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實驗六α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測背景:酶在應(yīng)用過程中存在的問題①天然酶對強酸、強堿、高溫等敏感,易失活②難回收,提高了生產(chǎn)成本③反應(yīng)后酶混在產(chǎn)物中,影響產(chǎn)品質(zhì)量
將水溶性的酶用物理或化學的方法固定在某種介質(zhì)上,使之成為不溶于水而又有酶活性的制劑。固定化酶基礎(chǔ)知識:酶的固定化技術(shù)酶固定化的方法:a、吸附法:將酶吸附到固體吸附劑表面的方法,如:活性碳、多孔玻璃、石英砂等固體吸附劑酶d、包埋法:將酶包裹在凝膠交聯(lián)后的格子中c、交聯(lián)法:b、共價偶聯(lián)法酶的某些基團(如氨基末端、羧基末端)與載體共價結(jié)合。利用試劑與酶之間發(fā)生分子交聯(lián)來把酶固定化的方法。a、吸附法:實驗六α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測實驗?zāi)康模?.掌握α-淀粉酶的固定化2.檢測固定化α-淀粉酶的效果實驗設(shè)備和材料:38頁—39頁固定化酶柱氣門心夾子5ml注射器1.α-淀粉酶的固定化吸附5mgα-淀粉酶+4ml蒸餾水+5g石英砂,攪拌30min裝入下端接有氣門心并用夾子封住的注射器中
用10倍柱體積的蒸餾水洗滌除去游離淀粉酶(1mL/min)裝柱洗柱如何證明淀粉酶已全部被固定?蒸餾水洗柱流出的水+淀粉,保溫幾分鐘后+KI-I2變藍說明水中無游離的淀粉酶,已全部固定固定化裝置—反應(yīng)柱淀粉α-淀粉酶糊精β-淀粉酶葡萄糖糖化淀粉酶麥芽糖遇碘顯藍色紅色實驗原理:2、淀粉水解的檢測一定濃度的淀粉流經(jīng)固定化酶柱后,可使淀粉水解成糊精,流出物用KI-I2溶液測試呈紅色??莶輻U菌的α-淀粉酶:最適溫度為50-75℃;最適PH為5.5-7.5溶解淀粉50mg淀粉溶于100ml熱水中,攪拌均勻過柱使淀粉溶液以0.3ml/min的流速過柱,在流出5ml淀粉后接收0.5ml流出液。檢測加入1-2滴KI-I2溶液,觀察顏色變化。用水稀釋1倍后再觀察顏色。保存及再次使用10倍柱體積蒸餾水洗滌此柱,放置4℃冰箱保存,幾天后取出重復(fù)實驗。實驗步驟:
讓淀粉和固定的α-淀粉酶充分反應(yīng)2.3實驗結(jié)果12341、水+1~2滴KI-I2溶液、淀粉液+1~2滴KI-I2溶液、流出液+1~2滴KI-I2溶液、稀釋1倍的流出液+1~2滴KI-I2溶液類型優(yōu)點不足直接使用酶催化效率高,低耗能、低污染等容易失活;很難回收,提高生產(chǎn)成本;酶會混在產(chǎn)物中,可能影響產(chǎn)品質(zhì)量固定化酶易與產(chǎn)物分離、反復(fù)利用一種酶只能催化一種化學反應(yīng),而在生產(chǎn)實踐中,很多產(chǎn)物的形成都通過一系列的酶促反應(yīng)才能得到的直接使用酶和固定化酶的優(yōu)缺點有些生物無性別,如大部分植物(雌雄同株);有性別的生物大部分由性染色體決定性別XY型(雌性為同型的XX,雄性為異型的XY)ZW型(雄性為同型的ZZ,雌性為異型的ZW)有些生物X比Y大,有些生物Y比X大果蠅9.1、將從大腸桿菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龍膜上制成制劑,可以用來降解殘留在土壤中的有機磷農(nóng)藥,與用微生物降解相比,其作用不需要適宜的()A、溫度B、PHC、水分D、營養(yǎng)D習題鞏固2.某一實驗小組的同學,欲通過制備固定化酵母細胞進行葡萄糖溶液發(fā)酵實驗,實驗材料及用具齊全。(2)該實驗小組用如圖所示的裝置來進行葡萄糖發(fā)酵①圖中a為固定化酵母;b是反應(yīng)柱。②從上端漏斗中加入反應(yīng)液的濃度不能過高的原因是:
。③為使該實驗中所用到的固定化酵母細胞可反
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