【課件】1.2微生物的培養(yǎng)技術(shù)和應(yīng)用-微生物的選擇培養(yǎng)和技術(shù)-（人教版2019選擇性必修3）

第2節(jié)微生物的培養(yǎng)技術(shù)和應(yīng)用二、微生物的選擇培養(yǎng)和技術(shù)1、實(shí)例：DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種在體外將少量DNA大量復(fù)制的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫（93℃）的DNA聚合酶。什么是TaqDNA聚合酶？從哪里獲得？如何獲得Taq細(xì)菌?2、實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微生物生長。一、選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。稀釋涂布法是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。稀釋涂布平板法二、微生物的選擇培養(yǎng)微量移液器滴灼涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍各梯度分別涂布3個平板1個不涂布作空白對照待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放在30-37℃恒溫箱中培養(yǎng)1-2d，平板上就可以觀察到單菌落。常用方法：1、稀釋涂布平板法（也叫活菌計數(shù)法、間接計數(shù)法）原理：成功統(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵是恰當(dāng)?shù)南♂尪?。?dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。稀釋涂布平板法、顯微鏡直接計數(shù)法、濾膜法三、微生物的數(shù)量測定②為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30—300的平板進(jìn)行計數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。

計算公式每克樣品中的菌落數(shù)＝×M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。①設(shè)置重復(fù)組，目的是增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。將待測樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇三個稀釋度的菌液，分別取0.1ml接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布在整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)計數(shù)菌落數(shù)。操作為使結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液加到三個或三個以上的平板上，經(jīng)涂布培養(yǎng)，計算出菌落平均數(shù)。

注意事項(xiàng)①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30——300的平板上進(jìn)行計數(shù)。②為使結(jié)果接近真實(shí)值可將同一稀釋度加到三個或三個以上的平皿中，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計算出菌落平均數(shù)。③統(tǒng)計的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。？是因?yàn)楫?dāng)2個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)表示而不用活菌數(shù)來表示。④涂布平板法所選擇的稀釋度很重要，一般以三個稀釋度中的第二個稀釋度所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為最好。思考題1.想一想，如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？答：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進(jìn)行計算。例：某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是(涂布平板時所用稀釋液的體積為0.1mL)多少？每克樣品中的菌落數(shù)=(C÷V)×M=(234/0.1)×106＝2.34×1092、顯微鏡直接計數(shù)法（1）原理：此法利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。（2）方法：用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)。計數(shù)板是特制的載玻片，其上有特定的面積為1mm2，高為0.1mm的計數(shù)室，一個計數(shù)室又被分成25個（或16個）中格，每個中格再被分成16個（或25個）小格，每個計數(shù)室都由400個小格組成。（3）操作：將稀釋的樣品滴在計數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計數(shù)4~5個中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個小格所含的細(xì)菌數(shù)，再按計數(shù)公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。（4）計算公式（5）缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運(yùn)動細(xì)菌的計數(shù)；需要相對高的細(xì)菌濃度；個體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；3、濾膜法以測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例。將已知體積的水用細(xì)菌過濾器過濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)。在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色?？梢愿鶕?jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。大腸桿菌菌落呈黑色或深紫色,有金屬光澤原理：伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基(EMB)是鑒別培養(yǎng)基，可以用來檢測自來水中的大腸桿菌是否超標(biāo)，因?yàn)榇竽c桿菌的代謝產(chǎn)物與伊紅—美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色或黑色并帶有金屬光澤，使大腸桿菌的菌落顯示出來，并沒有促進(jìn)大腸桿菌的生長和抑制其他微生物的生長。到社會中去練習(xí)：我國規(guī)定每升飲用水中大腸桿菌不能超過3個。某興趣小組嘗試對某品牌飲用水的大腸桿菌含量進(jìn)行檢測，操作簡圖如圖甲，伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基配方如圖乙。回答下列相關(guān)問題：（1）圖甲中濾膜的孔徑應(yīng)

（“大于”或“小于”）大腸桿菌。受此啟發(fā)，對某些不耐高溫的試劑可以怎樣除菌？（2）配制圖乙中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基時，除了水分、無機(jī)鹽以外，還應(yīng)加入

（一種營養(yǎng)成分），以及

。伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌菌落呈現(xiàn)

。（3）該小組通過統(tǒng)計黑色菌落的數(shù)目，計算出單位體積樣品中大腸桿菌數(shù)目。理論上他們的統(tǒng)計值要比實(shí)際

（“偏高”或“偏低”），理由是

？

（4）如圖所示的操作是培養(yǎng)基配置過程中的倒平板，該操作的正確使用順序是

（用圖中的序號和箭頭表示）。③步驟操作的目的是

。小于用濾膜過濾除菌氮源瓊脂黑色偏低兩個或多個大腸桿菌連在一起時，平板上只能觀察到1個菌落④→①→②→③既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染1、尿素的利用尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細(xì)菌利用尿素的原因土壤中的細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕窩O(NH2)2脲酶+CO22NH3+H2O四、探究實(shí)踐土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)（一）課題背景3、常見的分解尿素的微生物芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，某些真菌和放線菌也能分解尿素。（二）課題目的①從土壤中分離出能夠分解尿素的細(xì)菌②統(tǒng)計每克土壤樣品中究竟含有多少這樣的細(xì)菌在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖，從而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。（三）實(shí)驗(yàn)原理（四）實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣、制備培養(yǎng)基、樣品稀釋、取樣涂布、微生物培養(yǎng)、觀察并記錄結(jié)果、細(xì)菌計數(shù)、對分離的菌種做進(jìn)一步鑒定土壤取樣從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中?！羧⊥翗佑玫男¤F鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。（五）實(shí)驗(yàn)的具體操作步驟如下制備培養(yǎng)基設(shè)計一種選擇培養(yǎng)基，用尿素作為唯一氮源，可以將分解尿素的細(xì)菌分離出來。15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)培養(yǎng)基配方：①從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？從功能上屬于哪類培養(yǎng)基？該培養(yǎng)基是否有選擇作用？固體培養(yǎng)基②在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素選擇培養(yǎng)基③該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點(diǎn)和不同點(diǎn)？此培養(yǎng)基只是用尿素作為唯一氮源，培養(yǎng)基的其它營養(yǎng)成分基本相同。將10g土樣加入盛有90mL無菌生理鹽水的錐形瓶中（錐形瓶體積為250mL），充分搖勻，吸取上清液1mL，轉(zhuǎn)移至盛有9mL的生理鹽水的無菌大試管中，依次等比稀釋至107稀釋度。

樣品稀釋由于初次實(shí)驗(yàn)，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為103～107。每個稀釋度下需要3個選擇培養(yǎng)基，1個基礎(chǔ)培養(yǎng)基，因此共需要15個選擇培養(yǎng)基，5個基礎(chǔ)培養(yǎng)基。此外，還需要準(zhǔn)備8個滅菌的試管和1個滅菌的移液管?！魬?yīng)在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂屚寥廊芤旱倪^程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行為什么分離不同的微生物采用不同的稀釋度？原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計數(shù)的平板。測定土壤中細(xì)菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時還應(yīng)當(dāng)有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。微生物的種類土壤稀釋倍數(shù)目標(biāo)分離土壤中所有細(xì)菌104、105、106平板上的菌落數(shù)應(yīng)為30～300個，便于準(zhǔn)確計數(shù)。分離土壤中的放線菌103、104、105分離土壤中的真菌102、103、104分離土壤中的尿素細(xì)菌104、105、106、107按照由107～103稀釋度的順序分別吸取0.1mL進(jìn)行平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。

取樣涂布◆如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30——300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計數(shù)，如果同一稀釋倍數(shù)的三個重復(fù)的菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不精確，需要重新實(shí)驗(yàn)?！魧?shí)驗(yàn)時要對培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時間、稀釋度、培養(yǎng)物等。

微生物的培養(yǎng)與觀察培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。微生物的種類培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間觀察時間細(xì)菌30～37℃1～2d①每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。②仔細(xì)觀察并記錄菌落的（形狀、大小、隆起程度和顏色等）特征。霉菌25～28℃3～4d放線菌25～28℃5～7d將涂布好的培養(yǎng)皿放在某（如：30℃）溫度下培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時間的延長，會有不同的菌落產(chǎn)生。觀察記錄比較基礎(chǔ)培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，并做好記錄。

細(xì)菌計數(shù)當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)。在同一稀釋度下，至少對3個平板進(jìn)行重復(fù)計數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。對分離的菌種做進(jìn)一步鑒定挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含酚紅培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產(chǎn)生如圖的顏色反應(yīng)。因?yàn)樵谝阅蛩貫槲ㄒ坏吹呐囵B(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說明該細(xì)菌能夠分解尿素。

進(jìn)一步探究五、結(jié)果分析與評價（一）培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落

對照培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染?；A(chǔ)培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。（二）是否獲得了某一稀釋度下菌落數(shù)為30-300的平板？如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30～300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計數(shù)。如果學(xué)生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計的結(jié)果應(yīng)該接近。如果結(jié)果相差太遠(yuǎn)，需要進(jìn)一步分析產(chǎn)生差異的原因。（三）你的統(tǒng)計結(jié)果與其它同學(xué)的統(tǒng)計結(jié)果是否接近？如果相差很大，可能是什么原因造成的？拓展應(yīng)用1：反芻動物，如牛和山羊，具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活著多種微生物，其中許多微生物能以尿素作唯一氮源。請你設(shè)計一個實(shí)驗(yàn)，從瘤胃中分離出能夠分解尿素的微生物。提示：反芻動物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會死亡，因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準(zhǔn)備選擇培養(yǎng)基外，還應(yīng)參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計。下列哪一項(xiàng)操作達(dá)不到實(shí)驗(yàn)?zāi)康?？A.以尿素為唯一氮源B.以葡萄糖作為碳源C.將培養(yǎng)基調(diào)至酸性D.培養(yǎng)環(huán)境有充足氧氣拓展應(yīng)用2：分解纖維素的微生物的分離纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質(zhì)。植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。

棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。土壤中某些微生物能夠產(chǎn)生

,把纖維素分解為

，后再利用。纖維素酶葡萄糖2.纖維素酶

纖維素酶是一種

，一般認(rèn)為它

，即

，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纖維素復(fù)合酶至少包括三種組分C1酶、和葡萄糖苷酶CX酶濾紙崩潰法3、纖維素分解菌的篩選（1）篩選纖維素分解菌的方法______________。該方法可以通過________反應(yīng)直接篩選。剛果紅染色法顏色（2）原理：剛果紅是一種染料，它可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不和纖維二糖、葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后剛果紅—纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。可根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌1.實(shí)驗(yàn)原理纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即CX酶、

C1酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。剛果紅染色法：這種方法能夠通過顏色反應(yīng)直接對微生物進(jìn)行篩選.

剛果紅是一種染料，它可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不和纖維二糖、葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后剛果紅—纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解為中心的透明圈。這樣我們可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌.現(xiàn)在要從土壤中分離纖維素分解菌，請你給出詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案。實(shí)驗(yàn)設(shè)計土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落2.實(shí)驗(yàn)流程3.實(shí)驗(yàn)步聚（1）土壤取樣（2）選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基的制備選擇培養(yǎng)的操作（3）梯度稀釋制備菌懸液制備鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基（4）將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上倒平板涂布平板剛果紅染色法（5）挑選產(chǎn)生透明圈的菌落取樣的環(huán)境是怎樣的，作出這種選擇的理由是什么？（為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？）

選擇纖維素豐富的環(huán)境，如樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等等。生物與環(huán)境的互相依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土壤中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。（1）土壤取樣人工設(shè)置適宜環(huán)境，使纖維素分解菌相對聚集。將濾紙埋在土壤中有什么作用？將紙埋于深約10cm的腐殖土壤中。你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？為什么？根據(jù)樹葉腐爛程度推測出的，一般埋10cm左右，能使纖維素分解菌相對聚集。其次，纖維素分解菌是一類細(xì)菌，有的好氧，有的不好氧，所以這個深度不會太深或太淺。選擇培養(yǎng)的目的：增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物制備選擇培養(yǎng)基a、配方是液體培養(yǎng)基還是固體培養(yǎng)基？為什么？b、這個培養(yǎng)基對微生物是否具有選擇作用？如果具有，是如何進(jìn)行選擇的？c、你能否設(shè)計一個對照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的作用？是液體培養(yǎng)基，原因是配方中無凝固劑有選擇作用，本配方中的碳源是纖維素粉，為唯一碳源，所以能分解纖維素的微生物可以大量繁殖。用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基與之對照或者將纖維素改為葡萄糖。（2）選擇培養(yǎng)

d、配方中的酵母膏也能夠提供少量的碳源，會對纖維素分解菌的培養(yǎng)造成怎樣的影響？由于酵母膏的含量極少，其他微生物也能在該培養(yǎng)基中生長繁殖，但很少。然而，只有以纖維素為碳源的微生物才能大量繁殖。在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此選擇培養(yǎng)可以起到“濃縮”所需微生物的作用。為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？具體操作選擇培養(yǎng)基的制備按配方配制，在250ML錐形瓶中裝入30ML培養(yǎng)基，用紗布做成瓶塞，瓶塞外包裹包裝紙，扎緊，高壓蒸汽滅菌。選擇培養(yǎng)的操作稱取土樣20g，在無菌條件下，將土樣加入裝有30ml選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中，將錐形瓶固定在搖床上，在一定溫度下振蕩培養(yǎng)1～2天，直至培養(yǎng)液變渾濁。吸取一定量的培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移至新的選擇培養(yǎng)基中，同樣培養(yǎng)至變渾濁。振蕩培養(yǎng)的目的？增加溶解氧，為目的菌提供O2制備鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基（4）將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上培養(yǎng)基組成提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)CMC-Na(水溶性羧甲基纖維素鈉)5~10g碳源酵母膏1g碳源、氮源、生長因子KH2PO40.25g無機(jī)鹽土豆汁100mL碳源、生長因子瓊脂15g凝固劑上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至1000mL氫元素、氧元素鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基配方

制備菌懸液按照課題1的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)液進(jìn)行等比稀釋，稀釋最大倍數(shù)到106（3）梯度稀釋倒平板涂布平板將稀釋度為104～106的菌懸液各取0.1ml涂布在培養(yǎng)基上，30℃倒置培養(yǎng)，至菌落長出。每個稀釋度下涂布3個平板，設(shè)置對照。剛果紅染色法