獸醫(yī)生物制品學(xué)講義第十講

獸醫(yī)生物制品學(xué)講義第十講第一頁，共五十一頁，2022年，8月28日什么是免疫血清?動(dòng)物在接受抗原刺激或自然感染康復(fù)后，其血清中通常含有針對(duì)特定抗原的高效價(jià)特異性抗體，該動(dòng)物的血清即稱為免疫血清。又稱為高免血清、抗病血清。第十章免疫血清制備技術(shù)第二頁，共五十一頁，2022年，8月28日抗細(xì)菌血清主要包括抗病毒血清抗毒素血清第十章免疫血清制備技術(shù)第三頁，共五十一頁，2022年，8月28日是用于人工被動(dòng)免疫的制劑1.動(dòng)物感染病原后，使用免疫血清，就等于直接給動(dòng)物輸入抗體，可以迅速中和病原或毒素，發(fā)揮良好的治療作用。第十章免疫血清制備技術(shù)第四頁，共五十一頁，2022年，8月28日2.免疫血清也可用于疾病的預(yù)防，提供短期的被動(dòng)免疫。3.特異性免疫血清還可用于疫病診斷和微生物鑒定。第十章免疫血清制備技術(shù)第五頁，共五十一頁，2022年，8月28日一、免疫血清的制備過程通常是給適當(dāng)動(dòng)物以多次注射特定病原微生物或其代謝產(chǎn)物等抗原物質(zhì)，刺激動(dòng)物發(fā)生免疫應(yīng)答，在血清中產(chǎn)生大量的特異性抗體。第十章免疫血清制備技術(shù)第六頁，共五十一頁，2022年，8月28日1、動(dòng)物的選擇既可用同種動(dòng)物，也可用異種動(dòng)物！以抗病毒血清居多用同種動(dòng)物制造的血清同源抗病血清抗菌性和用異種動(dòng)物制造的血清異源抗病血清抗毒素血清為主常選擇大動(dòng)物→主要是考慮出血量問題。第十章免疫血清制備技術(shù)第七頁，共五十一頁，2022年，8月28日（1）許多免疫血清是用馬制備的！優(yōu)點(diǎn)不受接種途徑、抗原量限制；飼養(yǎng)管理也比較方便；采血便利；產(chǎn)血清量多。第十章免疫血清制備技術(shù)第八頁，共五十一頁，2022年，8月28日馬匹的選擇①年輕：3~8歲②健康：來自非疫區(qū)

1、就地進(jìn)行常規(guī)檢疫后運(yùn)回隔離飼養(yǎng)、觀察

2、然后根據(jù)不同生產(chǎn)目的進(jìn)行系統(tǒng)檢疫(馬鼻疽、馬傳染性貧血、馬流產(chǎn)等)，優(yōu)選出的馬匹經(jīng)消毒后轉(zhuǎn)入專用飼養(yǎng)舍飼養(yǎng)、生產(chǎn)。第十章免疫血清制備技術(shù)第九頁，共五十一頁，2022年，8月28日（2）也可用健壯閹牛制造1、飼養(yǎng)管理簡便；2、多選擇3～10歲的黃牛，并應(yīng)隔離觀察檢疫(結(jié)核、牛肺疫、布病等)，證明完全健康后方可用于生產(chǎn)；3、但血清滲出率偏低。多用于抗氣腫疽、抗豬丹毒、抗豬牛出敗、抗牛瘟等血清的制備。第十章免疫血清制備技術(shù)第十頁，共五十一頁，2022年，8月28日（3）豬1、應(yīng)選擇體壯、健康者；2、放血提取血清，不作循環(huán)采取血清方法；3、主要用于抗豬瘟血清生產(chǎn)。第十章免疫血清制備技術(shù)第十一頁，共五十一頁，2022年，8月28日（4）羊、兔、雞等1、常用于制備診斷用高免血清；2、較少用于抗病血清生產(chǎn)。第十章免疫血清制備技術(shù)第十二頁，共五十一頁，2022年，8月28日2、抗原的準(zhǔn)備抗原是制備免疫血清的基礎(chǔ)優(yōu)良的菌/毒種則是制備優(yōu)良抗原的關(guān)鍵第十章免疫血清制備技術(shù)第十三頁，共五十一頁，2022年，8月28日優(yōu)良菌/毒種的生物學(xué)特征應(yīng)十分典型（形態(tài)、培養(yǎng)、生化和血清學(xué)等）強(qiáng)毒弱毒常用的菌/毒種有：滅活毒可單獨(dú)使用，可共同使用，也可交互使用，其目的是盡可能提高抗體效價(jià)。第十章免疫血清制備技術(shù)第十四頁，共五十一頁，2022年，8月28日按照制備方法的不同免疫用抗原分為第十章免疫血清制備技術(shù)第十五頁，共五十一頁，2022年，8月28日（1）組織毒抗原用健康、易感的本種動(dòng)物人工感染增殖病原;根據(jù)微生物增殖規(guī)律，采集含毒高的組織制成活的或滅活的抗原液。如血液、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)和腦組織等第十章免疫血清制備技術(shù)第十六頁，共五十一頁，2022年，8月28日細(xì)菌和病毒等微生物都可利用動(dòng)物增殖！第十章免疫血清制備技術(shù)第十七頁，共五十一頁，2022年，8月28日例如：抗豬瘟血清抗原制備①給健康、敏感、40~80kg豬注射豬瘟強(qiáng)毒1mL②于6~8d發(fā)病典型時(shí)(高溫、癥狀明顯)頸動(dòng)脈放血③采血液、脾和淋巴結(jié)等，分別制成血液毒抗原和組織毒懸液抗原。第十章免疫血清制備技術(shù)第十八頁，共五十一頁，2022年，8月28日（2）雞胚毒抗原①可在雞胚增殖的微生物均適用②將種毒接種雞胚，收獲后經(jīng)檢驗(yàn)合格即可作為免疫原。第十章免疫血清制備技術(shù)第十九頁，共五十一頁，2022年，8月28日（3）細(xì)胞毒抗原①多種病毒均可通過細(xì)胞增殖；②將種毒接種細(xì)胞后培養(yǎng)增殖，然后根據(jù)不同病毒的增殖盛期收獲，經(jīng)檢驗(yàn)合格后即可作為免疫原。③必要時(shí)可濃縮、提純，也可制成佐劑抗原。第十章免疫血清制備技術(shù)第二十頁，共五十一頁，2022年，8月28日（4）培養(yǎng)物抗原細(xì)菌抗原幾乎都用培養(yǎng)物制造。①將菌種接種于規(guī)定的培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)，收獲后經(jīng)檢驗(yàn)合格制成抗原。②也可于培養(yǎng)物內(nèi)加入佐劑制成佐劑抗原。第十章免疫血清制備技術(shù)第二十一頁，共五十一頁，2022年，8月28日3、免疫程序由于病原微生物的性質(zhì)、免疫機(jī)制的不同，各有其最佳的免疫程序。第十章免疫血清制備技術(shù)第二十二頁，共五十一頁，2022年，8月28日1、一般的免疫程序（1）如以強(qiáng)毒抗原為抗原基礎(chǔ)免疫時(shí)以滅活疫苗為抗原，然后以遞增量強(qiáng)毒抗原進(jìn)行高度免疫。這種免疫程序通?？色@得高效價(jià)的抗血清如：抗氣腫疽血清、抗豬牛出敗血清等第十章免疫血清制備技術(shù)第二十三頁，共五十一頁，2022年，8月28日（2）如以滅活佐劑抗原免疫只需以遞增量抗原進(jìn)行免疫，即可獲得高效價(jià)的抗血清。如：破傷風(fēng)抗毒素血清等第十章免疫血清制備技術(shù)第二十四頁，共五十一頁，2022年，8月28日2、免疫間隔和次數(shù)不同的免疫原，差異較大！如:抗豬丹毒血清全程免疫要注射抗原20次、100d左右抗豬瘟血清全程須注射抗原6次以上、50d左右第十章免疫血清制備技術(shù)第二十五頁，共五十一頁，2022年，8月28日3、抗體效價(jià)測(cè)定1、常在免疫程序完成后采血進(jìn)行抗體效價(jià)測(cè)定2、合格后方可采血提取血清然后按后期程序注射、采血，持續(xù)生產(chǎn)抗血清第十章免疫血清制備技術(shù)第二十六頁，共五十一頁，2022年，8月28日4、血清提取包括：采血和血清分離第十章免疫血清制備技術(shù)第二十七頁，共五十一頁，2022年，8月28日（1）采血①采血時(shí)間1、通常在最后一次免疫8~10d后測(cè)定抗體效價(jià),合格后開始第1次采血。2、第1次采血后3~5d可進(jìn)行第2次采血3、第2次采血后，經(jīng)3~5d天可再次注射抗原，如此循環(huán)進(jìn)行。第十章免疫血清制備技術(shù)第二十八頁，共五十一頁，2022年，8月28日②采血量按動(dòng)物每kg體重采取10mL左右注意：采血常在上午空腹時(shí)進(jìn)行，前一晚上不喂精料，而僅給草料和水，避免血中出現(xiàn)乳糜第十章免疫血清制備技術(shù)第二十九頁，共五十一頁，2022年，8月28日（2）血清分離①自然凝結(jié)加壓法無菌操作采血后室溫靜置凝固；然后于血凝塊上加上滅菌的不銹鋼銘，將血塊壓下以析出血清。第十章免疫血清制備技術(shù)第三十頁，共五十一頁，2022年，8月28日②枸櫞酸鹽血漿分離血清法以10％枸櫞酸鈉液為抗凝劑（3.5%）采血；靜置分層；按1000mL血漿加入30%CaCl21.3mL，混勻后靜置48h，去除纖維制成血清。第十章免疫血清制備技術(shù)第三十一頁，共五十一頁，2022年，8月28日5、質(zhì)量檢驗(yàn)①物理性狀檢驗(yàn)按成品檢驗(yàn)的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行②無菌檢驗(yàn)按各種抗血清規(guī)定方法、標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行③效力檢驗(yàn)④安全檢驗(yàn)常用：18-22g健康小鼠2只,各皮下注射血清0.5mL250-450g健康豚鼠2只,各皮下注射血清10mL觀察10d均應(yīng)健活第十章免疫血清制備技術(shù)第三十二頁，共五十一頁，2022年，8月28日二、類毒素及抗毒素的制備某些病原微生物能產(chǎn)生強(qiáng)有力的特殊毒性物質(zhì)，從而大大增強(qiáng)病原的毒害作用，這種毒性物質(zhì)就稱為毒素。第十章免疫血清制備技術(shù)第三十三頁，共五十一頁，2022年，8月28日是微生物在生命活動(dòng)過程外毒素中產(chǎn)生并釋放或分泌到周圍環(huán)境中的毒素。毒素只有在微生物死亡后細(xì)胞內(nèi)毒素破裂時(shí)，才能釋放出來的毒素。第十章免疫血清制備技術(shù)第三十四頁，共五十一頁，2022年，8月28日類毒素外毒素經(jīng)適量濃度的甲醛處理后，可去除其毒性，保持其抗原性；這種喪失了毒性而仍具有抗原性的外毒素，稱為類毒素。也稱為“

變性毒素

”

第十章免疫血清制備技術(shù)第三十五頁，共五十一頁，2022年，8月28日抗毒素以類毒素作為抗原免疫動(dòng)物，刺激機(jī)體相應(yīng)的B細(xì)胞活化增殖為漿細(xì)胞后，產(chǎn)生的特異性抗體，稱為抗毒素?？苟舅乜商禺愋宰R(shí)別侵入機(jī)體的外毒素并中和其毒性，以保護(hù)機(jī)體免受毒害第十章免疫血清制備技術(shù)第三十六頁，共五十一頁，2022年，8月28日1、類毒素的生產(chǎn)和檢定產(chǎn)毒素菌種產(chǎn)毒培養(yǎng)基培養(yǎng)毒素4~7d毒素脫毒毒素的檢定0.3~0.4％甲醛，37℃，20~30d如破傷風(fēng)MLD應(yīng)>2×106除去類毒素精制類毒素非特異性物質(zhì)適當(dāng)佐劑吸附精制類毒素類毒素的檢定：安全試驗(yàn)等;類毒素及吸附類毒素的檢定:吸附度試驗(yàn),安全試驗(yàn),效力試驗(yàn)吸附類毒素的檢定第十章免疫血清制備技術(shù)第三十七頁，共五十一頁，2022年，8月28日2、抗毒素血清的制備1、馬、騾、驢是比較適用的動(dòng)物毒素或類毒素免疫動(dòng)物2、基礎(chǔ)免疫和加強(qiáng)免疫抗毒素血清提純精制抗毒素抗毒素的質(zhì)量檢定[安全性試驗(yàn)、熱原質(zhì)試驗(yàn)、效價(jià)測(cè)定]第十章免疫血清制備技術(shù)第三十八頁，共五十一頁，2022年，8月28日三、卵黃抗體的制備卵黃抗體，不能理解為抗卵黃的抗體，而是在卵黃中含有針對(duì)某種病原微生物的特異性抗體。第十章免疫血清制備技術(shù)第三十九頁，共五十一頁，2022年，8月28日目前，家禽病毒病是沒有特效藥物使用血清是一種很好的方法，但血清的價(jià)格比較高！第十章免疫血清制備技術(shù)第四十頁，共五十一頁，2022年，8月28日人們又尋求了另外一條途徑制備

高免卵黃抗體，并收到了良好的防治效果。第十章免疫血清制備技術(shù)第四十一頁，共五十一頁，2022年，8月28日卵黃抗體液的制備過程以抗IBD的卵黃抗體液為例第十章免疫血清制備技術(shù)第四十二頁，共五十一頁，2022年，8月28日1、動(dòng)物的選擇同制備抗血清的要求一樣必須選擇健康無病的產(chǎn)前或開產(chǎn)雞群第十章免疫血清制備技術(shù)第四十三頁，共五十一頁，2022年，8月28日2、疫苗的選擇很重要→獲得高效價(jià)抗體的關(guān)鍵通常選擇免疫原性優(yōu)良的油乳劑疫苗第十章免疫血清制備技術(shù)第四十四頁，共五十一頁，2022年，8月28日3、免疫程序①第1次免疫：肌肉注射免疫，每只2mL，分點(diǎn)注射②第2次免疫：第1次免疫后10~14d，重復(fù)免疫1次③第3次免疫：第2次免疫后10~14d，再重復(fù)免疫1次第十章免疫血清制備技術(shù)第四十五頁，共五十一頁，2022年，8月28日4、抗體監(jiān)測(cè)與高免蛋的收集1、第3次免疫后，以瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定卵黃中的抗體水平；2、在抗體效價(jià)達(dá)到1:128時(shí)，開始收集高免蛋,一般高免蛋合格時(shí)間大約可持續(xù)1個(gè)月。3、抗體效價(jià)降低到1:64時(shí)停止收蛋，并根據(jù)情況再進(jìn)行1次加強(qiáng)免疫。第十章免疫