第二篇 ALB尿微量白蛋白檢測

第一部分尿微量白蛋白（U-Albumin）的臨床意義1982年Viberti等發(fā)現(xiàn)了糖尿病患者尿中總蛋白在正常范圍，而尿白蛋白排泄增加的現(xiàn)象，首先提出了尿微量白蛋白的觀點，并指出了這種蛋白的出現(xiàn)是腎病發(fā)生的早期預兆。隨著檢測技術的進步，目前主要用于對糖尿病、高血壓患者早期檢測發(fā)現(xiàn)微量蛋白尿，以便及時采取保護腎功能的措施，如限制蛋白的攝入量、禁煙、及時控制血糖和血壓。因此及時檢測尿微量白蛋白，對控制和防止早期腎病的發(fā)生極為重要。1、微量白蛋白尿的基本概念多種疾病可引起尿白蛋白排泄率持續(xù)增加，尿中用常規(guī)方法不能檢測到，叫微量白蛋20－200mg/L發(fā)于糖尿病，高血壓病人中的尿蛋白，稱微量白蛋白。2、尿正常代謝及尿蛋白的形成尿是在腎臟內形成的。體內血流經腎小球毛細管時，其中的細胞、大分子蛋白質和脂絕大部分水分及電介質和葡萄糖等物質又被吸收回血，同時腎小管也分泌一些物質加入尿中，最后生成終尿。經輸尿管、膀胱、尿道排出體外。病理情況下，由于腎小球內壓力增高濾過增加或是基底膜改變，導致高濾過率而出現(xiàn)蛋白尿。3、微量白蛋白正常值：健康成年人尿微量白蛋白參考區(qū)間24h尿：＜30mg/L（24h最高量）(摘自衛(wèi)生部醫(yī)政司“全國臨床檢驗操作規(guī)程”2006,第三版p356)與定性法比較有下列優(yōu)點：敏感性高，可測出定性法陰性的標本CV5－8％5－200mg/L尿液特異性強能抗尿中多種物質的干擾分鐘報告結果4、尿微量白蛋白測定的臨床意義、對高血壓病的應用價值尿白蛋白排泄率明顯高于正常人，與收縮壓、舒張壓增高呈正相關，腎小球內壓力上升，白蛋白濾過功能關系失調?？梢詭椭私饽I臟損害的程度。腎臟發(fā)生病變的最早信號之一是尿微量白蛋白增高。U-Albumin升高是心血管疾病進展的重要危險因子和預報指標。高血壓伴U-Albumin應降壓治療，是減緩中斷微小血管損傷的有效措施。目標130／85mmHgU-Albumin是血管病變的敏感指標，比眼底檢查更敏感。、對糖尿病的應用價值可以預測糖尿病腎病的發(fā)展及早期診斷。糖尿病腎病最早的臨床信號是尿白蛋白排泄率持續(xù)增高，出現(xiàn)微量蛋白尿。U-Albumin<30mg/L為正常白蛋白尿期；U-Albumin位于20－200mg/L為微量白蛋白尿期，臨床可診斷為早期糖尿病腎?。灰话阏J為此時病變經治療尚可復原，尿微量白蛋白可轉為陰性。24h，診斷為糖尿病腎病。U-AlbuminU-Albumin＞300mg/24h。U-Albumin助于觀察糖尿病微血管合并癥發(fā)生的敏感指標。有視網(wǎng)膜病變者U-Albumin排泄率＞30mg/L病人中，就有一個由糖尿病腎病發(fā)展而來，而許多病人卻渾然不知，無知地走上了絕路。這個“無形殺手”之所以如此兇險，是因為前期病癥基本無癥狀，此時尿微量白蛋白部分病人已可以測到。因此為了避免糖尿病腎病的發(fā)生，應定期檢測尿微量白蛋白。型病人確診時已型病人15－20期死亡的主要原因。、U-Albumin在其他疾病中的應用全身性或局部炎癥反應的腎功能指標，如尿路感染等原因引起的腎臟早期病變。急性胰腺炎并發(fā)癥的預測指標，U－Alb高者會發(fā)生嚴重并發(fā)癥，＜200mg/L未發(fā)生并發(fā)癥。服用對腎功能有影響的藥物者也可檢測尿微量白蛋白，便于早期觀察腎功能情況及早采取措施。、U-Albumin測定時間首次陽性應在3－6月再測2次，2次陽性則為早期糖尿病腎病。2I型糖尿病，發(fā)病5年后每年3－6次。II型糖尿病，診斷明確時測試，3－6次／年，僅U-Albumin陽性，每三個月隨訪檢測一次。⑸、重視實驗前質量控制：標本留?。鹤詈?2h夜尿；尿液在膀胱內超過3h；首次晨尿較好，隨機留尿也可但不提倡，兩次以上陽性方可確診。尿微量白蛋白試劑(ALB-DOT)特點和尿十聯(lián)、糖化聯(lián)合應用的建議U2-ALB-DOT定量讀數(shù)儀和ALB-DOT快速(3-4分鈡)ALB12小時尿均可。2020-200mg/L是個非常適用的POCT快速測試系統(tǒng)。1、測試的主要技術數(shù)據(jù)檢測評估單位由上海復旦大學中ft醫(yī)院，上海交通大學仁濟醫(yī)院擔當。7600自動生化儀，德靈特定蛋白分析儀和奧普U2愛國者儀器比對。ALB-DOT（膠體金法作比對。22012892例尿微量蛋白陰性尿。比對方法：不同操作人員，按說明書操作，比對用盲法結果：奧普ALB-DOT與兩種進口試劑比對結果良好。12-250mg/L濃度時相關良好，相關系數(shù)R=0.981100%<12mg/L,>250mg/L。30mg/L和進口試劑一樣，能快速準確定量檢測尿微量白蛋白。2、ALB-DOT試驗和尿十聯(lián)等聯(lián)合應用的建議：尿微量白蛋白測定是個非常重要的檢測項目。這是在1982年Viberti者尿中總蛋白在正常范圍，而尿微量白蛋白排泄增加的現(xiàn)象，指出了這種蛋白的出現(xiàn)是腎病發(fā)生的早期預兆，并首先提出了尿微量白蛋白的觀點后迅速發(fā)展普及的一項試驗。該試3驗所以受到人們的青睞，是因為對腎功能損傷有極其好的早期診斷價值。尿微量白蛋白含量在20－200mg/L前我國有幾千萬現(xiàn)癥病人，潛在的糖尿病前期的人數(shù)更多。據(jù)文獻資料顯示約有30％左右的糖尿病人并發(fā)糖尿病腎病并死于尿毒征。因此如果有一項醫(yī)療措施能夠延緩或者中斷糖尿病患者轉化為糖尿病腎?。∧敲催@一項措施一定成為一個社會熱點關心問題。因為一當發(fā)現(xiàn)一個糖尿病腎病病人，對家人的拖累和社會的負擔是很難想象的。因此對尿微量白蛋白臨床檢測價值的認識應更進一步普及深化！特別還有不少認識誤區(qū)更應該及時糾正；臨＋時也在應用尿微量白蛋白檢測。這情況就絕對沒有必要做尿微量白蛋白檢測了。因為尿20-200mg/L含量的(檢測的適應癥并消除一些認識誤區(qū)是非常重要的。因此我們建議：⑴、尿微量白蛋白和尿十聯(lián)常規(guī)檢測聯(lián)用。這是一個十分新穎的觀點和非常有用的經驗。(＋--＋＋＋)的陽性反,微量白的檢測。這種尿十聯(lián)和尿微量白蛋白聯(lián)合應用的臨床價值是非常令人滿意的。它的特點是超越人們的一般常規(guī)思維，在尿常規(guī)檢測中挑選尿蛋白定性試驗陰性病例，根據(jù)病史和適應癥再作尿微量白蛋白檢測的成功經驗，已發(fā)現(xiàn)了許多腎臟損害處在可逆階段的早期病人，獲得了及時治療的機會，終止了腎臟損害使尿微量白蛋白的排泄恢復正常。這一成功檢測經驗的探索，理論根據(jù)的來源得益于對尿微量白蛋白理化特性的深刻理解。尿微量白蛋白臨床價值的幾個關鍵點：一是發(fā)現(xiàn)在常規(guī)尿蛋白定性陰性時，出現(xiàn)的含量在20—200mg/L濃度的尿微量白蛋白；二是此時特別重要的臨床病理階段是病變處在可逆期，如能及時發(fā)現(xiàn)并能針對產生ALB和降壓治療措施，就能使ALB轉為陰性。這是在疾病的進程中是難得的“天賜良機中醫(yī)的治病是強調整體調理和冶未病的思想ALB時的最早信號。因此ALB試驗和常規(guī)尿十聯(lián)試驗聯(lián)動，在常規(guī)尿蛋白定性試驗陰性的病例中，根據(jù)臨床病史和診斷有重點的挑選部分病人做ALB檢測，是非常有意義的?、啤⒛蛭⒘堪椎鞍缀吞腔t蛋白聯(lián)合檢測糖化血紅蛋白(HbA1c)對糖尿病的輔助診斷和并發(fā)癥的預測有重要意義。且不受空腹和4用藥的影響?？崭寡侵荒芊从吵檠獣r的即時指標，糖化血紅蛋白能反映近二個月來糖代1％(7％)，患者一般不會出現(xiàn)糖尿病1—22％糖尿性腎病等并發(fā)癥的危險性就大大增加。這是理論上的規(guī)律。由于每個病人的個體差異不同，并發(fā)癥可能性究竟有多大，只能依靠具體指標來說明。而尿微量白蛋白的出現(xiàn)正是腎臟損ALBHbA1c,無論對病人、家庭乃至社會的貢獻是十分巨大的。⑶、ALB在重點病人和體檢中的應用在臨床上不管是疾病進展演變或者是應用各種藥物后(特別是對腎功能有影響的藥物)，均應該檢測ALB白蛋白。以便能在腎臟損害的早期了解到腎功能的情況及早采取治療措施。這些對于有效防止形成不可逆轉的腎病有重要意義。ALBALBALB項目是非ALB對預測早期腎功能損傷的意義，他們表示ALB的檢測即使自費也愿意承擔。綜上所述，我們了解了ALB試驗對早期預防形成不可逆轉腎病的重要意義。這些預防知識一經普及就受到了民眾的普遍關注！前幾年該試驗的應用受到一定的限制。主要原因是應用的大部分進口試劑成本價超過了收費標準?，F(xiàn)在好了，上海奧普生物醫(yī)藥有限公司研發(fā)的ALB試劑盒，獲上海藥監(jiān)局正式批文，經上海復旦大學中ft濟醫(yī)院評估，結論：與進口試劑等效。上海奧普公司將提供質優(yōu)、價格適應普通百姓應用ALB試劑，努力為人民健康服務。尿微量白蛋白快速定量試劑盒(膠體金法)臨床試驗報告上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院臨床研究負責人：于嘉屏研究員主要實驗研究和數(shù)據(jù)統(tǒng)計：應春妹沈薇趙榮平徐燕萍5商品名：ALB-DOT研究開始日期：2008917日--928日研究摘要目的：使用仁濟檢驗科現(xiàn)用DadeBehringN-BNALB-DOT（equivalent）及臨床適用性。結果：ALB-DOTDadeBehring靠的判斷微量白蛋白尿的臨床性能。縮略語：ALB-DOT：尿微量白蛋白快速定量試劑盒(膠體金法)DadeBehring 德靈公司N-BN1、樣品⑴、尿液樣品：樣品數(shù)為120例尿微量白蛋白的陽性尿液：62例；來源于體檢人群尿：65587尿液化學分析質控品1ALB12、被評估試劑和比對法試劑比對方法試劑DadeBehring2004號；標準號：YZB/GEM0017，153931，效期至20111020104Dade特種蛋白分析儀測定。ALB-DOT：20/盒,上海奧普生物醫(yī)藥有限公司研制，6批號：20080701，142-8℃。ALB-DOTUppergoldU23、比對方法ALB前先對定量系統(tǒng)進行各自質控品自校，比對采用盲法，試驗結果由儀器判讀。（equivalent）ALB-DOT4、結果及分析⑴、定量等效性判斷標準和統(tǒng)計分析經比對法確認微量白蛋白陽性尿62份，二法均可定量范圍內(尿ALB20-200mg/L)56：y=1.0162xn=56，R=0.95尿微標本二法比對結果250200y=1.0162x+1.7398R=0.95150TOA100尿微標本二法比對結果250200y=1.0162x+1.7398R=0.95150TOA100500050100150200DadeBehring⑵、敏感度和特異性的判斷標準和統(tǒng)計分析7①敏感度統(tǒng)計分析：62性尿液中，ALB-DOT59，ALB-DOT65Dade5857，ALB-DOT)=98.3%(57/58)。按方案中敏感度和特異性的判斷標準，ALB-DOT(ALB＞30mg/L)足臨床使用需要。⑶、可能的干擾觀察ALB-DOTC(見產品定值表)。ALB-DOTALB<12mg/L，ALB-DOT蛋白，不是人白蛋白，ALB-DOTALB-DOTALB-DOT(1:100ALB-DOT5、臨床研究質量控制方法簡要闡述上海市交通大學附屬仁濟醫(yī)院檢驗科通過上海市衛(wèi)生部臨床檢驗中心室間質量控制。測試樣品前，用各自質控品或標準品校對各自定量系統(tǒng)，ALB-DOT50ALB（20080504)，ALB-DOT44mg/L，在作40-60mg/L153931169mg/L，153935150mg/L，140-170mg/L可接受范圍之內。8在互不了解測定結果前提下，二法由不同人員操作，全部工作結束后，將原始記錄輸入電腦，計算統(tǒng)計。6、臨床研究數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法MicrosoftExcel2000算統(tǒng)計、相關圖的繪制。7、研究過程中方案的修改⑴、樣品數(shù)量的修改n(1)：6362ALB20-200mg/L)40625640n≥40(2)：4558因臨床實際收集65份，其中7份經比對法證實微量白蛋白尿陽性，按方案規(guī)定不納入健康對照組。比對法確認微白陰性的體檢健康人尿58份全部比對測試，不作丟棄。8、有關臨床研究中特別情況的說明:無9、結論ALB-DOTDadeBehring20-200mg/LY=1.0162x+1.7398 (n=56) 相關系數(shù)R=0.95以比對法為標準結果：ALB-DOT的陽性符合率(敏感度)=95.2%(59/62)健康對照組比對測試顯示：ALB-DOT)=98.3%(57/58)。尿液中常見化學組分葡萄糖、酮體、膽紅素、亞硝酸鹽、尿膽原、維生素ALB-DOTALB-DOT9尿微量白蛋白快速定量試劑盒(膠體金法)和DadeBehring(ALB＞30mg/L)足臨床使用需要，ALB-DOT上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院200892810尿微量白蛋白快速定量試劑盒(膠體金法)臨床研究報告申請臨床研究產品：尿微量白蛋白快速定量試劑盒(膠體金法)商品名：ALB-DOT研究開始日期：20081211日研究完成日期：20081217主要研究者：潘柏申研究單位：上海復旦大學附屬中ft統(tǒng)計學負責人：吳炯研究摘要目的：使用中ft檢驗科現(xiàn)用Diasys（免疫透射比濁法）ALB-DOT（equivalent）及臨床適用性。結果：ALB-DOTDiasys用需要，ALB-DOT縮略語：ALB-DOT：尿微量白蛋白快速定量試劑盒(膠體金法)Diasys：德賽公司微量白蛋白試劑盒（免疫透射比濁法，中ft比對法臨床研究人員情況姓名姓名職稱在本項工作中職責簽名潘柏申研究員臨床研究負責人吳炯主管技師臨床報告撰寫審核周琰技師采樣和樣品處理吳炯技師對比法測試者周琰技師ALB-DOT測試者吳炯主管技師數(shù)據(jù)統(tǒng)計臨床測試單位主要參加人員姓名、職稱、在本項工作中職責。11、樣品、試劑與方法⑴、樣品：送檢尿微量白蛋白尿液：100例。⑵、被評估試劑和比對法試劑◆比對方法Diasys20063400230（更；標準號：YZB/GEM2059-2005，10326/47273，效期至201052-8℃，HITACHI7600-12020人份/盒,上海奧普生物醫(yī)藥有限公司研制，批號：20080701，142-8℃。ALB-DOTUppergoldU2⑶、比對方法ALB讀。（equivalent）上的關系。r≥0.95，表明有良好等效性，ALB-DOTr0.92-0.95，ALB-DOT求。r＜0.92，表明ALB-DOT與上市比對產品的等效性差，無法滿足臨床使用要求。2、結果：等效性判斷和統(tǒng)計分析100ALB20-200mg/L)28份，二法相關系數(shù)和回歸方程為：y=0.9621x1.4712，n=28，10.96211.0，ALB-DOTALB-DOTALB12－250mg/L)442所示)。100Diasys52ALB-DOT≥30mg/L51=98.1%)。比對法Diasys48ALB-DOT100%)。ALB-DOT(ALB＞30mg/L)恰當，ALB-DOT圖1 圖23、臨床研究質量控制方法簡要闡述3⑴、上海市復旦大學附屬中ft醫(yī)院檢驗科通過上海市衛(wèi)生局臨床檢驗中心室間質量控制。50ALB（20080504ALB-DOT54mg/L，在40-60mg/L1）5.05mg/L，SD=1.5mg/L4.8mg/L，在比對法規(guī)定的靶值±2SD（2.05-8.05mg/L）范圍內；2）46.65mg/L，SD=3.7mg/L44.9mg/L，也在比對法規(guī)定的靶值±2SD（39.25-54.05mg/L）范圍內。⑶、在互不了解測定結果前提下，二法由不同人員操作，全部工作結束后，將原始記錄輸入電腦，計算統(tǒng)計。4、臨床研究數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析方法MicrosoftExcel2000算統(tǒng)計、相關圖的繪制。5、研究過程中方案的修改6116(81)1006151(101)1006、結論ALB-DOT與比對法Diasys，在定量尿微量白蛋白時的相關良好：在二法均可定量范圍內(20-200mg/L)，ALB-DOT與比對法間的回歸方程：Y=0.9621x+1.4712，(n=28)，相關系數(shù)R=0.952。在二法均可讀數(shù)范圍內(12－250mg/L)，ALB-DOT與比對法間的回歸方程：Y＝0.9847x－0.3726,(n=44)，R＝0.977以比對法為標準結果：ALB-DOT98.1100%。尿微量白蛋白快速定量試劑盒(膠體金法)和Diasys微量白蛋白液體試劑盒(免疫透射比濁法)在尿微量白蛋白定量測定上有良好等效性，引用的微白尿4參考范圍(ALB＞30mg/L)微量白蛋白尿的臨床性能。上海復旦大學附屬中ft醫(yī)院20081217尿微量白蛋白定量檢測操作規(guī)程（SOP）1、項目名稱、檢驗方法名稱：尿微量白蛋白快速定量試劑盒免疫膠體金干化學法2、 方法學原理尿微量白蛋白(U-AlbuminALB)是利用固相三明治免疫法原理，以反應板的硝基纖維膜作為干化學反應的載體，在反應膜表面包被特異性抗微量白蛋白單克隆抗體。稀ALB濃度呈正比，可用U2愛國者金標定量讀數(shù)儀測定反應膜上膠體金反應的顏色強度，便可精確計算出標本中微量白蛋白的濃度。本試劑盒ALB標準起始于CRM470(IFCC/BCR/CAP)國際標準ALB。3、 試劑品牌、規(guī)格、內含物組份及試驗用具名稱ALBALBALBALBALBALB說明書

主要活性成分及濃度ALB抗體、致敏濃度0.5-1.5mg/ml1%牛血清白蛋白(BSA)，PH7.4PBS溶液，疊氮鈉1-1.5mg/mlpH7.4PBSALB單抗膠體金綴合物、1%BSA雙蒸水