GB 15193.20-2014食品安全國家標準體外哺乳類細胞TK基因突變試驗

中華人民共和國國家標準

GB1519320—2014

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食品安全國家標準

體外哺乳類細胞TK基因突變試驗

2014-12-24發(fā)布2015-05-01實施

中華人民共和國發(fā)布

國家衛(wèi)生和計劃生育委員會

GB1519320—2014

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前言

本標準代替基因突變試驗

GB15193.20—2003《TK》。

本標準與相比主要變化如下

GB15193.20—2003,:

標準名稱修改為食品安全國家標準體外哺乳類細胞基因突變試驗

———“TK”;

修改了范圍

———;

增加了術語和定義

———;

修改了試驗目的和原理

———;

增加了代謝活化系統(tǒng)

———;

增加了和選擇培養(yǎng)基的配制方法

———THMGTHG;

增加了和選擇培養(yǎng)基的配制方法

———CHATCHT;

增加了三氟胸苷的配制方法

———;

增加了磷酸鹽緩沖液的配制方法

———;

修改了受試物劑量設定的要求

———;

修改了對照的設定

———;

增加了備選細胞系及相應的試驗方法及數(shù)據(jù)處理

———;

增加了試驗報告的要求

———;

增加了試驗的解釋的要求

———。

Ⅰ

GB1519320—2014

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食品安全國家標準

體外哺乳類細胞TK基因突變試驗

1范圍

本標準規(guī)定了體外哺乳類胸苷激酶基因突變試驗的基本試驗方法與技術

(thymidinekinase,TK)

要求

。

本標準適用于評價受試物的致突變作用

。

2術語和定義

21TK基因

.

哺乳類動物的胸苷激酶基因人類的基因定位于號染色體長臂遠端小鼠的則定位于

。TK17;

號染色體

11。

22突變頻率

.

在某種細胞系中某一特定基因突變型的細胞集落占細胞集落總數(shù)的比例單位通常為-6

,()()(10)。

3試驗目的和原理

基因突變試驗的檢測終點是基因的突變基因突變屬于常染色體基因突變

TKTK。TK。

基因的產物胸苷激酶在體內催化從脫氧胸苷生成胸苷酸的反應在正常情況

TK(TdR)(TMP)。

下此反應并非生命所必需原因是體內的主要來自于脫氧尿嘧啶核苷酸即由胸苷酸

,,TMP(dUMP),

合成酶催化的甲基化反應生成但如在細胞培養(yǎng)物中加入胸苷類似物如三氟胸苷即

dUMPTMP。(,

則在胸苷激酶的催化下可生成三氟胸苷酸進而摻入造成致死

trifluorothymidine,TFT),TFT,DNA,

性突變故細胞不能存活若基因發(fā)生突變導致胸苷激酶缺陷則不能磷酸化亦不能摻入

,。TK,,TFT,

故突變細胞在含有的培養(yǎng)基中能夠生長即表現(xiàn)出對的抗性根據(jù)突變集落形成數(shù)

DNA,TFT,TFT。,

可計算突變頻率從而推斷受試物的致突變性在基因突變試驗結果觀察中可發(fā)現(xiàn)兩類明顯不同

,。TK

的集落即大小集落細胞或正常生長緩慢生長集落細胞有研究表明大集落正常

,/(L5178Y)/(TK6),,/

生長集落主要由點突變或較小范圍的缺失等引起而小集落緩慢生長集落主要由較大范圍的染色體畸

,/

變或由涉及調控細胞增殖的基因缺失引起

,。

4儀器和試劑

41儀器

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實驗室常用設備低溫冰箱