利用毛細(xì)管電泳-間接紫外檢測測定經(jīng)高壓預(yù)處理后魚蝦內(nèi)聚磷酸鹽的含量

DeterminationofpolyphosphatesinfishandshrimpmusclesbycapillaryelectrophoresiswithindirectUV

detectionafterphosphatase

inhibitionusinghighpressurepretreatment葉菁毛細(xì)管電泳—間接紫外檢測法測定魚和蝦內(nèi)的聚磷酸鹽含量——經(jīng)高壓抑制磷酸酶預(yù)處理前言目標(biāo)物的特征1技術(shù)現(xiàn)狀對比本方法優(yōu)越性本研究的目標(biāo)234目標(biāo)物的特征聚磷酸鹽包括：三聚磷酸鹽、焦磷酸鹽和三偏磷酸鹽等。聚磷酸鹽的作用:是法律上允許的食品添加劑,主要用于處理魚、魚片、蝦和肉制品以便提高其持水性。聚磷酸鹽的危害：過多攝入會造成心腦血管疾病，危害人體健康。魚和蝦體內(nèi)含有磷酸酶，會對聚磷酸鹽進(jìn)行水解。技術(shù)現(xiàn)狀對比聚磷酸鹽常用鑒定方法：國標(biāo)法、離子色譜法、毛細(xì)管電泳法。國標(biāo)法:將多聚磷酸鹽酸化消解轉(zhuǎn)化為正磷酸鹽，只能測定正磷酸鹽含量,誤差大。離子色譜法：操作成本高、試劑消耗多、分析時間長。本方法優(yōu)越性毛細(xì)管電泳的優(yōu)越性：分辨率高、分析時間短、樣本容量小、成本低。高壓預(yù)處理法的優(yōu)越性：有效抑制磷酸酶對聚磷酸鹽的水解作用，提高測定結(jié)果準(zhǔn)確性。3方法學(xué)考察2抑制磷酸酶研究1分離條件優(yōu)化本研究目標(biāo)基本條件毛細(xì)管儀類型：安捷倫公司1600A，配紫外二極管陣列檢測器，分離用未涂層熔融石英毛細(xì)管（總長50cm，有效長度41.5cm）。電泳條件:分離電壓：10kV；電泳溫度25±0.15℃；進(jìn)液量：50mbar，3s；紫外檢測波長：254nm。高壓預(yù)處理?xiàng)l件：壓力：400MPa；時間：10min。緩沖液的PH發(fā)光團(tuán)的選擇條件優(yōu)化分離條件的優(yōu)化確定ATP作為發(fā)光基團(tuán)緩沖液PH為6.4抑制磷酸酶研究HPP法對抑制磷酸酶的作用研究。小結(jié)：HPP法能夠有效的抑制磷酸酶對聚磷酸鹽的水解，實(shí)驗(yàn)時間在1.5h完成導(dǎo)致的10%的誤差也在可接受范圍內(nèi)。方法學(xué)考察線性關(guān)系、相關(guān)系數(shù)、檢出限度、重現(xiàn)性研究小結(jié)：線性相關(guān)性好，檢出限在0.23~0.33mg/L范圍內(nèi)，方法精密度好。方法學(xué)考察HPP處理后冰凍蝦樣品內(nèi)聚磷酸鹽的回收率小結(jié)：焦磷酸鹽和三聚磷酸鹽回收率為較高，驗(yàn)證本方法的精確性。但三偏磷酸鹽的回收率較低，這可能是因?yàn)樵诜爆嵉念A(yù)處理過程進(jìn)行降解化學(xué)。方法學(xué)考察對相關(guān)樣品進(jìn)行測定。小結(jié)：進(jìn)一步驗(yàn)證本方法的可行性和精確性。結(jié)果確定緩沖液的配方：含有0.1mmol/L十六烷基三甲基溴化銨、10mmol/LATP、32mmol/L檸檬酸的16mmol/L磷酸氫二鈉緩液沖（pH=6.4)）。確定了HPP法的操作條件：在400MPa壓力下處理10min。確定了本方法各種考察數(shù)據(jù)：最小檢出量為0.23–0.33mg/g-1，最低檢定濃度為0.77–1.0mg/g-1。在添加的樣品中回收的聚磷酸鹽的范圍，分別對應(yīng)的重復(fù)性差范圍為1.1%