HIV初篩試驗(yàn)室SOP文件

HIV抗體初篩實(shí)驗(yàn)室SOP文件科室：檢驗(yàn)科第一局部工作制度-2-實(shí)驗(yàn)室工作制度-2-HIV標(biāo)本采集與接收登記制度-3-艾滋病實(shí)驗(yàn)室制度-3-艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室常規(guī)消毒清理工作制度-4-過失事故處理制度-5-報(bào)告單簽發(fā)審核制度-7-設(shè)備管理制度-8-試劑管理制度-9-艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室平安防護(hù)制度-10-艾滋病病毒職業(yè)暴露預(yù)防處理方案-12-第二局部標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程-15-第二章樣品采集與處理-15-第二章標(biāo)準(zhǔn)操作程序-16-一、金豪-16-二、科華生物-18-三、英科新創(chuàng)-19-第三章結(jié)果報(bào)告與考前須知-22-第三局部設(shè)備SOP文件-24--1-/33一、多功能自動酶標(biāo)儀DNM-9602-24-二、DG3080洗板機(jī)-26-三、電熱恒溫水箱-28-第四局部流程圖-29-一、HIV抗體篩查流程圖-29-二、暴露級別的評估-31-附件：血清加樣表-32-第一局部工作制度實(shí)驗(yàn)室工作制度.室應(yīng)經(jīng)常保持整潔，各種儀器設(shè)備要安裝適當(dāng)，器皿試劑擺放整齊，標(biāo)志清晰，有良好的通風(fēng)設(shè)備。.實(shí)驗(yàn)室工作人員工作時一律穿制服，保持衣帽整潔，試驗(yàn)過程中應(yīng)專心致志、認(rèn)真負(fù)責(zé)，堅(jiān)守工作崗位，不得隨意串崗、閑談，保持實(shí)驗(yàn)室安靜，下班離開實(shí)驗(yàn)室前要檢查并關(guān)好水、電、門、窗等，注意實(shí)驗(yàn)室平安。.認(rèn)真開展實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制工作，儀器設(shè)備應(yīng)定期保養(yǎng)，有溫度記錄，檢測標(biāo)本的保存要求符合規(guī)要求。.實(shí)驗(yàn)室不得放置與測試無關(guān)的物品，水、溫、濕度、光照、防震、防塵、防噪聲等，環(huán)境必須符合實(shí)驗(yàn)室的工作要求。-2-/33.實(shí)驗(yàn)和樓道必須配置足夠的平安防火措施，并定期檢查保養(yǎng)。.對不同屬性、品種和含量水平的試樣，應(yīng)有足夠的試驗(yàn)區(qū)域，予以別離檢驗(yàn)，尤其是具有生物危害的試樣必須別離檢驗(yàn)。防止損害工作人員安康和污染環(huán)境。.與檢驗(yàn)無關(guān)人員不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，外單位人員聯(lián)系工作，一律在辦公室接待。.實(shí)驗(yàn)完畢后，應(yīng)與時清理實(shí)驗(yàn)現(xiàn)場和用品，對染菌帶毒的器具廢棄物應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)展消毒無菌處理。.實(shí)驗(yàn)室禁止吸煙、用餐和進(jìn)食。HIV標(biāo)本采集與接收登記制度1、采樣前和接收標(biāo)本時應(yīng)核對病人身份，嚴(yán)格執(zhí)行查對制度。2、采血時應(yīng)戴好手套、帽子、口罩。3、HIV標(biāo)本采集應(yīng)建立詳細(xì)的記錄本，記錄容包括：送檢單位、病人、門診號、數(shù)量、種類〔血清〕、送樣者、接收者或采集者。4、采集后，應(yīng)將用丫樣本單獨(dú)分裝，勿與其它項(xiàng)目共用。艾滋病實(shí)驗(yàn)室制度為確保艾滋病實(shí)驗(yàn)室所有資料嚴(yán)格，應(yīng)遵守以下制度-3-/331、與田丫/人105相關(guān)檢測項(xiàng)目的所有資料均應(yīng)嚴(yán)格，包括采樣記錄與檢測記錄的保管，報(bào)告單的發(fā)放和送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室檢測等。2、工作人員不得向無關(guān)人員提供檢驗(yàn)結(jié)果，要妥善保存各種實(shí)驗(yàn)記錄。3、對初篩疑似陽性感染者不能告訴受檢者本人，更不能到處亂講。4、實(shí)驗(yàn)室的有關(guān)檢驗(yàn)資料，檔案、結(jié)果記錄其他人不得翻錄查閱，修改和銷毀。5、實(shí)驗(yàn)室工作人員，不能在非正式場合對外提供任何結(jié)果、數(shù)據(jù)。艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室常規(guī)消毒清理工作制度1、檢測可疑樣品時，充分準(zhǔn)備好廢棄物消毒具與消毒藥、液。如：次氯酸鈉含有效氯2000—5000mg/L，75%乙醇和2%戊二醛。2、實(shí)驗(yàn)室用的吸頭與時打入消毒器皿中。3、一次性手套，隔離服更換后，應(yīng)丟棄在一次性垃圾袋。4、常用消毒方法物理消毒方法、高壓蒸汽消毒，121°C，保持15-20min；化學(xué)消毒方法、廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉、工作臺面與儀器外表：75%乙醇-4-/33、溢出物：50001^4次氯酸鈉、污染的臺面和器具：20001^4次氯酸鈉5、實(shí)驗(yàn)室中發(fā)生可疑樣品溢出時，應(yīng)與時用75%乙醇噴灑，然后用消毒劑浸泡的吸水物質(zhì)覆蓋10-15分鐘，最后再用消毒劑清洗該地方，擦干。6、全部實(shí)驗(yàn)工作完畢后，應(yīng)對實(shí)驗(yàn)臺、儀器、設(shè)備〔接觸部位〕地面進(jìn)展徹底消毒處理。7、廢棄物處理從HIV實(shí)驗(yàn)室出來的所有廢棄物，包括不再需要的樣品、包裝盒和其他物品，均應(yīng)視為感染性廢棄物。過失事故處理制度.艾滋病檢測工作人員必須要有高度的責(zé)任心和嚴(yán)肅的法制觀念，嚴(yán)防過-5-/33失事故的發(fā)生。.由于責(zé)任心不強(qiáng)、不認(rèn)真執(zhí)行規(guī)章制度，不遵守操作規(guī)程或技術(shù)因素而引發(fā)檢驗(yàn)錯誤，對病人未造成嚴(yán)重后果的，稱為過失。過失按程度不同，分為一般過失和嚴(yán)重過失。一級過失記過失一次，二級過失扣款50元，三級過失扣除當(dāng)月效益工資。一級過失：〔1〕違反操作規(guī)程，導(dǎo)致標(biāo)本損壞，需重新采集標(biāo)本或由于接收標(biāo)本未認(rèn)真查對，違反查對制度，影響檢驗(yàn)者?！?〕工作環(huán)境不能做到5s管理、違反生物平安者?！?〕未按時記錄結(jié)果、繪制質(zhì)控圖、當(dāng)發(fā)現(xiàn)失控時隱瞞不報(bào)者。二級過失：〔1〕未按時間先后順序使用試劑，導(dǎo)致試劑過期或由于存放不當(dāng)造成試劑變質(zhì)者?！?〕項(xiàng)目漏查、做錯項(xiàng)目，且標(biāo)本已處理，需再次采取標(biāo)本檢驗(yàn)者。(3)因操作不當(dāng)，導(dǎo)致設(shè)備故障，影響較大者。三級過失：〔1〕漏做、錯做一般標(biāo)本的檢驗(yàn)?zāi)康模庡e試管，標(biāo)錯標(biāo)本聯(lián)號、采錯病人標(biāo)本，寫錯檢驗(yàn)結(jié)果并已發(fā)出報(bào)告者。〔2〕粗心大意寫錯報(bào)告難以挽回者。(3)因責(zé)任心不強(qiáng)、管理不善導(dǎo)致陽性標(biāo)本喪失者。-6-/33報(bào)告單簽發(fā)審核制度各崗位的工作由本崗位人員進(jìn)展操作檢驗(yàn)，然后填寫檢驗(yàn)報(bào)告單。工作完成后，再對本崗位所有的檢驗(yàn)報(bào)告進(jìn)展核查一次，在你認(rèn)為可以發(fā)出時，蓋上檢驗(yàn)者印章，填寫好報(bào)告日期。交給本實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或有資質(zhì)的高年資檢驗(yàn)人員核查簽名；但在危急情況下或單獨(dú)一人值班時〔如夜班〕除外。沒有上崗證人員不得單獨(dú)簽發(fā)檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告單。專業(yè)責(zé)任主管技師對本專業(yè)的所有報(bào)告單進(jìn)展審核，審核的根本容有：1、臨床醫(yī)師所申請的檢驗(yàn)項(xiàng)目是否已全部檢驗(yàn)，有無漏項(xiàng)；2、檢驗(yàn)結(jié)果的填寫是否清楚、正確；3、檢驗(yàn)報(bào)告單上所有容是否全部填寫完整；4、有無非常異常的、難以解釋的結(jié)果；5、有無書寫錯誤；6、是否有需要復(fù)查的結(jié)果當(dāng)發(fā)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果有凝議時可指令本崗位人員對檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)展復(fù)查。確認(rèn)報(bào)告無問題時蓋章后，方可發(fā)出報(bào)告。-7-/33設(shè)備管理制度1?由科主任或科室主管負(fù)責(zé)監(jiān)視和檢查儀器設(shè)備的使用狀況，定期校準(zhǔn)儀器的準(zhǔn)確度。2?各科應(yīng)對本科室儀器設(shè)備建立臺賬明細(xì)。3?每月應(yīng)向總庫遞交儀器設(shè)備使用狀況表，并存檔。4?貴重儀器應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理。5?儀器操作前必須培訓(xùn)、考核，仔細(xì)閱讀儀器操作說明書，熟練掌握該儀器的使用方法與維護(hù)方法，考核合格前方可操作。6?當(dāng)班者在使用中應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，遇到問題應(yīng)作與時處理，并詳細(xì)記錄。問題嚴(yán)重者，應(yīng)與時上報(bào)科主任或主管加以解決。7?每次使用完畢，應(yīng)檢查儀器的電源、廢液傾倒情況，并詳細(xì)記錄該次使用情況。8?對有溫度要求的儀器設(shè)備，如冰箱冷藏室、冷凍室與恒溫培養(yǎng)箱、水浴箱等，均應(yīng)建立登記本，每天監(jiān)測溫度。-8-/33試劑管理制度1,為了更好地管理檢驗(yàn)科試劑，由主管對檢驗(yàn)科試劑申購、品牌、質(zhì)量、價格、使用與管理情況進(jìn)展督查。.每周上報(bào)周計(jì)劃，各組人員根據(jù)各崗情況，認(rèn)真、詳細(xì)填寫計(jì)劃表，務(wù)必注明詳細(xì)的名稱、規(guī)格、數(shù)量與品牌。.檢驗(yàn)科試劑必須由主管審核，并負(fù)責(zé)報(bào)物流中心采購，品牌不得隨意更改。杜絕浪費(fèi)和積壓。.所用的試劑必須符合質(zhì)量要求，必須有三證。不得使用過期、劣質(zhì)試劑。.供給商所送的試劑由總庫清點(diǎn)后才能接收，特殊試劑由檢驗(yàn)科主管清點(diǎn)后才能在貨單上簽字，有出入者必須向科主任或物流中心主任報(bào)告，再將貨單交物流中心統(tǒng)一結(jié)賬。.領(lǐng)用時應(yīng)檢查物品質(zhì)量和試劑品名、廠家、人份、批號、過期時間與外包裝-9-/33有無滲漏等，假設(shè)有問題，應(yīng)與時向總庫反映。.冰箱不能貯存乙醚、異戊烷或類似的易燃、可燃性液體。艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室平安防護(hù)制度為確保實(shí)驗(yàn)室人員的工作平安，防止穿插感染，請嚴(yán)格遵守平安防護(hù)制度1、工作人員要完成與工作有關(guān)的充足有效的技術(shù)培訓(xùn)，要了解田丫危害，提高全員平安意識，實(shí)驗(yàn)室平安負(fù)責(zé)人要對工作和環(huán)境的平安負(fù)責(zé)，所有工作人員都有責(zé)任保護(hù)自己和他人的平安。3、對有放試劑、樣品血清的冰箱專人管理。4、實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)熟練掌握操作知識和消毒技術(shù)。-10-/335、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿隔離衣，戴手套，傳染性危險大時應(yīng)戴雙層手套，戴防護(hù)鏡，口罩，如防護(hù)用具破損應(yīng)與時更換，不用戴手套的手觸摸暴露的皮膚等部位。6、實(shí)驗(yàn)期間盡量防止使用利器，易碎器皿，禁止采用口腔吸液管。7、送檢樣品應(yīng)視為有潛在傳染性，由專人接收，登記，存放，提取。9、實(shí)驗(yàn)用吸頭、手套、隔離服、污染物、廢棄物均放在指定垃圾袋中統(tǒng)一進(jìn)展消毒，燃燒到無害化處理。10、不得在實(shí)驗(yàn)室中吃食物，化裝打扮等，不得在實(shí)驗(yàn)室會客。11、實(shí)驗(yàn)室用品〔包括工作服〕不得用于其他用途，不可將私人和無關(guān)的物品帶入實(shí)驗(yàn)室。12、工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作服，用肥皂和流動水洗手，洗手后離開實(shí)驗(yàn)室。13、實(shí)驗(yàn)完畢后，要對工作平臺、儀器、地面進(jìn)展消毒處理。14、遇有意外事故，應(yīng)立即口頭和書面報(bào)告上級部門，并進(jìn)展局部處理，如含氯消毒劑浸泡傷口，洗眼，漱□等，如遇高危意外事故，除進(jìn)展局部處理外，同時應(yīng)立即采取預(yù)防措施，包括對其隨訪，HIV檢測，休息并暫離崗位二個月，按醫(yī)囑服用HIV藥物等。-11-/33艾滋病病毒職業(yè)暴露預(yù)防處理方案為維護(hù)醫(yī)務(wù)人員與其他部門有關(guān)人員的職業(yè)平安，有效預(yù)防在工作中發(fā)生職業(yè)暴露感染艾滋病病毒，一旦發(fā)生職業(yè)暴露后最大限度的防止或減少艾滋病病毒感染，特制定本方案。一、職業(yè)暴露〔一〕職業(yè)暴露是指醫(yī)務(wù)人員以與有關(guān)工作人員，在從事艾滋病防治工作與相關(guān)工作的過程中意外被艾滋病毒感染者或者艾滋病患者的血液、體液污染了皮膚或者粘膜或者被含有艾滋病病毒的血液體液污染了的針頭與其他銳器刺破皮膚，有可能被艾滋病病毒感染的情況。〔二〕數(shù)據(jù)分析說明，醫(yī)護(hù)和預(yù)防保健等人員對艾滋病病毒和艾滋病患者從事醫(yī)療和實(shí)驗(yàn)檢測活動是比擬平安的。執(zhí)行嚴(yán)格的平安操作與防護(hù)措施，醫(yī)護(hù)與檢驗(yàn)等人員的暴露事件是可以防止的。二、職業(yè)暴露的預(yù)防1、醫(yī)務(wù)人員對所有病人的血液、體液（包括羊水、心包液、胸腔液、腹腔液、腦脊液、滑液、陰道分泌物等人體物質(zhì)，下同）與被血液、體液污染的物品均視為具有傳染性的病原物質(zhì)，在接觸這些物質(zhì)時，必須采取防護(hù)措施。2、醫(yī)務(wù)人員進(jìn)展有可能接觸血液、體液的診療和護(hù)理操作時必須戴手套，操作完畢，脫去手套后立即洗手，必要時進(jìn)展手消毒。3、在診療、護(hù)理操作過程中，有可能發(fā)生病人血液、體液飛濺到醫(yī)務(wù)人員的面-12-/33部時，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)戴手套、具有防滲透性能的口罩、防護(hù)眼鏡；有可能發(fā)生血液、體液大面積飛濺或者有可能污染醫(yī)務(wù)人員的身體時，還應(yīng)當(dāng)穿戴具有防滲性能的隔離衣或者圍裙。4、醫(yī)務(wù)人員手部皮膚發(fā)生破損，在進(jìn)展有可能接觸病人血液、體液的診療和護(hù)理操作時必須戴雙層手套。5、醫(yī)務(wù)人員在進(jìn)展侵襲性診療、護(hù)理操作過程中，要保證充足的，并特別注意防止被針頭、縫合針、刀片等銳器刺傷或劃傷。6、使用后的銳器應(yīng)當(dāng)直接放入耐刺、防滲漏的利器盒，或者利用針頭處理設(shè)備進(jìn)展平安處置，也可以使用具有平安性能的注射器、輸液器等醫(yī)用銳器，以防刺傷。7、禁止將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片等銳器。三、艾滋病病毒暴露后的預(yù)防處理〔一〕緊急局部處理：1、用肥皂液和流動水清洗污染的皮膚，用生理鹽水沖洗粘膜。2、如有傷口，應(yīng)當(dāng)在傷口旁端輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，用再肥皂液和流動清水沖洗；禁止進(jìn)展傷口的局部擠壓。3、受傷部位的傷口沖洗后，應(yīng)當(dāng)用消毒液，如70%乙醇或者0.5%碘伏進(jìn)展消毒，并包扎傷口；被暴露的粘膜，應(yīng)當(dāng)反復(fù)用生理鹽水沖洗干凈。〔二〕暴露后的報(bào)告與處理程序1、醫(yī)護(hù)人員發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后，要立即上報(bào)醫(yī)院領(lǐng)導(dǎo)〔具體由醫(yī)院確定院程序，注意給暴露者〕。與時報(bào)告天山區(qū)疾控中心，組織專家對暴露的級別-13-/33和暴露源的病毒載量水平進(jìn)展評估和確定。2、醫(yī)務(wù)人員發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后，區(qū)疾控中心應(yīng)當(dāng)會同相關(guān)醫(yī)療衛(wèi)生單位對其進(jìn)展隨訪和咨詢。隨訪和咨詢的容包括：在暴露后第4周、第8周、第12周與6個月時對艾滋病病毒抗體進(jìn)展檢測，對服用藥物的毒性進(jìn)展監(jiān)控處理，觀察和記錄艾滋病病毒感染的早期病癥等。不進(jìn)展暴露后預(yù)防用藥者，也要定期檢測艾滋病病毒抗體，檢測時間同上。3、在對艾滋病病毒職業(yè)暴露事件的整個處理過程中，必須始終做好工作。凡涉與暴露者個人的相關(guān)資料，不得向無關(guān)單位和人員泄露。四、暴露后預(yù)防性用藥對發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露的醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)根據(jù)暴露源病毒載量水平實(shí)施預(yù)防性用藥方案。預(yù)防性用藥應(yīng)當(dāng)在發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后盡早開場，最好在4小時實(shí)施，最遲不得超過24小時；即使超過24小時，也應(yīng)當(dāng)實(shí)施預(yù)防性用藥。暴露后預(yù)防性用藥的推薦方案：1、根本用藥程序：兩種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，使用常規(guī)治療劑量，連續(xù)服用28天。如雙汰芝〔AZT與3TC聯(lián)合制劑〕300mg/次，每日2次，用藥時間為連續(xù)服用28天?；騾⒖伎共《局委熤笇?dǎo)方案。本程序適用于輕度低危暴露。2、強(qiáng)化用藥程序：根本用藥程序加一種蛋白酶抑制劑，如佳息患或利托那韋。均使用常規(guī)治療劑量，連續(xù)服用28天。本程序適用于嚴(yán)重暴露。鑒于醫(yī)務(wù)人員暴露后的感染率很低而用藥的毒、副作用很大，所以應(yīng)嚴(yán)格掌-14-/33握用藥的指征。第二局部標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程第二章樣品采集與處理一、樣本采集1、接患者申請單后，填寫血樣采集記錄，記錄包括患者日期、、年齡、門診號、采集人簽名等。2、用帶別離膠的負(fù)壓管采集一定量的靜脈血，顛倒混勻5-6次，室溫下自然放-15-/33置半小時，待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min。二、標(biāo)本采集考前須知1、樣本采集嚴(yán)格按靜脈穿刺規(guī)操作。2、采集樣本時應(yīng)注意平安，直接接觸出丫感染/艾滋病病人血液的操作，應(yīng)戴雙層手套，里層是PE手套，外層為乳膠手套。三、樣本保存在一周檢測的樣本，可存放于2?8℃；在一周以后檢測的樣本，須存放于-20℃。四、 樣本運(yùn)送1、樣本運(yùn)送一般為血清或血漿，不運(yùn)送全血。2、容器要求：①血清應(yīng)置于帶蓋的1.5ml離心管，管外應(yīng)有明顯的標(biāo)記，與門診號要清晰；②在離心周圍應(yīng)墊有可緩沖吸水材料，以免破碎；③隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣本分開放置。④外層容器要求耐受性好、防滲漏、容納并保護(hù)第一層容器。3、天氣過熱，需采用干冰或冰壺冷藏運(yùn)輸。第二章標(biāo)準(zhǔn)操作程序一、金豪【方法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】本試劑盒采用HIV特異性抗原gp160和gp36等包被微孔反響板用gp36、gp41標(biāo)記辣根過氧化物酶、采用雙抗原夾心法捕獲人血清、血漿標(biāo)本中的HIV-16-/33〔1+2〕抗體?！綡IV篩查試驗(yàn)操作程序】（一）試驗(yàn)前準(zhǔn)備：1、試驗(yàn)開場前將試劑和樣品放置于室溫〔18?23℃〕半小時。2、換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。3、緩沖液配制：用蒸餾水1：25倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w有結(jié)晶，應(yīng)放置在37℃直至溶解。（二）試驗(yàn)操作：1、裝好所需使用數(shù)目的孔條。設(shè)空白對照孔2孔，2個陰性對照孔，2個HIV-1陽性對照孔。取陽性對照和陰性對照分別充分混勻各50ul參加對照孔中，空白對照孔只加樣品稀釋液。2、每檢測孔參加樣品稀釋液50ul，待檢樣品50畝，可振搖5?10S。3、覆蓋粘膠紙，37±2℃孵育30min。4、置洗板機(jī)上洗滌5遍〔用洗液將反映孔完全加滿，靜置30S，共洗滌5遍，洗完后孔上方與底部不應(yīng)殘存液體，禁止在濾紙上拍干〕。5、每孔加酶結(jié)合物100ul，取新粘膠紙覆蓋反響板，37±2℃孵育30min。6、同步驟4。7、每孔參加底物緩沖液50ul，!1850譏，混勻，不必覆蓋粘膠紙，37±2℃孵育10min。8、每孔參加50ul1M硫酸終止反響，充分混勻。9、在2h置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm，或雙波長450/630nm測OD值?！踩吃囼?yàn)結(jié)果-17-/331、NCW0.022、Cutoff值=0.1+NC=0.123、標(biāo)本OD值小于Cutoff為陰性，大于或等于Cutoff為陽性〔四〕報(bào)告：對呈陰性反響的樣品，可由實(shí)施檢測的實(shí)驗(yàn)室出具HIV抗體陰性報(bào)告；對呈陽性反響的樣品，須進(jìn)展復(fù)檢，不能出陽性報(bào)告。二、科華生物【方法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】本試劑盒采用HIV特異性抗原gp160和gp36等包被微孔反響板，用gp36、gp41標(biāo)記辣根過氧化物酶、采用雙抗原夾心法捕獲人血清、血漿標(biāo)本中的HIV〔1+2〕抗體?！綡IV篩查試驗(yàn)操作程序】（一）試驗(yàn)前準(zhǔn)備：.試驗(yàn)開場前將試劑和樣品放置于室溫〔18?23℃〕半小時。.換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。.緩沖液配制：用蒸餾水1：25倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w有結(jié)晶，應(yīng)放置在37℃直至溶解。（二）試驗(yàn)操作：1、裝好所需使用數(shù)目的孔條。設(shè)空白對照孔2孔，2個陰性對照孔，3個HIV-1陽性對照孔。-18-/332、每孔參加100ul待檢樣品與對照〔對照要后加〕，可振搖15S。3、覆蓋粘膠紙，37±2℃孵育60±2min。4、置洗板機(jī)上洗滌5遍〔用洗液將反映孔完全加滿，靜置30S，共洗滌5遍，洗完后孔上方與底部不應(yīng)殘存液體，禁止在濾紙上拍干〕。5、每孔加酶結(jié)合物100ul，取新粘膠紙覆蓋反響板，37±2℃孵育30min。6、同步驟4。7、每孔參加底物緩沖液50ul，!1850譏，混勻，不必覆蓋粘膠紙，37±2℃孵育10min。8、每孔參加50ul1M硫酸終止反響，充分混勻。9、在2h置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm，或雙波長450/630nm測OD值。（三）試驗(yàn)結(jié)果1、NCW0.082、Cutoff值=陽性對照值x10%3、標(biāo)本OD值小于Cutoff為陰性，大于或等于Cutoff為陽性（四）報(bào)告：對呈陰性反響的樣品，可由實(shí)施檢測的實(shí)驗(yàn)室出具HIV抗體陰性報(bào)告；對呈陽性反響的樣品，須進(jìn)展復(fù)檢，不能出陽性報(bào)告。三、英科新創(chuàng)【方法】膠體金法【原理】本試劑盒采用膠體金免疫技術(shù)和層析原理，定性測定血清樣本中的HIV1/2型抗體。血清陽性樣本中HIV抗體與膠體金標(biāo)記抗原結(jié)合形成復(fù)合物，-19-/33由于層析作用復(fù)合物沿紙條向前移動，經(jīng)過檢測線時與預(yù)包被的重組Au-HIV〔1+2〕一Ag那么在對照線處與抗HIV單克隆抗體結(jié)合而富集顯色。陰性標(biāo)本那么僅在對照線處顯色，30分鐘觀察結(jié)果即可?！綡IV篩查試驗(yàn)操作程序】（一）試驗(yàn)前準(zhǔn)備：1、試驗(yàn)開場前將試劑和樣品放置于室溫〔18?23℃〕半小時，編號。2、戴好帽子、口罩、雙層手套。3、將所需測試卡從包裝盒中取出，置于臺面上。（二）試驗(yàn)操作：1、用微量加樣器取60ul樣本血清，加到測試卡的加樣處。2、加樣后，陽性標(biāo)本可在1~30分鐘檢出。30分鐘后觀察結(jié)果將造成影響。（三）試驗(yàn)結(jié)果陽性：測試卡在檢測區(qū)和對照區(qū)位置出現(xiàn)兩條紫紅色條帶。如果檢測的紫紅色條帶隱約可見，應(yīng)用酶免試劑重復(fù)檢測。陰性：測試卡只在對照區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色條帶。失效：對照區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶?！痉椒ā侩p抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】采用雙抗原夾心兩步法檢測人血清或血漿樣本中的HIV抗體。當(dāng)待檢樣本中存在HIV抗體時在反響過程中形成“固相HIV抗原一HIV抗體一酶標(biāo)記HIV抗原〃的免疫復(fù)合物，參加底物后形成顯色反響。-20-/33【HIV篩查試驗(yàn)操作程序】〔一〕試驗(yàn)前準(zhǔn)備：.試驗(yàn)開場前將試劑和樣品放置于室溫〔18?25℃〕半小時，編號。.換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。.緩沖液配制：用蒸餾水1：19倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配?；蛞后w有結(jié)晶，應(yīng)放置在37℃直至溶解。〔二〕試驗(yàn)操作.按順序分別在相應(yīng)孔參加50ul待測樣品與陰、陽性對照血清。.覆上封板膜，置37℃溫育30min..用洗滌液充分洗滌5次〔每次應(yīng)保持30-60秒浸泡時間〕，扣干。.分別在每孔中參加酶標(biāo)抗原100ul。.覆上封板膜，置37℃溫育30min。.用洗滌液充分洗滌5次〔每次應(yīng)保持30-60秒浸泡時間〕，扣干。.每孔加底物A、B各50ul，輕拍混勻，覆上封板膜，置37℃暗置20min。8,每孔參加終止液50ul。.用酶標(biāo)儀測定?！踩吃囼?yàn)結(jié)果3.樣品0口值大于或等于臨界值為初篩陽性，小于臨界值為陰性。-21-/33第三章結(jié)果報(bào)告與考前須知【復(fù)檢試驗(yàn)】對初篩呈陽性反響的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反響，那么報(bào)告HIV抗體陰性；如均呈陽性反響，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)展確認(rèn)?！簿唧w詳見流程圖〕【篩試驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告】對HIV抗體篩查試驗(yàn)，呈陰性反響者可出具“HIV抗體陰性〃報(bào)告。對初篩試驗(yàn)呈陽性反響者不能出陽性報(bào)告，可出具“HIV抗體待復(fù)查〃報(bào)告。【初篩試驗(yàn)呈陽性反響樣品的轉(zhuǎn)送】如需送上級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)展復(fù)測或確認(rèn)，需要填寫“HIV抗體復(fù)測送檢單〃，經(jīng)1名檢驗(yàn)人員和1名具有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字，與血樣品一同送天山區(qū)疾控中心實(shí)驗(yàn)室，再轉(zhuǎn)送市疾控中心艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，或在本實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢后直接送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室?！静僮髋_消毒處理】用3?5%84消毒液擦拭臺面，如工作臺被溢出物污染，那么用消毒液浸泡30分鐘后，再行擦拭?！痉块g消毒】每日用紫外線照射30?60min-22-/33【方法學(xué)特性與考前須知】試劑盒4?30℃枯燥保存。有效期16個月?？鼓獞?yīng)采用EDTA，樣品應(yīng)防止溶血。樣品應(yīng)在收集后7天檢測，2?8℃保存，如果大于7天，應(yīng)冷凍保存。測試卡僅用于HIV抗體的現(xiàn)場初篩，檢測陽性必須用ELISA方法進(jìn)一步確認(rèn)。樣本的加樣應(yīng)使用微量加樣器準(zhǔn)確參加。實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)保持一定濕度、避風(fēng)，18?25℃進(jìn)展。本試劑盒應(yīng)視為有感染源的物品，應(yīng)按生物危險樣品處理?！狙寮訕颖怼恳姼郊?。每次檢測完畢需填寫血清加樣表，由審核者簽字復(fù)核，存檔，以備查。-23-/33

第三局部設(shè)備SOP文件一、普朗自動酶標(biāo)儀DNM-96021?儀器簡介RT-2100c是一臺網(wǎng)絡(luò)化的酶標(biāo)免疫測試分析儀器，可廣泛用于傳染病、腫瘤標(biāo)志物、血液病、艾滋病、分泌障礙測定等診斷領(lǐng)域。2儀器原理觸摸屏3?環(huán)境要求：防止直曬溫度：10℃?40℃，濕度20%?85%3)電源必須接地良好4)電源穩(wěn)定，禁止與大功率用電器共用電源4?操作步驟4?1開機(jī)翻開儀器反面的電源開關(guān)，等待約10秒鐘，開機(jī)初始化流程要完成以下工作：-24-/331）系統(tǒng)程序加載2）系統(tǒng)自檢3）讀取用戶數(shù)據(jù)4）前端初始化5）等待光源穩(wěn)定：儀器需要等待光源穩(wěn)定約1分鐘左右。6）光路自檢：期間濾光片輪會轉(zhuǎn)動，酶標(biāo)板將往返走板一次。開機(jī)完畢后，進(jìn)展主菜單窗口。4?2項(xiàng)目設(shè)置在主菜單中按［項(xiàng)目設(shè)置］鍵，進(jìn)入項(xiàng)目列表窗口。4-2-1新建與更改項(xiàng)目按［新建］或［更改］鍵，添加或更改項(xiàng)目，如果項(xiàng)目數(shù)已經(jīng)超過100，將無法創(chuàng)立新項(xiàng)目。按圖所示設(shè)置參數(shù)設(shè)置。1）項(xiàng)目名稱：該項(xiàng)必須輸入，注意不要與已經(jīng)存在的項(xiàng)目名重復(fù)。試劑名稱：根據(jù)所用試輸入，也可以不輸入。波長：從列表中選取，注意主波長和次波長不能重復(fù)。4）計(jì)算方法：從列表中選取雙樣本：假設(shè)選擇雙樣本，那么布板時每個樣本孔的相鄰孔自動設(shè)置為重復(fù)孔，計(jì)算時取兩者吸光度的平均值。6）空白上限：職由試劑要求空白必須不超過0.05，那么空白應(yīng)設(shè)為＜0.05，測試時如果空白孔吸光度值超過設(shè)定的上限，系統(tǒng)會提示用戶“空白也吸光度值過高〃。7）定量計(jì)算，根據(jù)試劑說明輸入：標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量：選擇2?8個標(biāo)準(zhǔn)品。濃度單位：從列表中選擇。雙標(biāo)準(zhǔn)：假設(shè)選擇雙標(biāo)準(zhǔn)：那么布板時每個標(biāo)準(zhǔn)孔的相鄰孔被自動設(shè)置為重復(fù)孔，計(jì)算時取兩者吸光度的平均值。d）標(biāo)準(zhǔn)品吸光度：雙擊標(biāo)準(zhǔn)品濃度列表項(xiàng)，可以在彈出窗口中輸入濃度值，注意標(biāo)準(zhǔn)品濃度順序必須為由小到大。8〕計(jì)算，按試劑說明在窗口中輸入：a）Cut-off公式系數(shù)：各鐘試劑的定性公式如有不同形式如5爪，〔N-S〕/N等均可轉(zhuǎn)換為S/〔X*N+Y*P+Fac〕的形式。b）陰性對照和陽性對照的吸光度圍：對照的吸光度超出上限和下限進(jìn)分別按上限和下限計(jì)算。例如有試劑要求陰性對照小于0。05按0。05計(jì)，那么陰性對照下限應(yīng)設(shè)為0。05。c）對照：可以任意設(shè)置對照，但對照的數(shù)量不超過5個，計(jì)算時取所有對照吸光度的平均值。9〕陰陽性判定設(shè)置窗口在此窗口中輸入判定陰性和陽性的臨界值，吸光度模式下，臨界值為吸光度值：Cut-off方式下，臨界值為樣本與Cut-off值的比值，定量計(jì)算方式下，臨界值為濃度值。定性方式分為3類：正向閾值模式：陰性〈陰性臨界值，陽性三陽性臨界值，兩者之間為灰區(qū)，在此區(qū)間的樣本判定為可疑。反向閾值模式：陰性〉陰性臨界值，陽性W陽性臨界值。c）不需要判定陰陽性：在定性方式中選擇“無。所有參數(shù)設(shè)置完畢，按［完成］鍵。-25-/334?3樣品測試在主菜單中按［樣品測試］鍵，進(jìn)入如下窗口：a）布板方向：橫向或縱向b）進(jìn)板方式：選擇連續(xù)方式〔＜5秒〕提高測量速度，選擇步進(jìn)方式〔45秒〕獲得更高的測量精度。振板參數(shù)：振板速度分快速，中速和慢速3檔，振板時間1~60秒，也可以選擇不振板。設(shè)定完以上參數(shù)后，按［確定］鍵，進(jìn)入布板窗口。4?4布板4-4-1樣本任意點(diǎn)擊欲設(shè)置為樣本的孔位，樣本號從1起自動遞增并顯示在該孔位上。如果要修改樣本號，可再次點(diǎn)擊該孔位。4-4-2空白空白孔在項(xiàng)目測試中用以吸光度調(diào)零，即其它孔位的吸光度均要減去空白孔吸光度值。根據(jù)不同項(xiàng)目測試的要求，可以選擇是否設(shè)定空白。舊空白的保存和使用：空白孔的測試結(jié)果將自動保存，如果在同一項(xiàng)目的后續(xù)測試中不重新設(shè)定空白，那么系統(tǒng)自動用舊空白進(jìn)展計(jì)算。第個項(xiàng)目只允許設(shè)置一個空白孔，如果在設(shè)置空白孔時屢次點(diǎn)擊不同的孔位，那么只有最后一次點(diǎn)擊的孔位被設(shè)定為空白孔，前面設(shè)置的空白孔被自動去除。4-4-3依次設(shè)置陰性對照和陽性對照。按［開場］鍵，系統(tǒng)確認(rèn)布板無誤后，開場走板測試。走板完畢，系統(tǒng)自動進(jìn)入吸光度顯示。4-5關(guān)機(jī)在主菜單中按［關(guān)機(jī)］，系統(tǒng)顯示關(guān)機(jī)確認(rèn)窗口，按［YES］執(zhí)行關(guān)機(jī)程序，按［NO］返回主菜單。5-儀器維護(hù)1）保持儀器工作環(huán)境的清潔。2）儀器外表的清潔，可以用中性清潔劑和濕布擦拭。3）液晶顯示器請用柔軟的布清潔4）勿讓任何溶劑，油脂類，腐蝕性物質(zhì)接觸儀器。二、DG3080自動洗板機(jī)1目的規(guī)洗板機(jī)的操作程序，保證洗板機(jī)的正常狀態(tài)。2適用圍本實(shí)驗(yàn)室DNM-9602洗板機(jī)的操作。3操作人員本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)人員。4操作步驟拔掉廢液瓶口的塞子〔接有與洗板機(jī)相連的廢液管〕，倒掉廢液瓶的廢液，再把塞子安緊在廢液瓶口上。注意不要讓廢液管擰緊，以保證廢液管的通暢。-26-/33擰開洗液瓶的蓋子〔接有與洗板機(jī)相連的洗液管〕，倒掉前一天洗液瓶里剩的洗液，倒進(jìn)新配的洗液。擰緊蓋子，注意不要讓洗液管擰緊，以保證洗液管的通暢。保證待洗反響板所有的孔處于同一水平位置，以免孔邊緣過高碰到洗板機(jī)的吸液針。開機(jī)插上電源，翻開電源開關(guān)〔按后面板（POWER】鍵〕，儀器顯示“儀器復(fù)位中，請稍候〃儀器初始化完畢后。儀器顯示：“就緒，當(dāng)前程序#X請選擇功能鍵〃X處顯示的數(shù)字〔圍0-15之間〕表示當(dāng)前準(zhǔn)備就緒的是第幾號程序。此時儀器正處于待機(jī)狀態(tài)，用戶可進(jìn)展下一步操作。預(yù)洗在待機(jī)狀態(tài)下，使預(yù)洗槽處于清洗頭下方，按下【預(yù)洗/返回】鍵，清洗頭抬起，電磁閥翻開，洗液進(jìn)入預(yù)洗槽。清洗頭將對預(yù)洗槽洗滌3次，清洗容量為400UL，但清洗時沒有暫停和浸泡步驟。編程按下【編程】鍵。進(jìn)入編程菜單界面。畫面最左邊有閃動的指示光標(biāo)“-〃，按下【T】鍵或【J】鍵移動所需要設(shè)定的參數(shù)前，按下【確定】鍵，即選中了該參數(shù)項(xiàng)，再按下【T】或【J】鍵設(shè)定該參數(shù)的參數(shù)值。運(yùn)行按下【運(yùn)行】鍵，系統(tǒng)將立即按照用戶設(shè)定的程序執(zhí)行。關(guān)機(jī)5鍵盤功能【編程】：進(jìn)入編程菜單。用來設(shè)定儀器的運(yùn)行方式與各項(xiàng)參數(shù)。【運(yùn)行】：執(zhí)行先定的程序?！綯】：處于待機(jī)狀態(tài)時，此鍵用來順次遞增程序號；處于編程狀態(tài)時，用來使光標(biāo)“—〃上移?！綣】：處于待機(jī)狀態(tài)時，此鍵用來順次遞減程序號；處于編程狀態(tài)時，用來使光標(biāo)“—〃下移?！緩?fù)位】：終止當(dāng)前操作，使儀器恢復(fù)到開機(jī)狀態(tài)?！绢A(yù)洗/返回】：處于待機(jī)狀態(tài)時，此鍵用來使儀器執(zhí)行預(yù)洗程序；處于編程狀態(tài)時，此鍵可使顯示面板界面回到待機(jī)狀態(tài)【確定】：確認(rèn)光標(biāo)所指示的參數(shù)項(xiàng)。6編制洗滌程序編程菜單中包括清洗方式、清洗頭數(shù)、清洗條數(shù)、清洗容量、加洗次數(shù)、清洗次數(shù)、暫停時間、浸泡時間8種參數(shù)項(xiàng)目。清洗方式，條洗和板洗。清洗頭數(shù)，可設(shè)定為12頭或8頭。清洗條數(shù)，或設(shè)定在1?12圍，該參數(shù)設(shè)置與清洗頭數(shù)有關(guān)，當(dāng)頭數(shù)為12時條數(shù)最大值為8。反之當(dāng)頭數(shù)為8時，條數(shù)最大值為12。清洗容量，可在50UL、100UL、150UL、200UL、250UL、300UL、350UL、400UL、450UL中選擇設(shè)定。加洗次數(shù)，加洗次數(shù)可在1~3圍設(shè)定。清洗次數(shù)，清洗次數(shù)可在1~10圍設(shè)定。暫停時間，當(dāng)清洗方式為知洗時清洗頭在注滿酶標(biāo)板每行后啟動暫停，時間可在0~10秒任意設(shè)定，增量為1秒；當(dāng)清洗方式為板洗時，清洗頭在每次過板注滿水后啟動暫停，時-27-/33間可在0~60秒任意設(shè)定，增量為5秒。