巴比妥及苯并二氮雜卓類(lèi)鎮(zhèn)靜藥物的分析

巴比妥及苯并二氮雜卓類(lèi)鎮(zhèn)靜藥物的分析廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)環(huán)狀丙二酰脲類(lèi)化合物(一)基本結(jié)構(gòu)廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)典型藥物(Phenylbarbital)(barbital)廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)(Secobarbital)戊巴比妥(Pentobarbital)廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)(一)基本結(jié)構(gòu)酰胺鍵的水解酸性，與醛加成反應(yīng)側(cè)鏈反應(yīng)：雙鍵，苯環(huán)絡(luò)合反應(yīng)與金屬離子反應(yīng)紫外吸收廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)(二)主要性質(zhì)性狀——白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末溶解度——微溶或極微溶于水，易溶于乙醇等有機(jī)溶劑鈉鹽易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑1.弱酸性(pKa:7.3～8.4)＋廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)一級(jí)電離二級(jí)電離烯醇互變廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)2.水解反應(yīng)廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)巴比妥鈉注射液不能預(yù)先配制進(jìn)行加熱滅菌，須制成粉針劑，臨用時(shí)溶解。廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)3.與金屬離子反應(yīng)a.與銀鹽的反應(yīng)5,5－取代的巴比妥類(lèi)藥物＋AgNO3Na2CO3可溶性的一銀鹽AgNO3二銀鹽白色沉淀巴比妥類(lèi)藥物分子結(jié)構(gòu)中含有酰亞胺基團(tuán),在碳酸鈉溶液中生成鈉鹽而溶解,因而可與硝酸銀反應(yīng)廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室白色難溶性二銀鹽AgNO3Na2CO3滴加AgNO3Ag與銀鹽的反應(yīng)用這種形式表示也是一樣的廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)3.與金屬離子反應(yīng)b.與銅鹽的反應(yīng)巴比妥類(lèi)藥物在吡啶溶液中生成烯醇式異構(gòu)體,可與吡啶試劑反應(yīng)形成穩(wěn)定的配位化合物,產(chǎn)生類(lèi)似雙縮脲的呈色反應(yīng)廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)3.與金屬離子反應(yīng)b.與銅鹽的反應(yīng)巴比妥類(lèi)＋銅吡啶顯色巴比妥類(lèi)——紫色或紫色沉淀硫巴比妥類(lèi)——綠色廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室水吡啶部分離子化＋有色配位化合物與銅鹽的反應(yīng)用這種形式表示也是一樣的廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)c.與鈷鹽的反應(yīng)Co(NO3)2、CoO、Co(Ac)2異丙胺無(wú)水甲醇或乙醇廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室d.與汞鹽的反應(yīng)一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)巴比妥類(lèi)藥物+汞鹽→白色↓（可溶于氨試液）廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)4.香草醛反應(yīng)(Vanillin)戊巴比妥鑒別：

取戊巴比妥10mg，加香草醛約10mg和硫酸2ml，混合后在水浴上加熱2min，顯棕紅色。放冷，小心加入乙醇5ml，即顯紫色并變成藍(lán)色。廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)5.紫外吸收光譜特征λ(nm)2902702502300.51.01.5A巴比妥類(lèi)藥物的紫外吸收光譜ABC240nm255nmA.H2SO4液(0.05mol/L,未電離)B.pH9.9緩沖液(一級(jí)電離)C.pH13NaOH液(1mol/L,二級(jí)電離)1,5,5-三取代巴比妥類(lèi)藥物不存在二級(jí)電離，最大吸收波長(zhǎng)不變。廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)3202802402000.80.50.2λ(nm)A238287304硫代巴比妥的紫外吸收光譜

A.HCl液(0.1mol/L)

B.NaOH液(0.1mol/L)6.薄層色譜行為特征廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室7.顯微結(jié)晶一、基本結(jié)構(gòu)與主要性質(zhì)

藥物本身晶形反應(yīng)產(chǎn)物晶形廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室二、鑒別試驗(yàn)(一)丙二酰脲類(lèi)的鑒別試驗(yàn)取供試品約0.1g，加碳酸鈉試液1ml與水10ml，振搖2min，濾過(guò)，濾液中逐滴加入硝酸銀試液，即生成白色沉淀，振搖，沉淀即溶解；繼續(xù)滴加過(guò)量的硝酸銀試液，沉淀不再溶解。取供試品約50mg，加吡啶溶液(1→10)5ml，溶解后，加銅吡啶試液1ml，即顯紫色或生成紫色沉淀。銀鹽反應(yīng)銅鹽反應(yīng)廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室(二)測(cè)定熔點(diǎn)二、鑒別試驗(yàn)

巴比妥類(lèi)的鈉鹽＋酸→游離巴比妥類(lèi)藥物↓→過(guò)濾→洗滌→干燥→測(cè)熔點(diǎn)(三)利用特殊取代基或元素的鑒別試驗(yàn)

利用不飽和取代基的鑒別試驗(yàn)(司可巴比妥鈉)

利用芳環(huán)取代基的鑒別試驗(yàn)(苯巴比妥鈉)

硫色素反應(yīng)(硫代巴比妥類(lèi))廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室二、鑒別試驗(yàn)1.司可巴比妥鈉的鑒別I2褪色Br2KMnO4廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室二、鑒別試驗(yàn)2.苯巴比妥的鑒別a.硝化反應(yīng)

b.硫酸-亞硝酸鈉反應(yīng)

苯巴比妥與NaNO2-H2SO4反應(yīng)生成橙黃色→橙紅色c.甲醛-硫酸反應(yīng)

苯巴比妥與甲醛-H2SO4反應(yīng)生成玫瑰紅色環(huán)區(qū)分苯巴比妥與不含芳環(huán)取代的巴比妥類(lèi)藥物。廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室二、鑒別試驗(yàn)3.硫代巴比妥類(lèi)的鑒別——硫色素反應(yīng)硫代巴比妥類(lèi)與巴比妥類(lèi)的區(qū)別以前廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室三、特殊雜質(zhì)試驗(yàn)(一)苯巴比妥ⅠⅡⅢ廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室三、特殊雜質(zhì)試驗(yàn)廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室三、特殊雜質(zhì)試驗(yàn)1.酸度中間體Ⅱ乙?；煌耆珪r(shí)，Ⅱ與尿素縮合產(chǎn)生的雜質(zhì)Ⅱ苯基丙二酰脲酸性較強(qiáng)檢查方法取本品0.20g，加水10ml，煮沸攪拌1min，放冷，濾過(guò)后，取濾液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得顯紅色廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室2.乙醇溶液澄清度三、特殊雜質(zhì)試驗(yàn)檢查中間體Ⅱ、Ⅲ等乙醇中不溶物。

取本品1.0g，加乙醇5ml，加熱回流3min，溶液應(yīng)澄清

3.中性或堿性物質(zhì)(提取重量法,溶解度差異)

副產(chǎn)物：2-苯基丁酰(胺)脲或分解產(chǎn)物不溶于NaOHT.S.而溶于醚分液漏斗NaOHT.S.乙醚H2O過(guò)濾干燥濾紙蒸發(fā)皿105℃1hr<3mg取本品1.0g乙醚，H2O洗3次濾液蒸干殘?jiān)鼜V西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室123含量測(cè)定銀量法Argentometry酸堿滴定法Acid-basetitrationmethod紫外分光光度法uv廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室(一)銀量法(Argentometry)巴比妥類(lèi)藥物在適當(dāng)?shù)膲A性溶液中,易與重金屬離子反應(yīng),并可定量地形成鹽,因而可用銀量法進(jìn)行滴定.在滴定過(guò)程中,可以通過(guò)生成沉淀進(jìn)產(chǎn)生的混濁指示滴定終點(diǎn).但容易出現(xiàn)誤差.改用甲醇及3%的無(wú)水碳酸鈉溶劑系統(tǒng),采用Ag-玻璃電極系統(tǒng)電位法指示終點(diǎn),方法改善,為chp2010所用.四、含量測(cè)定廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室四、含量測(cè)定(一)銀量法(Argentometry)0.2g甲醇40ml異戊巴比妥測(cè)定3%無(wú)水碳酸鈉電位滴定法(AgNO3)指示電極(Ag)參比電極(玻璃/甘汞)廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室四、含量測(cè)定(二)溴量法:溴過(guò)量,再用KI反應(yīng),再用硫代硫酸鈉滴定.司可巴比妥鈉測(cè)定取本品約0.1g，精密稱(chēng)定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸5ml，立即密塞并振搖1min，在暗處?kù)o置15min后，注意微開(kāi)瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.05mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相當(dāng)于13.01mg的C12H17N2NaO3。廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室四、含量測(cè)定(三)酸堿滴定法(Acid-basetitrationmethod)

水-乙醇混合溶劑中滴定膠束水溶液中滴定非水滴定法廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室四、含量測(cè)定異戊巴比妥水—醇溶解麝香草酚酞NaOH淡藍(lán)色1.水-乙醇混合溶液廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室2.膠束水溶液四、含量測(cè)定正膠束反膠束H2O溴化十六烷基三甲基芐銨Cetyltrimethylbenzylammoniumbromide，CTMA氯化四癸基二甲基芐銨Tetradecyldimethylbenzylammoniumchloride，TDBA巴比妥類(lèi)表面活性劑溶解麝香草酚酞指示劑NaOH滴定廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室四、含量測(cè)定3.非水滴定法

溶劑：二甲基甲酰胺、甲醇、丙酮、三氯甲烷、無(wú)水乙醇、苯、吡啶、甲醇-苯、乙醇-三氯甲烷滴定劑：甲醇鈉（鉀）、氫氧化四丁基胺指示劑：麝香草酚藍(lán),也可以用電位法指示終點(diǎn)廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室四、含量測(cè)定(四)紫外分光光度法直接測(cè)定的UV法提取分離后的UV法廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室四、含量測(cè)定注射用硫噴妥鈉含量測(cè)定取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱(chēng)取適量(約相當(dāng)于硫噴妥鈉0.25g)，置500ml量瓶中，搖勻，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀釋制成每1ml中約含5μg的溶液；另取硫噴妥對(duì)照品，精密稱(chēng)定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5μg的溶液。用1cm吸收池，于304nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，以0.4%NaOH溶液作空白。根據(jù)每支的平均裝量計(jì)算。每1mg的硫噴妥鈉相當(dāng)于1.091mg的C11H19N2NaO2S廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室四、含量測(cè)定USP24法測(cè)定苯巴比妥含量巴比妥類(lèi)藥物適量，加水使其溶解后，加酸酸化，用三氯甲烷提取巴比妥類(lèi)藥物，三氯甲烷提取液加入pH7.2～7.5的緩沖液，振搖，分離棄去水相緩沖液層，再用氫氧化鈉自三氯甲烷中提取巴比妥類(lèi)藥物，調(diào)節(jié)堿提取液的pH值，然后選用相應(yīng)的吸收波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。提取后的UV分光光度法,消除干擾廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室(五)HPLC法五、體內(nèi)藥物分析廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室第二節(jié)苯并二氮雜卓類(lèi)藥物的分析NNClH3CO1234567892’地西泮

(diazepam)七元亞胺內(nèi)酰胺環(huán)奧普唑侖奧沙西泮(Oxazepam)氯氮卓(Chlordiazepoxide)NNNCH3OClH2.官能團(tuán)與分析方法二氮雜卓環(huán)為七元環(huán)，環(huán)上氮原子具有堿性，苯基的取代使堿性降低，可與生物堿試劑反應(yīng)，可進(jìn)行非水滴定法測(cè)定；本品多為游離堿，不溶于水，而溶于甲醇、乙醇和氯仿中。定量UV吸收，用于含量測(cè)定環(huán)比較穩(wěn)定，在強(qiáng)酸性下水解，形成相應(yīng)的二苯甲酮衍生物，可用于鑒別和比色測(cè)定。（氯氮卓水解生成芳伯胺基；地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸）；鑒別芳伯胺基反應(yīng)：氯氮卓水解生成芳伯胺基(重氮化偶合反應(yīng)

鑒別茚三酮反應(yīng)：地西泮水解生成甘氨酸（茚三酮反應(yīng)）鑒別硫酸熒光反應(yīng)：本類(lèi)藥物→加硫酸，在紫外燈下，呈熒光

鑒別含有氯元素：氧瓶燃燒廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室理化性質(zhì)通常為白色或微黃色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；具有一定的熔點(diǎn)。一般不溶或極微溶于水，溶于丙酮或三氯甲烷等有機(jī)溶劑。具有弱堿性；水解性；UV吸收特性。廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室第二節(jié)苯并二氮雜卓類(lèi)藥物一、鑒別試驗(yàn)(一)化學(xué)鑒別試驗(yàn)

1.沉淀反應(yīng)氯氮卓橙紅色沉淀阿普唑侖＋KBiI4

鹽酸氟西泮也生成橙紅色沉淀氯硝西泮放置后，沉淀顏色變深，因此可以相互區(qū)別。阿普唑侖+遇硅鎢酸白色沉淀，藥典中也用于鑒別。廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室第二節(jié)苯并二氮雜卓類(lèi)藥物2.水解后呈芳伯胺反應(yīng)

氯氮卓和奧沙西泮的鹽酸溶液(1→2)，緩緩加熱煮沸，放冷，加亞硝酸鈉和堿性β-萘酚試液，生成橙紅色沉淀，后者放置后顏色變暗。廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室地西泮ChP（2005）[鑒別]（2）取本品20mg，用氧瓶燃燒法（附錄ⅦC）進(jìn)行有機(jī)破壞，以5%氫氧化鈉溶液5ml為吸收液，燃燒完全后，用稀硝酸酸化，并緩緩煮沸2分鐘，溶液顯氯化物的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）。3.分解產(chǎn)物的反應(yīng)

本類(lèi)藥物多為有機(jī)氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，生成HCl，以5%氫氧化鈉溶液吸收，硝酸酸化，顯氯化物反應(yīng)。Ch.P用于地西泮和三唑侖藥物的鑒別。廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室第二節(jié)苯并二氮雜卓類(lèi)藥物4.硫酸－熒光反應(yīng)：苯并二氮雜卓類(lèi)藥物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光(365nm)下顯不同的顏色。藥物硫酸稀硫酸地西泮黃綠色黃色氯氮卓黃色紫色艾司唑侖亮綠色天藍(lán)色硝西泮淡藍(lán)色藍(lán)綠色廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室5.UV第二節(jié)苯并二氮雜卓類(lèi)藥物藥物溶劑C(μg/ml)λmax(nm)A地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242約0.51282約0.23366－氯氮卓鹽酸(9→1000)7245、3080.65阿普唑侖鹽酸(9→1000)12264－鹽酸氟西泮硫酸甲醇(1→36)10239±2、284±2比值1.95~2.50362±2－氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液10239±2，307±2－奧沙西泮乙醇10229，315±2(較弱)廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室

取本品，加硫酸甲醇溶液(1→36)制成每1ml中約含10ug的溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在239nm、284nm與360nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，在239nm與284nm處的吸光度比值為1.95～2.50。UV法—鹽酸氟西泮(BP2005)IR法氯硝西泮——BP2005作為該品種唯一的鑒別方法IR法一般是USP首要的鑒別手段廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室紅外吸收光譜:已用于地西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、鹽酸氟西泮、氯硝西泮和奧沙西泮的鑒別廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室第二節(jié)苯并二氮雜卓類(lèi)藥物(四)TLC與HPLC硅膠G薄層板，苯－丙酮(3:2)為展開(kāi)劑，稀硫酸噴霧，105℃干燥30min，紫外燈下檢視熒光斑點(diǎn)藥物Rf值斑點(diǎn)顏色*單一點(diǎn)樣混合點(diǎn)樣自然光254nm365nm地西泮0.800.78無(wú)色黃色(m)黃色(m)氯氮卓0.340.34無(wú)色藍(lán)紫色(s)藍(lán)紫色(w)艾司唑侖0.220.20無(wú)色灰紫色(m)藍(lán)紫色(m)硝西泮0.720.72黃色紫色(w)紫色(w)奧沙西泮0.490.52黃色亮灰藍(lán)色(s)亮灰藍(lán)色(s)*s,m,w分別表示熒光的強(qiáng)、中、弱廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室

有關(guān)物質(zhì)檢查其檢查方法除了采用GC法（三唑侖）TLC法HPLC特殊雜質(zhì)檢查廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室1.地西泮中有關(guān)物質(zhì)的檢查地西泮在合成過(guò)程中因其副反應(yīng)，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化學(xué)結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)物質(zhì)，可采用TLC法中的高低濃度對(duì)比法進(jìn)行檢查。

2.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的檢查USP(24)用TLC法檢查氯氮卓中的有關(guān)物質(zhì)，并規(guī)定其分解產(chǎn)物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得過(guò)0.01%；中間體7-氯-1，3-二氫-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜卓-2-酮-4-氧化物含量不得過(guò)0.1%。TLC法廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室3.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的反相高效液相色譜法色譜條件：色譜柱為250mm×2.6mm（i.d.）C18柱；n=3000；流動(dòng)相為甲醇-磷酸液(0.05mol/L)(60:40),40%氫氧化鈉溶液調(diào)pH為6.0；流速為1ml/min;紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)為254nm。檢測(cè)結(jié)果：氨基物（Ⅱ）的tR為12.0min、氧化物（Ⅲ）的tR為4.3min，痕量雜質(zhì)（Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ）的tR為13.8、3.6、4.7min。廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室HPLC廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室Test鹽酸氟西泮中氟化物的檢查對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取NaF221mg，置100ml量瓶中，加水20ml使溶解，加NaOH溶液(1→2500)1ml,

加水稀釋到刻度，搖勻，貯于密封的塑料容器內(nèi)備用(每1ml相當(dāng)于1mg的F-)。供試品溶液：取本品1g，精密稱(chēng)定，置100ml量瓶中，加枸櫞酸鈉緩沖液(pH5.25)溶解并稀釋到刻度，搖勻。電位法——氟離子選擇電極廣西醫(yī)科大學(xué)藥物分析教研室測(cè)定法：取對(duì)照品溶液適量，加枸櫞酸鈉緩沖液

(pH5.25)分別制成每1ml中含1ug、3