教學課件-細菌的形態(tài)觀察

細菌的形態(tài)觀察顯微鏡的構造

1.光學部分:目鏡物鏡照明裝置(聚光鏡、虹彩光圈、反光鏡等)。它使檢視物放大,生成物象。2.機械部分:鏡座、鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺、載物臺轉(zhuǎn)移器、粗調(diào)節(jié)器、細調(diào)節(jié)器等部件.它起著支持調(diào)節(jié)固定等作用.光學顯微鏡的成像原理倒立的虛像顯微鏡顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率

1.放大倍數(shù)：物鏡放大倍數(shù)×目鏡放大倍數(shù)

2.

顯微鏡的分辨率:是表示顯微鏡辨析兩點之間距離的能力?？捎霉奖硎緸椋?/p>

D=λ/2n·sin(α/2)

式中D：物鏡分辨出物體兩點間的最短距離。：可見光的波長（平均0.55m)n:物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折射率：鏡口角（即入射角）D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰油鏡使用的原理油浸接物鏡。當光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相近），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進光量，從而使物象更加清晰。浸沒油與玻璃的折射率相近很多原來由于在透鏡及載片表面的反射和折射而損失的光線可以進入物鏡，使照明亮度提高，改善觀察效果。2、香柏油為介質(zhì)增加了分辨率顯微鏡的放大倍數(shù)和分辨率放大倍數(shù)=接物鏡放大倍數(shù)×接目鏡放大倍數(shù)顯微鏡的分辨率：表示顯微鏡辨析物體（兩端）兩點之間距離的能力D=λ/2n·sin(α/2)式中：D——物鏡分辨出物體兩點間的最短距離

λ——可見光的波長（平均0.55mm)

n——物鏡和被檢標本間介質(zhì)的折射率

α——鏡口角（即入射角）根據(jù)公式D=λ/2n·sin(α/2)

，增大分母，使得D值減小，分辨率增大。細菌形態(tài)觀察方法

(一)簡單染色法原理(二)革蘭氏染色法原理(三)抗酸染色原理(四)芽孢染色原理(五)莢膜染色原理(六)鞭毛染色原理染色劑和染色原理微生物染色常用染料如下表：實驗內(nèi)容

（簡單染色的方法和步驟）涂片自然干燥微火固定染色lmin沖洗吸干鏡檢實驗內(nèi)容

（革蘭氏染色的方法和步驟）涂片，干燥、固定草酸銨結晶紫染液染色lmin，用水沖洗用革氏碘液媒染lmin，用水沖去碘液用95％乙醇脫色10-30s，至乙醇液不呈現(xiàn)紫色蕃紅染液復染lmin，用水沖洗吸干并鏡檢實驗內(nèi)容

（了解抗酸染色的方法和步驟）1．制片將少量草分枝桿菌制成菌懸液，80℃恒溫水浴3h殺死菌體。取菌懸液涂片，自然干燥。2．染色滴加石炭酸復紅染液2滴，覆蓋涂片，在微火上加熱至有蒸氣出現(xiàn)，不斷補充染液，加熱8～10min，棄染液。3．脫色用3％鹽酸乙醇液脫色，至乙醇液呈淡紅色或無色。4．水洗滴加蒸餾水洗去鹽酸乙醇。5．復染加美藍染液染lmin。6．水洗后自然干燥、鏡檢草分枝桿菌呈現(xiàn)紅色。若用非抗酸性菌作為對照，則菌體被染成藍色。實驗內(nèi)容

（了解芽孢染色的方法和步驟）孔雀綠染色法：取一干凈載片，在載片中央加一小滴水，按無菌操作取巨大芽孢桿菌菌體少許混合均勻，制成涂片，風干固定后，在涂菌處滴加7.6％的孔雀綠飽和水溶液，間斷加熱染色10min后(注意添加染液勿使涂片干燥)，用水沖洗。再用0.5％蕃紅液染色lmin，水洗，自然干燥后鏡檢。芽孢被染上綠色，營養(yǎng)體呈現(xiàn)紅色。實驗內(nèi)容

（了解莢膜染色的方法和步驟）1．制片加一滴6％葡萄糖水溶液于載片一端，挑取少量膠質(zhì)芽孢桿菌與其混合，再加一滴黑色素充分混勻。用推片法制片，將菌液鋪成薄層，自然干燥。2．固定滴加l～2滴無水乙醇覆蓋涂片，固定lmin，自然干燥。3．染色，沖洗滴加結晶紫，染色2min，用水輕輕沖洗，干燥后鏡檢。有莢膜的菌、菌體呈紫色，背景灰黑色，莢膜不著色呈無色透明圈。無莢膜的菌，由于干燥菌體收縮，菌體四周也可能出現(xiàn)一圈狹窄的不著色環(huán)，但這不是莢膜，莢膜不著色的部分寬。實驗內(nèi)容

（了解鞭毛染色的方法和步驟）1．載片的清洗：將載片洗凈浸泡在95％乙醇中備用。2．實驗菌種的準備：將枯草芽孢桿菌在新制備的肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基上(斜面下部要有少量冷凝水)，連續(xù)移種3～4次，每次培養(yǎng)12～18h，最后一次培養(yǎng)12～16h。3．制片：擦干載片，在載片一端加一滴蒸餾水，用接種環(huán)挑取少許菌苔底部有水部分的菌體(注意不要挑出培養(yǎng)基)，將接種環(huán)懸放在水滴中片刻，將載片稍傾斜，使菌液隨水滴緩緩流到另一端，可再返轉(zhuǎn)一次使菌液流經(jīng)面積擴大，然后放平，自然干燥。4．染色（利夫森氏染色法）：用蠟筆將涂菌區(qū)圈起，滴加染液，過數(shù)分鐘后，當染液的1/2以上區(qū)域表面出現(xiàn)金屬光澤膜時，用水輕輕將金屬膜及染液沖洗干凈，自然干燥。鏡檢鏡檢時應在涂片上按順序進行觀察，經(jīng)常是在部分涂片區(qū)的菌體染出鞭毛，菌體及鞭毛均為紅色。實驗材料Ⅰ(一)菌種大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌。(二)染液簡單染色：草酸銨結晶紫染液。革蘭氏染色：草酸銨結晶紫染液、革氏碘液、95％乙醇、蕃紅染液。實驗材料Ⅱ(三)標本細菌三型、四聯(lián)球菌、莢膜、芽孢。(四)其他物品無菌水、顯微鏡、載片、蓋玻片、酒精燈、吸水紙、香柏油、擦鏡紙、接種環(huán)。實驗內(nèi)容

(一)成片觀察(1)觀察細菌三型涂片，比較球菌、桿菌和螺旋菌的形態(tài)。(2)觀察四聯(lián)球菌的形態(tài)及排列方式。(3)觀察蘇云金芽孢桿菌的芽孢，褐球固氮菌的莢膜的形態(tài)。實驗內(nèi)容

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