艾滋病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程

艾滋病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程艾滋病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程檢測(cè)項(xiàng)目的樣品種類1HIV抗體檢測(cè)：全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品。2HIV抗原檢測(cè)：全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液。3T淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定：EDTA或肝素抗凝全血。4HIV-1病毒載量、基因型、耐藥檢測(cè)：血漿、濾紙干血斑(DBS)。5HIV核酸定性與定量、基因型檢測(cè)和HIV-1分離培養(yǎng)：淋巴細(xì)胞富集液、外周血單核淋巴細(xì)胞(PBMC)及全血。當(dāng)然，實(shí)驗(yàn)室最常用的仍然是血液標(biāo)本，其他只作為補(bǔ)充樣本。HIV抗體檢測(cè)HIV抗體檢測(cè)是艾滋病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的優(yōu)先選擇項(xiàng)目，在國(guó)內(nèi)絕大多數(shù)初篩實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最廣泛。1初篩方法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)ELISA法檢測(cè)HIV抗體是HIV初篩實(shí)驗(yàn)室最常用最普遍的方法，目前檢測(cè)試劑已經(jīng)發(fā)展到第四代，即同時(shí)檢測(cè)血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體，秉承「寧可錯(cuò)殺一千，不可漏網(wǎng)一個(gè)」的革命精神，其靈敏度遠(yuǎn)高于特異性，直叫HIV抗體無(wú)處遁形?；瘜W(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)(CIA/IFA)這個(gè)試驗(yàn)方法是近10年迅猛發(fā)展的一種新型檢測(cè)方法，其采用發(fā)光或熒光底物，既可檢測(cè)抗體，也可聯(lián)合檢測(cè)抗原抗體，用發(fā)光或熒光儀測(cè)定結(jié)果，其靈敏度較ELISA有了進(jìn)一步的提高，同時(shí)帶來(lái)的'是檢測(cè)成本的增加和假陽(yáng)性率的增高?？焖贆z測(cè)(RT)方法此類方法操作簡(jiǎn)便快速，適用于應(yīng)急檢測(cè)、門診急診檢測(cè)，但靈敏度和特異性遠(yuǎn)不如ELISA和發(fā)光法，但是經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，也有一定的市場(chǎng)影響力。主要包括以下幾種方法：明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)、免疫滲濾試驗(yàn)、免疫層析試驗(yàn)。2確認(rèn)實(shí)驗(yàn)⑴免疫印跡試驗(yàn)(WB)WB采用間接法檢測(cè)樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的HIV-1蛋白分離開來(lái)，經(jīng)過一系列處理后，硝酸纖維素膜顯示與特異抗原的結(jié)合的抗體條帶從而確診抗體的存在。(2)條帶/線性免疫試驗(yàn)(RIBA/LIA)實(shí)驗(yàn)原理基本同WB法，不再贅述。HIV-1抗原檢測(cè)1篩查實(shí)驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA法):即第四代抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑盒?？贵w包被固相反應(yīng)孔(管)的底部，待測(cè)樣本中P24抗原與包被抗體形成抗原抗體復(fù)合物，再加入酶(HRP)標(biāo)記的HIV-1抗體與抗原結(jié)合，加底物顯色，在酶標(biāo)儀上讀取結(jié)果。因同時(shí)檢測(cè)抗原抗體，靈敏度大大提高，有效縮短了HIV感染的檢測(cè)窗口期，但因試劑成本較高，在普通篩查實(shí)驗(yàn)室推廣有一定難度。酶聯(lián)熒光分析法(ELFA):待測(cè)樣品的p24抗原與包被在固相孔(管)內(nèi)的p24抗體結(jié)合，并被生物素標(biāo)記的p24抗體識(shí)別。臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用前景不明朗，需要熒光檢測(cè)設(shè)備，成本較高。電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA):待測(cè)樣品的p24抗原與包被抗體的磁性微粒和發(fā)光劑標(biāo)記的抗體在反應(yīng)管中溫育，形成磁性微珠包被抗體-抗原-發(fā)光劑標(biāo)記抗體復(fù)合物?？乖贵w快速檢測(cè)法：同快速方法(RT)檢測(cè)抗體，不同之處是用HIV抗體包被載體，檢測(cè)靈敏度同樣較差。2中和試驗(yàn)中和試驗(yàn)主要是p24抗原檢測(cè)的補(bǔ)充試驗(yàn)，還可做HIV-1RNA的定性或定量檢測(cè)，以排除篩查試驗(yàn)的假陽(yáng)性。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA法):待檢樣品先與中和劑(p24抗原的抗體)共同孵育，如果樣品中存在p24抗原，中和抗體將與之結(jié)合形成復(fù)合物，而不能與固相載體上的捕獲抗體結(jié)合。酶聯(lián)熒光分析法(ELFA):原理和檢測(cè)步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA法)，中和率$60%,認(rèn)為樣品中的p24抗原是真陽(yáng)性。電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA):原理和檢測(cè)步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA法)，中和率大于50%，認(rèn)為樣品中的p24抗原是真陽(yáng)性。HIV核酸檢測(cè)目前國(guó)內(nèi)HIV核酸檢測(cè)試劑主要為Taqman實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑，可檢測(cè)血漿、血清、組織器官或血液制品的HIV-1RNA和DNA,DBS可用于檢測(cè)RNA/DNAo全球目前正式用于臨床診斷HIV-1急性期感染的核酸檢測(cè)試劑比較少，主要是美國(guó)FDA批準(zhǔn)的Gen-Probe公司生產(chǎn)的AptimaHIV-IRNA核酸定性檢測(cè)試劑和歐盟批準(zhǔn)的AbbottM2000HIVTRNA/DNA定性檢測(cè)試劑。臨床診斷相關(guān)的檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告HIV檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果的檢測(cè)過程一般經(jīng)歷兩個(gè)階段，初篩和復(fù)檢程序。以HIV抗體檢測(cè)為例，具體流程如下：試劑1進(jìn)行初篩，結(jié)果無(wú)反應(yīng)，報(bào)告「HIV抗體陰性」；結(jié)果有反應(yīng)，不能出具陽(yáng)性報(bào)告，必須進(jìn)入復(fù)檢試驗(yàn)。對(duì)初篩有反應(yīng)的樣品，用原有試劑雙份或雙孔進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)(或者兩種試劑復(fù)檢)，如均無(wú)反應(yīng)，報(bào)告「HIV抗體陰性」；如均有反應(yīng)或一個(gè)有反應(yīng)一個(gè)無(wú)反應(yīng)，進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)（抗體確證試驗(yàn)和HIV-1核酸試驗(yàn)），報(bào)告HIV感染待確定。目前大部分臨床實(shí)驗(yàn)室為艾滋病初篩實(shí)驗(yàn)室，開展常規(guī)初篩實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果初步復(fù)檢后送省市CDC或當(dāng)?shù)仄渌_認(rèn)實(shí)驗(yàn)室做確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。臨床診斷篩查檢測(cè)流程見下圖：目前國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室多采用「初