季期 生化理論授課課件6 酵母核糖酸的分離及組分鑒定

實(shí)驗(yàn)六、酵母核糖核酸的分離及組分鑒定一、目的：1.了解核酸的組分;2.掌握鑒定核酸組分的方法。二、原理：

酵母核酸中rna的含量較多。rna可溶于堿溶液，在堿提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此即得到rna的粗制品。核糖核酸含有核糖，嘌呤堿，嘧啶堿和磷酸各組分。加硫酸煮沸可使其水解，從水解液中可以測出上述組分的存在。鹿鴿自遷桓羨閃疼羅拇褐酋炊咽犁釬佃雍欽榔聶喻映夫伸造慨賣絲綏彤室2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定1.乳缽2.150毫升錐形瓶3.水浴

4.量筒5.吸管，滴管6.試管及試管架7.燒杯，漏斗8.離心機(jī)三、器材：

實(shí)驗(yàn)六、酵母核糖核酸的分離及組分鑒定舒皿率濱弓伺訴磅柄洶央數(shù)積槍肄贍孤寒探啦巍乒簍福繭屜漸蓑逞峭誼弊2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定1.0.04mol/l氫氧化鈉溶液1000ml2.酸性乙醇溶液500ml3.95%乙醇1000ml4.乙醚500ml5.3當(dāng)量/升硫酸200ml6.濃氨水50ml7.0.1mol/l硝酸銀溶液50ml8.三氯化鐵濃鹽酸溶液80ml9.苔黑酚乙醇溶液

10ml10.酵母粉四，試劑和材料：四、試劑與材料：實(shí)驗(yàn)六、酵母核糖核酸的分離及組分鑒定鎂犢荔風(fēng)欺揚(yáng)古諾險支振北似膊跳箭作襲賊熱軀逛佛舍琢探宣邵狐傘小佰2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定

11.定磷試劑50ml（1）17%硫酸：將17毫升濃硫酸（比重1.84）緩緩加入到83毫升水中。（2）2.5%鉬酸銨溶液：2.5g鉬酸氨溶于100ml水中。（3）10%抗壞血酸溶液：10g抗壞血酸溶于100ml水中，貯存棕色瓶保存。溶液呈淡黃色時可用，如呈深黃色或棕色則失效，需要純化抗壞血酸。臨用時將上述3種溶液與水按如下比例混合。17%硫酸：2.5%鉬酸銨溶液：10%抗壞血酸溶液：水=1：1：1：2（v:v）四、試劑與材料：實(shí)驗(yàn)六、酵母核糖核酸的分離及組分鑒定或夜擾霍沼謬瓤鉆文嘎福盯蔣淫冠蓉遮覽琢遲岔凈棉苞組股朽籃田運(yùn)牧衫2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定

將7.5g酵母懸浮于45毫升0.04mol/l氫氧化鈉溶液中，并在乳缽中研磨均勻。將懸浮液轉(zhuǎn)移至150ml錐形瓶中。在沸水浴上加熱30分鐘后，冷卻。離心（3000轉(zhuǎn)/分）15分鐘將上清液緩緩傾入15毫升酸性乙醇溶液中。注意要一邊攪拌一邊緩緩傾入。待核糖核酸沉淀后，離心（3000轉(zhuǎn)/分）3分鐘。棄去清液。用95%乙醇洗滌沉淀2次，乙醚洗滌沉淀1次后，沉淀在空氣中干燥。

將提取的核酸，加入3當(dāng)量/升的硫酸5ml，在沸水浴中加熱10分鐘制成水解液并進(jìn)行組分的鑒定。

五，操作方法：五、操作方法：酵母核糖核酸的分離實(shí)驗(yàn)六、酵母核糖核酸的分離及組分鑒定蒸薄贊啞假磺鼠裴調(diào)質(zhì)頸蝦腐莎鱗沖罰舉取繃纂蕩傀阮級假砍晝酬鄉(xiāng)班粥2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定

1.

嘌呤堿：取水解液1ml加入過量濃氨水，然后加入約1ml1mol/l的硝酸銀溶液，觀察有無嘌呤堿的銀化合物的沉淀。

2.

核糖：取1支試管加入水解液1ml，三氯化鐵濃鹽酸溶液2毫升和苔黑酚乙醇溶液0.2毫升。放沸水浴中10分鐘。注意溶液是否變成墨綠色，說明核糖的存在。

3.

磷酸：取一支試管，加入水解液1ml和定磷試劑1ml。在水浴中加熱，觀察溶液是否變成藍(lán)色，說明磷酸是否存在。五、操作方法：酵母核糖核酸的組分鑒定實(shí)驗(yàn)六、酵母核糖核酸的分離及組分鑒定腦館砒鈔于亂弊業(yè)澎訓(xùn)嘉燼操妙訃冀鈾損嘻幻蛋屜蛻萄宰傅焰荊狗趨涼肇2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定(一）rna的提?。航湍阜?.5g(減半)加0.2％naoh45ml（減半）研磨均勻懸浮液移至錐形瓶（100ml）沸水浴30分離心15分（3000轉(zhuǎn)分）取上請液將上請液緩緩傾入30ml酸性乙醇溶液中，邊加邊攪拌，待核酸完全沉淀后離心取沉淀物（由于時間短，不做洗和抽，此沉淀物即為rna粗品，可做組分鑒定用）（二）rna的水解：按實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)做（但不稱rna粗品）（三）rna組分鑒定：按實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)做（注意加量和高溫水?。┎僮鞣椒ǎ蓛扇撕献?、量減半）化韶櫻侖奈伯斡管育暫唱爐侈紉棵蒸弓淖汐潤篡塘實(shí)橫苞碧郊牟訟姆勵府2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定離心機(jī)的使用方法1．接通電源2．平衡離心樣品3.加入樣品,關(guān)蓋4．設(shè)置時間5．調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速6.關(guān)機(jī),開蓋,取出樣品挪暫鞭殃莖奶垃抿盔納酵批染蛹擾魯勒形價柿錘醇違險拜鹽貍楔聲頒臥餌2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定2012年秋季期生化理論授課課件-6酵母核糖酸的分離及組分鑒定1．離心前必須仔細(xì)檢查轉(zhuǎn)頭各孔內(nèi)有無異物。2．離心管必須仔細(xì)平衡。3．機(jī)內(nèi)若不清潔，離心管要封口。4．必須慢啟動，然后加速。5．離心時不準(zhǔn)開蓋。6．不準(zhǔn)用手剎車。使用離心機(jī)的注意事項(xiàng)強(qiáng)別肌砰罕緝靖分爬畸劈憲五涯區(qū)侵超趟傍埂揣付落膛嗡啡捍鱗徘遲棟防2012年秋季期生化理論授