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文檔簡介

EcoRI酶切鑒定組分體系質(zhì)粒DNA3gl水4plbuffer1.5glBSA0.5ulEcoRI1ul10m體系，于水浴中切割3小時，然后電泳，點樣5pl。通常質(zhì)粒DNA出現(xiàn)三個條帶，由前到后的順序為閉環(huán)質(zhì)粒、線性質(zhì)粒和開環(huán)質(zhì)粒。BamHI和HindIII雙酶切體系鑒定使用pMD-18T載體連接的目的片段，酶切鑒定時選用BamHI和HindIII雙酶切體系鑒定：（見下表）依DNA量定體系5gl10gl10"10gl重組DNA26.534BSA0.30.50.2—BamHI0.410.50.5HindIII0.410.50.5Buffer(10X)0.5111H2O1.4—4.84「反應(yīng)條件37°C水浴，3hr，電泳檢測若質(zhì)粒DNA不能被限制酶所切割，這幾乎總是由于從細(xì)菌沉淀或從核酸沉淀中去除所有上清時注意得不夠，可用酚:氯仿對solution進(jìn)行抽提，以去除少量制備中的雜質(zhì)，若問題依然存在，可用離心，柱層析純化DNA。XbalI和SalI雙酶切體系鑒定依DNA量定體系20pl10gl10gl火菌去離子水8.54.3—10Xbuffer211BSA(10ug/ul)0.20.10.1DNA(1ug/ul)8.347.9XbaI(10U/ul)0.50.30.5SalI(10U/ul)0.50.30.5反應(yīng)條件37C，1~3hr，電泳檢測HindII單酶切依DNA量定體系30gl火菌去離子水410Xbuffer3DNA(1ug/ul)20HindIII3反應(yīng)條件37C，1?3hr，電泳檢測NotI和SalI雙酶切體系鑒定依DNA量定體系20pl10gl10gl10gl30gl40pl火菌去離子水8.54.3—262.410XbufferD211134BSA(10皿l)0.20.10.10.20.60.6DNA(1ug/ul)8.347.961830NotI(10U/ul)0.50.30.50.41.21.5SalI(10U/ul)0.50.30.50.41.21.5

依DNA量定體系20pl10gl火菌去離子水--10Xbuffer21DNA(1ug/ul)178.5NheI10.5反應(yīng)條件37C,1~3hr，電泳檢測反應(yīng)條件

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