第18章色層分離法

色層分離法的產(chǎn)生和發(fā)展2色層分離的有關(guān)術(shù)語3概述118色層分離法色層分離過程理論4各類不同分離機制的色層分離法介紹5層析的放大618.1概述色層分離是一組相關(guān)技術(shù)的總稱，又叫色譜法、層離法、層析法等，是一種條件溫和、能分離物化性能差別很小的一組化合物的重要分離技術(shù)。18.2色層分離法的產(chǎn)生和發(fā)展12沿革色層分離中的基本概念及其分類3色譜展開技術(shù)18.2.1沿革氣相和液相特別是液相色層分離技術(shù)，如分配色譜、離子交換色譜、疏水色譜、凝膠色譜、親和色譜等，已成為有機化學(xué)、生物化學(xué)、蛋白質(zhì)等方面的一項重要分離技術(shù)。色層分離這一術(shù)語，最早應(yīng)用于有色色素的離析并沿用至今。它是基于當(dāng)含有被分離物質(zhì)的料液滲濾通過由吸著劑粒子涂鋪的層（薄層層析）或填充的管子（柱層析）時，對混合物各組分產(chǎn)生選擇性的阻滯作用。18.2.2色層分離中的基本概念及其分類18.2.2色層分離中的基本概念及其分類18.2.2色層分離中的基本概念及其分類18.2.3色譜展開技術(shù)18.2.3色譜展開技術(shù)（１）洗脫分析法18.2.3色譜展開技術(shù)（２）前流分析法18.2.3色譜展開技術(shù)（３）頂替分析法18.2.3色譜展開技術(shù)18.3色層分離的有關(guān)術(shù)語12平衡關(guān)系局部平衡定律18.3.1平衡關(guān)系在色層分離過程中，所有的溶質(zhì)都被同一流動速度的移動相運送，并且可逆地向固定相遷移，由于在固定相上面它們所消耗的時間不同，所以其總的遷移速率各不相同。通常溶質(zhì)在固定相中的濃度是它在流動相中濃度的函數(shù)，一般認(rèn)為：18.3.2局部平衡定律但是在給定溫度下，可簡化為：18.3.2局部平衡定律18.4色層分離過程理論12塔板理論色層分離的連續(xù)描述以下的假設(shè)是大多數(shù)塔板理論模型所共有的。①吸附過程是熱力學(xué)上可逆的。②在相間，溶質(zhì)的質(zhì)量傳遞阻力可以忽略不計③洗脫液連續(xù)通過板，流出體積為Q④在相鄰板之間它們沒有返混。⑤平衡等溫線是線性的（Kｄ＝常數(shù)）：⑥18.4.1塔板理論它的圖解表示被稱為是穿透曲線（圖18.10）。（１）參數(shù)的估計———N的判定（２）等理論板高度的概念和效率（３）不平衡和區(qū)域擴展18.4.1塔板理論18.4.1塔板理論18.4.2色層分離的連續(xù)描述（１）平衡模型（２）速率理論18.4.2色層分離的連續(xù)描述18.5各類不同分離機制的色層分離法介紹12吸附色層分離法疏水作用色層分離法34金屬螯合色層分離法共價作用色層分離法56聚焦色層分離法離子交換色層分離法18.5各類不同分離機制的色層分離法介紹910聚焦色層分離法離子交換色層分離法1112擬似移動床型色層分離法灌注色層分離法78凝膠過濾色層分離法正相與反相層析吸附色層分離法是利用吸附劑對組分的吸附能力的差別進行分離的，用來填充柱的物質(zhì)包括無機吸附劑和有機吸附劑。18.5.1吸附色層分離法18.5.2疏水作用色層分離法（１）原理（２）首要條件（３）影響疏水作用的參數(shù)（４）在蛋白質(zhì)分離、純化上的應(yīng)用18.5.3金屬螯合色層分離法18.5.4共價作用色層分離法（１）簡介（２）過程階段（３）應(yīng)用情況一是谷胱甘型二硫鍵層18.5.4共價作用色層分離法二是巰基丙基型二硫鍵層析劑18.5.5聚焦色層分離法（１）簡介（２）過程原理

①蛋白質(zhì)的等電點

②ｐＨ梯度的形成③聚焦效應(yīng)18.5.5聚焦色層分離法18.5.5聚焦色層分離法18.5.6離子交換色層分離法（１）原理（２）特點（３）介質(zhì)（４）洗脫方式（５）影響線性梯度洗脫分離特性的因素（６）應(yīng)用它們的相態(tài)。18.5.6離子交換色層分離法18.5.6離子交換色層分離法18.5.6離子交換色層分離法18.5.7凝膠過濾色層分離法

18.5.7凝膠過濾色層分離法

（１）原理18.5.7凝膠過濾色層分離法

見教材（２）凝膠過濾介質(zhì)及其選擇18.5.7凝膠過濾色層分離法（３）應(yīng)用18.5.8正相與反相層析（１）簡介（２）反相層析對分離物要求①弱酸性、弱堿性化合物可調(diào)節(jié)ｐＨ使該化合物處于不解離狀態(tài)。②兩性物質(zhì)可以加入反離子使之成為中性離子對，再進行層析。③有些離子，可以使它們先變成中性配合物，然后再層析，如金屬離子。18.5.9親和色層分離法（１）原理（２）親和分離介質(zhì)（３）應(yīng)用親和色譜分離介質(zhì)的種類：①金屬螯合介質(zhì)；②小配體親和分離介質(zhì)；③顏料親和分離介質(zhì)；④抗體親和分離介質(zhì)；⑤外源凝集素親和分離介質(zhì)等多種。18.5.9親和色層分離法18.5.9親和色層分離法連續(xù)環(huán)狀色譜法可用于蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類等生化物質(zhì)的分離。18.5.10連續(xù)環(huán)狀色層分離法擬似移動床型色層分離法是克服色層分離處理量小的另一種方法。18.5.11擬似移動床型色層分離法18.5.11擬似移動床型色層分離法18.5.12灌注色層分離法（１）灌注色層分離介質(zhì)18.5.12灌注色層分離法（１）灌注色層分離介質(zhì)18.5.12灌注色層分離法（１）灌注色層分離介質(zhì)18.5.12灌注色層分離法（２）