枸杞多糖對實驗性正

枸杞多糖對小鼠NK細胞和白細胞活性的免疫調(diào)節(jié)作用

枸杞“枸杞子”名字的來歷

相傳戰(zhàn)國時，在秦國境內(nèi)黃河南岸、香山北麓（今衛(wèi)寧）平原上，有一個青年農(nóng)夫，乳名狗子，以農(nóng)耕為業(yè)，娶妻杞氏。杞氏勤而賢惠，夫妻日出而作，日落而息，奉養(yǎng)老母，倒也勉強度日。時秦吞并六國，傾國之男丁，拓疆征戰(zhàn)，狗子被召戍邊。

將軍百戰(zhàn)死，壯士十年歸，狗子戍邊歸來，已是滿臉須發(fā)。路上見正鬧饑荒，田園荒蕪，路人討吃，餓殍遍地，眾人面帶菜色，孩子嗷嗷待哺。狗子甚為惶恐，不知老母與妻子現(xiàn)狀如何。既到家，見老母發(fā)絲如銀，神采奕奕，妻子面色紅潤，不像路人饑餓之狀，甚為驚訝謂妻曰：“路見鄉(xiāng)鄰皆饑，唯母與爾飽滿，何也？”妻對曰：“爾從軍后，吾終日勞作，勉為生計，去今之年，蝗災澇害，顆粒無收，吾采山間紅果與母充饑，方勉其餓。”其母曰：“吾若非爾媳采紅果食之，命已殞矣！”狗子喜泣，對妻更為敬之。鄰人聞之，爭相采食，謂之狗杞食。

后人發(fā)覺，杞氏所采山間紅果有滋陰補血、養(yǎng)肺健胃之功效，民間醫(yī)生采之入藥，改其名稱“枸杞子”。枸杞是我國傳統(tǒng)名貴中藥材，素有“紅寶”美稱，富含植物多糖、蛋白質(zhì)、維生素等營養(yǎng)成分。枸杞多糖是從枸杞中提取而得的一種水溶性多糖。已明確該多糖系蛋白多糖，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6種單糖成分組成.經(jīng)研究表明，枸杞多糖是枸杞子調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老的主要活性成分，可改善老年人易疲勞、食欲不振和視力模糊等癥狀，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗衰老等作用。枸杞多糖研究背景枸杞為茄科植物枸杞成熟果實，其主要有效成分為枸杞多糖(LBP（Lyciumbarbariumpalysacharides,LBP）)，通過離子交換層析法進一步分離和純化粗多糖，可得到一種蛋白多糖復合物LBP3p，具有免疫刺激作用。LBP3p能增加人類外周血單核細胞中IL-2和TNF-α的表達，mRNA和蛋白水平都與LBP呈劑量相關。LBP3p可以抑制移植性S180肉瘤的生長，增加巨噬細胞的噬菌能力、脾巨噬細胞的增殖和脾細胞的抗體分泌、受損T巨噬細胞的活力、IL-2mRNA的表達和降低脂質(zhì)過氧化。研究證明，LBP能調(diào)節(jié)小鼠骨髓樹突細胞(樹突細胞是體內(nèi)重要抗原呈遞細胞,在啟動初次免疫應答中具有重要的作用)的表型和功能。并通過激活巨噬細胞來增強先天免疫，其機制可能與激活轉錄因子NF-κB和AP-1進而誘導TNF-α的生成以及增加MHCⅡ型共刺激分子有關。LBP、LBPF4和LBPF5可刺激脾T細胞增殖，其機制為激活轉錄因子NFAT和AP-1，促進CD25的表達，誘導IL-2和IFN-γ基因轉錄和蛋白表達，從而起到免疫增強作用。本文就枸杞多糖對小鼠自然殺傷細胞(NK)殺傷活性及外周血白細胞數(shù)量的影響作了進一步的研究。研究目的及方法目的：

探討枸杞多糖對小鼠免疫功能的正向調(diào)節(jié)作用方法：

以BALB／C小鼠為研究對象．灌服枸杞多糖20天．另分別以環(huán)磷酰胺、環(huán)磷璉胺加枸杞多糖為不同組，測定NK細胞殺傷活性和白細胞數(shù)量。實驗方案1.試劑①枸杞多糖枸杞(青海)，用20％乙醇回流提取，

蒸發(fā)濃縮，旋轉薄膜干燥制成粉劑。②環(huán)磷酰胺③小鼠白血病細胞株(YAc—l細胞)2.實驗動物

雌性BALB／C純系小鼠，5—6周實驗分組及服藥方法1.正常對照組每只小鼠每天胃飼生理鹽水0、2ml，連續(xù)20天。2.枸杞組分3個劑量組，每只小鼠每天分別胃飼0．1ml、0．2ml及0．3ml，枸杞多糖用生理鹽水溶解，濃度為0．125g／ml[6]，連續(xù)20天。3.環(huán)磷酰胺組每只小鼠每6天腹腔注射環(huán)磷酰胺(30mg／kg)，共3次。4.環(huán)磷酰胺+枸杞組環(huán)磷酰胺同上法給藥，同時每只小鼠連續(xù)20天每天胃飼枸杞多糖02ml(0.125g／ml)。實驗方法NK細胞殺傷活性測定采用LDH釋放法，基本步驟為：小鼠脾細胞懸液，用5％小牛血清RPMI1640培養(yǎng)液調(diào)細胞濃度至2．5×10／ml靶細胞采用體外傳代的小鼠白血病細胞株YAC—l細胞(5×lO／m1)，小鼠細胞及靶細胞之比為50：1，加至96孔圓底板中，離心5min，37℃5％CO培養(yǎng)3h，加入預冷的RPMI1640培養(yǎng)液50μl，離心5min，吸100μl上清液轉移至另一96孔平底板中，加人LDH底液l00μl／孔，3min后加人lmol／LHcL(50μl／孔)終止反應，于自動酶標儀上讀取波長490nm的OD值。NK細胞殺傷活性=×100％其中自然釋放孔不加效應細胞，最大釋放孔用1％tritionxl00處理細胞。

預期結果1．枸杞多糖組小鼠外周血白細胞數(shù)量明顯多于對照組。2．枸杞多糖對小鼠NK細胞活性有明顯提高作用，環(huán)磷酰胺可使小鼠NK細胞活性下降，與對照組比較，環(huán)磷酰胺組對NK細胞有明顯的抑制作用，加用枸杞多糖，NK細胞活性有所提高。討論

枸杞含有十多種氨基酸和微量元素，具有多種藥理作用。LBP能明顯增強去胸腺小鼠的細胞免疫功能，對小鼠性功能也有一定的恢復作用。以LBP為主的組方能恢復衰老模型小鼠T和B淋巴細胞增殖反應功能，提高衰老模型小鼠肝總SOD的活性及血清總SOD和Cu/ZnSOD活性，抑制衰老模型肝組織過氧化脂質(zhì)的形成，減少心、肝組織的脂褐素沉積。LBP可明顯延長雌性及雄性果蠅的平均壽命及最高壽命，并有顯著升高小鼠紅細胞SOD作用和明顯降低MDA的作用。LBP還能增加免疫抑制動物Th細胞的數(shù)量，提高Th／Ts比值，調(diào)整T細胞亞群紊亂狀態(tài)。而且能使免疫抑制動物的細胞轉化率上升。

本文實驗結果表明LBP可明顯地促進小鼠NK細胞活性，可解除部分或全部環(huán)磷酰胺對小鼠免疫抑制作用，可使注射環(huán)磷酰胺小鼠的白細胞恢復，能顯著提高小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞吞噬能力。LBP可顯著對抗環(huán)