酵母菌的培養(yǎng)

回顧復(fù)習(xí)：（1）酵母菌

酵母菌是單細(xì)胞真核生物

酵母菌呼吸方式為兼性厭氧型 酵母菌生殖方式為出芽生殖、孢子生殖探究培養(yǎng)液中酵母菌數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化

（2）種群數(shù)量的變化?

種群數(shù)量的變化包括增長、波動(dòng)、穩(wěn)定、下降等?

“S”型曲線有一個(gè)K值，即環(huán)境容納量。?

種群數(shù)量的增長也受到許多環(huán)境因素（如溫度、培養(yǎng)液的pH、培養(yǎng)液的養(yǎng)分種類和濃度、代謝產(chǎn)物等）的影響。探究培養(yǎng)液中酵母菌數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化

1．實(shí)驗(yàn)?zāi)康模海?）嘗試建構(gòu)酵母菌種群增長的數(shù)學(xué)模型。（2）用數(shù)學(xué)模型解釋種群數(shù)量的變化。（3）學(xué)會(huì)使用血球計(jì)數(shù)板進(jìn)行計(jì)數(shù)。2.實(shí)驗(yàn)步驟： 1）培養(yǎng)基的配置 2）培養(yǎng)基滅菌 3）接種 4）酵母菌的培養(yǎng)28℃，連續(xù)培養(yǎng)7天 5）抽樣檢測計(jì)數(shù) 6）記錄并分析結(jié)果液體培養(yǎng)基

隨機(jī)取樣，多次計(jì)數(shù)，取平均值

如何計(jì)數(shù)？血球計(jì)數(shù)板構(gòu)造：實(shí)物圖正面圖縱切面圖計(jì)數(shù)室，2個(gè)滴液處深度面積

血球計(jì)數(shù)板是一種專門用于計(jì)算較大單細(xì)胞微生物的一種儀器。一個(gè)特制的可在顯微鏡下觀察的玻片大方格中方格小方格計(jì)數(shù)室平臺(tái)上有九個(gè)大方格的方格網(wǎng)，中間大方格為計(jì)數(shù)室計(jì)數(shù)室放大計(jì)數(shù)室有兩種規(guī)格：一是分為16個(gè)中方格，每中方格中有25個(gè)小方格；另一種是分為25個(gè)中方格，每中方格有16個(gè)小方格。兩種都共有400個(gè)小方格。計(jì)數(shù)室計(jì)數(shù)時(shí)用25中格的計(jì)數(shù)板，要按對(duì)角線方位，取左上、左下、右上、右下、中央5個(gè)中格(即80小格)的酵母菌數(shù)。如果是16中格計(jì)數(shù)板,則只數(shù)四角上的四格酵母菌數(shù)（即100小格）。然后求出一個(gè)小方格的細(xì)胞平均數(shù)(N)放大放大對(duì)于壓在小方格界線上的酵母菌應(yīng)取相鄰兩邊及頂角計(jì)數(shù)。c.從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計(jì)數(shù)之前，要將試管輕輕震蕩幾次，用滴管吸取少許，從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多，將計(jì)數(shù)室充滿即可），勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。5）計(jì)數(shù)

a.視待測菌懸液濃度，以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。培養(yǎng)后期的樣液稀釋后再計(jì)數(shù)，加無菌水適當(dāng)稀釋，如菌液不濃，可不必稀釋。b.取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊，在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。d.靜置片刻（待細(xì)胞全部沉降到計(jì)數(shù)室底部），將血球計(jì)數(shù)板置載物臺(tái)上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù).由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近，觀察時(shí)應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。滴液處

e．一般選取計(jì)數(shù)室內(nèi)四個(gè)角及中央五個(gè)中方格計(jì)數(shù)，若細(xì)胞位于小方格的線上，應(yīng)遵循“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線”的原則，以減少誤差。f.對(duì)于出芽的酵母菌，芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí)，即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算。每個(gè)樣品計(jì)數(shù)應(yīng)重復(fù)3次（每次數(shù)值不應(yīng)相差過大，否則應(yīng)重新操作），取其平均值,求出每一個(gè)小格中細(xì)胞平均數(shù)（N），按公式計(jì)算出每ml菌懸液所含酵母菌細(xì)胞數(shù)量。公式附后g.測數(shù)完畢，取下蓋玻片，用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，放入盒內(nèi)保存。6）記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果每天同一時(shí)間，各組取出本組的試管，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)酵母菌個(gè)數(shù)，并作記錄，連續(xù)觀察7天。多次測量取平均值。減少誤差，力求準(zhǔn)確。7）分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得出結(jié)論a、根據(jù)表格平均值作出培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量7天中的變化曲線。b、酵母菌種群數(shù)量隨時(shí)間呈_____型增長變化。S第4天第6天第1天死亡第7天此法計(jì)得的是活菌體和死菌體的總和每隔24小時(shí)取樣計(jì)數(shù)。(注意計(jì)數(shù)時(shí)間每天要固定)1、如果一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌過多，難以數(shù)清，應(yīng)當(dāng)采取怎樣的措施？無菌水稀釋后，再用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù).2.討論：血球計(jì)數(shù)板上的誤差應(yīng)如何減少，力求準(zhǔn)確？多次測量取平均值。一個(gè)小組取同樣的菌液進(jìn)行計(jì)數(shù)，取平均值。計(jì)算公式：A/5×25×B以一個(gè)大方格有25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板為例進(jìn)行計(jì)算：假設(shè)五個(gè)中方格中總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，那么，一個(gè)大方格中的總菌數(shù)（即0.1mm3中的總菌數(shù)）為：提示：1ml＝1cm3=1000mm31ml菌液總的總菌數(shù)為：＝A/5×25×B×10×1000＝50000A·B（個(gè)）如果計(jì)數(shù)板大方格中有16個(gè)中方格，四個(gè)中方格中總菌數(shù)為A，稀釋倍數(shù)為B,那么，又該如何計(jì)算呢鞏固練習(xí)在計(jì)算酵母菌個(gè)數(shù)的時(shí)候經(jīng)常用到血球計(jì)數(shù)板，下列說法正確的是（）A.血球計(jì)數(shù)板只能對(duì)活細(xì)菌計(jì)數(shù)B.血球計(jì)數(shù)板每個(gè)計(jì)數(shù)室內(nèi)的容積為1mm3C.血球計(jì)數(shù)板在滴加樣品的時(shí)候應(yīng)該先滴加，后蓋蓋玻片D.遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，即作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)0.1mm3？

在探究酵母菌種群數(shù)量變化時(shí)，酵母菌計(jì)數(shù)通常采用顯微鏡下觀察并用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的方法。血球計(jì)數(shù)板（見右圖）有16個(gè)中方格，每個(gè)中方格有25個(gè)小方格，小方格的邊長為Xmm，加蓋蓋玻片后的深度為Ymm。若顯微鏡下觀察一個(gè)小方格內(nèi)的酵母菌數(shù)為A，則1mL培養(yǎng)液中酵母菌數(shù)為（1mL=1000mm3）

A．1000A/X2Y B．300A C．3×103A/X2Y D．AX2Y/1000取小量酵母菌液直接放入血球計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù),測得的數(shù)目是

A.活細(xì)胞數(shù)

B.死細(xì)胞數(shù)

C.菌落數(shù)

D.細(xì)胞總數(shù)

直接用血球計(jì)數(shù)板法無法區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞的,計(jì)得的是活菌體和死菌體的總和死亡在“探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化”實(shí)驗(yàn)中，某同學(xué)用顯微鏡觀察計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)血球計(jì)數(shù)板的小方格(2mm×2mm)內(nèi)酵母菌數(shù)量的平均值為13個(gè)。假設(shè)蓋玻