免疫學(xué)的實(shí)際應(yīng)用

免疫學(xué)的實(shí)際應(yīng)用第一頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日特異性免疫的獲得方式第二頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日第一節(jié)生物制品生物制品是指以微生物、寄生蟲(chóng)、動(dòng)物毒素和生物組織作為起始材料，采用生物學(xué)工藝或分離純化技術(shù)制備，并以生物學(xué)技術(shù)和分析技術(shù)控制中間產(chǎn)物和成品質(zhì)量制成的生物活性制劑。包括：疫苗、免疫血清和診斷試劑。

第三頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日根據(jù)應(yīng)用對(duì)象，生物制品可以分為3類(lèi)(1)用于人類(lèi)的醫(yī)用生物制品(2)用于動(dòng)物的動(dòng)物生物制品(3)用于植物的植物生物制品。通常所說(shuō)的生物制品是指醫(yī)用生物制品。第四頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日一、人工自動(dòng)免疫用制劑㈠疫苗：是指病原微生物、寄生蟲(chóng)及其組織成分或代謝產(chǎn)物制成并用于人工自動(dòng)免疫的生物制品。

第五頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日1活苗：

病原微生物毒力逐漸減弱或喪失，但仍保持良好的免疫原性，用該種活的、變異的病原微生物制成的疫苗稱(chēng)為活苗或弱毒苗。如脊髓灰質(zhì)病毒、卡介苗、麻疹病毒疫苗等。優(yōu)點(diǎn)：活苗能在體內(nèi)短期繁殖，多為一次免疫，使用劑量小，免疫力強(qiáng)，成本低，有多種免疫途徑且不需佐劑；缺點(diǎn)：有排毒危險(xiǎn)或組織反應(yīng)，難以制成聯(lián)苗，運(yùn)輸保存較困難，現(xiàn)多制成凍干苗。第六頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日2滅活苗（死苗）

選用免疫原性強(qiáng)的細(xì)菌、病毒等經(jīng)人工培養(yǎng)后用理化方法將其殺死（滅活）后制成的疫苗稱(chēng)為滅活苗或死苗。如傷寒菌、百日咳桿菌、霍亂弧菌、鉤端螺旋體、流感病毒、狂犬病病毒、乙腦病毒疫苗均為滅活疫苗。

優(yōu)點(diǎn)：滅活苗安全易保存，容易制成聯(lián)苗或多價(jià)苗。

缺點(diǎn)：不能在體內(nèi)增殖，免疫期短，常需多次免疫，使用劑量大且只能注射，可能有毒性等副作用。

第七頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日死疫苗和活疫苗的比較死疫苗活疫苗接種途徑多采取皮下注射多為模擬自然感染途徑、少數(shù)經(jīng)皮下注射接種劑量較大較小接種次數(shù)二次或多次一般只需一次免疫效果較差可靠免疫力維持時(shí)間數(shù)月~1年長(zhǎng)達(dá)3~5年以上疫苗保存易于保存不易保存不良反應(yīng)較大較小制品類(lèi)型可多種疫苗混合使用一般單獨(dú)使用第八頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日常用的病毒疫苗流行性感冒Influenza—Inactivated風(fēng)疹Rubella—Attenuated輪狀病毒Rotavirus—Attenuated

水痘Varicella—Attenuated甲肝HepatitisA—Inactivated

乙肝HepatitisB—Subunit脊髓灰質(zhì)炎PolioInactivatedAttenuated狂犬病Rabies

firstattenuatedinactivated第九頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日3類(lèi)毒素

將細(xì)菌的外毒素用0.3%-0.4%甲醛溶液脫毒制成的生物制品。外毒素經(jīng)脫毒后失去毒性，但保留較強(qiáng)的免疫原性。

類(lèi)毒素常與死疫苗混合使用劇成白喉類(lèi)毒素、破傷風(fēng)類(lèi)毒素及百日咳桿菌聯(lián)合疫苗。

第十頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日第十一頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日（二）新型疫苗1.聯(lián)苗與多價(jià)苗聯(lián)苗：是指不同種微生物或其代謝產(chǎn)物組成的疫苗。多價(jià)苗：則是指同種微生物不同型或株所制成的疫苗。

2.寄生蟲(chóng)疫苗由于寄生蟲(chóng)大多有復(fù)雜的生活史，其蟲(chóng)體抗原極其復(fù)雜并具有高度多變性，因而至今仍無(wú)理想的寄生蟲(chóng)疫苗。第十二頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日3.亞單位苗利用微生物的一種或幾種亞單位或亞結(jié)構(gòu)制成的疫苗稱(chēng)為微生物亞單位苗或亞結(jié)構(gòu)苗；由微生物的某些化學(xué)成分制成的疫苗又稱(chēng)為化學(xué)苗。4.基因工程苗

是以辣病毒、皰疹病毒為載體，將目的基因插入此種病毒基因組的特定位置上，使載體病毒獲得表達(dá)外源基因新特性的重組體疫苗，又稱(chēng)為重組活毒疫苗。

第十三頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日(四）疫苗制造的基本程序1.疫苗的菌種與毒種（1）菌種、毒種的一般要求①來(lái)源清楚，資料完整②生物學(xué)特性比較典型③血清型相符④遺傳性狀穩(wěn)定第十四頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日(2)滅活、滅活劑與佐劑①滅活與滅活劑滅活：是指破壞微生物的生物學(xué)特性，但盡可能避免影響其免疫原性。②佐劑

佐劑：?jiǎn)为?dú)使用一般無(wú)免疫原性，而與抗原物質(zhì)合用能增強(qiáng)后者的免疫原性和機(jī)體的免疫應(yīng)答，或改變機(jī)體免疫應(yīng)答類(lèi)型的物質(zhì)稱(chēng)為佐劑。第十五頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日雞胚培養(yǎng)細(xì)胞大量突變病毒原代猴腎細(xì)胞減毒繁殖快，生長(zhǎng)迅速脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗的制備生長(zhǎng)迅速，無(wú)毒性，只在非神經(jīng)組織中生長(zhǎng)(腎)，不在CNS生長(zhǎng)。脊髓灰質(zhì)炎病毒傳代病毒于其他宿主脊髓灰質(zhì)炎疫苗第十六頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日牛分支桿菌13年卡介苗（BCG）BacillusCalmette-Guerin在膽汁中適應(yīng)性生長(zhǎng)，充分減毒成為預(yù)防肺結(jié)核的疫苗?？ń槊绲闹苽渲糜诤懼呐囵B(yǎng)基，逐漸增加膽汁的濃度。最早由法國(guó)科學(xué)家卡爾梅特(Calmette)和介朗(Guérin)研制成功的疫苗。即將有毒力的牛型結(jié)核分枝桿菌在甘油膽汁馬鈴薯培養(yǎng)基上長(zhǎng)期培養(yǎng)傳代，得到減毒菌株，可用于預(yù)防結(jié)核菌感染。第十七頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日第十八頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日二、人工被動(dòng)免疫用制劑動(dòng)物經(jīng)反復(fù)多次注射同一種病原微生物等抗原后，機(jī)體體液中產(chǎn)生大量抗該抗原的抗體，由此分離所得的血清稱(chēng)為免疫血清、高免血清或抗血清。此種免疫持續(xù)時(shí)間短，只適用于治療與緊急預(yù)防，屬人工被動(dòng)免疫。

第十九頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日用于人工被動(dòng)免疫的制劑有3類(lèi)：（1）特異性免疫球蛋白制劑，如抗毒素和抗病毒血清等。（2）混合的免疫球蛋白制劑，如丙種球蛋白制劑；（3）提高細(xì)胞免疫功能的制劑，如致敏淋巴細(xì)胞，轉(zhuǎn)移因子，白細(xì)胞介素，免疫核糖核酸，胸腺素等。第二十頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日人工自動(dòng)免疫與人工被動(dòng)免疫的比較人工自動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫產(chǎn)生免疫力的物質(zhì)抗原（疫苗、類(lèi)毒素、瘤苗等）抗體、活化的淋巴細(xì)胞、細(xì)胞因子等發(fā)揮作用的潛伏期較長(zhǎng)，約12~4周短，無(wú)需誘導(dǎo)期、立即發(fā)揮作用免疫力維持時(shí)間較長(zhǎng)，約半年~數(shù)年較短，數(shù)周~數(shù)月主要用途預(yù)防傳染性疾病治療腫瘤傳染性疾病的治療或緊急預(yù)防，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，治療腫瘤第二十一頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日計(jì)劃免疫就是根據(jù)疫情監(jiān)測(cè)和人群免疫狀況分析，按照國(guó)家規(guī)定的免疫程序，有計(jì)劃地利用疫苗進(jìn)行人群預(yù)防接種，以提高人群免疫水平，達(dá)到控制以至最終消滅相應(yīng)傳染病的目的。計(jì)劃免疫工作是當(dāng)前我國(guó)衛(wèi)生防疫工作的主要組成部分，其主要內(nèi)容是“接種五苗防七病”，即：按照免疫程序，對(duì)7周歲以下兒童有計(jì)劃地進(jìn)行卡介苗（BCG）、脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗（TOPV）、百白破三聯(lián)混合制劑（DPT）、麻疹疫苗（MV）和乙肝疫苗（HBV）的基礎(chǔ)免疫及加強(qiáng)免疫接種，從而達(dá)到防治結(jié)核、脊髓灰質(zhì)炎、百日咳、白喉、破傷風(fēng)、麻疹及乙型肝炎等疾病的目的。三、中國(guó)計(jì)劃免疫第二十二頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日1.白喉2.百日咳3.破傷風(fēng)4.流感5.脊髓灰質(zhì)炎6.流行性腮腺炎7.麻疹8.風(fēng)疹常見(jiàn)傳染病疫苗接種前后的發(fā)病率比較接種后接種前102123456781041060發(fā)病數(shù)第二十三頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日浙江省于1978年開(kāi)始實(shí)施免疫規(guī)劃。2008年，浙江根據(jù)自身經(jīng)濟(jì)狀況和發(fā)展水平，進(jìn)一步擴(kuò)大了國(guó)家免疫規(guī)劃，將腮腺炎疫苗、風(fēng)疹疫苗、甲肝、流腦等疫苗納入本省的免疫規(guī)劃。通過(guò)免費(fèi)接種，適齡兒童注射的疫苗已從7種預(yù)防9種疾病擴(kuò)大到12種預(yù)防15種疾病，針對(duì)性疾病得到了有效控制，千萬(wàn)兒童的身體健康得到了有效保護(hù)。

第二十四頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日第二十五頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日第二十六頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日一、概念血清學(xué)試驗(yàn):抗體和相應(yīng)的抗原在體外一定的條件下作用后，能出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的反應(yīng)。由于抗體主要存在于血清中，所以將體外的抗原抗體反應(yīng)叫做血清學(xué)反應(yīng)。第二節(jié)血清學(xué)反應(yīng)第二十七頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日二、常見(jiàn)的血清學(xué)反應(yīng)包括

㈠凝聚性反應(yīng)⒈凝集反應(yīng)：⒉沉淀反應(yīng)：㈡有補(bǔ)體參與的反應(yīng)㈢中和試驗(yàn)㈣標(biāo)記抗體技術(shù)第二十八頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日二、血清學(xué)試驗(yàn)的一般規(guī)律㈠特異性和交叉性*概念：抗原分子，只能與由它刺激所產(chǎn)生的抗體結(jié)合而起反應(yīng)的專(zhuān)一性能。*交叉反應(yīng)(crossreaction)

兩種不同的抗原物質(zhì)具有部分相同或類(lèi)似結(jié)構(gòu)的抗原決定簇，則可與彼此相應(yīng)的抗體反應(yīng)。第二十九頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日特異性示意圖第三十頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日（二）比例性當(dāng)抗原與抗體比例適合時(shí)，才能形成大復(fù)合物，血清學(xué)反應(yīng)才出現(xiàn)象，如果某一成分過(guò)多或過(guò)少則不會(huì)出現(xiàn)可見(jiàn)的反應(yīng)，這種現(xiàn)象叫帶現(xiàn)象。*最適比(optimalratio)或等價(jià)點(diǎn)(equivzlencepoint)最迅速出現(xiàn)沉淀時(shí)的抗原抗體的濃度比或量比。等價(jià)帶(equivalencezone)抗原與抗體分子比例合適的范圍。第三十一頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日比例性示意圖抗體過(guò)量比例合適抗原的量抗原過(guò)量抗體沉淀的量前帶等價(jià)帶后帶第三十二頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日㈢可逆性是指抗原與抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條件下可解離為游離抗原與抗體的特性。

(1)解離后抗原抗體仍保持原有特性。

(2)一定條件：低pH、高濃度鹽等。(3)常用于解離抗原抗體復(fù)合物的物質(zhì)有：

3mol/L硫氰化鉀、pH2.40.1mol/L甘氨酸、

7mol/L尿素等。第三十三頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日第三十四頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日三、影響血清學(xué)試驗(yàn)的因素

1．電解質(zhì)

2．溫度

3．酸堿度

4．雜質(zhì)、異物

5．振蕩第三十五頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日四、常見(jiàn)的血清學(xué)試驗(yàn)㈠凝聚性試驗(yàn)⒈凝集試驗(yàn)⑴直接凝集試驗(yàn)

顆粒性抗原與相應(yīng)抗體在電解質(zhì)的參與下，直接結(jié)合，凝集成團(tuán)的現(xiàn)象，稱(chēng)直接凝集試驗(yàn)。第三十六頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日A．平板凝集反應(yīng)+平板凝集試驗(yàn)用抗原陰性血清無(wú)凝集現(xiàn)象+平板凝集試驗(yàn)用抗原陽(yáng)性血清出現(xiàn)凝集現(xiàn)象第三十七頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日第三十八頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日第三十九頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日B.試管凝集反應(yīng)

第四十頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日⑵間接凝集反應(yīng)將可溶性抗原或抗體先吸附于一種與免疫無(wú)關(guān)的、一定大小的載體顆粒的表面相吸附，然后與相應(yīng)的抗體或抗原作用，在有電解質(zhì)存在的適宜條件下，所出現(xiàn)的特異性凝集反應(yīng)為間接凝集試驗(yàn)。第四十一頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日第四十二頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日（正向）間接凝集反應(yīng)原理示意圖第四十三頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日（反向）間接凝集反應(yīng)原理示意圖

第四十四頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日2、沉淀反應(yīng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在適量電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見(jiàn)的絮狀白色沉淀，稱(chēng)之為沉淀試驗(yàn)。（1）液相沉淀試驗(yàn)

A．環(huán)狀沉淀試驗(yàn)

原理：小試管內(nèi)，下層沉淀素與上層沉淀原在液界面應(yīng)形成白色沉淀環(huán)。

用途：檢測(cè)皮毛中的炭疽桿菌抗原

B．絮狀沉淀試驗(yàn)抗原與抗體在試管內(nèi)混合，在電解質(zhì)的存在下抗原抗體復(fù)合物可形成絮狀凝聚物。此法多用于毒素和抗毒素測(cè)定。第四十五頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日（2）瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

根據(jù)其擴(kuò)散的方向可分為單向單擴(kuò)散、單向雙擴(kuò)散、雙向單擴(kuò)散、雙向雙擴(kuò)散，其中雙向雙擴(kuò)應(yīng)用最廣。雙向瓊脂擴(kuò)散（瓊擴(kuò)）系采用1%瓊脂倒于平皿或玻片上，制成凝膠板，可按需要打孔。將抗原、抗體分別滴入孔內(nèi)，放置濕盒中，在37?C濕箱中24-72h后觀(guān)察。在抗原與抗體孔間形成沉淀帶。每一種抗原成分出現(xiàn)一條沉淀帶。第四十六頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)AgAgAgAg含抗體凝膠第四十七頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日雙向雙擴(kuò)散如兩個(gè)相鄰孔之間抗原相同，則沉淀帶融合；抗原不同，則互相交叉；部分相同則部分融合，另外不同部分則交叉。第四十八頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日（3）免疫電泳

瓊脂擴(kuò)散與電泳技術(shù)結(jié)合起來(lái)稱(chēng)免疫電泳。由于抗原顆粒帶電荷不同，在同一電場(chǎng)中其泳動(dòng)速度不同，故遷移率不同，因而通過(guò)電泳可將抗原成分分開(kāi)。停止電泳后加抗血清進(jìn)行擴(kuò)散，如有一對(duì)抗原抗體出現(xiàn)一條沉淀線(xiàn)，因而大大加強(qiáng)了免疫擴(kuò)散的分辨率及敏感性。此法可應(yīng)用于抗原成分及含量成分的分析、免疫球蛋白純度的鑒定，以及傳染病的快速診斷等。第四十九頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日1.對(duì)流免疫電泳第五十頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日2.火箭電泳第五十一頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日3.免疫電泳第五十二頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日免疫電泳技術(shù)的用途對(duì)流免疫電泳——快速、半定量測(cè)定火箭電泳——快速、定量測(cè)定免疫電泳——抗原分析第五十三頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日（二）補(bǔ)體有關(guān)的試驗(yàn)（補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)）反應(yīng)系統(tǒng)指示系統(tǒng)反應(yīng)結(jié)果的判定已知抗原（抗體）待檢血清（抗原）補(bǔ)體綿羊紅細(xì)胞溶血素如溶血?jiǎng)t為陰性如不溶血?jiǎng)t為陽(yáng)性第五十四頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日第五十五頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日第五十六頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日第五十七頁(yè)，共六十五頁(yè)，2022年，8月28日（三）中和試驗(yàn)原理：病毒與抗血清中抗體特異結(jié)合后失去感染易感動(dòng)物、雞或雞胚、細(xì)胞的活性。例1：新城疫病毒檢測(cè)

NDV9～11d雞胚24～48h雞胚死亡NDV+抗血清9～11d雞胚雞胚不死亡第五十