第五章抗體制藥

第五章

抗體制藥

第一節(jié)概述

一.抗體工程與抗體藥物

1890年Behring和北里柴三郎發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素,建立了血清療法,開(kāi)創(chuàng)了抗體制藥。

1937年Tiselius用電泳法將血清蛋白分離為白蛋白、α、β、γ球蛋白，并證明抗體活性主要存在于γ球蛋白組分。

抗體是指能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合具有免疫功能的球蛋白。

抗體的產(chǎn)生：機(jī)體免疫系統(tǒng)受抗原刺激后，B淋巴細(xì)胞被活化增殖和分化為漿細(xì)胞，由漿細(xì)胞合成和分泌的球蛋白。20世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)多發(fā)性骨髓瘤是漿細(xì)胞癌變形成的惡性增殖性疾病。病人血清中出現(xiàn)同抗體結(jié)構(gòu)類似的球蛋白，統(tǒng)稱為免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。所以Ig是化學(xué)結(jié)構(gòu)的概念，而抗體是生物學(xué)功能的概念?？贵w與細(xì)菌、病毒或毒素等抗原結(jié)合，通過(guò)下列3中或其中一種方式綜合和除去有害物質(zhì)：1.直接使抗原失去活性2.使免疫效應(yīng)細(xì)胞將其吞噬并加以破壞3.使抗原表面弱化從而易于受補(bǔ)體破壞

多克隆抗體：病原微生物含有多種抗原決定簇的抗原物質(zhì)，因此這些抗體制劑也是多種抗體的混合物，故稱多克隆抗體。早期采用的抗體藥物主要為多克隆抗體，雖然其在治療多種急性中毒中仍發(fā)揮重要的作用，但是多克隆抗體存在非均一性、異質(zhì)性、不穩(wěn)定性等缺點(diǎn)。1975年Kohler和Milstein首先利用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備出單克隆抗體（monoclonalantibodyMcAb）。單克隆抗體具有高度特異性、均一性、來(lái)源穩(wěn)定、可大量生產(chǎn)等特點(diǎn)，為抗體制備和應(yīng)用提供了全新的手段，還促進(jìn)了基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展。

單克隆抗體作為抗體制劑，在臨床上主要用與疾病的診斷和治療。單克隆抗體檢測(cè)與某些疾病有關(guān)的抗原，輔助臨床診斷。用放射性核素標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行腫瘤顯像，做免疫定位診斷。

單克隆抗體用于臨床治療，CD3單克隆抗體作為免疫抑制劑對(duì)器官移植免疫排斥有抑制作用。以單克隆抗體作為載體的藥物對(duì)腫瘤進(jìn)行定向治療。二、抗體藥物的特異性單克隆抗體針對(duì)特定的單一抗原表位，具有高度的特異性，這是抗體藥物發(fā)揮治療作用的重要基礎(chǔ)。對(duì)于抗腫瘤抗體藥物的研究表明，其特異性主要表現(xiàn)在1.與相關(guān)抗原的特異性結(jié)合2.對(duì)腫瘤靶細(xì)胞的選擇性殺傷3.在動(dòng)物體內(nèi)呈靶向性分布4.對(duì)相關(guān)的腫瘤顯示更強(qiáng)的療效三、抗體藥物的主要研究方向1.研究新的分子靶點(diǎn)2.免疫檢測(cè)技術(shù)的研發(fā)3.抗體的人源化4.抗體藥物分子的小型化5.具有抗體功能的融合蛋白第二節(jié)單克隆抗體及其制備

單克隆抗體是將抗體產(chǎn)生細(xì)胞與具有無(wú)限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞相融合，通過(guò)有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細(xì)胞成為純一的單克隆細(xì)胞系而產(chǎn)生的。

一、抗原與動(dòng)物免疫制備特定抗原的單克隆抗體，首先要制備用于免疫的適當(dāng)抗原，再用抗原進(jìn)行動(dòng)物免疫。有的抗原可以用化學(xué)合成：地高辛多數(shù)抗原物為混合物須經(jīng)免疫、篩選、克隆化。

為使雜交瘤細(xì)胞穩(wěn)定，免疫動(dòng)物和骨髓瘤細(xì)胞供體同一品系動(dòng)物進(jìn)行免疫。目前常用的骨髓瘤細(xì)胞系多來(lái)自BALB/c小鼠和LOU大鼠，因此免疫動(dòng)物也采用相應(yīng)的品系。

免疫的方法采用體內(nèi)免疫法和體外免疫法。

體內(nèi)免疫法適用于免疫原性強(qiáng)、抗原量較多時(shí)應(yīng)用，一般用8～12周齡雌性鼠。顆粒性抗原（如細(xì)菌細(xì)胞抗原）的免疫原性強(qiáng)，可不加佐劑，直接注入腹腔10個(gè)細(xì)胞進(jìn)行初次免疫，間隔1～3周，再追加免疫1～2次。7可溶性抗原按每只小鼠10～100μg抗原與弗氏完全佐劑等量混合后注入腹腔內(nèi)，進(jìn)行初次免疫，間隔2～4周，再用不加佐劑原抗原追加免疫1～2次。一般再采脾細(xì)胞前3日由靜脈注射最后一次抗原。刺激B細(xì)胞分裂。

脾內(nèi)免疫法即在麻醉下直接將

0.1～0.2ml抗原注入脾臟進(jìn)行免疫。細(xì)胞抗原需105個(gè)，可溶性抗原需10μg。

體外免疫法用于不能采用體內(nèi)免疫的情況下，如制備人源性單克隆抗體；免疫源性極弱，易引起免疫抑制。優(yōu)點(diǎn)：需抗源量少，免疫期短，干擾因素少。

體外免疫法：用4～8周齡BALB/c

小鼠的脾臟制成單細(xì)胞懸液，再加入適當(dāng)抗原使其濃度達(dá)0.5～5μg/ml,在5%CO

37C下培養(yǎng)4～5天,再分離脾細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞融合。o2o二、細(xì)胞融合與雜交瘤細(xì)胞的選擇性培養(yǎng)

1.骨髓瘤細(xì)胞的選擇應(yīng)盡可能選擇自身不合成或至少不分泌任何免疫球蛋白分子或片段的骨髓瘤細(xì)胞作為親本細(xì)胞。細(xì)胞必須處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期最好。2.免疫脾細(xì)胞懸液的制備取經(jīng)免疫的小鼠，摘除眼球放血，將小鼠處死，無(wú)菌摘取脾臟，研磨制取脾淋巴細(xì)胞懸液，洗滌調(diào)整細(xì)胞濃度。3.細(xì)胞融合的方法：脾細(xì)胞（1×108）骨髓瘤細(xì)胞（2×107）混合聚乙二醇（PEG）誘導(dǎo)下融合，2分鐘，然后用培養(yǎng)液將融合液緩慢稀釋。

PEG相對(duì)分子量4000，濃度為50%，二甲基亞砜增加融合率。

細(xì)胞融合后可產(chǎn)生多種融合。脾—脾、脾—瘤、瘤—瘤融合細(xì)胞。選擇性培養(yǎng):

培養(yǎng)基為HAT培養(yǎng)液。次黃嘌呤(H)氨甲喋呤(A)胸腺嘧啶(T)配制。

A阻斷DNA合成。脾細(xì)胞在一般情況下不能連續(xù)培養(yǎng)。骨髓瘤細(xì)胞都是HGPRT缺乏株，不能利用H和T合成DNA,而脾細(xì)胞中有這種酶，所以只有脾—瘤才能在HAT選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。

三、篩選陽(yáng)性克隆與克隆化篩選陽(yáng)性克隆常用檢測(cè)方法：免疫酶技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、放射免疫技術(shù)等。應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件及抗原的情況選擇合適的方法。

ELISA

1.原理

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原

或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用

洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上

。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物

質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很

高的敏感度?？寺』侵竼蝹€(gè)細(xì)胞通過(guò)無(wú)性繁殖而獲得細(xì)胞集團(tuán)的整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程。這種群體細(xì)胞的生物學(xué)特性和功能完全相同。常用方法：有限稀釋法和軟瓊脂培養(yǎng)法四、雜交瘤細(xì)胞與抗體性狀的鑒定

1.雜交瘤細(xì)胞鑒定：染色體分析、抗體穩(wěn)定性分析、外原因子檢查。

2.單抗進(jìn)行Ig類和亞類鑒定：用羊或兔抗Ig不同類或亞類抗體，進(jìn)行免疫擴(kuò)散或ELISA鑒定。

3.親和力常用方法：相對(duì)親和力測(cè)定和親和常熟測(cè)定4.純度含量測(cè)定純度一般用SDS或?qū)游龇y(cè)定5.活性測(cè)定測(cè)效價(jià)6.識(shí)別抗原位點(diǎn)測(cè)定7.特異性、交叉反應(yīng)性測(cè)定五、單克隆抗體的大量制備目前制備的方法主要有兩種：動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法體外培養(yǎng)法可獲的10μg/ml抗體

1.體內(nèi)誘生法可獲的5～20mg/ml抗體用BALB/c小鼠。降植烷接種雜交瘤細(xì)胞取腹水離心上清。2.體外培養(yǎng)法-目前工業(yè)化生產(chǎn)常用方法動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展非常迅速，越來(lái)越多用于單克隆抗體的生產(chǎn)。生產(chǎn)工藝易控制，對(duì)于保證產(chǎn)品的品質(zhì)很重要。目前常用的方式有兩種：懸浮培養(yǎng)和細(xì)胞固定化培養(yǎng)

六、單克隆抗體的純化依單抗IgG類和亞類不同，選各種不同的純化方法。體內(nèi)誘生法單克隆抗體的純化方法：1離心取上清，超濾，鹽析。2分離⑴凝膠過(guò)濾用于IgGIgM單抗純化。⑵陰離子交換層析IgG單抗純化。⑶親和層析IgG單抗純化。第三節(jié)基因工程抗體及其制備

雜交瘤單抗為鼠源性，應(yīng)用人體產(chǎn)生人抗鼠抗體及毒副作用。對(duì)鼠源性的單抗進(jìn)行基因加工和改造。目的：降低免疫源性；降低相對(duì)分子量。人-鼠嵌合抗體、改形抗體、小分子抗體。基因工程抗體的優(yōu)點(diǎn)：1.最大成度降低抗體的鼠源性，降低甚至消除人體對(duì)抗體的排斥反應(yīng)2.分子較小，穿透力強(qiáng)，更易到達(dá)病灶的核心部位3.可以根據(jù)治療的需要，制備多種用途的新型抗體4.可以采用原核細(xì)胞、真核細(xì)胞或動(dòng)植物等多種表達(dá)系統(tǒng)大量生產(chǎn)，大大降低成本。一、人鼠嵌合抗體

抗原抗體結(jié)合功能—抗體可變區(qū)（V）同種性免疫源性—抗體穩(wěn)定區(qū)（C）在基因水平上將鼠源單抗的H和L鏈可變區(qū)基因分離出來(lái)，分別與人Ig的H和L鏈的穩(wěn)定區(qū)（C）基因連接成人-鼠嵌合抗體的H和L鏈基因，再共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細(xì)胞，就能表達(dá)完整人-鼠嵌合抗體。Pr鼠VH人CHPr鼠VL人CL免疫球蛋白基因載體的構(gòu)建H鏈嵌合載體L

鏈嵌合載體共轉(zhuǎn)染細(xì)胞啟動(dòng)子人-鼠嵌合抗體基因工程改造策略鼠VH鼠VL人CL人CH抗體分泌細(xì)胞人-鼠嵌合基因工程抗體二、改形抗體（CDR移植抗體）Ig分子中參與構(gòu)成抗原結(jié)合部位的區(qū)域是H和L鏈V區(qū)中的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR區(qū)），而不是整個(gè)可變區(qū)。H和L鏈各有三個(gè)CDR，其它部分稱框架區(qū)。用鼠源單抗的CDR序列替換人Ig分子中CDR序列，則可使人的Ig分子具有鼠源單抗的抗原結(jié)合特異性?？上庖咴葱?。CDR序列CDR序列鼠單克隆抗體人抗體人源化抗體（改型抗體）圖4鼠單克隆V區(qū)人源化（CDR移植）三、小分子抗體-Fab,Fv

基因工程小分子抗體僅表達(dá)鼠源單抗的V區(qū)片段，相對(duì)分子量為原抗體的1/80～1/3。即保留CDR區(qū)，而Ig分子中的C區(qū)不表達(dá)。小分子抗體類型有：①Fab片段抗體②Fv抗體③單鏈抗體④單域抗體⑤最小識(shí)別單位單鏈抗體的優(yōu)點(diǎn)：1.可去除非特異性反應(yīng)的競(jìng)爭(zhēng)性表面蛋白，腫瘤顯象背景更加清晰性。2.易滲透腫瘤組織中增加藥物治療濃度。3.免疫源性小，可消除人抗鼠的排異反應(yīng)。4.在體內(nèi)循環(huán)的半衰期短，易清除，利于解毒排出;5.易于與毒素或酶基因連接，便于直接獲得免疫毒素或酶標(biāo)抗體等。FvScFv單區(qū)抗體最小識(shí)別單位Fab

由完整的輕鏈和Fd組成，大小為完整分子的1/3。

把Fab與細(xì)菌的前導(dǎo)肽相連，在前導(dǎo)肽的作用下Fab進(jìn)入質(zhì)周腔，裝配折疊后，它具有結(jié)合抗原的活性。(1)Fab免疫球蛋白基因載體的構(gòu)建H鏈表達(dá)載體L鏈表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染細(xì)胞PrVHCH1PrVLCL圖5Fab抗體分子的制備IFabantibodymolecule抗體分泌細(xì)胞VHVLCL-S-S-CH1圖5Fab抗體分子的制備

Fv、ScFv的大小約為全分子的1/6。(2)Fv或ScFv

FvScFv連接肽分別構(gòu)建載體L鏈表達(dá)載體H鏈表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染細(xì)胞PrVHPrVL圖6Fv[二硫鍵穩(wěn)定的Fv(disulfide-stabilizedFv,ds-Fv)]小分子抗體的制備a.ds-Fv抗體分泌細(xì)胞VHVL-S-S-圖6Fv小分子抗體的制備disulfide-stabilizedFv,ds-Fv

Fv由VH與VL構(gòu)成，由于其結(jié)合是非共價(jià)結(jié)合，故Fv不穩(wěn)定。在VH與VL之間加上一段連接肽，把VH與VL連成一條單鏈，得到ScFv，即單鏈抗體。連接肽的長(zhǎng)度在10-15個(gè)氨基酸左右，不宜太長(zhǎng)或太短，它應(yīng)具有柔軟性，側(cè)鏈少，抗原性弱等特點(diǎn)。常用的連接肽是(GGGGS)3。

單鏈抗體大多在大腸桿菌中表達(dá)，有三種形式：①直接在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)；②與其它菌體融合表達(dá)融合蛋白；③分泌表達(dá)具有功能的單鏈抗體。

即為VH，約為完整分子的1/12。它只由一個(gè)結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，故稱單域抗體。單域抗體盡管親和力有所降低，但仍保持著原單抗的特異性。

四、單鏈抗體VH

約為完整分子的1/80-1/70大小，一般由一個(gè)CDR構(gòu)成，它也保持著抗體的特異性。五、分子識(shí)別單位CDR第四節(jié)多功能抗體及其制備一、雙功能抗體二、多功能抗體三、抗體融合蛋白

雙鏈抗體（Diabody）一詞最早由Hollinger等于1993年創(chuàng)造。乃是一種小分子的雙價(jià)雙特異性抗體片段。

一、雙功能抗體雙特異性抗體(bispecificantibody,BSAb)是指能同時(shí)識(shí)別2種抗原的抗體。1種為對(duì)應(yīng)腫瘤相關(guān)抗原。另1種為對(duì)應(yīng)效應(yīng)成分。即能結(jié)合靶腫瘤細(xì)胞又能結(jié)合高細(xì)胞毒性的效應(yīng)細(xì)胞,將效應(yīng)細(xì)胞富集在腫瘤周圍,而且可以模擬天然配體的作用,與細(xì)胞表面引發(fā)分子結(jié)合,激活效應(yīng)細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷和裂解。雙功能抗體就是雙特性抗體。它是一種非天然性抗體。其結(jié)合抗原的兩個(gè)臂具有不同的特異性。構(gòu)建方法：⒈化學(xué)交聯(lián)法⒉生物學(xué)方法（雜種-雜交瘤）⒊基因工程法scFv的多聚體二、多功能抗體三、抗體融合蛋白

抗體融合蛋白廣義屬雙功能抗體。類型：①配基-配基型融合蛋白；②配基-Ig型嵌合蛋白；③配基-Fv型融合蛋白；④受體-Fv型融合蛋白；⑤酶-抗體型融合蛋白；第五節(jié)抗體工程

抗體研究進(jìn)展3個(gè)階段：①1890年白喉抗毒素，多克隆抗體；②1975年雜交瘤技術(shù)單克隆抗體；③1994年基因工程抗體；抗體庫(kù)技術(shù)產(chǎn)生的三項(xiàng)技術(shù)基礎(chǔ)

抗體庫(kù)技術(shù)是用基因工程方法把人或其他動(dòng)物的全部抗體的輕、重鏈可變區(qū)基因克隆出來(lái)，在原核載體上表達(dá)，然后篩選出所需的特異基因和抗體。RT-PCR：能夠克隆全套抗體可變區(qū)基因抗體基因片段在大腸桿菌的功能性表達(dá)噬菌體展示技術(shù)（phagedisplay)

初期的抗體庫(kù)技術(shù)是從淋巴細(xì)胞中提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA或直接用總DNA為模板，用PCR技術(shù)建立輕、重鏈文庫(kù)，在大腸桿菌中表達(dá)后篩選。

它是在PCR技術(shù)和PhageDisplay的基礎(chǔ)上實(shí)現(xiàn)的。其過(guò)程是把用PCR法得到的抗體基因插入絲狀噬菌體的DNA，與噬菌體外殼蛋白的基因相連，在輔助噬菌體的幫助下，噬菌粒包裝成絲狀噬菌體，抗體分子通過(guò)與PⅢ或PⅧ相連，在噬菌體表面的一端或分散分布，然后可直接對(duì)噬菌體表面的抗體分子進(jìn)行篩選。噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)接頭DNAVHVL圖2噬菌體表面呈現(xiàn)的小分子抗體基因III或基因VIII外殼蛋白VHVL

1990年McCafferty等成功地建立了噬菌體表面展示系統(tǒng)，通過(guò)將抗溶菌酶單鏈抗體基因克隆于fd噬菌體基因3的下游，使ScFv以融合蛋白的形式展示于噬菌體表面，利用親和層析，兩輪富集達(dá)106倍。該技術(shù)的成功給抗體基因的篩選工作帶來(lái)了革命性的變革。噬菌體表面展示系統(tǒng)(phagesurfacedisplaysystem)一、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的

基本方法⒈獲取目的基因⒉抗體庫(kù)技術(shù)的載體⒊淘篩⒋表達(dá)與鑒定

噬菌體表面展示文庫(kù)技術(shù)的要點(diǎn):

外源基因表達(dá)多肽以融合蛋白形式展示在外殼蛋白N端將基因組合文庫(kù)插入噬菌體編碼膜蛋白的基因g3或g8的先導(dǎo)系列的緊靠下游隨機(jī)克隆入相應(yīng)載體形成組合文庫(kù)從免疫或未被免疫的B細(xì)胞中PCR擴(kuò)增抗體全套基因片段用固相化抗原經(jīng)“親和結(jié)合一洗脫一擴(kuò)增”數(shù)個(gè)循環(huán)直接、方便、簡(jiǎn)捷、高效地篩選出表達(dá)特異性好、親和力強(qiáng)的抗體噬菌體庫(kù)。使翻譯出的抗體分泌到細(xì)菌的質(zhì)周腔內(nèi)，形成游離的抗體片段，經(jīng)過(guò)純化即可獲得目的抗體。篩選到的噬菌體再將基因g3或g8切除后，轉(zhuǎn)入大腸桿菌，噬菌體cDNA展示技術(shù)的應(yīng)用1用于模擬表位的研究。2用于DNA、RNA結(jié)合蛋白的研究。3用于蛋白-蛋白相互作用的研究。4用于非蛋白小分子與蛋白相互作用的研究。5細(xì)胞與蛋白相互作用的研究。6酶作用底物的分析、先導(dǎo)化合物的發(fā)現(xiàn)、定位信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等。二、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的

特點(diǎn)⒈模擬天然全套抗體庫(kù)⒉避開(kāi)了人工免疫和雜交瘤技術(shù)⒊可獲得高親和力的人源化抗體該項(xiàng)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):

將抗體的基因型和表型緊密聯(lián)系起來(lái);

可繞過(guò)雜交瘤技術(shù)，不需要復(fù)雜的基因工程技術(shù);

抗體基因篩選的范圍廣;

技術(shù)穩(wěn)定、可靠、生產(chǎn)周期短;可規(guī)模化生產(chǎn);

適用范圍廣，既可用于抗體制備，也適用于其它蛋白如激素、酶、藥物、隨機(jī)多肽等的生產(chǎn)。

噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的發(fā)展具有很大優(yōu)越性。它簡(jiǎn)單易行，篩選容量大，效率高，繞過(guò)了細(xì)胞融合及免疫等步驟，而且在表型一基因型的統(tǒng)一和識(shí)別一增殖過(guò)程上模擬了B細(xì)胞的成熟過(guò)程，從而在實(shí)際應(yīng)用上具有很大意義。三、基因工程抗體表達(dá)⒈原核細(xì)胞表達(dá)⒉真核細(xì)胞表達(dá)⒊轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)⒋轉(zhuǎn)基因動(dòng)物表達(dá)第六節(jié)抗體診斷試劑一、血清學(xué)鑒定用的抗體類試劑⒈鑒定病原菌的抗體試劑⑴常用診斷血清的品種和用途①沙門氏菌屬診斷血清②志賀氏菌屬診斷血清③病原性大腸埃希氏菌診斷血清⑵診斷血清的制備步驟①制備細(xì)菌抗原②免疫動(dòng)物和制備抗體血清⑶診斷血清診斷方法⒉乙型肝炎病毒表面抗原的反向被動(dòng)血凝診斷試劑⒊妊娠診斷試劑⒋抗ABO血型系統(tǒng)血清若將血型不相容的兩個(gè)人的血滴放在玻片上混合，其中的紅細(xì)胞即聚集成簇，這種相容稱為凝集（agglutination）。紅細(xì)胞的凝集有時(shí)還伴有溶血。當(dāng)血型不相容的血液輸入循環(huán)血液中時(shí)，在血管內(nèi)可發(fā)生同樣的情況，此凝集成簇的紅細(xì)胞可以堵塞毛細(xì)血管，溶血將損害腎小管，同時(shí)常伴發(fā)過(guò)敏反應(yīng)，其結(jié)果可危及生命。紅細(xì)胞膜上的一些特異糖蛋白，在凝集反應(yīng)中糖蛋白起著抗原的作用，因而稱它們?yōu)槟╝gglutinogen）。能與紅細(xì)胞膜上的凝集原起反應(yīng)的特異抗體則稱為凝集素（agglutinin）。

ABO血型是根據(jù)紅細(xì)胞膜上存在的凝集原A與凝集原B的情況而將血液分為4型。凡紅細(xì)胞只含A凝集原的，即稱A型；如存在B凝集原的，稱為B型；若A與B兩種凝集原都有的稱為AB型；這兩種凝集原都沒(méi)有的，則稱為O型。不同血型的人的血清中各含有不同的凝集素，即不含有對(duì)抗內(nèi)他自身紅細(xì)胞凝集原的凝集素。在A型人的血清中，只含有抗B凝集素；B型人的血清中，只含有抗A凝集素；AB型人的血清中沒(méi)有抗A和抗B凝集素；而O型人的血清中則含有抗A和抗B凝集素二、免疫標(biāo)記用的抗體試劑⒈熒光抗體診斷試劑⑴熒光抗體的制備⑵免疫熒光測(cè)定方法⒉免疫酶抗體診斷試劑⑴免疫酶染色法用抗體診斷試劑⑵酶免疫測(cè)定用抗體診斷試劑①HBsAg酶標(biāo)診斷試劑②HBeAg酶標(biāo)診斷試劑③HAVAg（甲型肝炎病毒抗原）酶標(biāo)診斷試劑④測(cè)定HIV（人免疫缺陷病毒）抗原的酶標(biāo)抗體診斷試劑⑤甲胎蛋白（AFP）酶標(biāo)抗體診斷試劑⑥癌胚抗原（CEA）的酶標(biāo)抗體診斷試劑⒊放射免疫用抗體診斷試劑放射免疫技術(shù)是將放射性核素分析的高度靈敏性與抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái)建立的檢測(cè)技術(shù)。放射性核素標(biāo)記抗體的方法：①氯胺-T法②Iodogen氏法抗原的測(cè)定有：①夾心法②間接法③竟?fàn)幏ǔＳ脴?biāo)記抗體試劑有①HBsAg放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑②HBeAg放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑③HAV抗原放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑④AFP放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑⑤CEA放射性核素標(biāo)記抗體診斷試劑三、導(dǎo)向診斷藥物

放射性核素標(biāo)記抗體腫瘤放射免疫顯像放射免疫顯像優(yōu)點(diǎn)：①在體內(nèi)確切腫瘤定位作用，準(zhǔn)確性達(dá)90%，靈敏度達(dá)100%。②在體內(nèi)可檢出0.5cm大小的病灶，并可檢出肺腦的轉(zhuǎn)移灶。③小分子抗體易到達(dá)腫瘤部位，可顯著提高N/NT值。④抗體在腫瘤部位可保留6～9日⑤能觀擦抗體在血中的半衰期和可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)。

放射免疫顯像定位技術(shù)將抗腫瘤單克隆抗體（Ab）與二乙基三胺五乙酸（DTPA）在體外偶聯(lián)成Ab-DTPA，再注入體內(nèi)后，就能與體內(nèi)組織相結(jié)合。由于抗體分子量大，需3天完成。3天后注入放射性核素In-113M（半衰期100m），因DTPA是重金屬離