細(xì)菌性食物中毒的實(shí)驗(yàn)室支持泉州

細(xì)菌性食物中毒的實(shí)驗(yàn)室支持泉州市疾控中心鄭友限食物中毒的概念定義：國家標(biāo)準(zhǔn)(GBl4938)中界定了食物中毒，指攝入了含有生物性、化學(xué)性有毒有害物質(zhì)的食品或者把有毒有害物質(zhì)當(dāng)作食品攝入后出現(xiàn)的非傳染性(不屬于傳染病)的急性、亞急性疾病。即食物中毒指通過飲料或食物及其盛具、容器、包裝材料進(jìn)入人體的某種致病性微生物及其毒素、有害有毒的化學(xué)物質(zhì)(包括有毒動植物)等引起的，多數(shù)是以急性胃腸炎癥狀為主要特征的一群疾病。但不包括已知的傳染病，寄生蟲病、人畜共患性疾病、食物過敏和暴飲暴食所引起的急性胃腸炎等食源性疾病。食物中毒的特點(diǎn)

食物中毒常呈集體性爆發(fā)，其種類很多，病因也很復(fù)雜，一般具有下列共同特點(diǎn)：⑴.潛伏期短，在短時間內(nèi)可能有很多人同時發(fā)病。⑵.有相似的臨床表現(xiàn)，病人都有大致相同的臨床表現(xiàn)。⑶.與飲食有關(guān)，凡進(jìn)食某種有毒食品的人大都發(fā)病，沒有進(jìn)食該種有毒食品的人不發(fā)病。發(fā)病和食物有明顯關(guān)系，一旦停止食用這種有毒食品，發(fā)病立即停止。⑷.發(fā)病率高、爆發(fā)性，人與人不傳染，一般沒有傳染病流行時的余波或拖尾現(xiàn)象。(5).發(fā)病季節(jié)性強(qiáng)，一般多發(fā)于4-10月份，6-9月進(jìn)入高峰期。食物中毒分類一般按病原物質(zhì)，將食物中毒分為五類。⑴.細(xì)菌性食物中毒：是指由于食入被病原菌或其有毒代謝產(chǎn)物污染的食物后，所引起的以急性腸胃炎為主要中毒癥狀的疾病。⑵.真菌性食物中毒：指食入被真菌及其毒素污染的食物而引起的食物中毒。⑶.動物性食物中毒：指攝入動物性有毒食品引起的食物中毒。⑷.植物性食物中毒：攝入植物性中毒食品引起的食物中毒。⑸.化學(xué)性食物中毒：攝入化學(xué)性有毒食品引起的食物中毒。

細(xì)菌性食物中毒細(xì)菌性食物中毒：是指人們吃了大量活菌或活菌產(chǎn)的毒素養(yǎng)污染的食品所引起的種毒現(xiàn)象。細(xì)菌性食物中毒按發(fā)病機(jī)理又分為感染型食物中毒、毒素型食物中毒和混合型食物中毒。感染型食物中毒

指食物被污染并繁殖了大量食物中毒性微生物（包括病原菌和條件致病菌，如沙、志、金、變形、蠟樣、副溶、耶爾森、產(chǎn)氣莢膜梭菌、枯草桿菌等）這種含有大量活菌（一般在107/g以上）的食物被攝入機(jī)體后，引起一系列消化道癥狀的現(xiàn)象，稱為感染型食物中毒，此類種毒是由細(xì)菌本身引起。毒素型食物中毒

食物被能產(chǎn)生毒素的微生物如葡萄球菌、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等污染，并在適宜的條件下生長繁殖，產(chǎn)生了某種毒素，這種毒素同污染的微生物一起或單獨(dú)隨食物被攝入體內(nèi)，所引起的一系列的中毒現(xiàn)象，稱為毒素型食物中毒。混合型食物中毒

有的細(xì)菌性食物中毒，有感染型食物中毒的特征，又具有毒素型食物中毒的特征，稱為混合型食物中毒。如產(chǎn)氣莢膜梭菌、蠟樣芽胞桿菌等引起的食物中毒，這種食物中毒在檢驗(yàn)時，應(yīng)得視毒素養(yǎng)的檢測。樣品采集標(biāo)本是進(jìn)行一切實(shí)驗(yàn)室檢測的基礎(chǔ)；所有實(shí)驗(yàn)室檢測的結(jié)果都依賴于所得到標(biāo)本的質(zhì)量；直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)室檢測的準(zhǔn)確性與效率；食物中毒標(biāo)本的采集原則1．典型性原則食物中毒標(biāo)本的采集不同于衛(wèi)生評價(jià)采樣，應(yīng)根據(jù)可疑食物的性質(zhì)采集可能含毒最多的標(biāo)本。2．適時性原則為了防止可疑食物丟失和被檢物質(zhì)組分發(fā)生變化，保證得到正確結(jié)論必須盡快采樣送檢。流調(diào)人員到達(dá)現(xiàn)場后應(yīng)及時采樣送檢。3．適量性原則

由于引起食物中毒的毒物種類繁多，有時需實(shí)驗(yàn)室檢索的項(xiàng)目很多，這要求有一定的樣本量，在可能的情況下盡量多采。采樣前的準(zhǔn)備(1)

人員的準(zhǔn)備：一般要指派2名以上專業(yè)人員趕赴現(xiàn)場，必要時還需要檢驗(yàn)人員和其他部門有關(guān)人員協(xié)作前往。

交通工具準(zhǔn)備：在接到疑似食物中毒報(bào)告后，在城區(qū)1小時、郊區(qū)2小時內(nèi)到達(dá)現(xiàn)場。采樣前的準(zhǔn)備(2)●調(diào)查采樣箱準(zhǔn)備：屬常用的物品，應(yīng)提前準(zhǔn)備，定期檢查，及時補(bǔ)充。常備以下物品：

1、采樣工具：注射器、肛拭子、消毒棉簽、消毒紗布、調(diào)匙、勺子、夾子、鑷子、剪刀、酒精燈、標(biāo)號用品、75%酒精、其他消毒滅菌器具、吸管、火柴等。

2、樣品容器：滅菌塑料袋、廣口瓶、滅菌試管、滅菌糞便盒、樣品冷藏設(shè)施等。采樣前的準(zhǔn)備(3)●現(xiàn)場快速檢驗(yàn)、測量設(shè)備：食物中毒快速檢樣箱，食品溫度測試計(jì)、消毒劑濃度檢測試紙等?！裾{(diào)查用表：食物中毒事故個案調(diào)查登記表、調(diào)查筆錄、樣品采集記錄表、樣品送檢單、調(diào)查結(jié)果匯總表、空白紙等●參考資料：食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)、有關(guān)衛(wèi)生部規(guī)章、參考書籍等?！衿渌嘘P(guān)物品：如便攜式電腦、手機(jī)或?qū)χv機(jī)等通訊設(shè)施以及用于保存運(yùn)送培養(yǎng)基的冰箱、冰塊等●取證工具：照相機(jī)、攝像機(jī)等采樣用容器和試劑要求1.

采樣容器應(yīng)采用潔凈、無色、無毒的聚乙烯塑料或硬質(zhì)玻璃（又稱硼硅玻璃）。樣品瓶必須專瓶專用，切不可用實(shí)驗(yàn)室裝過試劑的瓶作采樣瓶。2.用于微生物檢驗(yàn)容器基本要求是選耐高溫、無毒、耐用材料制成，容器包裝好后可防滲漏，能承受空中或地面運(yùn)送過程中可能發(fā)生的溫度和壓力變化。所有采樣用具、容器需嚴(yán)格滅菌，并且不能存放過長時間，防止污染影響檢驗(yàn)結(jié)果。３、采樣用的生理鹽水、運(yùn)送培養(yǎng)基及有關(guān)試劑等都應(yīng)該滿足新鮮、無菌的要求，同時應(yīng)符合采樣所需要的試劑量，如運(yùn)送糞便的培養(yǎng)基為5ml/管為宜。細(xì)菌性食物中毒標(biāo)本的采集（1）剩余食物：采集殘余食物時應(yīng)盡量避免采集不相干的標(biāo)本。殘余食物用滅菌工具采取，置于滅菌容器內(nèi)。如無剩余食物，可用滅菌棉拭在可疑食物容器內(nèi)涂擦，置于裝有少量生理鹽水試管內(nèi)。體積較大的肉及魚等，應(yīng)將表面燒灼滅菌后割取內(nèi)部肌肉，置于滅菌容器內(nèi)?？赡墓揞^可直接送檢，如僅剩余空盒，可將空盒送檢。炊事用具：如鍋、刀、抹布、砧板等，可用棉試大用具上涂擦，置于裝有少量生理鹽水的試管中。如砧板已洗過，可用刀用力刮取表面層木屑，置于滅菌容器中。細(xì)菌性食物中毒標(biāo)本的采集（2）糞便、肛拭：糞便標(biāo)本應(yīng)盡量在病程早期和治療前采集，同時應(yīng)采集新鮮糞便，選取有膿血、粘液部分3-5克、水樣便取含絮狀物的2-5ml，盛于無菌容器中及時送檢。若無法獲得糞便時，可用保存液或增菌液濕潤過的棉拭子插入肛門4-5cm深處（小兒2-3cm），輕輕轉(zhuǎn)動一圈，擦取直腸表面的黏液后取出，盛入運(yùn)送培養(yǎng)基或保存液中送檢。注意為保證多個檢驗(yàn)項(xiàng)目的開展，同一病人應(yīng)至少采集2支肛拭

細(xì)菌性食物中毒標(biāo)本的采集（3）嘔吐物：直接放入無菌容器中及時送檢咽拭樣品：采集時應(yīng)將棉簽檫拭咽喉及扁桃體紅腫處（特別是白膜處），然后將棉簽插入4-5ml生理鹽水中，尾部棄去血液：采集患者急性發(fā)病期（3天內(nèi)）和恢復(fù)期（2周左右）各3ml全血分離血清送檢檢驗(yàn)項(xiàng)目霍亂弧菌、副溶血弧菌及其它致病性弧菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌、沙門菌、變形桿菌、致瀉性大腸埃希菌、空腸彎曲菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌、志賀菌、溶血性鏈球菌及單核細(xì)胞增生李斯特菌等引起的細(xì)菌性食物中毒樣品檢驗(yàn)

中毒特征名稱常見食物潛伏期病程主要癥狀重點(diǎn)采集標(biāo)本沙門氏菌肉蛋類4-48h3-7d惡心嘔吐腹痛腹瀉發(fā)熱38-40℃便食品血副溶血弧菌水產(chǎn)品3-24h1-3d嘔吐發(fā)熱腹痛以上腹部為主水樣便腹瀉便食品變形桿菌肉蛋及水產(chǎn)品5-18h1-3d惡心嘔吐腹痛腹瀉發(fā)熱38℃左右食品便致瀉性大腸涼拌菜4-44h1-3d嘔吐腹痛腹瀉水樣便或粘液便發(fā)熱<39℃便食品蠟樣芽孢桿菌米飯、肉、乳嘔吐型0.5-5h腹瀉型8-16h1d惡心嘔吐為主腹痛腹瀉為主食品嘔吐物葡萄球菌肉、乳、蛋2-4h1-2d惡心頻繁劇烈嘔吐腹痛腹瀉食品嘔吐物糞鏈球菌肉、乳、蛋、冷凍食品5-10h1-2d惡心嘔吐腹痛腹瀉食品嘔吐物糞便肉毒梭菌罐頭、腌制品1-7d2-20d吞咽困難復(fù)視失音呼吸困難食品嘔吐物血液2023/2/119檢驗(yàn)宗旨竭盡全力盡快找到病原體快速、準(zhǔn)確可與傳統(tǒng)方法不一定完全相同

檢驗(yàn)程序

樣品采集↓初步檢驗(yàn)→活菌數(shù)、直接鏡檢(涂片→染色→鏡檢)↓各種致病菌熒光PCR篩查

分離培養(yǎng)(包括增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng))↓初篩試驗(yàn)↓純培養(yǎng)↓全面鑒定（生化試驗(yàn)、血清分型、噬菌體試驗(yàn)等）↓報(bào)告直接涂片染色鏡檢

觀察存在于檢品中特種形態(tài)的細(xì)菌如霍亂弧菌、彎曲菌、球菌等，為進(jìn)一步的檢驗(yàn)提供有用的信息

檢樣的處理病源檢樣因含較多病原菌而一般無須做預(yù)增菌處理，但若病源檢樣為服過抗生素后采集的檢樣應(yīng)按檢驗(yàn)項(xiàng)目要求而進(jìn)行預(yù)增菌處理以保護(hù)和放大目的病原菌直接插入2ml預(yù)增管37℃預(yù)增菌4～6h

直接培養(yǎng)將無須做增菌處理的病源檢樣按檢驗(yàn)項(xiàng)目要求直接接種于各相應(yīng)培養(yǎng)基

增菌及分離培養(yǎng)將預(yù)增菌處理后的服過抗生素后采集的病源檢樣按檢驗(yàn)項(xiàng)目要求接種各相應(yīng)增菌液進(jìn)行增菌增菌培養(yǎng)后接種于各相應(yīng)選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)初篩試驗(yàn)克氏雙糖/三糖鐵/腸道綜合發(fā)酵管1、管2PCRVIDAS可疑菌的鑒定全面生化試驗(yàn)（API、ATB、VETIK、IDS、SWF、手工鑒定等）噬菌體試驗(yàn)血清分型毒素或毒素基因測試毒素或毒素基因測試霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、EIEC侵襲毒素、ETEC腸毒素按國標(biāo)方法進(jìn)行動物試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（VIDAS等）毒素基因測試：霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、致瀉性大腸埃希菌的所有毒力基因均可用PCR檢測，特別是對致瀉性大腸埃希菌的定論應(yīng)以毒素或毒素基因?yàn)闇?zhǔn)

患者血清的試驗(yàn)疑似傷寒或副傷寒的患者應(yīng)取發(fā)病一周的血清做肥達(dá)氏反應(yīng)，用作輔助診斷將患者急性期和恢復(fù)期的血清做凝集效價(jià)的對比，4倍增長可確診檢驗(yàn)結(jié)果的判定應(yīng)以找到病原體或其毒素為最終結(jié)論，在此之前所有的快速檢驗(yàn)方法如PCR、VIDAS等得到的結(jié)果僅供參考

應(yīng)注意非病源檢樣與病源檢樣檢出的病原體的統(tǒng)一性

檢驗(yàn)結(jié)果的判定原則（1）多數(shù)患者樣品中檢出的致病意義明確的細(xì)菌在種類、生化和/或血清型、毒素型均一致時，可報(bào)告為細(xì)菌性食物中毒的病原體檢驗(yàn)結(jié)果的判定原則（2）非病源檢樣與病源檢樣檢出占絕對優(yōu)勢但通常致病意義不甚明確的細(xì)菌如大腸艾希菌、溶藻弧菌等，且其在種類、生化和/或血清型均一致，同時本次細(xì)菌性食物中毒事件中非患者對照標(biāo)本中未檢出該菌時，應(yīng)做該菌的毒素、毒素基因或動物試驗(yàn)，陽性結(jié)果可報(bào)告為細(xì)菌性食源性疾病事件的病原體檢驗(yàn)結(jié)果的判定原則（3）樣品中檢出的生化、血清符合致瀉性大腸艾希菌、金黃色葡萄球菌，一定要以毒素、毒素基因測試陽性為最終結(jié)論報(bào)告蠟樣芽胞桿菌在非病源檢樣中須達(dá)到105cfu/g(ml)以上者才有報(bào)告價(jià)值

細(xì)菌檢驗(yàn)重要篩檢試驗(yàn)接觸酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)用于分辨G-桿菌中腸桿菌科及弧菌科兩類細(xì)菌

革蘭陰性桿菌

陽性反應(yīng)弧菌科

陰性反應(yīng)腸桿菌科接觸酶試驗(yàn)用于分辨葡萄球菌及鏈球菌

革蘭陽性球菌

陽性反應(yīng)葡萄球菌

陰性反應(yīng)鏈球菌沙門氏菌檢測沙門氏菌食物中毒主要特征來源:生食和烹飪不完全的食物，主要是肉類蛋品。癥狀：惡心嘔吐、胃痛、腹瀉、出冷汗、發(fā)燒（38-40℃）。較重者可出現(xiàn)煩躁不安、昏迷、譫語、抽搐等中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，也可以出現(xiàn)尿少、尿閉，呼吸困難等癥狀。同時還出現(xiàn)面色蒼白、口唇青紫、四肢發(fā)涼、血壓下降等周圍循環(huán)衰竭癥狀，甚至休克，如不及時救治，最后可因循環(huán)衰竭而死亡。潛伏期一般為12～36h，短者6h，長者48～72h。腸熱癥----是傷寒病和副傷寒病的總稱，主要由傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。急性腸炎（食物中毒）----是最常見的沙門桿菌感染。多由鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、腸炎桿菌等引起。敗血癥----常由豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌、鼠傷寒桿菌、腸炎桿菌等引起。概況1880年發(fā)現(xiàn)，至今已有2600種有動力（除雞-雛沙門菌）大多產(chǎn)H2S

（除副甲傷寒沙門菌等）產(chǎn)酸大多產(chǎn)氣（除傷寒、雞-雛沙門菌）靛基質(zhì)-、蔗糖-、乳糖-甘露醇+符合腸桿菌科特征（葡萄糖+、硝酸鹽還原+、氧化酶-）檢樣25g(ml)樣品+225mlBPW1ml+TTB10ml1ml+SC10ml36℃±1℃，8h-18hBSXLD(或HE、顯色培養(yǎng)基)挑取可疑菌落42℃±1℃，18h~24h

36℃±1℃，18h~24h36℃±1℃，40h~48h36℃±1℃，18h~24h沙門氏菌檢驗(yàn)程序生化鑒定試劑盒或全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)+A1A2A3反應(yīng)結(jié)果與左側(cè)描述不符

甘露醇+、山梨醇+

ONPG-

沙門氏菌，血清學(xué)試驗(yàn)

非沙門氏菌

報(bào)告TSI，賴氨酸，NA，靛基質(zhì)，尿素（pH7.2），KCN沙門氏菌菌落形態(tài)BS瓊脂：培養(yǎng)40～48h，菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，光滑、邊緣整齊、圓形，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形態(tài)成灰綠色菌落，周圍培養(yǎng)基不變。HE瓊脂：藍(lán)綠色或藍(lán)色，透明、光滑、濕潤、邊緣整齊、圓形，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。XLD瓊脂：菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色，帶或不帶黑色中心。沙門氏菌菌落形態(tài)BS亞硫酸鉍瓊脂（BS）黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。沙門氏菌菌落形態(tài)PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建沙門氏菌菌落形態(tài)XLDXLD瓊脂：粉紅色，帶或不帶黑色中心，有 些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn) 全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或 不帶黑色中心。沙門氏菌菌落形態(tài)HEl沙門氏菌在HE瓊脂上的菌落形態(tài)：藍(lán)綠色或藍(lán)色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建沙門氏菌顯色培養(yǎng)基-CHRO生化試驗(yàn)自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不要滅菌，直接接種賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板，于36℃±1℃培養(yǎng)18h

～24h，必要時可延長 至48h。PDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建血清學(xué)鑒定

血清學(xué)鑒定中的血清學(xué)分型為選擇性試驗(yàn)項(xiàng)目.目前根據(jù)對某一特定O抗原共同具有的標(biāo)準(zhǔn)，將沙門氏菌屬分為A～Z和O51

～O67共42個O群，58種O抗原，63種H抗原。到1987年底為止，已有2213個血清型。我國已發(fā)現(xiàn)26個菌群、161個血清型。沙門氏菌的血清分型沙門氏菌主要有O和H兩種抗原。少數(shù)菌具有表面抗原Vi。在這些菌群中，對人致病的沙門氏菌，通常為屬于A～F各O群的常見菌型。故用A～F多價(jià)O血清對沙門氏菌進(jìn)行的菌型鑒定，只是對于O抗原的第一步鑒定。若待測菌型不屬于A到F群，仍要繼續(xù)使用其他沙門氏菌因子血清中的多價(jià)O血清繼續(xù)鑒定。而在確定了所屬O群之后，還要進(jìn)行H抗原的鑒定。必要時，還需進(jìn)行Vi抗原的鑒定。

沙門氏菌血清試驗(yàn)

致病性的沙門氏菌絕大多數(shù)血清歸在A-F群內(nèi)，所以檢出疑似菌株應(yīng)先凝集A-F群O多價(jià)血清，若凝集可按常見O因子檢出頻率，按照O4→O10→O9→O7→O8→O19→O2→O11順序凝集，可節(jié)省時間。H抗原可先凝集H多價(jià)1～H多價(jià)4，再逐個凝集某個H多價(jià)凝集所含的H單因子血清。傷寒和丙型副傷寒桿菌在A-F群多價(jià)血清不凝集情況下，還應(yīng)做Vi血清凝集。P第1位數(shù)第2位數(shù)第3位數(shù)第4位數(shù)第5位數(shù)第6位數(shù)第7位數(shù)ONA D HGLDCODCCITHU2RSETDAINDVPGELGLUMANINOSORRGASACMELAMYARA

結(jié)O果X判 定124124124124124124124反應(yīng)結(jié)果－＋＋＋＋＋－－－－－＋＋＋＋＋－＋－＋－沙門氏菌應(yīng)得數(shù)值024124000004124104020組合編碼6704752API20EPDF文件使用"pdfFactoryPro"試用版本創(chuàng)建沙門氏菌生化鑒定志賀氏菌檢測概況至今已有4群（A、B、C、D）、32種（A-痢疾志賀菌10個血清型；B–福氏志賀菌6個血清型+X、Y變種；C-鮑氏志賀菌15個血清型、D-宋內(nèi)1個血清型，S，R兩相）無動力乳糖-

（除宋內(nèi)遲緩發(fā)酵+）不產(chǎn)H2S產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（除F6產(chǎn)極少量氣泡）靛基質(zhì)大多+（宋內(nèi)-）、蔗糖-甘露醇+（痢疾志賀菌為-）符合腸桿菌科特征（葡萄糖+、硝酸鹽還原+、氧化酶-）增菌：用GN增菌液使處于瀕死狀態(tài)的細(xì)菌恢復(fù)活力選擇性平板分離培養(yǎng)：XLD+MAC/顯色培養(yǎng)基生化試驗(yàn)：可采用API20E或VITEK2血清學(xué)鑒定：特異性診斷血清鑒定到種。

志賀氏菌操作流程增菌培養(yǎng)用志賀氏菌增菌液增菌,41.5℃±１℃，16h～20h厭氧培養(yǎng)。智能厭氧微需氧培養(yǎng)系統(tǒng)（二）分離培養(yǎng)取增菌后的GN增菌液或志賀氏增菌肉湯分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或R&F志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上于36℃1℃培養(yǎng)20h～24h，觀察各個平板上生長的菌落形態(tài)若出現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀察，則繼續(xù)培養(yǎng)至48h再進(jìn)行觀察。初步生化鑒定從平板上挑取3～4個可疑菌落，接種TSI和葡萄糖半固體培養(yǎng)基各一管，36℃培養(yǎng)18～24h。初步生化鑒定TSI生長結(jié)果（現(xiàn)象）：斜面產(chǎn)堿仍為粉紅色或紅色；底層產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，變黃色；不產(chǎn)硫化氫，不產(chǎn)黑色。半固體培養(yǎng)基：沿線生長，無動力。初步生化鑒定可棄去地培養(yǎng)物：在TSI表面呈蔓延生長的。18～24h內(nèi)發(fā)酵乳糖、庶糖的。不分解葡萄糖，只在半固體培養(yǎng)基表面生長的。產(chǎn)氣的。有動力的。產(chǎn)硫化氫的。血清學(xué)分型（選做項(xiàng)目）

先用四種志賀氏菌多價(jià)血清檢查，如果呈現(xiàn)凝集，則再用相應(yīng)各群多價(jià)血清分別試驗(yàn)。先用B群福氏志賀氏菌多價(jià)血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如呈現(xiàn)凝集，再用其群和型因子血清分別檢查，福氏志賀氏菌各型和亞型的型抗原和群抗原鑒別見表4。如果B群多價(jià)血清不凝集，則用D群宋內(nèi)氏志賀氏菌血清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如呈現(xiàn)凝集，則用其Ⅰ相和Ⅱ相血清檢查；如果B、D群多價(jià)血清都不凝集，則用A群痢疾志賀氏菌多價(jià)血清及1～12各型因子血清檢查，如果上述三種多價(jià)血清都不凝集，可用C群鮑氏志賀氏菌多價(jià)檢查，并進(jìn)一步用1～18各型因子血清檢查。志賀氏菌的O抗原人們原來的認(rèn)識認(rèn)為血清學(xué)試驗(yàn)是特異性的，但是志賀氏菌的O抗原和大腸埃希氏菌屬關(guān)系密切，有半數(shù)的菌型與大腸埃希氏菌的某些O抗原完全相同。相同抗原菌屬間存在血清交叉凝集反應(yīng)。因此，生化試驗(yàn)對于屬的鑒定是非常重要的。若生化反應(yīng)符合，而血清四種多價(jià)-，考慮：A、C群志賀菌O抗原外有K包膜抗原遮蔽，煮沸后再凝可能是EIEC，再做大生化以鑒別宋內(nèi)的R相菌，用R相血清凝集可能是蜂窩哈夫尼亞菌，做大生化以鑒別可能是類志賀鄰單胞菌，觀察動力、氧化酶報(bào)告方式痢疾志賀菌1型福氏志賀菌2a型福氏志賀菌X變種鮑氏志賀菌13型宋內(nèi)志賀菌S相福建省福氏志賀菌優(yōu)勢血清型別2005首次檢出福氏志賀菌4c血清亞型（F4c），在隨后的分離株中F4c亞型成為福建省福氏志賀菌分離株的優(yōu)勢血清型17/40(42.5%)繼往流行的福氏2a、1b血清亞型分離的菌株數(shù)卻減少說明福建省福氏志賀菌優(yōu)勢血清型別在發(fā)生更替

。金黃色葡萄球菌金葡菌食物中毒主要特征來源：主要存在于人們的皮膚、鼻、喉、耳等部位。進(jìn)食了被污染的肉類、乳品、定粉制品。癥狀：惡心、嘔吐（頻繁而劇烈），腹痛、腹瀉，由于劇烈嘔吐和腹瀉，可引起大量失水而發(fā)生外周循環(huán)衰竭和虛脫。潛伏期：一般30min～6h，最短為15min左右，很少有超過8h的。金黃色葡萄球菌

檢驗(yàn)流程食物25g+生理鹽水225mL，取5mL50mL7.5％NaCl肉湯血平板、B-P平板36℃24h染色鏡檢血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)觀察菌落形態(tài)報(bào)告嘔吐物、糞便肛拭了、涂抹拭子3個連續(xù)稀釋度接種B-P平板36℃48h10mL7.5％NaCl肉湯BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂斜面金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)B-P瓊脂：菌落圓形、凸起、濕潤，直徑2～3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈，接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣硬度，偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落，但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。血平板：形成較菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色（有時為白色），菌落周圍可見完全透明溶血圈。BP平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和痕量礦物元素丙酮酸鈉是一種生長促進(jìn)劑亞碲酸鹽對除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有毒性，并使菌落產(chǎn)生黑色卵黃提供營養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)甘氨酸和氯化鋰對金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)完全溶血和不完全溶血β溶血α溶血血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)可疑菌落1個（計(jì)數(shù)時取5個菌落分別接種）→5mLBHI和營養(yǎng)瓊脂斜面，36℃培養(yǎng)24h→0.2～0.3mLBHI培養(yǎng)物+0.5mL兔血漿→36℃水浴箱或培養(yǎng)箱→每半小時觀察一次,觀察6小時→凝固為陽性,反之為陰性（同時以血漿凝固酶陽性和陰性葡萄球菌株的肉湯培養(yǎng)物作對照）。4、金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測

一、動物學(xué)試驗(yàn)主要用幼貓和猴。二、血清學(xué)試驗(yàn)?zāi)c毒素作為抗原，可以和特異性抗體發(fā)生結(jié)合性反應(yīng)，產(chǎn)生可見沉淀。用血清學(xué)反應(yīng)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌腸毒素，方法主要有：免疫瓊脂擴(kuò)散法反向間接血凝試驗(yàn)免疫熒光法酶聯(lián)免疫吸附法三、實(shí)時熒光定量PCR

副溶血性弧菌

副溶血性弧菌食物中毒是我國沿海地區(qū)、我省最常見的一種食物中毒

概況副溶血弧菌系弧菌科弧菌屬，革蘭染色陰性，兼性厭氧菌，為多形態(tài)桿菌或稍彎曲弧菌。本菌嗜鹽畏酸。最適宜的培養(yǎng)基：溫度為30℃—37℃，含鹽2.5%—3%(若鹽濃度低于0.5%則不生長），pH值為8.0—8.5。本菌對酸較敏感，當(dāng)pH6以下即不能生長，在普通食醋中l(wèi)一3min即死亡。在固體培養(yǎng)基上菌落常隆起，圓形，表面光滑，濕潤。在3％一3．5％含鹽水中繁殖迅速，每8～9min為一周期。對高溫抵抗力小，50℃20min；65℃5min或80℃1min即可被殺死。本菌對常用消毒劑抵抗力很弱，可被低濃度的酚和煤酚皂溶液殺滅。概況氧化酶試驗(yàn)：副溶為氧化酶陽性三糖鐵試驗(yàn)：底層變黃，斜面不變或紅色加深、無硫化氫、無氣泡、有動力。

嗜鹽性試驗(yàn)：副溶在無氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不生長或微弱生長，在7%氯化鈉的胰胨水中生長旺盛?；【鷮僦械蔫b別特點(diǎn)梅氏弧菌氧化酶陰性，其余陽性蔗糖陰性：副溶血弧菌、創(chuàng)傷弧菌、擬態(tài)弧菌、霍利斯弧菌、其余的在TCBS上為黃色菌落。無鹽生長：霍亂、擬態(tài)10%NaCl生長：溶藻弧菌。副溶血性弧菌

檢驗(yàn)流程糞便、嘔吐物、拭子食物25g+3％NaCl堿性胨水225mL，37℃，8～16hTCBS平板，37℃，18～24h3％TSA純化，37℃，18～24h初步鑒定；3％TSI、革蘭染色、氧化酶實(shí)驗(yàn)、嗜鹽性實(shí)驗(yàn)生化試驗(yàn)（接種含3％氯化鈉生化試劑）報(bào)告3％NaCl堿性胨水10mL，37℃，8～16h副溶血性弧菌菌落形態(tài)TCBS瓊脂：呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，接種環(huán)輕觸，有類似口香糖的質(zhì)感，直徑2～3mm。涂片鏡檢：革蘭氏陰性，呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài)，無芽胞，有鞭毛。副溶血性弧菌菌落特征副溶血性弧菌菌落特征霍亂、副溶、隨培養(yǎng)時間的延長霍亂的黃色菌落逐漸變藍(lán)

鑒定生化性狀：葡萄糖+、分解葡萄糖產(chǎn)氣-、甘露醇+、H2S-、氧化酶+、動力+、蔗糖-、乳糖-、賴氨酸脫羧酶+、V-P-、ONPG-。嗜鹽試驗(yàn)：10％氯化鈉胰胨水不生長或微弱生長，7％氯化鈉胰胨水生長旺盛。變形桿菌概況變形桿菌屬(Proteus)包括:普通變形桿菌(P．vulgaris)奇異變形桿菌(P.mirabilis)產(chǎn)粘變形桿菌（P.myxofaciens）。

變形桿菌為革蘭氏陰性桿菌，兩端鈍圓，有明顯的多形性。無芽孢無莢膜，有周身鞭毛，運(yùn)動活潑。為需氧或兼性厭氧，對營養(yǎng)要求不高，生長溫度為10～43℃。不耐熱，60℃5～30min皆可殺死。變形桿菌可產(chǎn)生腸毒素，此腸毒素為蛋白質(zhì)和碳水化合物的復(fù)合物，具抗原性。變形桿菌檢驗(yàn)流程食品加適量生理鹽水制成混懸液計(jì)數(shù)選擇性SS、EMB培養(yǎng)基，37℃，18～24hTSI，37℃，24h生化試驗(yàn)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告GN，37℃，24h糞便、嘔吐物、拭子、涂抹液變形桿菌菌落形態(tài)SS瓊脂：形成單個菌落，菌落圓形、扁薄透明或半透明，有的菌落邊緣呈擴(kuò)散狀，對光觀察，菌落周圍淡藍(lán)色中心稍厚，有黏性，打開平皿時有臭味。EMB瓊脂：無色透明菌落，普通變形桿菌和奇異變形桿菌在伊紅美藍(lán)平板上可呈現(xiàn)片狀蔓延生長。變形桿菌菌落特征普平鑒定生化實(shí)驗(yàn)：乳糖反應(yīng)陰性（TSI斜面紅色）、葡萄糖產(chǎn)酸（TSI底層黃色）產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，硫化氫陽性或陰性、尿素陽性、苯丙氨酸陽性者進(jìn)行系統(tǒng)生化鑒定，判定種屬或群。血清學(xué)實(shí)驗(yàn)：變形桿菌食物中毒需對來自可疑食物與患者的菌株進(jìn)行血清型別鑒定，以判定其同源性，，方法：將待試菌株分別點(diǎn)種在普通營養(yǎng)瓊脂平板的兩端，待兩側(cè)的菌株蔓延生長到平板中間，菌苔完全融合，說明兩株細(xì)菌沒有拮抗現(xiàn)象。蠟樣芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌食物中毒主要特征來源：米食、乳制品、畜禽肉類制品、等。剩飯，特別是大米飯，其次小米飯、高粱米飯等剩飯。除米飯有時微有發(fā)粘、入口不爽或稍帶異味外，大多數(shù)食品的感官性狀正常。

癥狀：嘔吐型：主要表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛，腹瀉。此外，頭昏、四肢無力、口干、寒戰(zhàn)、結(jié)膜充血等癥亦有發(fā)生。該型主要是由剩米飯或炒飯引起的。該菌易在米飯中繁殖并產(chǎn)生耐熱性腸毒素。與葡萄球菌食物中毒在潛伏期、中毒表現(xiàn)方面非常相似，易混淆。腹瀉型：主要表現(xiàn)有腹瀉、腹痛。水樣便，一般無發(fā)熱，可有輕度惡心，但嘔吐罕見。病程稍長，16～136h。主要是蠟樣芽孢桿菌在食品中產(chǎn)生不耐熱腸毒素所致,與產(chǎn)氣莢膜梭菌食物中毒相似，應(yīng)注