ELISA試驗(yàn)前的注意事項(xiàng)

ELISA實(shí)驗(yàn)前的注意事項(xiàng)為了幫助您更好地解決在實(shí)驗(yàn)中可能碰到的各種問(wèn)題，我們?cè)O(shè)計(jì)了這些問(wèn)題指導(dǎo)，配以試劑盒內(nèi)的說(shuō)明書(shū)一起供您參考使用。很多因素都將導(dǎo)致免疫測(cè)定實(shí)驗(yàn)的失敗，而大多數(shù)技術(shù)失誤是可以通過(guò)全面閱讀和準(zhǔn)確理解說(shuō)明書(shū)以及實(shí)驗(yàn)步驟來(lái)避免的。若對(duì)試劑盒內(nèi)的說(shuō)明書(shū)有任何意見(jiàn)和建議，歡迎反饋。我們期待聽(tīng)到您的聲音，從而完善我們的產(chǎn)品，更好地為您服務(wù)。仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)檢查試劑盒標(biāo)簽上的有效期。如果超過(guò)有效期，請(qǐng)勿使用。按說(shuō)明書(shū)確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無(wú)法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，（比如移液器，試管，清洗器，酶標(biāo)儀）按說(shuō)明書(shū)將所用試劑平衡至室溫，根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件，保證所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)推薦的條件存儲(chǔ)。檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液(比如沉淀或變色)。有些試劑，比如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或者檢測(cè)稀釋液，可能在設(shè)計(jì)時(shí)就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標(biāo)板之前，必需充分混勻。而由于沉淀物的特性，在加入酶標(biāo)板之前，必需不停攪拌。保證充分的孵育時(shí)間和溫度。切勿使用不同生產(chǎn)批號(hào)的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。在混合或溶解蛋白溶液時(shí)，避免泡沫產(chǎn)生。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前，安排好實(shí)驗(yàn)流程。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前，清潔工作臺(tái)。若有問(wèn)題，應(yīng)與我公司或代理商的技術(shù)支持聯(lián)系洗板方法(WashingTechniques)任何一個(gè)成功的ELISA檢測(cè)，正確的洗板方法是非常關(guān)鍵和重要的一方面。連貫的洗板也是很有必要的。在稀釋濃縮洗滌液時(shí)，請(qǐng)使用去離子水或者蒸餾水。洗滌瓶或多通道移液器保證洗瓶?jī)?nèi)壓強(qiáng)良好或者移液器的管頭被適當(dāng)調(diào)整并且無(wú)碎屑。檢查板內(nèi)的板條是否安放完好。將板條編號(hào)以防在傾泄的時(shí)候松動(dòng)便于調(diào)整。首先，傾泄酶標(biāo)板以清空內(nèi)容物。根據(jù)試劑盒內(nèi)推薦的體積向每孔內(nèi)滴加洗液。若實(shí)驗(yàn)步驟中要求浸泡，則定時(shí)將每孔浸泡完全。將板內(nèi)液體傾倒完全，用干凈紙巾擦拭。按照說(shuō)明書(shū)所示重復(fù)以上步驟。最后一次洗板之后，將板內(nèi)液體傾倒完全，用干凈紙巾拍打表面并擦干。切勿讓孔內(nèi)干燥。按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)迅速進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)操作。自動(dòng)洗板儀將自動(dòng)洗板儀接入適當(dāng)真空（根據(jù)制造商的說(shuō)明）。確保每管都被適當(dāng)抽吸。首先，通過(guò)抽吸或者傾倒將板清空。根據(jù)試劑盒內(nèi)推薦的體積向每孔內(nèi)滴加洗液。若實(shí)驗(yàn)步驟中要求浸泡，則定時(shí)將每孔浸泡完全。完全抽吸各孔，保證沒(méi)有洗液殘留。在孔內(nèi)液體被完全抽走之后不要再將裝置至于孔內(nèi)過(guò)分抽吸。按照說(shuō)明書(shū)所示重復(fù)以上步驟。最后一次洗板之后，將板內(nèi)液體傾倒完全，用干凈紙巾拍打表面并擦干。切勿讓孔內(nèi)干燥。按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)迅速進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)操作。移液注意事項(xiàng)反復(fù)而準(zhǔn)確移液的關(guān)鍵是連貫的操作。流暢而迅速的移液操作是非常重要的。吸液和釋放液體是都要避免劇烈的移動(dòng)。檢查槍頭大小是否合適，是否固定完好。在滴加樣品或試劑時(shí)，每次更換槍頭。請(qǐng)勿轉(zhuǎn)移小于移液器生產(chǎn)廠(chǎng)家推薦的最小體積的液體。否則將會(huì)降低實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。某些液體易于附著在槍頭的內(nèi)外表面上，所以，最好預(yù)先洗滌槍頭以避免由于這種表面張力而引起的液體體積變化。這樣會(huì)增加移液的準(zhǔn)確性。若果需要移動(dòng)的液體是粘稠的，在吸取液體時(shí)，請(qǐng)?jiān)诖∫后w中停留一段時(shí)間，待體積達(dá)到平衡后再移出。用移液器吸取液體之后，用不含棉的絨紙片擦干槍頭的外表面。在吸取液體時(shí)槍頭內(nèi)如果出現(xiàn)氣泡，排出已吸液體并重新從容器中緩慢吸取一次。如果槍頭內(nèi)依然出現(xiàn)氣泡，則更換槍頭。在吸取液體時(shí)槍頭內(nèi)如果出現(xiàn)泡沫，則輕微傾斜移液器，并緩慢吸取液體。每種試劑均分開(kāi)配制貯存樣本信息(SampleInformation)我能否在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前一天收集樣品？除非試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)特別說(shuō)明不允許，一般都可以。如果收集的樣品不能夠及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，請(qǐng)保存至-20℃或者按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行保存。應(yīng)避免反復(fù)凍融。-20℃是推薦的冷藏保存溫度。解凍的平衡過(guò)程可能會(huì)導(dǎo)致樣品的降解。我是否必需按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)中的方法準(zhǔn)備樣品？推薦的樣品準(zhǔn)備方法是經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的最佳的方法，所以推薦按照說(shuō)明書(shū)上的方法制備樣品。我能否不用推薦的收集方法來(lái)收集血漿？每一次按照推薦步驟操作的測(cè)定都是經(jīng)過(guò)驗(yàn)證可行的。在某些測(cè)定中有些抗凝劑是不被推薦的。具體請(qǐng)參看說(shuō)明書(shū)。有些待檢測(cè)的分析物也存在于血小板中，因此，推薦使用低血小板血漿。正確的收集操作方法請(qǐng)參看說(shuō)明書(shū)。我能否使用自己的稀釋液或者緩沖液？每個(gè)試劑盒中都含有按配方配制的與特異性樣品種屬相配套的稀釋液，以確保待檢測(cè)的樣品被正確稀釋。具體請(qǐng)參看說(shuō)明書(shū)。建議確定待檢測(cè)的樣品在收集和制備時(shí)保證無(wú)菌操作。如果要檢測(cè)多個(gè)樣品，將樣品隔離并標(biāo)記清楚以防相互污染。檢測(cè)前，將樣品離心除去顆粒。將樣品轉(zhuǎn)移至新的離心管內(nèi)，混合均勻。在混合樣品時(shí)，使用容積至少比樣品體積大50%的離心管以保證混合充分。我沒(méi)有足量的稀釋液去稀釋所有的樣品，怎么辦？試劑盒內(nèi)提供說(shuō)明書(shū)中所指定的足量的稀釋液。能保證所有的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品檢測(cè)兩次。如果沒(méi)有推薦的稀釋度，或者需要大量稀釋?zhuān)?qǐng)?jiān)趯?shí)驗(yàn)前計(jì)算出所需的稀釋液總量，然后聯(lián)系技術(shù)服務(wù)部門(mén)獲取額外的稀釋液。我能否使用試劑盒內(nèi)非推薦的樣品類(lèi)型？試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)中所指定的樣品類(lèi)型是經(jīng)過(guò)驗(yàn)證可行的。其它未推薦的樣品類(lèi)型是沒(méi)有經(jīng)過(guò)任何檢測(cè)的。我使用對(duì)照的檢測(cè)結(jié)果都在范圍外，為什么？如果使用對(duì)照，其濃度應(yīng)該是在某一特定范圍內(nèi)。如果對(duì)照值在范圍外，則是無(wú)效測(cè)定。確定對(duì)照具有重復(fù)性。我是否可以將試劑盒中說(shuō)明書(shū)的樣品數(shù)據(jù)作為參考？說(shuō)明書(shū)中的樣品數(shù)據(jù)是從有限的檢測(cè)個(gè)體中得出，只能作為大概的指導(dǎo)。我是否可以省略說(shuō)明書(shū)中標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)品值？不可以。樣品值必需由每次檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)決定。如果是手繪標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，我怎樣決定樣品濃度？要決定每個(gè)樣品的濃度，首先找到Y(jié)軸的光度值或者相對(duì)光單位，然后作水平線(xiàn)至標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。在交點(diǎn)處，作垂線(xiàn)至X軸，讀取相應(yīng)濃度。我怎樣補(bǔ)償樣品的稀釋度或者濃縮度？如果樣品是稀釋型的，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)所讀取的值必需乘以稀釋度。如果樣品是濃縮型的，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)所讀取的值必需除以濃縮比。我怎樣將樣品值的單位轉(zhuǎn)換成Units?如果可以使用NIBSC/WHO國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，可使用說(shuō)明書(shū)中介紹的相應(yīng)的轉(zhuǎn)換方程進(jìn)行轉(zhuǎn)換。插入你的樣品值到方程中將pg/mL或者ng/mL轉(zhuǎn)換成Units。我檢測(cè)到的樣品值在測(cè)定實(shí)驗(yàn)的動(dòng)態(tài)范圍之外，我是否可以用這些數(shù)值？只有隨標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)降低的樣品值才被推薦使用。在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍外的值都是非線(xiàn)性的，會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的外推值。如果測(cè)定的樣品值比最高的標(biāo)準(zhǔn)品的值還要高，則此樣品需要進(jìn)一步的稀釋并重新進(jìn)行檢測(cè)。如果測(cè)定的樣品值遠(yuǎn)低于測(cè)定范圍，則樣品被認(rèn)為是無(wú)法被檢測(cè)。我的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)看上去還不錯(cuò)，但是卻沒(méi)有達(dá)到我預(yù)期的結(jié)果，為什么？樣品可能不含有待分析物。稀釋液的影響可能遮蔽了檢測(cè)。確保采用說(shuō)明書(shū)推薦的稀釋度。如果確實(shí)采用的是推薦的稀釋度，則檢查稀釋操作是否正確。過(guò)度稀釋將導(dǎo)致樣品值低于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍。精確度/重復(fù)性(Precision/Reproducibility)免疫測(cè)定的精確性可由酶標(biāo)板孔之間的重復(fù)性和每次檢測(cè)之間的重復(fù)性決定。由高CV值引起的低精確度一般由兩個(gè)因素引起：移液操作和洗液操作。我需要在孔內(nèi)混合試劑嗎？當(dāng)多種試劑滴加至一個(gè)孔內(nèi)時(shí)(比如稀釋液和樣品)，需要在孔內(nèi)進(jìn)行混合。滴加試劑和樣品至每孔的中心，輕拍酶標(biāo)板使其充分混合。我的試劑/樣品是粘稠狀的，不易于吸取移動(dòng)，怎么辦？在吸取粘稠液體時(shí)，請(qǐng)?jiān)诖∫后w中停留一段時(shí)間，待體積達(dá)到平衡后再移出。用相應(yīng)試劑預(yù)洗滌槍頭以補(bǔ)償液體的表面張力。微量移液器槍頭中的液體體積不足或者不均勻，表明移液器需要被校準(zhǔn)。檢查移液器的功能，必要時(shí)重新校準(zhǔn)。在滴加試劑，標(biāo)準(zhǔn)品，樣品時(shí)應(yīng)及時(shí)更換槍頭以避免互相污染。檢查槍頭是否安裝完好。如果安裝不得當(dāng)，可能會(huì)導(dǎo)致吸液和排出液體是體積不準(zhǔn)確。從容器中移出槍頭時(shí)，將槍頭輕靠在受液容器壁上移去殘留在槍頭外表面的液體。正確洗板方法如果使用自動(dòng)洗板儀，抽吸裝置或者多道移液器。確保每管都被適當(dāng)抽吸。在孔內(nèi)液體被完全抽走之后不要再將裝置至于孔內(nèi)過(guò)分抽吸。按照說(shuō)明書(shū)所示重復(fù)以上步驟。最后一次洗板之后，將板內(nèi)液體傾倒完全，用干凈紙巾拍打表面并擦干。洗板太快或者太慢，不完全洗板或者抽吸?？變?nèi)干燥等各種因素都將影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)迅速進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)操作。我是否可以使用同一容器盛放所有的試劑？不可以。請(qǐng)使用不同的容器盛放不同的試劑以避免污染。有些待分析物對(duì)污染極其敏感（比如唾液，氧化試劑等等。根據(jù)說(shuō)明書(shū)，注意預(yù)防試劑盒內(nèi)試劑污染。我可以重復(fù)使用蓋板嗎？再利用的蓋板上可能含有上一步驟的殘留物，可能會(huì)污染孔內(nèi)現(xiàn)有的成分從而導(dǎo)致精確性降低。所以在每次孵育的時(shí)候使用新的蓋板。很多因素都能影響標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的結(jié)果，其中就包括制備和操作。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(StandardCurve)很多因素都能影響標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的結(jié)果，其中就包括配制和操作。我是否可以改變標(biāo)準(zhǔn)品的配制？不可以。用指定的稀釋液適當(dāng)稀釋的重組標(biāo)準(zhǔn)品如說(shuō)明書(shū)中所示?；旌虾腿芙鈽?biāo)準(zhǔn)品時(shí)，應(yīng)避免起泡。溶解后的標(biāo)準(zhǔn)品最好靜置至少15分鐘(根據(jù)說(shuō)明書(shū))。在使用之前輕輕混勻，保證所有的固體已經(jīng)溶解。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)時(shí)，確保所有的稀釋步驟已經(jīng)準(zhǔn)確完成。稀釋時(shí)注意及時(shí)更換槍頭。在移液之前將稀釋液充分混合。洗滌方式怎樣影響我的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)？不完全的洗滌會(huì)降低測(cè)定精確性，導(dǎo)致不理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)結(jié)果。確保洗板機(jī)的正常工作，確保酶標(biāo)板各孔被充分洗滌卻不干燥。移液方式怎樣影響我的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)？不合理的移液操作會(huì)導(dǎo)致高CV值和不理想曲線(xiàn)。在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的過(guò)程中，不正確的移液方式會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的稀釋?zhuān)瑥亩瑰e(cuò)誤的數(shù)值進(jìn)入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中，或者產(chǎn)生非線(xiàn)性曲線(xiàn)。確保移液器正常工作。每孔中的液體體積不等可能就是移液器失靈或者槍頭使用不當(dāng)所致。我的電腦軟件不支持推薦的數(shù)據(jù)歸納方式，我是否可以用其它的？可以，然而，每次測(cè)定最好使用說(shuō)明書(shū)中推薦的數(shù)據(jù)歸納方式。使用不同的數(shù)據(jù)歸納方式會(huì)導(dǎo)致結(jié)果的浮動(dòng)。對(duì)于不同的計(jì)算機(jī)軟件，將標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度設(shè)定為Y軸，濃度設(shè)定為X軸。用對(duì)數(shù)紙作出的數(shù)據(jù)應(yīng)該是線(xiàn)性的，回歸分析被應(yīng)用于對(duì)數(shù)變換。如果不能使用對(duì)數(shù)紙，則將濃度的對(duì)數(shù)和OD值的對(duì)數(shù)進(jìn)行線(xiàn)性作圖。最適曲線(xiàn)由回歸分析決定。測(cè)定多個(gè)酶標(biāo)板時(shí)是否可以使用同一條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)？在測(cè)定不同板中的樣品時(shí)，每一個(gè)板都對(duì)應(yīng)一條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。技術(shù)錯(cuò)誤或者不同的孵育情況，環(huán)境條件都會(huì)引起酶標(biāo)板之間產(chǎn)生不同結(jié)果。一條標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)測(cè)定的樣品值必需是在相同環(huán)境下產(chǎn)生的，否則就是無(wú)效值。我的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)是平的或者是非線(xiàn)性的，這可能是由于什么原因引起的?引起不理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的原因有很多，最常見(jiàn)的原因例舉如下：確定稀釋是否得當(dāng)。確定波長(zhǎng)是否正確。標(biāo)準(zhǔn)品和樣品必需在15-20分鐘內(nèi)滴加入板內(nèi)。（除非試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)特別說(shuō)明）檢查背景是否過(guò)高。確定酶標(biāo)板是否正確洗滌。不恰當(dāng)?shù)南礈炜赡軙?huì)引起具有高背景的平直曲線(xiàn)。在測(cè)定過(guò)程中重復(fù)讀板。在超過(guò)建議時(shí)間后讀板會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。如果最高的標(biāo)準(zhǔn)品的讀數(shù)超過(guò)了酶標(biāo)儀的范圍，確定標(biāo)準(zhǔn)品是否正確溶解，孵育時(shí)間和溫度是否準(zhǔn)確。為保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性請(qǐng)重復(fù)測(cè)定。如果使用對(duì)照，對(duì)照的濃度必須在測(cè)定范圍內(nèi)。在檢測(cè)和孵育過(guò)程中確定試劑沒(méi)有被污染。沒(méi)有任何信號(hào)的平直標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可能是由于酶結(jié)合物或者底物沒(méi)有反應(yīng)。檢查各個(gè)操作過(guò)程由于許多酶標(biāo)儀的限制，因此建議標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)由高向低做復(fù)孔。邊緣效應(yīng)(EdgeEffect)邊緣效應(yīng)的定義是酶標(biāo)板孔內(nèi)中心部分與酶標(biāo)板孔內(nèi)遠(yuǎn)離中心部分之間相比存在明顯的信號(hào)差異，一般歸因于兩個(gè)主要因素。孵育環(huán)境確實(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)有影響嗎？是的。孵育時(shí)溫度不均會(huì)引起邊緣效應(yīng)。請(qǐng)嚴(yán)格按照推薦的溫度進(jìn)行孵育。如果條件允許，可以在能夠控溫的孵育器中進(jìn)行孵育。在使用之前將所有試劑平衡至室溫。（除非特別說(shuō)明）在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前檢查工作的環(huán)境溫度。如果曲線(xiàn)很平直，可能是由于工作環(huán)境溫度低于氣溫所致。在孵育末期我注意到蓋板一側(cè)突起來(lái)了，這是否會(huì)影響我的實(shí)驗(yàn)結(jié)果?蓋板如果使用不恰當(dāng)會(huì)導(dǎo)致邊緣效應(yīng)。跳孔（Drift）跳孔的定義是酶標(biāo)板從左側(cè)到右側(cè)的孔或從上到下的孔內(nèi)信號(hào)出現(xiàn)顯著的倒置現(xiàn)象我剛配置試劑的時(shí)候中斷了，這是否會(huì)影響我的實(shí)驗(yàn)結(jié)果？這可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生波動(dòng)的曲線(xiàn)。在移液之前確定所有的標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品是否配制完好。請(qǐng)?jiān)谠噭┡渲仆甑?5-20分鐘內(nèi)滴加入板內(nèi)。（除非特別說(shuō)明）我是否需要一個(gè)多道移液器？在配制諸如底物，酶結(jié)合物，或者稀釋液的時(shí)候，最好選擇連續(xù)或多道移液器。如果我沒(méi)有平衡試劑會(huì)怎樣？沒(méi)有平衡的試劑會(huì)導(dǎo)致孔之間溫度不均，使整個(gè)酶標(biāo)板的信號(hào)產(chǎn)生變異。除非特別說(shuō)明，試劑一般在使用之前都要平衡至室溫。每次檢測(cè)都會(huì)有推薦的孵育時(shí)間和溫度。冷凍的試劑一般需要更長(zhǎng)的孵育時(shí)間。所以最好使用說(shuō)明書(shū)上推薦的孵育溫度和時(shí)間。我是否需要蓋板？參看試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)。如果說(shuō)明書(shū)內(nèi)的實(shí)驗(yàn)步驟中有推薦使用蓋板，則在使用時(shí)應(yīng)選用與酶標(biāo)板配套的蓋板，使邊緣與酶標(biāo)板緊密契合。如果蓋板的一邊突起，則會(huì)產(chǎn)生信號(hào)的差別。酶標(biāo)儀的設(shè)置怎樣影響我的結(jié)果？對(duì)于底物測(cè)定，如果讀數(shù)時(shí)間等于或超過(guò)2秒/孔，使從第一孔到最后一孔在讀書(shū)時(shí)存在時(shí)間上的延誤，會(huì)導(dǎo)致結(jié)果的異變。在底物反應(yīng)階段，辣根過(guò)氧化物酶會(huì)一直作用直到底物反應(yīng)完全。而由于時(shí)間的延誤，底物越來(lái)越少，底物反應(yīng)也受到影響。將酶標(biāo)儀的讀數(shù)時(shí)間設(shè)定為1.0秒/孔。我是否可以根據(jù)自己的方案來(lái)調(diào)整孵育時(shí)間？更改孵育時(shí)間或溫度會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)不能達(dá)到平衡或過(guò)度反應(yīng)。請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)推薦的孵育時(shí)間和溫度操作。如果同時(shí)進(jìn)行多項(xiàng)檢測(cè)，對(duì)每孔必需分別計(jì)時(shí)已避免孵育不足或過(guò)度孵育。信號(hào)變化(SignalDevelopment)信號(hào)的變化受以下幾個(gè)因素影響：底物，孵育時(shí)間，酶結(jié)合物和底物反應(yīng)失敗，波長(zhǎng)和儀器。我是否可以更改底物處理的方法？如果反應(yīng)物溶液需要混合，確保加入的反應(yīng)物試劑體積正確并充分混合。混合后的溶液必需在15分鐘內(nèi)使用（化學(xué)發(fā)光檢測(cè)最多4小時(shí)）。如果反應(yīng)物混合得太早，則在容器中的顏色可能會(huì)發(fā)生變化。如果底物是凍干品或片劑，則根據(jù)說(shuō)明書(shū)中的方法用適當(dāng)體積的稀釋液將其完全溶解?；旌贤耆蟛⒃谡f(shuō)明書(shū)中推薦的時(shí)間內(nèi)使用。我在移液的時(shí)候是否要按照一定的順序？根據(jù)說(shuō)明書(shū)中的順序進(jìn)行移液操作。高靈敏度檢測(cè)利用了放大系統(tǒng)。在底物孵育完成之后，按照加底物的順序依次加入放大試劑。底物加完之后，輕拍酶標(biāo)板使其充分混合。底物有可能被污染嗎？是的。如果測(cè)定時(shí)使用的是堿性磷酸酶或者辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的結(jié)合物，在測(cè)定時(shí)要注意避免污染。污染可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生超過(guò)酶標(biāo)儀范圍的值。避免與金屬或氧化試劑接觸。使用新容器。底物是否需要在黑暗環(huán)境中進(jìn)行孵育？不需要。不過(guò)在孵育過(guò)程中應(yīng)避免陽(yáng)光直射。溫度怎樣影響結(jié)果？堿性磷酸酶或者辣根過(guò)氧化物酶都是光敏感型酶。光密度單位或者相對(duì)光單位都會(huì)隨著溫度的改變而變化。避免在環(huán)境條件變化劇烈的地方孵育。（比如通風(fēng)口，窗口這些溫度和光照都劇烈變化的地方）為了保證酶結(jié)合物和底物反應(yīng)完全：對(duì)于比色法測(cè)定：將同體積的結(jié)合物和底物溶液充分混合（對(duì)于高靈敏度的試劑盒，在加入同體積的結(jié)合物和底物一分鐘之后，再加入等體積的擴(kuò)增劑）。顏色若不是立即顯現(xiàn)，則檢查所加成分是否在正確的貯藏溫度下保存，是否被