第7章-革蘭陽性球菌課件

獸醫(yī)微生物學獸醫(yī)微生物學1第7章革蘭陽性球菌第一節(jié)葡萄球菌屬第二節(jié)鏈球菌屬第三節(jié)腸球菌屬第四節(jié)蜜蜂球菌屬第7章革蘭陽性球菌第一節(jié)葡萄球菌屬2革蘭陽性球菌球菌種類很多，按革蘭染色特性分為革蘭陽性球菌和陰性球菌兩大類，獸醫(yī)臨床上重要的是革蘭陽性球菌，其中的葡萄球菌屬和鏈球菌屬的某些成員是人和動物的重要致病菌。革蘭陽性球菌球菌種類很多，按革蘭染色特性分為3第一節(jié)葡萄球菌屬一、屬的特征：

1、葡萄球菌分布廣泛:空氣、飼料、飲水、地面及物體表面。人及畜禽的皮膚、粘膜、腸道、呼吸道及乳腺中。2、致病性葡萄球菌常引起各種化膿性疾患、敗血癥或膿毒敗血癥。當污染食品時，可引起食物中毒。3、圓形，直徑0.5-1.5μm，排列成葡萄狀（如圖）；無芽胞、無鞭毛，有的可形成莢膜或粘液層。第一節(jié)葡萄球菌屬一、屬的特征：4第7章-革蘭陽性球菌課件54、需氧或兼性厭氧，可在普通培養(yǎng)基中生長，但不能在麥康凱培養(yǎng)基中生長。最適溫度35-40℃，最適pH為7.0-7.5。5、致病性菌株多能產(chǎn)生脂溶性的黃色或檸檬色，不著染培養(yǎng)基。4、需氧或兼性厭氧，可在普通培養(yǎng)基中生長，但不能在麥康凱培養(yǎng)66、分類（1）按產(chǎn)生色素顏色：金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和檸檬色葡萄球菌。（2）1974年葡萄球菌屬分：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。（3）《伯吉系統(tǒng)細菌學手冊》將本屬細菌分為37種，許多種內(nèi)還分亞種。常見的動物致病菌有金黃色葡萄球菌、豬葡萄球菌、中間葡萄球菌、偽中間葡萄球菌及海豚葡萄球菌。6、分類7二、金黃色葡萄球菌常見的致病菌多為金黃色葡萄球。1.培養(yǎng)及生化特性

在普通瓊脂平板形成濕潤、光滑、隆起的圓形菌落，直徑1-2mm，有時可達4-5mm。菌落顏色依菌株而異，初呈灰白色，繼而為金黃色。在血液瓊脂平板形成的菌落較大，產(chǎn)溶血素的菌株多為病原菌，在菌落周圍呈現(xiàn)明顯的β溶血。2.抗原及變異

葡萄球菌細胞壁上的抗原構造比較復雜，含有多糖及蛋白質(zhì)兩類抗原。二、金黃色葡萄球菌8多糖抗原

具有型特異性，可分為11個型，臨床分離多為5型和8型。蛋白抗原

人源菌株都含有葡萄球菌蛋白A(SPA)，來自動物源菌株則少見。SPA能與人、猴、豬、犬及幾乎所有哺乳動物的免疫球蛋白的Fc段結合，結合后的IgG仍能與相應抗原特異性反應。用于免疫學及診斷技術（協(xié)同凝集試驗）。SPA與IgG結合形成的復合物在機體內(nèi)具有生物學作用（趨化性、抵抗吞噬、損傷血小板等）。多糖抗原具有型特異性，可分為11個型，臨床分離多為5型和9第7章-革蘭陽性球菌課件103、抵抗力及藥物敏感性

在無芽孢菌中，葡萄球菌的抵抗力較強。在干燥的膿汁或血液中可存養(yǎng)2-3個月，80℃30min才能殺死。對龍膽紫、洗必泰、消毒凈、新潔爾滅、度米芬等敏感。對磺胺類、青霉素、金霉素、紅霉素、新霉素等抗生素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性。

4、致病性及毒力因子

金色葡萄球菌可產(chǎn)生多種毒素和酶，故致病性強。常引起化膿性疾?。▌?chuàng)傷感染、膿腫、乳腺炎、敗血癥、膿毒敗血癥等）及毒素性疾?。ū黄咸亚蚓廴镜氖澄锘蝻暳峡梢鹑嘶騽游锏氖澄镏卸拘约膊。?。3、抵抗力及藥物敏感性在無芽孢菌中，葡萄球菌的抵抗力較強11毒力因子：葡萄球菌蛋白A、莢膜、毒素及酶。

α毒素

α溶血素，與牛羊的壞疽性乳腺炎有關，它還導致白細胞等崩解。α毒素是不耐熱的蛋白質(zhì)（外毒素），對多種哺乳動物紅細胞有溶血作用，而從動物分離的菌株常見β溶血素。

作用原理：毒素分子插入紅細胞的細胞膜疏水區(qū)，形成微孔，造成紅細胞溶解，屬于穿孔毒素。

腸毒素

引致人類食物中毒，刺激嘔吐中樞，表現(xiàn)嘔吐、腹瀉。腸毒素是結構相似的一組蛋白質(zhì)，耐熱抗酸，能經(jīng)受100℃30min或胃蛋白酶的水解根據(jù)抗原性差異可以將其分為20多個血清型，A、B兩型是引起食物中毒的常見血清型，其次是D型。毒力因子：葡萄球菌蛋白A、莢膜、毒素及酶。12凝固酶

多數(shù)致病株能同時產(chǎn)生兩種凝固酶，一種分泌于菌體外（游離凝固酶）。另一種結合在菌體表面（結合凝固酶），它們能使含有抗凝劑的家兔或人的血漿凝固，稱為凝固酶。凝固酶耐熱，經(jīng)100℃30min或高壓滅菌僅降低少量活性。

作用：保護菌株，有助致病菌株抵御宿主體內(nèi)吞噬細胞和殺菌物質(zhì)的作用，同時也使感染局限化。檢測葡萄球菌的凝固酶是鑒別菌株的重要指標，致病株多數(shù)為凝固酶陽性。

另外還有耐熱核酸酶、溶纖維蛋白酶、透明質(zhì)酸酶，又稱為擴散因子。凝固酶多數(shù)致病株能同時產(chǎn)生兩種凝固酶，一種分泌于菌體外（135.微生物學診斷（1）涂片染色鏡檢

取膿汁、滲出液、乳汁、血液，中毒癥取剩余食物等。將病料涂片染色鏡檢。如發(fā)現(xiàn)有大量典型的葡萄球菌課初步診斷。（2）分離培養(yǎng)鑒定

將病料劃線接種于5％綿羊或兔血液瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18-24h，菌落金黃色，周圍呈溶血圈者多為致病菌株。進一步鑒定還要做凝固酶試驗、分解甘露醇試驗，陽性者多為致病菌。必要時可做動物試驗。

5.微生物學診斷14第二節(jié)鏈球菌屬第二節(jié)鏈球菌屬15

鏈球菌種類多、分布廣。有些可致人或動物的各種化膿性疾病、肺炎、乳腺炎、敗血癥等。一、分類

按溶血性分為α、β、γ3類。在鑒定鏈球菌的致病性方面有一定的意義。

α型溶血鏈球菌

在菌落周圍形成不透明的草綠色溶血環(huán)，紅細胞未完全溶解，血紅蛋白變成綠色。此菌致病力不強，多為條件性菌。β型溶血鏈球菌

菌落周圍形成完全透明的溶血環(huán)，紅細胞完全溶解。這類菌致病力強，常引起人及動物各種疾病。鏈球菌種類多、分布廣。有些可致人或動物的各種化膿16

γ型溶血鏈球菌

菌落周圍無溶血現(xiàn)象。一般為非致病菌。二、形態(tài)與染色

鏈球菌呈圓形或卵圓形，直徑小于2.0μm，常排列成鏈狀或成雙。肉湯內(nèi)對數(shù)生長期的鏈球菌常呈長鏈排列，革蘭氏陽性，多有莢膜。三、培養(yǎng)及生化特性

多為兼性厭氧菌，少數(shù)為厭氧菌。致病菌營養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基中生長不良，需添加血液、血清、葡萄糖等。在血液瓊脂平板上長成直徑0.1-1.0mm，灰白色，表面光滑，邊緣整齊的小菌落。多數(shù)致病菌株有溶血性。血清肉湯中初呈均勻渾濁，后呈顆粒狀沉淀，上清透明。（實驗課培養(yǎng)的大腸桿菌的菌液）γ型溶血鏈球菌菌落周圍無溶血現(xiàn)象。一般為非致病菌。17菌膜菌沉淀均勻渾濁對照菌膜菌沉淀均勻渾濁對照18四、致病性

致病性鏈球菌可產(chǎn)生多種毒素或酶，可致人及多種動物的很多疾病，化膿感染、肺炎、乳房炎等。溶血素

分為對氧敏感溶血素O(SLO)和對氧穩(wěn)定溶血素S(SLS)兩種，呈溶血性。致熱外毒素

舊名紅疹毒素，主要由A群鏈球菌產(chǎn)生，致人猩紅熱，小劑量皮內(nèi)注射家兔可引起局部紅疹，大劑量注射可致全身紅疹。其他

不同致病菌株，可產(chǎn)生鏈激酶（溶纖維蛋白酶），透明質(zhì)酸酶等，其性質(zhì)作用類葡菌。四、致病性致病性鏈球菌可產(chǎn)生多種毒素或酶，可致人及多種動19

細胞壁上的脂磷壁酸(LFA)與菌體吸附于宿主黏膜有關。其莢膜成分、M蛋白等具有抗吞噬作用。五、抵抗力

本屬細菌的抵抗力不強。對青霉素、磺胺類藥物敏感，易產(chǎn)生耐藥性。六、免疫性

鏈球菌的抗原結構比較復雜，機體感染后有多種抗體產(chǎn)生，已知抗M蛋白的抗體具有保護作用，M蛋白有多種抗原型，各型間缺乏有效的交叉保護。我國研制的豬、羊鏈球菌疫苗有一定的免疫效果。

細胞壁上的脂磷壁酸(LFA)與菌體吸附于宿主20七、微生物學診斷

病料（膿汁、乳汁、血液、組織）涂片染色鏡檢，見革蘭氏陽性、具莢膜、成對或鏈狀排列的球菌，可作初步診斷。確診需用血液瓊脂平板分離培養(yǎng)，觀察菌落、溶血等特征，并進行生理生化試驗。用群、型特異性血清作血清學試驗，對病原菌定群或定型。七、微生物學診斷病料（膿汁、乳汁、血液、組織）涂片染色鏡21溶血性鏈球菌溶血性鏈球菌22八、主要致病菌（一）無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌：三種鏈球菌是牛、山羊和綿羊的急性、慢性乳腺炎的病原菌之一，其中最常見的是無乳鏈球菌。形態(tài)及染色特性三者形態(tài)相似，直徑0.5-1.0μm。均無莢膜，革蘭陽性。無乳鏈球菌常呈長鏈停乳鏈球菌形成中等長度的鏈乳房鏈球菌的鏈較短，有時成對排列八、主要致病菌無乳鏈球菌常呈長鏈停乳鏈球菌形成中等長度的鏈乳23抵抗力及藥物敏感性對熱、干燥及消毒藥的抵抗力不強。對青霉素、紅霉素等抗生素及磺胺類等藥物均敏感。致病性及免疫性引致牛、山羊和綿羊的急性、慢性乳腺炎，其中最常見的是無乳鏈球菌。感染后，三種菌均不產(chǎn)生明顯的免疫，目前也無可靠的多價菌苗。微生物學診斷取少量乳汁或其離心沉淀物涂片、染色、鏡檢，如發(fā)現(xiàn)鏈球菌及大量的白細胞，可作出初步診斷。需通過生化實驗做進一步的鑒定。抵抗力及藥物敏感性對熱、干燥及消毒藥的抵抗力不強。對青霉24(二)豬鏈球菌：是豬鏈球菌病的重要致病菌，并可感染人而致死。1、血清型：按莢膜抗原的差異分為35個血清型，包括1－34和1/2，豬鏈球菌2型是其中毒力最強、最常見的一種，豬鏈球菌1型、7型及9型也可使豬發(fā)病死亡。2、致病性：表現(xiàn)敗血癥、腦膜炎、關節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、肺炎和突然死亡。豬鏈球菌2型在豬群中通常通過口鼻感染，在扁桃體中增殖，還可存在于母豬的子宮或陰道中，攜帶豬鏈球菌2型的豬對其它豬具有傳染性。(二)豬鏈球菌：是豬鏈球菌病的重要致病菌，并可感染人而致死。253、毒力因子

豬鏈球菌2型的溶菌酶釋放因子（Muramidase-releasedproteinMRP）、胞外因子（ExtracellularfactorEF）、莢膜多糖抗原（CapsularPolysaccharidebiosynthesislocuscps）和溶血素等是主要的毒力因子。其中，莢膜多糖還是豬鏈球菌的型特異性抗原，據(jù)此可將豬鏈球菌分為35個血清型。豬鏈球菌2型cps2J基因僅可以與2型與1/2血清型產(chǎn)生雜交。顯示cps2J基因為豬鏈球菌2型的特異性基因，可以作為鑒定豬2型鏈球菌的依據(jù)。3、毒力因子豬鏈球菌2型的溶菌酶釋放因子（Murami264、我國流行情況

我國于1991年在廣東省首次證實該病的存在；1998年和1999年夏季分別在江蘇部分地區(qū)豬群中爆發(fā)，并導致特定人群的25人感染，致死1人；2005年夏季，在四川省資陽、內(nèi)江等8地市21個縣市區(qū)爆發(fā)，致死豬只647頭，感染發(fā)病人數(shù)為204，其中致死38人。

4、我國流行情況我國于1991年在廣東省首次證實該病的存27第7章-革蘭陽性球菌課件284、微生物學診斷：（1）取樣：安全問題：a)

在標本采集過程中，注意使用一次性隔離服、手套、防護口罩等防護措施。b)

在標本采集過程中,嚴格采取防護措施，防止針頭等銳器刺傷。準備工作：a)

無菌、封閉性好的試管。b)

可以清楚標記且標記不易脫落的記號筆。c)

樣品采樣記錄表。d)

采集組織標本的無菌容器。e)

無菌的剪刀、鑷子和手術刀。f)

血平皿(或者使用血培養(yǎng)瓶)。4、微生物學診斷：29（2）樣品的處理：將采集的樣品接種于高葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)6h。取培養(yǎng)液1mL，12000r/min離心3min，去掉上清。用200μL滅菌雙蒸水充分重懸菌泥，100℃煮沸15min，再12000r/min離心5min，收集上清。上清即可以作為模板進行PCR擴增。（2）樣品的處理：將采集的樣品接種于高葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中，330（3）PCR：在1個PCR管中依次加入10×Buffer：2.5μL2mmol/LdNTP：5μLepf-1、epf-2：各0.2μLcps2J-1、cps2J-2：各0.3μLmrp-1、mrp-2：各0.3μLTaq酶0.3μL模板1μL補雙蒸水至25μL94℃預變性2min，94℃50s，53℃40s，72℃50s，運行30個循環(huán)，最后延伸8min。取5μLPCR產(chǎn)物，于1%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外燈下觀察。（3）PCR：在1個PCR管中依次加入31cps2J-230bpepf-570bpMrp-860bp瓊脂糖凝膠電泳結果cps2J-230bp瓊脂糖凝膠電泳結果32馬鏈球菌獸疫亞種（舊稱獸疫鏈球菌）：可致多種家畜的炎癥及敗血病，包括馬的創(chuàng)傷感染、敗血癥、子宮炎、流產(chǎn)、幼駒臍帶炎；牛乳腺炎、子宮炎；豬敗血癥、關節(jié)炎；羊敗血癥、心包炎、胸膜炎、肺炎；雞敗血癥等。

馬鏈球菌馬亞種（舊稱馬腺疫鏈球菌）：是引起馬腺疫的病原體。感染馬下頜淋巴結形成膿灶。

肺炎鏈球菌(又名肺炎球菌、肺炎雙球菌)：常引起人大葉性肺炎或腦膜炎，亦可致幼畜肺炎或敗血癥。馬鏈球菌獸疫亞種（舊稱獸疫鏈球菌）：可致多種家畜的炎33第三節(jié)腸球菌屬

腸球菌屬原先屬于鏈球菌屬的D群成員。鑒于二者16SrRNA序列的差異，1984年Schleifer提議將其獨立建屬，并于1994年獲得確認?，F(xiàn)歸屬于球菌綱，乳酸桿菌目，腸球菌科。除腸球菌屬外該科還包括奇異桿菌屬、蜜蜂球菌屬、四聯(lián)球菌屬及漫游球菌屬。第三節(jié)腸球菌屬腸球菌屬原先屬于鏈球菌屬的D群34形態(tài)及培養(yǎng)特性腸球菌為圓形或橢圓形、呈鏈狀排列的革蘭陽性球菌，老齡菌可呈革蘭陰性。無鞭毛、無芽孢，為需氧或兼性厭氧菌。對營養(yǎng)要求高，在血平板37℃培養(yǎng)18h，可形成灰白色、不透明、表面光滑、直徑0.5-1mm大小的圓型菌落，不同的菌株產(chǎn)生不同的溶血現(xiàn)象。致病性及致病機理家畜最常見的是本屬菌所致的尿道感染，雞則為心內(nèi)膜炎。致病機理不明，推測可能與抗生素的濫用導致菌群失調(diào)有關，腸球菌因對抗生素有較大抗性而成為機會致病菌。形態(tài)及培養(yǎng)特性腸球菌為圓形或橢圓形、呈鏈狀排列的35第四節(jié)蜜蜂球菌屬本屬菌屬于球菌科，僅包括蜂房蜜蜂球菌1個種，曾稱為蜂房鏈球菌，Baily經(jīng)系統(tǒng)鑒定后改為本名。第四節(jié)蜜蜂球菌屬本屬菌屬于球菌科，僅包括蜂房蜜蜂球36主要生物學特性披針形的球菌，多呈單個存在，有時排列成對或短鏈狀，革蘭陽性，但染色不穩(wěn)定，有時陰性。無莢膜，無芽孢、無運動性。微需氧或厭氧且需二氧化碳，在馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基上生長良好。培養(yǎng)24~48h，可形成珍珠白或半透明水滴樣、邊緣整齊、表面光滑、中心凸突的小菌落。主要生物學特性披針形的球菌，多呈單個存在，有時排37致病性是歐洲幼蟲腐臭病的原發(fā)病原。各品種各日齡的蜜蜂均易感，東方蜜蜂比西方蜜蜂易感，幼齡蜂比成年蜂更易感。消化道感染，潛伏期2~3d，1~2日齡幼蟲最易感，侵染中腸上皮，細菌隨糞便排至幼蟲巢房內(nèi)，成為重要的感染源。該菌致病機理不詳，酪胺是目前發(fā)現(xiàn)的唯一毒力因子，系細胞毒素，對4~5日齡蜜蜂幼蟲的致死量為0.3mg。致病性是歐洲幼蟲腐臭病的原發(fā)病原。各品種各日齡的38微生物學診斷應作細菌分離培養(yǎng)，所獲細菌再根據(jù)染色特性、形態(tài)和生化試驗進行鑒定，也可采用抗血清做玻片凝集試驗確診。PCR或套式PCR法可用于快速診斷。防控定期檢查幼蟲蜂房，并對養(yǎng)蜂工具等進行消毒處理。隔離病蜂，輕者用鏈霉素、土霉素等抗生素治療，重者焚燒患病蜂群以杜絕病害蔓延?？捎脺缁钜呙珙A防。微生物學診斷應作細菌分離培養(yǎng)，所獲細菌再根據(jù)染色特性、形39復習思考題1、金黃色葡萄球菌常致動物哪些疾病？2、鏈球菌各型的溶血表現(xiàn)及在血清肉湯中的生長特性如何？3、腸球菌屬的致病性如何？4、試述蜂房蜜蜂球菌的致病特點。復習思考題1、金黃色葡萄球菌常致動物哪些疾病？40獸醫(yī)微生物學獸醫(yī)微生物學41第7章革蘭陽性球菌第一節(jié)葡萄球菌屬第二節(jié)鏈球菌屬第三節(jié)腸球菌屬第四節(jié)蜜蜂球菌屬第7章革蘭陽性球菌第一節(jié)葡萄球菌屬42革蘭陽性球菌球菌種類很多，按革蘭染色特性分為革蘭陽性球菌和陰性球菌兩大類，獸醫(yī)臨床上重要的是革蘭陽性球菌，其中的葡萄球菌屬和鏈球菌屬的某些成員是人和動物的重要致病菌。革蘭陽性球菌球菌種類很多，按革蘭染色特性分為43第一節(jié)葡萄球菌屬一、屬的特征：

1、葡萄球菌分布廣泛:空氣、飼料、飲水、地面及物體表面。人及畜禽的皮膚、粘膜、腸道、呼吸道及乳腺中。2、致病性葡萄球菌常引起各種化膿性疾患、敗血癥或膿毒敗血癥。當污染食品時，可引起食物中毒。3、圓形，直徑0.5-1.5μm，排列成葡萄狀（如圖）；無芽胞、無鞭毛，有的可形成莢膜或粘液層。第一節(jié)葡萄球菌屬一、屬的特征：44第7章-革蘭陽性球菌課件454、需氧或兼性厭氧，可在普通培養(yǎng)基中生長，但不能在麥康凱培養(yǎng)基中生長。最適溫度35-40℃，最適pH為7.0-7.5。5、致病性菌株多能產(chǎn)生脂溶性的黃色或檸檬色，不著染培養(yǎng)基。4、需氧或兼性厭氧，可在普通培養(yǎng)基中生長，但不能在麥康凱培養(yǎng)466、分類（1）按產(chǎn)生色素顏色：金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和檸檬色葡萄球菌。（2）1974年葡萄球菌屬分：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。（3）《伯吉系統(tǒng)細菌學手冊》將本屬細菌分為37種，許多種內(nèi)還分亞種。常見的動物致病菌有金黃色葡萄球菌、豬葡萄球菌、中間葡萄球菌、偽中間葡萄球菌及海豚葡萄球菌。6、分類47二、金黃色葡萄球菌常見的致病菌多為金黃色葡萄球。1.培養(yǎng)及生化特性

在普通瓊脂平板形成濕潤、光滑、隆起的圓形菌落，直徑1-2mm，有時可達4-5mm。菌落顏色依菌株而異，初呈灰白色，繼而為金黃色。在血液瓊脂平板形成的菌落較大，產(chǎn)溶血素的菌株多為病原菌，在菌落周圍呈現(xiàn)明顯的β溶血。2.抗原及變異

葡萄球菌細胞壁上的抗原構造比較復雜，含有多糖及蛋白質(zhì)兩類抗原。二、金黃色葡萄球菌48多糖抗原

具有型特異性，可分為11個型，臨床分離多為5型和8型。蛋白抗原

人源菌株都含有葡萄球菌蛋白A(SPA)，來自動物源菌株則少見。SPA能與人、猴、豬、犬及幾乎所有哺乳動物的免疫球蛋白的Fc段結合，結合后的IgG仍能與相應抗原特異性反應。用于免疫學及診斷技術（協(xié)同凝集試驗）。SPA與IgG結合形成的復合物在機體內(nèi)具有生物學作用（趨化性、抵抗吞噬、損傷血小板等）。多糖抗原具有型特異性，可分為11個型，臨床分離多為5型和49第7章-革蘭陽性球菌課件503、抵抗力及藥物敏感性

在無芽孢菌中，葡萄球菌的抵抗力較強。在干燥的膿汁或血液中可存養(yǎng)2-3個月，80℃30min才能殺死。對龍膽紫、洗必泰、消毒凈、新潔爾滅、度米芬等敏感。對磺胺類、青霉素、金霉素、紅霉素、新霉素等抗生素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性。

4、致病性及毒力因子

金色葡萄球菌可產(chǎn)生多種毒素和酶，故致病性強。常引起化膿性疾?。▌?chuàng)傷感染、膿腫、乳腺炎、敗血癥、膿毒敗血癥等）及毒素性疾?。ū黄咸亚蚓廴镜氖澄锘蝻暳峡梢鹑嘶騽游锏氖澄镏卸拘约膊。?。3、抵抗力及藥物敏感性在無芽孢菌中，葡萄球菌的抵抗力較強51毒力因子：葡萄球菌蛋白A、莢膜、毒素及酶。

α毒素

α溶血素，與牛羊的壞疽性乳腺炎有關，它還導致白細胞等崩解。α毒素是不耐熱的蛋白質(zhì)（外毒素），對多種哺乳動物紅細胞有溶血作用，而從動物分離的菌株常見β溶血素。

作用原理：毒素分子插入紅細胞的細胞膜疏水區(qū)，形成微孔，造成紅細胞溶解，屬于穿孔毒素。

腸毒素

引致人類食物中毒，刺激嘔吐中樞，表現(xiàn)嘔吐、腹瀉。腸毒素是結構相似的一組蛋白質(zhì)，耐熱抗酸，能經(jīng)受100℃30min或胃蛋白酶的水解根據(jù)抗原性差異可以將其分為20多個血清型，A、B兩型是引起食物中毒的常見血清型，其次是D型。毒力因子：葡萄球菌蛋白A、莢膜、毒素及酶。52凝固酶

多數(shù)致病株能同時產(chǎn)生兩種凝固酶，一種分泌于菌體外（游離凝固酶）。另一種結合在菌體表面（結合凝固酶），它們能使含有抗凝劑的家兔或人的血漿凝固，稱為凝固酶。凝固酶耐熱，經(jīng)100℃30min或高壓滅菌僅降低少量活性。

作用：保護菌株，有助致病菌株抵御宿主體內(nèi)吞噬細胞和殺菌物質(zhì)的作用，同時也使感染局限化。檢測葡萄球菌的凝固酶是鑒別菌株的重要指標，致病株多數(shù)為凝固酶陽性。

另外還有耐熱核酸酶、溶纖維蛋白酶、透明質(zhì)酸酶，又稱為擴散因子。凝固酶多數(shù)致病株能同時產(chǎn)生兩種凝固酶，一種分泌于菌體外（535.微生物學診斷（1）涂片染色鏡檢

取膿汁、滲出液、乳汁、血液，中毒癥取剩余食物等。將病料涂片染色鏡檢。如發(fā)現(xiàn)有大量典型的葡萄球菌課初步診斷。（2）分離培養(yǎng)鑒定

將病料劃線接種于5％綿羊或兔血液瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18-24h，菌落金黃色，周圍呈溶血圈者多為致病菌株。進一步鑒定還要做凝固酶試驗、分解甘露醇試驗，陽性者多為致病菌。必要時可做動物試驗。

5.微生物學診斷54第二節(jié)鏈球菌屬第二節(jié)鏈球菌屬55

鏈球菌種類多、分布廣。有些可致人或動物的各種化膿性疾病、肺炎、乳腺炎、敗血癥等。一、分類

按溶血性分為α、β、γ3類。在鑒定鏈球菌的致病性方面有一定的意義。

α型溶血鏈球菌

在菌落周圍形成不透明的草綠色溶血環(huán)，紅細胞未完全溶解，血紅蛋白變成綠色。此菌致病力不強，多為條件性菌。β型溶血鏈球菌

菌落周圍形成完全透明的溶血環(huán)，紅細胞完全溶解。這類菌致病力強，常引起人及動物各種疾病。鏈球菌種類多、分布廣。有些可致人或動物的各種化膿56

γ型溶血鏈球菌

菌落周圍無溶血現(xiàn)象。一般為非致病菌。二、形態(tài)與染色

鏈球菌呈圓形或卵圓形，直徑小于2.0μm，常排列成鏈狀或成雙。肉湯內(nèi)對數(shù)生長期的鏈球菌常呈長鏈排列，革蘭氏陽性，多有莢膜。三、培養(yǎng)及生化特性

多為兼性厭氧菌，少數(shù)為厭氧菌。致病菌營養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基中生長不良，需添加血液、血清、葡萄糖等。在血液瓊脂平板上長成直徑0.1-1.0mm，灰白色，表面光滑，邊緣整齊的小菌落。多數(shù)致病菌株有溶血性。血清肉湯中初呈均勻渾濁，后呈顆粒狀沉淀，上清透明。（實驗課培養(yǎng)的大腸桿菌的菌液）γ型溶血鏈球菌菌落周圍無溶血現(xiàn)象。一般為非致病菌。57菌膜菌沉淀均勻渾濁對照菌膜菌沉淀均勻渾濁對照58四、致病性

致病性鏈球菌可產(chǎn)生多種毒素或酶，可致人及多種動物的很多疾病，化膿感染、肺炎、乳房炎等。溶血素

分為對氧敏感溶血素O(SLO)和對氧穩(wěn)定溶血素S(SLS)兩種，呈溶血性。致熱外毒素

舊名紅疹毒素，主要由A群鏈球菌產(chǎn)生，致人猩紅熱，小劑量皮內(nèi)注射家兔可引起局部紅疹，大劑量注射可致全身紅疹。其他

不同致病菌株，可產(chǎn)生鏈激酶（溶纖維蛋白酶），透明質(zhì)酸酶等，其性質(zhì)作用類葡菌。四、致病性致病性鏈球菌可產(chǎn)生多種毒素或酶，可致人及多種動59

細胞壁上的脂磷壁酸(LFA)與菌體吸附于宿主黏膜有關。其莢膜成分、M蛋白等具有抗吞噬作用。五、抵抗力

本屬細菌的抵抗力不強。對青霉素、磺胺類藥物敏感，易產(chǎn)生耐藥性。六、免疫性

鏈球菌的抗原結構比較復雜，機體感染后有多種抗體產(chǎn)生，已知抗M蛋白的抗體具有保護作用，M蛋白有多種抗原型，各型間缺乏有效的交叉保護。我國研制的豬、羊鏈球菌疫苗有一定的免疫效果。

細胞壁上的脂磷壁酸(LFA)與菌體吸附于宿主60七、微生物學診斷

病料（膿汁、乳汁、血液、組織）涂片染色鏡檢，見革蘭氏陽性、具莢膜、成對或鏈狀排列的球菌，可作初步診斷。確診需用血液瓊脂平板分離培養(yǎng)，觀察菌落、溶血等特征，并進行生理生化試驗。用群、型特異性血清作血清學試驗，對病原菌定群或定型。七、微生物學診斷病料（膿汁、乳汁、血液、組織）涂片染色鏡61溶血性鏈球菌溶血性鏈球菌62八、主要致病菌（一）無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌：三種鏈球菌是牛、山羊和綿羊的急性、慢性乳腺炎的病原菌之一，其中最常見的是無乳鏈球菌。形態(tài)及染色特性三者形態(tài)相似，直徑0.5-1.0μm。均無莢膜，革蘭陽性。無乳鏈球菌常呈長鏈停乳鏈球菌形成中等長度的鏈乳房鏈球菌的鏈較短，有時成對排列八、主要致病菌無乳鏈球菌常呈長鏈停乳鏈球菌形成中等長度的鏈乳63抵抗力及藥物敏感性對熱、干燥及消毒藥的抵抗力不強。對青霉素、紅霉素等抗生素及磺胺類等藥物均敏感。致病性及免疫性引致牛、山羊和綿羊的急性、慢性乳腺炎，其中最常見的是無乳鏈球菌。感染后，三種菌均不產(chǎn)生明顯的免疫，目前也無可靠的多價菌苗。微生物學診斷取少量乳汁或其離心沉淀物涂片、染色、鏡檢，如發(fā)現(xiàn)鏈球菌及大量的白細胞，可作出初步診斷。需通過生化實驗做進一步的鑒定。抵抗力及藥物敏感性對熱、干燥及消毒藥的抵抗力不強。對青霉64(二)豬鏈球菌：是豬鏈球菌病的重要致病菌，并可感染人而致死。1、血清型：按莢膜抗原的差異分為35個血清型，包括1－34和1/2，豬鏈球菌2型是其中毒力最強、最常見的一種，豬鏈球菌1型、7型及9型也可使豬發(fā)病死亡。2、致病性：表現(xiàn)敗血癥、腦膜炎、關節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、肺炎和突然死亡。豬鏈球菌2型在豬群中通常通過口鼻感染，在扁桃體中增殖，還可存在于母豬的子宮或陰道中，攜帶豬鏈球菌2型的豬對其它豬具有傳染性。(二)豬鏈球菌：是豬鏈球菌病的重要致病菌，并可感染人而致死。653、毒力因子

豬鏈球菌2型的溶菌酶釋放因子（Muramidase-releasedproteinMRP）、胞外因子（ExtracellularfactorEF）、莢膜多糖抗原（CapsularPolysaccharidebiosynthesislocuscps）和溶血素等是主要的毒力因子。其中，莢膜多糖還是豬鏈球菌的型特異性抗原，據(jù)此可將豬鏈球菌分為35個血清型。豬鏈球菌2型cps2J基因僅可以與2型與1/2血清型產(chǎn)生雜交。顯示cps2J基因為豬鏈球菌2型的特異性基因，可以作為鑒定豬2型鏈球菌的依據(jù)。3、毒力因子豬鏈球菌2型的溶菌酶釋放因子（Murami664、我國流行情況

我國于1991年在廣東省首次證實該病的存在；1998年和1999年夏季分別在江蘇部分地區(qū)豬群中爆發(fā)，并導致特定人群的25人感染，致死1人；2005年夏季，在四川省資陽、內(nèi)江等8地市21個縣市區(qū)爆發(fā)，致死豬只647頭，感染發(fā)病人數(shù)為204，其中致死38人。

4、我國流行情況我國于1991年在廣東省首次證實該病的存67第7章-革蘭陽性球菌課件684、微生物學診斷：（1）取樣：安全問題：a)

在標本采集過程中，注意使用一次性隔離服、手套、防護口罩等防護措施。b)

在標本采集過程中,嚴格采取防護措施，防止針頭等銳器刺傷。準備工作：a)

無菌、封閉性好的試管。b)

可以清楚標記且標記不易脫落的記號筆。c)

樣品采樣記錄表。d)

采集組織標本的無菌容器。e)

無菌的剪刀、鑷子和手術刀。f)

血平皿(或者使用血培養(yǎng)瓶)。4、微生物學診斷：69（2）樣品的處理：將采集的樣品接種于高葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)6h。取培養(yǎng)液1mL，12000r/min離心3min，去掉上清。用200μL滅菌雙蒸水充分重懸菌泥，100℃煮沸15min，再12000r/min離心5min，收集上清。上清即可以作為模板進行PCR擴增。（2）樣品的處理：將采集的樣品接種于高葡萄糖肉湯培養(yǎng)基中，370（3）PCR：在1個PCR管中依次加入10×Buffer：2.5μL2mmol/LdNTP：5μLepf-1、epf-2：各0.2μLcps2J-1、cps2J-2：各0.3μLmrp-1、mrp-2：各0.3μLTaq酶0.3μL模板1μL補雙蒸水至25μL94℃預變性2min，94℃50s，53℃40s，72℃50s，運行30個循環(huán)，最后延伸8min。取5μLPCR產(chǎn)物，于1%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外燈下觀察。（3）PCR：在1個PCR管中依次加入71cps2J-230bpepf-570bpMrp-860bp瓊脂糖凝膠電泳結果cps2J-230bp瓊脂糖凝膠電泳結果72馬鏈球菌獸疫亞種（舊稱獸疫鏈球菌）：可致多種家畜的炎癥及敗血病，包括馬的創(chuàng)傷感染、敗血癥、子宮炎、流產(chǎn)、幼駒臍帶炎；牛乳腺炎、子宮炎；