臨床輸血與檢驗(yàn)課件

臨床輸血與檢驗(yàn)

臨床輸血與檢驗(yàn)臨床輸血與檢驗(yàn)

輸血與血型輸血前的檢查交叉配血的方法和有關(guān)問(wèn)題自身免疫性溶血性貧血產(chǎn)前的免疫血清學(xué)檢查血小板血型與輸血血小板輸血展望臨床輸血與檢驗(yàn)輸血與血型臨床輸血與檢驗(yàn)輸血與血型臨床輸血與檢驗(yàn)輸血與血型臨床輸血與檢驗(yàn)

最早的輸血試驗(yàn)是英國(guó)人羅維爾在1665年進(jìn)行的。他把一條失血過(guò)多瀕于死亡的狗的靜脈與另一條健康狗的靜脈用鵝毛管連接起來(lái)。失血的狗逐漸從瀕死狀態(tài)恢復(fù)過(guò)來(lái)。1667年，法國(guó)國(guó)王的御醫(yī)丹尼斯首先進(jìn)行了動(dòng)物血液輸入人體的試驗(yàn)。他將400毫升羊血注入一個(gè)失血多病的青年人的靜脈，這個(gè)青年人竟奇跡般地活了下來(lái)。此后他又進(jìn)行了多次輸血試驗(yàn)，也安然無(wú)恙。但他在1668年的一次試驗(yàn)中，卻以失敗而告終。他給一名患者輸動(dòng)物血，第一次輸血后病人病情有所好轉(zhuǎn)；第二次輸血后，病人出現(xiàn)發(fā)熱、腹痛、大汗、血尿等癥狀，第三次輸血后病人死亡。死者妻子告丹尼斯犯有殺人罪，為此，法國(guó)議會(huì)特別制定法律：不許再進(jìn)行輸血。1825年，英國(guó)的布倫德?tīng)栣t(yī)生從一個(gè)人直接輸血給另一個(gè)人首次成功，但是這一成功具有很大的偶然性。據(jù)醫(yī)書(shū)記載：19世紀(jì)末葉有346人接受過(guò)輸血治療，另有129人被試圖輸入動(dòng)物的血液。當(dāng)時(shí)人們還沒(méi)有認(rèn)識(shí)到血型的不同，因輸血發(fā)生的事故時(shí)有發(fā)生，因此，輸血是要冒極大風(fēng)險(xiǎn)的。輸血的變遷臨床輸血與檢驗(yàn)輸血的變遷臨床輸血與檢驗(yàn)蘭德斯坦納

（K.Landsteiner)

1868年生于奧地利首都維也納。維也納大學(xué)醫(yī)學(xué)院畢業(yè)后，繼續(xù)留校，學(xué)習(xí)化學(xué)。1900年發(fā)現(xiàn)A、B、O3種血型。1919年在荷蘭巴庫(kù)的一所醫(yī)院工作。1922年赴美，受聘于洛克菲勒研究所。1930年獲諾貝爾生理學(xué)醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。1943年逝世。臨床輸血與檢驗(yàn)蘭德斯坦納 （K.Landsteiner) 蘭德斯坦納的貢獻(xiàn)

卡爾·蘭德斯坦納是奧地利著名醫(yī)學(xué)家，他因發(fā)現(xiàn)了Ａ、Ｂ、Ｏ血型而于1930年獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)及生理學(xué)獎(jiǎng)。

1900年，蘭德斯坦納在維也納病理研究所工作時(shí)，發(fā)現(xiàn)一個(gè)人的血清有時(shí)會(huì)與另一個(gè)人的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。隨后，蘭德斯坦納進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)人的血液按紅細(xì)胞與血清中的不同抗原和抗體，可分為不同類(lèi)型，他以Ａ、Ｂ、Ｏ三個(gè)字母來(lái)代表他發(fā)現(xiàn)的三種不同類(lèi)型的血液。不同血型的血液混合在一起，就會(huì)發(fā)生凝集、溶血現(xiàn)象。

1902年，蘭德斯坦納的兩名學(xué)生把實(shí)驗(yàn)范圍擴(kuò)大到155人，又發(fā)現(xiàn)了較為稀少的ＡＢ型血。1927年，國(guó)際上正式采納了蘭德斯坦納原定的字母命名，確定血型有Ａ、Ｂ、Ｏ、ＡＢ四種類(lèi)型。至此，現(xiàn)代血型系統(tǒng)正式確立。

蘭德斯坦納在認(rèn)識(shí)人類(lèi)血型方面的杰出研究成果，不僅為安全輸血和治療新生兒溶血癥提供了科學(xué)的理論基礎(chǔ)，而且對(duì)免疫學(xué)、遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)的發(fā)展都帶來(lái)了深遠(yuǎn)影響。臨床輸血與檢驗(yàn)蘭德斯坦納的貢獻(xiàn)

卡爾·蘭德斯坦納是奧地利著名醫(yī)學(xué)家ABO血型的遺傳關(guān)系父母血型的配合子女可能的血型父母血型的配合子女可能的血型O×O

A×A

O×A

B×B

O×BO

O，A

O，A

O，B

O，BA×B

O×AB

A×AB

B×AB

AB×ABO，A，B，AB

A，B，

A，B，AB

A，B，AB

A，B，AB臨床輸血與檢驗(yàn)ABO血型的遺傳關(guān)系父母血型的配合子女可能的血型父母血型的配

Rh是恒河猴（RhesusMacacus）外文名稱(chēng)的頭兩個(gè)字母。蘭德斯坦納等科學(xué)家在1940年做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)恒河猴和多數(shù)人體內(nèi)的紅細(xì)胞上存在Rh血型的抗原物質(zhì)，故而命名的。凡是人體血液紅細(xì)胞上沒(méi)有Rh抗原（又稱(chēng)D抗原）的，稱(chēng)為Rh陰性。這樣就使已發(fā)現(xiàn)的紅細(xì)胞A、B、O及AB四種主要血型的人，又都分別被劃分為Rh陽(yáng)性和陰性?xún)煞N。隨著對(duì)Rh血型的不斷研究，認(rèn)為Rh血型系統(tǒng)可能是紅細(xì)胞血型中最為復(fù)雜的一個(gè)血型系。Rh血型的發(fā)現(xiàn)，對(duì)更加科學(xué)地指導(dǎo)輸血工作和進(jìn)一步提高新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)診斷和維護(hù)母嬰健康，都有非常重要的作用。根據(jù)有關(guān)資料介紹，Rh陽(yáng)性血型在我國(guó)漢族及大多數(shù)民族人中約占99.7%，個(gè)別少數(shù)民族約為90%。在國(guó)外的一些民族中，Rh陽(yáng)性血型的人約為85%，其中在歐美白種人鐘，Rh陰性血型人約占15%。臨床輸血與檢驗(yàn)Rh是恒河猴（RhesusMacacus）外文名稱(chēng)輸血前的檢查臨床輸血與檢驗(yàn)輸血前的檢查臨床輸血與檢驗(yàn)輸血前的檢查確認(rèn)受血者身份和血樣本查受血者以前血標(biāo)本的試驗(yàn)記錄對(duì)受血者作ABO和Rh定型對(duì)受血者進(jìn)行抗體篩選和鑒定選擇適宜的血液用受血者血標(biāo)本與獻(xiàn)血者血標(biāo)本做交叉臨床輸血與檢驗(yàn)輸血前的檢查確認(rèn)受血者身份和血樣本臨床輸血與檢驗(yàn)最好是血清標(biāo)本要新鮮不能溶血（如溶血?jiǎng)t要做對(duì)照）一支抗凝管另一支不抗凝抗體檢測(cè)對(duì)血標(biāo)本的要求臨床輸血與檢驗(yàn)最好是血清抗體檢測(cè)對(duì)血標(biāo)本的要求臨床輸血與檢驗(yàn)抗體檢測(cè)的目的對(duì)獻(xiàn)血者的檢查：避免抗體對(duì)受血者的被動(dòng)轉(zhuǎn)移對(duì)受血者的檢查：避免抗體與供血者的紅細(xì)胞結(jié)合，出現(xiàn)反應(yīng)對(duì)孕產(chǎn)婦的檢查：避免新生兒溶血病的發(fā)生，避免如輸血時(shí)抗體與供血者的紅細(xì)胞結(jié)合，出現(xiàn)反應(yīng)臨床輸血與檢驗(yàn)抗體檢測(cè)的目的對(duì)獻(xiàn)血者的檢查：避免抗體對(duì)受血者的被動(dòng)轉(zhuǎn)移臨床臨床輸血與檢驗(yàn)臨床輸血與檢驗(yàn)受血者與獻(xiàn)血者血標(biāo)本交叉后標(biāo)本的保留時(shí)間不能馬上丟棄在2-6℃至少保留7天如有不良反應(yīng)需進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)臨床輸血與檢驗(yàn)受血者與獻(xiàn)血者血標(biāo)本交叉后標(biāo)本的保留時(shí)間不能馬上丟棄臨床輸血對(duì)患者配血標(biāo)本的要求新近采集的特殊情況下或患者血管條件很差也不能過(guò)三天可以是血漿也可以是血清臨床輸血與檢驗(yàn)對(duì)患者配血標(biāo)本的要求新近采集的臨床輸血與檢驗(yàn)ABO血型一定要做正反定型兩種定型結(jié)果可相互驗(yàn)證防止標(biāo)準(zhǔn)血清變質(zhì)防止類(lèi)B現(xiàn)象或紅細(xì)胞多凝現(xiàn)象或全凝現(xiàn)象對(duì)血型檢查造成錯(cuò)誤防止ABO亞型漏檢發(fā)現(xiàn)和糾正血型錯(cuò)誤臨床輸血與檢驗(yàn)ABO血型一定要做正反定型兩種定型結(jié)果可相互驗(yàn)證臨床輸血與檢ABO正反定型不一致的人為因素試劑問(wèn)題操作中加錯(cuò)樣本或試劑離心不足或過(guò)度細(xì)胞比例不當(dāng)結(jié)果判斷錯(cuò)誤臨床輸血與檢驗(yàn)ABO正反定型不一致的人為因素試劑問(wèn)題臨床輸血與檢驗(yàn)ABO正反定型不一致的

客觀(guān)因素抗原減弱產(chǎn)生類(lèi)B物質(zhì)或紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象抗體效價(jià)低有不規(guī)則抗體存在臨床輸血與檢驗(yàn)ABO正反定型不一致的

客觀(guān)因素抗原減弱臨床輸血與檢驗(yàn)交叉配血的方法和有關(guān)問(wèn)題臨床輸血與檢驗(yàn)交叉配血的方法和有關(guān)問(wèn)題臨床輸血與檢驗(yàn)交叉配血的方法和有關(guān)問(wèn)題鹽水配血法酶配血法促凝劑配血法凝聚胺配血法抗人球蛋白法微柱凝膠配血法臨床輸血與檢驗(yàn)交叉配血的方法和有關(guān)問(wèn)題鹽水配血法臨床輸血與檢驗(yàn)交叉配血不合時(shí)的分析主側(cè)不合時(shí)的分析1、患者血型是否正確2、患者是否有冷抗體存在3、患者是否有不規(guī)則抗體的存在4、患者是否有自身抗體存在5、標(biāo)本是否有細(xì)菌污染6、試管是否不清潔臨床輸血與檢驗(yàn)交叉配血不合時(shí)的分析主側(cè)不合時(shí)的分析臨床輸血與檢驗(yàn)交叉配血不合時(shí)的分析次側(cè)不合時(shí)的分析1、供者血型是否正確2、供者是否有冷抗體存在3、供者是否有不規(guī)則抗體的存在4、供者是否有自身抗體存在5、標(biāo)本是否有細(xì)菌污染6、試管是否不清潔臨床輸血與檢驗(yàn)交叉配血不合時(shí)的分析次側(cè)不合時(shí)的分析臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于不規(guī)則抗體（單一抗體或復(fù)合抗體）的問(wèn)題抗體的形成幾乎總是通過(guò)輸血或妊娠，接觸有這種抗原的紅細(xì)胞后免疫產(chǎn)生的。根據(jù)人體免疫的初級(jí)應(yīng)答及二級(jí)應(yīng)答反應(yīng)的原理，一個(gè)個(gè)體第一次接觸外來(lái)抗原后，典型的應(yīng)答方式是經(jīng)過(guò)幾天的潛伏期，出現(xiàn)特異性抗體，逐漸升高，約在兩周左右達(dá)到高峰，保持不同的時(shí)期后逐漸下降，如不再給予抗原刺激，以后終于測(cè)不出抗體。臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于不規(guī)則抗體（單一抗體或復(fù)合抗體）的問(wèn)題抗體的形成幾乎總是關(guān)于不規(guī)則抗體（單一抗體或復(fù)合抗體）的問(wèn)題初級(jí)應(yīng)答幾天或幾年后再接受同樣的抗原刺激，常誘發(fā)二級(jí)應(yīng)答（記憶應(yīng)答），再一次刺激將增強(qiáng)和加速免疫應(yīng)答，血清中的抗體含量2～3天就開(kāi)始升高，大約10天左右達(dá)到高峰。二級(jí)應(yīng)答階段的抗體以IgG為主。臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于不規(guī)則抗體（單一抗體或復(fù)合抗體）的問(wèn)題初級(jí)應(yīng)答幾天或幾年關(guān)于自身抗體及冷抗體的問(wèn)題大量臨床和實(shí)驗(yàn)研究的資料表明，自身免疫病的發(fā)生與病毒感染有密切關(guān)系。病毒感染可改變機(jī)體自身紅細(xì)胞的抗原性，或作為多克隆激活劑可刺激B細(xì)胞分裂增殖，并發(fā)展為漿細(xì)胞，均可導(dǎo)致自身抗體的產(chǎn)生。另外病毒感染可直接損害免疫系統(tǒng)，促進(jìn)自身免疫的發(fā)生和發(fā)展。冷凝集素綜合征（CAS）也稱(chēng)冷血凝素疾?。–HD），是伴有冷反應(yīng)性自身抗體的自身免疫性溶血性貧血(AIHA)的最常見(jiàn)的一種類(lèi)型，約占免疫性溶血性貧血的16~32%。也有資料統(tǒng)計(jì)占免疫性溶血性貧血的16~25%。臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于自身抗體及冷抗體的問(wèn)題大量臨床和實(shí)驗(yàn)研究的資料表明，自身關(guān)于自身抗體及冷抗體的問(wèn)題它的發(fā)生可能是急性的或慢性的。急性的AIHA，一時(shí)性的冷抗體綜合征常和肺炎支原體感染有關(guān)，在少數(shù)情況下和傳染性單核細(xì)胞增多癥有關(guān)。慢性冷凝集素綜合征的病人常常是老年人，有輕度或中等度的慢性溶血性貧血。天氣冷時(shí)常發(fā)生雷諾氏現(xiàn)象和血紅蛋白尿。冷反應(yīng)性自身抗體的自身免疫性溶血性貧血的溶血原因是：當(dāng)外周循環(huán)的溫度低于32℃時(shí)，IgM冷自身凝集素和病人的紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)。IgM抗體及其抗原的反應(yīng)使補(bǔ)體致敏紅細(xì)胞，特別是C3和C4成分。臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于自身抗體及冷抗體的問(wèn)題它的發(fā)生可能是急性的或慢性的。急性關(guān)于自身抗體及冷抗體的問(wèn)題當(dāng)細(xì)胞回到積蓄循環(huán)較溫暖的中央部分時(shí)，IgM冷抗體從細(xì)胞表面上放散出來(lái)，而將補(bǔ)體致敏在紅細(xì)胞上,這樣溶血會(huì)很快發(fā)生。在循環(huán)紅細(xì)胞上出現(xiàn)的補(bǔ)體成分是C3d，往往有些是C4d。因此補(bǔ)體是紅細(xì)胞上唯一要測(cè)定的球蛋白。IgM冷自身凝集素的效價(jià),在4℃時(shí)測(cè)定時(shí),往往在1000以上,常波動(dòng)在2000~64000之間,但1000000以上者也有報(bào)道。臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于自身抗體及冷抗體的問(wèn)題當(dāng)細(xì)胞回到積蓄循環(huán)較溫暖的中央部分關(guān)于自身抗體及冷抗體的問(wèn)題上述效價(jià)在64至16348間。一般情況下，有冷凝集素綜合征的病人很少需要輸血。病人避免冷的溫度，往往可以防止溶血。如果需要輸血，應(yīng)該用降低冷自身抗體作用，增強(qiáng)同種抗體的方法進(jìn)行配血，血液加溫輸注。而自身抗體輸血時(shí)采取的方法則是用多個(gè)供血者同時(shí)與患者交叉，取相對(duì)凝聚較弱的給予洗滌后輸注。

臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于自身抗體及冷抗體的問(wèn)題上述效價(jià)在64至16348間。一般關(guān)于藥物引起的自身抗體的問(wèn)題藥物性溶血性貧血按發(fā)病機(jī)制可分藥物氧化性溶血性貧血（DOHA）和藥物免疫性溶血性貧血（DIHA），DOHA主要常見(jiàn)于遺傳性紅細(xì)胞酶缺陷和血紅蛋白病人，DIHA一般發(fā)生相對(duì)較緩，貧血癥狀輕，但奎寧丁、福阿亭或非那西丁引起的可較重，DIHA可分自身抗體型（又稱(chēng)甲基多巴型），使用甲基多巴誘發(fā)體內(nèi)產(chǎn)生自身的紅細(xì)胞抗體，DAT陽(yáng)性較多；藥物性吸附性（也叫半抗原型或青霉素型）：青霉素大量使用時(shí)，作為半抗原與正常紅細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗藥物－紅細(xì)胞結(jié)合物的抗體，不僅是DAT陽(yáng)性，導(dǎo)致溶血。臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于藥物引起的自身抗體的問(wèn)題藥物性溶血關(guān)于藥物引起的自身抗體的問(wèn)題蛋白非免疫吸附性（也叫先鋒霉素型或非特異型）先鋒霉素能與紅細(xì)胞膜結(jié)合，使膜的抗原發(fā)性改變，膜變異的紅細(xì)胞就能非免疫性吸附蛋白質(zhì)；免疫復(fù)合物型（也叫福阿亭型），此類(lèi)藥物可與蛋白載體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物體，非特異性吸附紅細(xì)胞表面，引起免疫反應(yīng)，產(chǎn)生IgM型抗體（少數(shù)IgG），吸附免疫復(fù)合物的紅細(xì)胞并結(jié)合補(bǔ)體，導(dǎo)致血管內(nèi)溶血，紅細(xì)胞表面有補(bǔ)體，故用單價(jià)的Ｃ３做DAT可呈陽(yáng)性；混合型，同一種藥物在同一病人可同時(shí)的多種溶血機(jī)制。輸血方法同自身抗體。臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于藥物引起的自身抗體的問(wèn)題蛋白非免疫吸附性（也叫先鋒霉素型關(guān)于細(xì)菌污染標(biāo)本及器具不干凈的問(wèn)題貯存于玻璃瓶中的鹽水可能含有從容器脫落下來(lái)的膠體硅，這種物質(zhì)能引起假陽(yáng)性。金屬容器貯存的鹽水，可能含有金屬離子，這些離子能參與蛋白質(zhì)和紅細(xì)胞表面非特異性結(jié)合，引起假陽(yáng)性。洗滌不干凈的玻璃器具，可能被灰塵、清潔劑或其它引起紅細(xì)胞不規(guī)則聚集的材料所污染，引起假陽(yáng)性。受細(xì)菌污染的貯存標(biāo)本，T激活后的細(xì)胞可以與存在于抗人球蛋白血清中的抗T起反應(yīng)，引起假陽(yáng)性。臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于細(xì)菌污染標(biāo)本及器具不干凈的問(wèn)題貯存于玻璃瓶中的鹽水可能含關(guān)于方法學(xué)的問(wèn)題目前各醫(yī)院交叉配血所使用的方法多為凝聚胺法，該方法分致敏、促凝和再中和三步進(jìn)行。Polybrene法的實(shí)驗(yàn)原理是凝聚胺（Polybrene）是帶有正電荷的大分子物質(zhì)，能夠中和紅細(xì)胞膜唾液酸組成的負(fù)電荷，減少細(xì)胞間靜電斥力，使細(xì)胞間距縮短，而又不致引起紅細(xì)胞間的非特異凝集。臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于方法學(xué)的問(wèn)題目前各醫(yī)院交叉配血所使用的方法多為凝聚胺法，關(guān)于方法學(xué)的問(wèn)題在生理鹽水介質(zhì)中長(zhǎng)度較短的IgG抗體不能造成抗體可在細(xì)胞間搭成復(fù)橋，離心后可見(jiàn)凝集反應(yīng)，非特異性的凝集可被帶負(fù)電荷的重懸液（枸櫞酸鈉）消除，對(duì)IgM抗體的作用則是增強(qiáng)凝集反應(yīng)強(qiáng)度。從資料上顯示該方法對(duì)Kell抗體不敏感，但我們?cè)趯?shí)際工作中發(fā)現(xiàn)對(duì)Dia抗體也不敏感。有一例病例醫(yī)院用凝聚胺法交叉，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)任何問(wèn)題，輸血后出現(xiàn)了嚴(yán)重的溶血反應(yīng)，經(jīng)抗人球蛋白法檢測(cè)出病人血清中有抗-Dia抗體，所引起的溶血反應(yīng)。臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于方法學(xué)的問(wèn)題在生理鹽水介質(zhì)中長(zhǎng)度較關(guān)于血型錯(cuò)誤及ABO亞型的問(wèn)題玻片法定型簡(jiǎn)單，不需要離心設(shè)備，僅靠抗體的力量，凝集紅細(xì)胞而無(wú)離心的加速反應(yīng)，所以反應(yīng)的時(shí)間較長(zhǎng)，不適合急診，另亞型紅細(xì)胞抗原與抗體的凝集反應(yīng)慢，凝集強(qiáng)度弱，有時(shí)容易被忽略而導(dǎo)致定型錯(cuò)誤，不適合用于反定型和交叉配血，只適于大規(guī)模血型普查。為臨床輸血安全在鑒定血型時(shí)采用正反定型，正定型是用標(biāo)準(zhǔn)血型抗體，對(duì)紅細(xì)胞膜上ABO系統(tǒng)血型抗原的鑒定。臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于血型錯(cuò)誤及ABO亞型的問(wèn)題玻片法定型關(guān)于血型錯(cuò)誤及ABO亞型的問(wèn)題反定型是用標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞抗原對(duì)血清中ABO系統(tǒng)血型抗體的鑒定，其目的在于復(fù)檢正定型結(jié)果的準(zhǔn)確性糾正漏檢誤報(bào)，特別是一些具有弱抗原的亞型，正定型易被忽略，此外反定型還可以糾正某些腫瘤病人因紅細(xì)胞抗原性減弱造成的正定型錯(cuò)誤以及克服排除獲得性類(lèi)B抗原和全凝集現(xiàn)象對(duì)紅細(xì)胞定型的干擾，可發(fā)現(xiàn)血清中存在的一些不規(guī)則抗體等。臨床輸血與檢驗(yàn)關(guān)于血型錯(cuò)誤及ABO亞型的問(wèn)題反定型是用標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞抗原對(duì)血清交叉配血時(shí)對(duì)冷抗體的處理一般情況下在37℃水浴中散開(kāi)，可正常使用不能散開(kāi)，則要查明原因方能輸血臨床輸血與檢驗(yàn)交叉配血時(shí)對(duì)冷抗體的處理一般情況下在37℃水浴中散開(kāi)，可正常酶配血法的注意事項(xiàng)蛋白酶能破壞M﹑N﹑S﹑s﹑Fya和Fyb抗原蛋白酶能顯著增強(qiáng)Rh和Kidd系統(tǒng)的抗原抗體的反應(yīng)所用濃度多為0.5%4℃可保存3-7天，負(fù)20℃可保存二個(gè)月臨床輸血與檢驗(yàn)酶配血法的注意事項(xiàng)蛋白酶能破壞M﹑N﹑S﹑s﹑Fya微柱凝膠配血法的簡(jiǎn)介

是一種新的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，它是通過(guò)觀(guān)察紅細(xì)胞抗原抗體在凝膠介質(zhì)中的反應(yīng)情況，從而確定抗原抗體的性質(zhì)。目前，該項(xiàng)技術(shù)在國(guó)外已成為紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測(cè)的常規(guī)技術(shù)臨床輸血與檢驗(yàn)微柱凝膠配血法的簡(jiǎn)介是一種新的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，微柱凝膠配血法臨床輸血與檢驗(yàn)微柱凝膠配血法臨床輸血與檢驗(yàn)抗人球蛋白法的原理抗體分子和補(bǔ)體成分是人球蛋白提純?nèi)饲虻鞍酌庖邉?dòng)物，提純抗人球蛋白經(jīng)適當(dāng)處理后，可與人球蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)被檢測(cè)者紅細(xì)胞表面如吸附有抗體或補(bǔ)體，測(cè)會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)凝集臨床輸血與檢驗(yàn)抗人球蛋白法的原理抗體分子和補(bǔ)體成分是人球蛋白臨床輸血與檢驗(yàn)直接抗人球蛋白法可用于新生兒溶血病的診斷自身免疫性溶血貧血的診斷研究藥物致敏的紅細(xì)胞輸血反應(yīng)的研究臨床輸血與檢驗(yàn)直接抗人球蛋白法可用于新生兒溶血病的診斷臨床輸血與檢驗(yàn)間接抗人球蛋白法可用于檢出和鑒定意外抗體交叉配血檢查用其它的方法不能查明的紅細(xì)胞抗原特殊的研究：如抗人球蛋白消耗試驗(yàn)臨床輸血與檢驗(yàn)間接抗人球蛋白法可用于檢出和鑒定意外抗體臨床輸血與檢驗(yàn)抗人球蛋白法假陰性的原因試驗(yàn)細(xì)胞、血清和抗人球蛋白貯藏不當(dāng)有些抗體只在活性補(bǔ)體參與才能檢出溫度與時(shí)間抗原抗體的比例洗滌不充分試驗(yàn)過(guò)程度中斷或推遲抗人球蛋白污染離心不充分漏加抗人球蛋白試劑前帶現(xiàn)象臨床輸血與檢驗(yàn)抗人球蛋白法假陰性的原因試驗(yàn)細(xì)胞、血清和抗人球蛋白貯藏不當(dāng)臨抗人球蛋白法假陽(yáng)性的原因紅細(xì)胞洗滌前已經(jīng)凝聚膠體硅從瓶?jī)?nèi)脫落進(jìn)入鹽水金屬離子溶入鹽水不潔器皿離心過(guò)度抗人球蛋白務(wù)清不標(biāo)準(zhǔn)（上述為直接法及間接法適用）臨床輸血與檢驗(yàn)抗人球蛋白法假陽(yáng)性的原因紅細(xì)胞洗滌前已經(jīng)凝聚臨床輸血與檢驗(yàn)被測(cè)血清中可能含有冷自身抗體敗血癥病人或受細(xì)菌污染的血標(biāo)本極度的網(wǎng)積紅細(xì)胞增多癥（上述僅直接法適用）抗人球蛋白法假陽(yáng)性的原因臨床輸血與檢驗(yàn)被測(cè)血清中可能含有冷自身抗體抗人球蛋白法假陽(yáng)性的原因臨床輸血自身免疫性溶血性貧血臨床輸血與檢驗(yàn)自身免疫性溶血性貧血臨床輸血與檢驗(yàn)自身免疫性溶血性貧血的類(lèi)型與冷抗體有關(guān)的自身免疫性溶血性貧血（冷凝集素綜合癥、PCH）與溫暖抗體有關(guān)的自身免疫性溶血性貧血臨床輸血與檢驗(yàn)自身免疫性溶血性貧血的類(lèi)型與冷抗體有關(guān)的自身免疫性溶血性貧血概念自身免疫性溶血性貧血（AIHA）是一組B淋巴細(xì)胞功能異?？哼M(jìn)，產(chǎn)生自身紅細(xì)胞抗體，使紅細(xì)胞破壞增加引起的貧血。臨床輸血與檢驗(yàn)概念自身免疫性溶血性貧血（AIHA）是一組B現(xiàn)象1紅細(xì)胞的破壞能被骨髓紅細(xì)胞生成所代償，臨床上不發(fā)生貧血，即僅有自身免疫性溶血（AIH），也有人僅可測(cè)及抗自身紅細(xì)胞抗體（AI），而無(wú)明顯溶血臨床輸血與檢驗(yàn)現(xiàn)象1紅細(xì)胞的破壞能被骨髓紅細(xì)胞生成所代償，臨床上不發(fā)生貧血現(xiàn)象2當(dāng)機(jī)體既產(chǎn)生抗自身紅細(xì)胞抗體，又產(chǎn)生抗自身血小板抗體（甚至白細(xì)胞抗體），進(jìn)而同時(shí)出現(xiàn)貧血和血小板減少（或全細(xì)胞減少）時(shí)，稱(chēng)之為Evans。臨床輸血與檢驗(yàn)現(xiàn)象2當(dāng)機(jī)體既產(chǎn)生抗自身紅細(xì)胞抗體，又產(chǎn)生抗自身血小板抗體（種類(lèi)1溫抗體型AIHA

溫抗體型AIHA多為慢性起病，易于反復(fù)實(shí)驗(yàn)室檢查：a.血片上可見(jiàn)多量球形紅細(xì)胞及數(shù)量不等的幼紅細(xì)胞及少量鐵粒幼細(xì)胞。偶見(jiàn)紅細(xì)胞被吞噬現(xiàn)象。網(wǎng)織紅細(xì)胞增多。b．骨髓呈幼紅細(xì)胞增生象，偶見(jiàn)紅細(xì)胞系統(tǒng)輕度巨幼樣變。c．再生障礙性貧血危象時(shí)，網(wǎng)織紅細(xì)胞極度減少，骨髓象呈再生障礙表現(xiàn)，血象呈全血細(xì)胞減少。d．抗人球蛋白試驗(yàn)：直接試驗(yàn)陽(yáng)性，主要為IgG和Ｃ３型；間接試驗(yàn)可為陽(yáng)性或陰性。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)1溫抗體型AIHA溫抗體型AIHA多為慢性起種類(lèi)1溫抗體型AIHA診斷依據(jù)：a.已近4個(gè)月內(nèi)無(wú)輸血或特殊藥物服用史，如直接Ｃoomb’S試驗(yàn)陽(yáng)性，結(jié)合臨床表現(xiàn)和實(shí)驗(yàn)室檢查，可考慮為溫抗體自身免疫性溶血性貧血；b.如Ｃoomb’S試驗(yàn)陰性，但臨床表現(xiàn)較符合，腎上腺皮質(zhì)激素或切脾有效，除外其他溶血性貧血（特別是遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥），可診斷為Ｃoomb’S陰性的自身免疫性溶血性貧血。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)1溫抗體型AIHA診斷依據(jù)：臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)1溫抗體型AIHAAIHA自身抗體進(jìn)行免疫學(xué)分型：復(fù)合型：IgG+C3；IgG+IgM+C3單一型：IgG；IgM；C3臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)1溫抗體型AIHAAIHA自身抗體進(jìn)行免疫學(xué)分種類(lèi)1溫抗體型AIHA特點(diǎn)紅細(xì)胞上結(jié)合的Ig通常是IgG，少數(shù)為IgM，個(gè)案報(bào)告有IgA致敏紅細(xì)胞復(fù)合型中的均伴有IgG，伴有IgM的較少，伴有IgA的更少，無(wú)單純IgM或IgA型復(fù)合型較單純型為重，IgG+IgM+C3型最重，C3型最輕臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)1溫抗體型AIHA特點(diǎn)臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)1溫抗體型AIHA輸血治療原則是：可以不輸盡量不要輸，如一定要輸血，則以輸注洗滌紅細(xì)胞為主。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)1溫抗體型AIHA輸血治療原則是：可以不輸盡量種類(lèi)2冷抗體型AIHA冷抗體AIHA亦稱(chēng)冷溶血綜合征,自身抗體結(jié)合紅細(xì)胞發(fā)生溶血的溫度多為<30℃,少數(shù)<32℃，于0～4℃作用最強(qiáng),直接凝集紅細(xì)胞。補(bǔ)體系統(tǒng)對(duì)紅細(xì)胞損傷起重要作用,引起血管內(nèi)溶血多見(jiàn)。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)2冷抗體型AIHA冷抗體AIHA亦稱(chēng)冷溶血綜合種類(lèi)2冷抗體型AIHA冷抗體有二種:冷凝集素和冷溶血素。冷凝集素綜合征（CAS）也稱(chēng)冷血凝素疾?。–HD），是伴有冷反應(yīng)性自身抗體的自身免疫性溶血性貧血(AIHA)的最常見(jiàn)的一種類(lèi)型，約占免疫性溶血性貧血的16~32%臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)2冷抗體型AIHA冷抗體有二種:冷凝集素和冷溶血種類(lèi)2冷抗體型AIHA發(fā)病分急性及慢性：急性的AIHA，一時(shí)性的冷抗體綜合征常和肺炎支原體感染有關(guān)，在少數(shù)情況下和傳染性單核細(xì)胞增多癥有關(guān)。慢性冷凝集素綜合征的病人常常是老年人，有輕度或中等度的慢性溶血性貧血。天氣冷時(shí)常發(fā)生雷諾氏現(xiàn)象和血紅蛋白尿臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)2冷抗體型AIHA發(fā)病分急性及慢性：急性的AIH種類(lèi)2冷抗體型AIHA冷反應(yīng)性自身抗體的自身免疫性溶血性貧血的溶血原因：外周循環(huán)的溫度低于32℃時(shí)，IgM冷自身凝集素和病人的紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng)。IgM抗體及其抗原的反應(yīng)使補(bǔ)體致敏紅細(xì)胞，特別是C3和C4成分。當(dāng)細(xì)胞回到積蓄循環(huán)較溫暖的中央部分時(shí)，IgM冷抗體從細(xì)胞表面上放散出來(lái)，而將補(bǔ)體致敏在紅細(xì)胞上,這樣溶血會(huì)很快發(fā)生。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)2冷抗體型AIHA冷反應(yīng)性自身抗體的自身免疫性溶種類(lèi)2冷抗體型AIHA冷凝集素病（CAS）實(shí)驗(yàn)室檢查：a.慢性輕至中度貧血，周?chē)袩o(wú)紅細(xì)胞畸形及大小不一，可有輕度高膽紅素血癥，反復(fù)發(fā)作有含鐵血黃素尿。b.冷凝集素試驗(yàn)陽(yáng)性，4℃效價(jià)可高至1：1000甚至1：

64000，在30℃時(shí)，在白蛋白或生理鹽水內(nèi)，如凝集素效價(jià)仍然較高，有診斷意義。c．抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性，幾乎均為Ｃ３型。冷凝集素陽(yáng)性效價(jià)較高。結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室檢查，可診斷為冷凝集素綜合征。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)2冷抗體型AIHA冷凝集素?。–AS）臨床輸血與種類(lèi)2冷抗體型AIHA冷溶血素實(shí)驗(yàn)室檢查a、從發(fā)作對(duì)貧血嚴(yán)重，進(jìn)展迅速，周?chē)河屑t細(xì)胞大小不一及畸形，并有球形細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片及嗜堿性點(diǎn)彩細(xì)胞及幼紅細(xì)胞出現(xiàn)。B、反復(fù)發(fā)作有含鐵血黃素尿。C、冷熱溶血試驗(yàn)（DonathLandsteiner）陽(yáng)性。D、抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性，為Ｃ３型。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)2冷抗體型AIHA冷溶血素臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)2冷抗體型AIHA輸血者,血液宜經(jīng)37℃加溫器再輸入,否則在保溫情況下緩慢輸入。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)2冷抗體型AIHA輸血者,血液宜經(jīng)37℃加溫器再種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA藥物性溶血性貧血按發(fā)病機(jī)制可分藥物氧化性溶血性貧血（DOHA）和藥物免疫性溶血性貧血（DIHA）臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA藥物性溶血性貧血按發(fā)病機(jī)制種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHADOHA主要常見(jiàn)于遺傳性紅細(xì)胞酶缺陷和血紅蛋白病人，DIHA一般發(fā)生相對(duì)較緩，貧血癥狀輕，但奎寧丁、福阿亭或非那西丁引起的可較重臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHADOHA主要常見(jiàn)于遺傳性紅細(xì)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHADIHA可分自身抗體型（又稱(chēng)甲基多型），使用甲基多巴誘發(fā)體內(nèi)產(chǎn)生自身的紅細(xì)胞抗體，DAT陽(yáng)性較多。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHADIHA可分自身抗體型（又稱(chēng)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA本病是因?yàn)樗幬镞M(jìn)入機(jī)體后，由于免疫等因素從而引起紅細(xì)胞大量破壞，臨床上出現(xiàn)貧血、黃疸、醬油色尿等溶血表現(xiàn)。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA本病是因?yàn)樗幬镞M(jìn)入機(jī)體后，由種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA按發(fā)病機(jī)制可分為四類(lèi)半抗原/藥物吸收機(jī)制(青霉素型)：藥物與紅細(xì)胞膜蛋白牢固結(jié)合具有抗原性誘發(fā)抗體。經(jīng)典范例為用大量青霉素(>1000萬(wàn)U/d)。用青霉素產(chǎn)生抗青霉素的青霉噻唑酰決定簇(BPO)的IgM抗體,不引起溶血;抗BPO的IgG抗體可溶血。IgG抗體結(jié)合到已與紅細(xì)胞膜蛋白結(jié)合的青霉素分子上可使DAT陽(yáng)性,約3%發(fā)生溶血。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA按發(fā)病機(jī)制可分為四類(lèi)臨床輸種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA半抗原/藥物吸收機(jī)制(青霉素型)：用藥7～10天后發(fā)病,停藥后數(shù)日至2周恢復(fù),但DAT陽(yáng)性可維持?jǐn)?shù)周。無(wú)其他青霉素過(guò)敏現(xiàn)象。少數(shù)于用藥后,補(bǔ)體結(jié)合于紅細(xì)胞加上IgG吸附,使DAT抗IgG和C3陽(yáng)性。致敏紅細(xì)胞主要在脾被巨噬細(xì)胞破壞。除青霉素外,以同樣機(jī)制溶血的藥物還有半合成青霉素、頭孢霉素族、四環(huán)素、卡溴脲和甲苯磺丁脲等。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA半抗原/藥物吸收機(jī)制(青霉素種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA新抗原型或藥物抗體靶細(xì)胞三元復(fù)合物型(奎尼丁波芬型)藥物與藥物抗體(多為IgG或IgM)在血循中形成免疫復(fù)合物附于紅細(xì)胞(尤有或Rh抗原者)上激活補(bǔ)體破壞紅細(xì)胞?？贵w對(duì)藥物和紅細(xì)胞形成的新抗原起作用。三元復(fù)合物結(jié)合松散,抗體常自紅細(xì)胞膜上脫落,游離于血中再與其他紅細(xì)胞膜結(jié)合。少量藥物即可于數(shù)日內(nèi)引發(fā)溶血。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA新抗原型或藥物抗體靶細(xì)胞三元種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA主要由補(bǔ)體介導(dǎo)故為血管內(nèi)溶血。發(fā)病突然、嚴(yán)重,常伴血紅蛋白尿,多見(jiàn)球形細(xì)胞,易有腎功能衰竭。DAT抗C3陽(yáng)性,IgG或IgMDAT很少陽(yáng)性,IAT陰性。除損傷紅細(xì)胞,也可損及血小板和粒細(xì)胞。除奎尼丁、波芬外,還有奎寧、氯磺丙脲、利福平、安他唑啉、硫噴妥鈉、托美丁、丙磺舒、頭孢霉素、乙烯雌酚、二性霉素B、多慮平、雙氯芬酸鈉等藥物。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA主要由補(bǔ)體介導(dǎo)故為血管內(nèi)溶血種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA自身免疫機(jī)制(α-甲基多巴型)藥物引致自身抗體與自身或同質(zhì)的紅細(xì)胞在無(wú)藥物下反應(yīng)。發(fā)病緩慢,用藥后至少1個(gè)月后發(fā)病。如α-甲基多巴,用藥后3～6月或更長(zhǎng)時(shí)間8%～36%DAT陽(yáng)性,引起臨床溶血者僅0.8%?？贵w為IgG。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA自身免疫機(jī)制(α-甲基多巴型種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA可在無(wú)藥物時(shí)發(fā)病。以前用過(guò)藥物,DAT陽(yáng)性者再用此藥發(fā)病也慢。如不了解患者服藥史,常誤為特發(fā)性溫抗體AIHA。停藥后DAT可持續(xù)陽(yáng)性數(shù)周至數(shù)月。IAT陽(yáng)性。有關(guān)藥物有:α-甲基多巴、左旋多巴、頭孢霉素、托美丁、諾米芬新、替尼泊甙、甲滅酸、普魯卡因酰胺、雙氯芬酸鈉等。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA可在無(wú)藥物時(shí)發(fā)病。以前用過(guò)藥種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA機(jī)制未明者下列藥物能引起免疫損傷紅細(xì)胞,但機(jī)制不明,有非那西丁、氯丙嗪、馬法蘭、異煙肼、鏈霉素、蘇靈大、萘啶酸、氨苯蝶啶、布洛芬、撲熱息痛、紅霉素、氟脲嘧啶、奧美拉唑等。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA機(jī)制未明者下列藥物能引起免種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA實(shí)驗(yàn)診斷：凡AIHA,均應(yīng)仔細(xì)詢(xún)問(wèn)服藥史,有肯定服用可疑藥物,停藥后溶血迅速消失,可確立診斷。另外IAT在診斷藥物相關(guān)性免疫性溶貧有一定價(jià)值。以青素型引起為例可檢測(cè)血清中的青霉素抗體及或加藥物結(jié)合在紅細(xì)胞膜上后,IAT陽(yáng)性;自身免疫型無(wú)論加與不加藥物IAT均陽(yáng)性;新抗原型者,必須加藥后,IAT即陽(yáng)性?？蛇M(jìn)行診斷。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA實(shí)驗(yàn)診斷：凡AIHA,均應(yīng)仔種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA輸血原則同溫抗體型AIHA。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)3藥物誘發(fā)AIHA輸血原則同溫抗體型AIHA。種類(lèi)4：溫冷抗體免疫性溶血性貧血(DIHA)紅細(xì)胞自身抗體具有最佳反應(yīng)溫度，根據(jù)這一特點(diǎn)可將AIHA分為溫抗體型（最適反應(yīng)溫度為37℃）、冷抗體型（最適反應(yīng)溫度為0℃～4℃）及溫冷抗體混合型。依據(jù)其抗體類(lèi)型不同又可將冷抗體型AIHA分為陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿（含雙向IgG自身抗體）和冷凝集素綜合征（coldagglutininsyndrome,CAS）（自身抗體多為IgM,極少數(shù)為IgA、IgG）。正常人血清中均有低滴度冷凝集素（coldagglutinin,CA)存在，屬于IgM型，對(duì)Ii血型抗原有特異性，滴度不超過(guò)1：32，最適反應(yīng)溫度為0℃～4℃臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)4：溫冷抗體免疫性溶血性貧血(DIHA)紅細(xì)胞自身抗體種類(lèi)4：溫冷抗體免疫性溶血性貧血(DIHA)病理學(xué)上的冷凝集素即異常CA特點(diǎn)是：①滴度高，0℃～4℃時(shí)滴度可達(dá)64000。原發(fā)性CAS和繼發(fā)于骨髓增殖障礙的CAS的CA滴度通常高于繼發(fā)于感染的CAS的CA滴度。②寬熱幅，37℃時(shí)仍可檢測(cè)到紅細(xì)胞凝集。③部分CA除識(shí)別Ii抗原外，還能特異識(shí)別Pr、Cd、Sa、FL、Vo、Lud抗原，抗Pr冷凝集素與異常高滴度、寬熱幅冷凝集素相關(guān)。④除極少數(shù)為IgA、IgG，多數(shù)為IgM抗體。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)4：溫冷抗體免疫性溶血性貧血(DIHA)病理學(xué)上的冷凝集種類(lèi)4：溫冷抗體免疫性溶血性貧血(DIHA)實(shí)驗(yàn)室檢查A、從發(fā)作對(duì)貧血嚴(yán)重，進(jìn)展迅速，周?chē)河屑t細(xì)胞大小不一及畸形，并有球形細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片及嗜堿性點(diǎn)彩細(xì)胞及幼紅細(xì)胞出現(xiàn)。B、反復(fù)發(fā)作有含鐵血黃素尿。C、冷熱溶血試驗(yàn)（DonathLandsteiner）陽(yáng)性。D、抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性，為IgG+Ｃ３型。E、4℃、22℃、37℃效價(jià)遞減。臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)4：溫冷抗體免疫性溶血性貧血(DIHA)實(shí)驗(yàn)室檢查臨床輸種類(lèi)4：溫冷抗體免疫性溶血性貧血(DIHA)輸血原則：同溫抗體免疫性溶血性貧血臨床輸血與檢驗(yàn)種類(lèi)4：溫冷抗體免疫性溶血性貧血(DIHA)輸血原則：同溫抗產(chǎn)前產(chǎn)后的免疫血清學(xué)檢查臨床輸血與檢驗(yàn)產(chǎn)前產(chǎn)后的免疫血清學(xué)檢查臨床輸血與檢驗(yàn)產(chǎn)前的免疫血清學(xué)檢查的項(xiàng)目夫妻雙方的ABO血型正反定型夫妻雙方的Rh血型鑒定女方的抗體篩選女方的IGg抗-A或抗-B效價(jià)測(cè)定臨床輸血與檢驗(yàn)產(chǎn)前的免疫血清學(xué)檢查的項(xiàng)目夫妻雙方的ABO血型正反定型臨床輸類(lèi)型ABO新生兒溶血病(ABO-HDN)Rh新生兒溶血病(Rh-HDN)其它新生兒溶血病抗-C引起的HDN抗-E引起的HDNKELL和其它IGg抗體引起HDN臨床輸血與檢驗(yàn)類(lèi)型ABO新生兒溶血病(ABO-HDN)臨床輸HDN的原理免疫的IGg抗體通過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)入胎兒體內(nèi)與相應(yīng)的紅細(xì)胞結(jié)合引起HDN臨床輸血與檢驗(yàn)HDN的原理免疫的IGg抗體通過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)入胎兒體內(nèi)與相應(yīng)的產(chǎn)后胎兒的免疫血清學(xué)檢查的項(xiàng)目ABO血型正定型Rh血型鑒定直接抗人球蛋白試驗(yàn)游離抗體檢查或鑒定紅細(xì)胞放散液的抗體檢查或鑒定臨床輸血與檢驗(yàn)產(chǎn)后胎兒的免疫血清學(xué)檢查的項(xiàng)目ABO血型正定型臨床輸血與檢驗(yàn)ABO-HDN結(jié)果判斷直抗試驗(yàn)游離試驗(yàn)釋放試驗(yàn)結(jié)論

陰性陰性陰性不能證實(shí)

陽(yáng)性陰性陰性可疑為HDN陰性陽(yáng)性陰性可疑為HDN陰性陰性陽(yáng)性

可以證實(shí)為ABOHDN

陽(yáng)性陰性陽(yáng)性

可以證實(shí)為ABOHDN

陽(yáng)性陽(yáng)性陰性可以證實(shí)為ABOHDN陰性陽(yáng)性陽(yáng)性可以證實(shí)為ABOHDN

陽(yáng)性陽(yáng)性陽(yáng)性可以證實(shí)為ABOHDN臨床輸血與檢驗(yàn)ABO-HDN結(jié)果判斷直抗試驗(yàn)游離試驗(yàn)釋放血小板血型與輸血臨床輸血與檢驗(yàn)血小板血型與輸血臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗原共有抗原HLA抗原ABH抗原其它抗原特異性抗原（HPA抗原）臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗原共有抗原HLA抗原特異性抗原（HPA抗原）臨床輸血小板具有HLA-Ⅰ類(lèi)抗原（HLA-A、HLA-B抗原和少量HLA-C抗原），無(wú)HLA-Ⅱ類(lèi)抗原。故輸注血小板要比器官移植所需配型簡(jiǎn)單。HLA-Ⅰ類(lèi)分子為血小板的固有蛋白，少量從血漿中吸附。HLA抗原臨床輸血與檢驗(yàn)血小板具有HLA-Ⅰ類(lèi)抗原（HLA-A、HLA-B抗原部分為血小板的固有蛋白，另一部分從血漿中吸附。血小板上的ABH抗原個(gè)體之間表達(dá)不同，5%-10%的非O型個(gè)體為A抗原或B抗原的高表達(dá)者。故血小板輸血應(yīng)同型輸注；抗體檢測(cè)應(yīng)采用O型血小板。ABH抗原臨床輸血與檢驗(yàn)部分為血小板的固有蛋白，另一部分從血漿中ABH抗原臨床輸血Ii,Lea,Leb,P2其它共有抗原臨床輸血與檢驗(yàn)其它共有抗原臨床輸血與檢驗(yàn)主要存在于血小板膜的GP分子上，也少量存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞、結(jié)締組織細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞。1990年國(guó)際輸血協(xié)會(huì)血小板免疫學(xué)工作組提出了HPA命名，以發(fā)現(xiàn)的時(shí)間順序排列：HPA-1、HPA-2、HPA-3等系統(tǒng)，每一系統(tǒng)中高頻率基因表達(dá)的抗原以a表示，低頻率基因表達(dá)的抗原以b表示，新發(fā)現(xiàn)的系統(tǒng)以w表示。血小板特異性抗原（HPA抗原）臨床輸血與檢驗(yàn)主要存在于血小板膜的GP分子上，也少量存在于血小板特異性已確定了24個(gè)HPA，其中12個(gè)抗原為雙等位基因表達(dá)（HPA-1,-2,-3,-4，-5和-15），且呈共顯性表達(dá)模式。單核苷酸多態(tài)性（SNP）:24個(gè)HPA中有22個(gè)已搞清楚基因背景，其中21個(gè)HPA的多態(tài)性型是由一個(gè)氨基酸置換所致，而這又是由編碼血小板膜糖蛋白（GP）基因的一個(gè)核苷酸的不同所致。HPA-14bw不具有單核苷酸多態(tài)性。其核苷酸置換發(fā)生在1909-1911delAAG。血小板特異性抗原（HPA抗原）臨床輸血與檢驗(yàn)已確定了24個(gè)HPA，其中12個(gè)抗原為雙等位基因血小板特異系統(tǒng)抗原原名糖蛋白CD核苷酸多態(tài)性HPA-1HPA-1aZwa，plAlGplllaCD61167THPA-1bZwb，plA2167CHPA-2HPA-2aK0bGplbαCD42b482CHPA-2bK0a，Siba482THPA-3HPA-3aBaka，LekaGpllbCD412621THPA-3bBakb2621GHPA-4HPA-4aYukb，PenaGplllaCD61506GHPA-4bYuka，penb506AHPA-5HPA-5aBrb，ZavbGplaCD49b1600GHPA-5bBra，Zava，Hca1600AHPA-15HPA-15aGovbCD109CD1092108CHPA-15bGova2108AHPA-6bwCaa，TuaGplllaCD611544G>AHPA-7bwMoaGplllaCD611297C>GHPA-8bwSraGplllaCD611984C>THPA-9bwMaxaGpllbCD412602G>AHPA-10bwLaaGplllaCD61263G>AHPA-11bwGroaGplllaCD611976G>AHPA-12bw1yaGplbβCD42c119G>AHPA-13bwSitaGplaCD49b2483C>THPA-14bwOeaGplllaCD611909-1911delAAGHPA-16bwHPA-17bwDuvaVaaGplllaGplllaCD61CD61497C>T622C>T血小板特異性抗原臨床輸血與檢驗(yàn)系統(tǒng)抗原原名糖蛋白CD核苷酸多態(tài)性HPA-1HPA-1aZwGPⅣ(CD36)88KD分布:血小板、單核細(xì)胞紅細(xì)胞、脾細(xì)胞、表皮及內(nèi)皮細(xì)胞功能：參與止血、凝血、炎癥、脂類(lèi)代謝、瘧疾感染等臨床輸血與檢驗(yàn)GPⅣ(CD36)88KD臨床輸血與檢驗(yàn)TypeI:血小板和單核細(xì)胞均缺失CD36TypeII:僅血小板缺失CD36缺失頻率：日本、韓國(guó)：3-11%印尼、臺(tái)灣：4%美國(guó)黑人：2.4%Sub-Saharan：7.8%高加索人：0.06%GPⅣ(CD36)臨床輸血與檢驗(yàn)GPⅣ(CD36)臨床輸血與檢驗(yàn)有20多種基因突變可導(dǎo)致I型CD36缺失。主要有如下幾種形式突變：（1）外顯子4的第478個(gè)堿基處發(fā)生C→T取代（C478T）；（2）539堿基位置AC發(fā)生消除（539delAC）；（3）外顯子10的1159堿基位置插入A；（4）日本人為839-841堿基位置GAG發(fā)生消除而插入AAAAC堿基；（5）肯尼亞人和岡比亞人為T(mén)1264G。CD36缺失II型的基因背景尚未完全弄清楚。CD36缺失的個(gè)體通過(guò)輸血或妊娠有產(chǎn)生抗CD36抗體的風(fēng)險(xiǎn)。CD36缺失型臨床輸血與檢驗(yàn)有20多種基因突變可導(dǎo)致I型CD36缺失。主要有如下幾種形血小板血型與臨床血小板抗原同種異體抗原

HLA-I,HPA,ABH同種抗原

GPⅡb/Ⅲa,CD36自身抗原

GPⅡb/Ⅲa,GPⅠb/Ⅸ藥物依賴(lài)性抗原肝素、奎寧等非特異性抗原血小板免疫性疾病血小板輸注無(wú)效癥新生兒血小板減少癥輸血后紫癜自身免疫性血小板減少癥藥物引起的血小板減少癥移植相關(guān)的血小板減少癥臨床病癥淤點(diǎn)淤斑流產(chǎn)（顱內(nèi)）出血死亡臨床輸血與檢驗(yàn)血小板血型與臨床血小板抗原血小板免疫性疾病臨床病癥臨床輸血與血小板血型與臨床---自身抗原臨床輸血與檢驗(yàn)血小板血型與臨床---自身抗原臨床輸血與檢驗(yàn)血小板血型與臨床---同種異體抗原輸血妊娠骨髓移植致敏血小板并引起破壞抗供者血小板抗體抗父親血小板抗體抗供者血小板抗體出血/紫癜流產(chǎn)/死胎移植排斥血小板臨床輸血與檢驗(yàn)血小板血型與臨床---同種異體抗原輸血妊娠骨髓移植致敏血小板血小板血型與臨床---同種異體抗原直接途徑患者CD4+T細(xì)胞上T細(xì)胞受體（TCR）直接與外源抗原提呈細(xì)胞（APC）表面的MHCⅡ類(lèi)分子識(shí)別，并與其提呈的血小板抗原反應(yīng)，從而啟動(dòng)機(jī)體免疫應(yīng)答。間接途徑外源血小板抗原被患者抗原提呈細(xì)胞加工后，被患者CD4+T細(xì)胞上的TCR識(shí)別而啟動(dòng)免疫應(yīng)答。在這兩種途徑中，CD4+T細(xì)胞活化后分泌的細(xì)胞因子如白介素-2和干擾素家族，可刺激初始B細(xì)胞發(fā)育分化為漿細(xì)胞并分泌特異性抗體。最終結(jié)果是血小板抗體Fab段識(shí)別、結(jié)合具有相應(yīng)抗原的血小板（稱(chēng)為“致敏”），抗體Fc段與巨噬細(xì)胞上Fc受體結(jié)合并引起血小板被巨噬細(xì)胞吞噬破壞，該過(guò)程多數(shù)發(fā)生在患者脾臟內(nèi)。臨床輸血與檢驗(yàn)血小板血型與臨床---同種異體抗原直接途徑臨床輸血與檢驗(yàn)GPⅡb/Ⅲa格蘭茨曼血小板功能不全?。℅LANZMANN‘STHROMBASTHENIA）CD36血小板輸注無(wú)效癥等

血小板血型與臨床---同種抗原臨床輸血與檢驗(yàn)GPⅡb/Ⅲa血小板血型與臨床---同種抗原臨床輸血與檢驗(yàn)Pl

血小板減少

出血免疫性血小板減少癥患者藥物依賴(lài)性抗體藥物？外源血小板同種/同種異體抗體Pl患者血小板藥物患者血小板Pl外源血小板血小板被清除自身抗體臨床輸血與檢驗(yàn)Pl 出血免疫性血小板減少癥患者藥物依賴(lài)性抗體藥物？外源血血小板輸血必要性

輕度血小板減少癥患者

血小板計(jì)數(shù)<50×109/L，會(huì)出現(xiàn)凝血障礙，導(dǎo)致出血不止，特別對(duì)于嚴(yán)重失血患者、產(chǎn)婦等。嚴(yán)重血小板減少癥患者

血小板計(jì)數(shù)<10×109/L，會(huì)出現(xiàn)自發(fā)出血、顱內(nèi)出血甚至死亡，特別對(duì)于白血病、腫瘤化療、骨髓異常綜合癥及ITP患者等。臨床輸血與檢驗(yàn)血小板輸血必要性輕度血小板減少癥患者臨床輸血與檢驗(yàn)血小板輸血是提高患者（特別是腫瘤和移植患者）血小板計(jì)數(shù)，防止出血最快速、有效的方法和手段。然而，血小板輸血并不是每次都能達(dá)到滿(mǎn)意效果，特別是反復(fù)多次隨機(jī)輸注血小板的患者，體內(nèi)極易產(chǎn)生血小板抗體，從而破壞輸入的血小板并引起輸注無(wú)效。文獻(xiàn)報(bào)道約有20％~50％白血病患者，80％的再生障礙性貧血患者長(zhǎng)期隨機(jī)輸注血小板后會(huì)出現(xiàn)輸注無(wú)效狀態(tài)，導(dǎo)致患者因血小板計(jì)數(shù)低下而自發(fā)出血或出血不止，甚至死亡。我國(guó)目前大多數(shù)臨床單位采用隨機(jī)輸注血小板，導(dǎo)致血小板輸注無(wú)效頻繁發(fā)生。后果：患者病情得不到改善，病危甚至死亡；浪費(fèi)財(cái)力、物力；浪費(fèi)寶貴的血小板資源；不利于血站及輸血科業(yè)務(wù)水平的提高。血小板輸血？臨床輸血與檢驗(yàn)血小板輸血是提高患者（特別是腫瘤和移植患者）血小板計(jì)數(shù)，防止血小板輸注無(wú)效癥血小板輸注無(wú)效（PlateletRefractorinessPTR）尚未有統(tǒng)一的判斷標(biāo)準(zhǔn)。成功輸注：1小時(shí)PPR>30%24小時(shí)PPR>20%（PPR：血小板回收率）PPR=血小板增加數(shù)×病人體重（Kg）×血容量輸注血小板計(jì)數(shù)×體積（ml）1小時(shí)CCI>7.5×109/L24小時(shí)CCI>4.5×109/L（CCI：血小板糾正計(jì)數(shù)指數(shù)）CCI=輸血后血小板增加數(shù)×體表面積（m2）輸注血小板數(shù)u/m2臨床輸血與檢驗(yàn)血小板輸注無(wú)效癥血小板輸注無(wú)效（PlateletRefra非免疫性血小板本身質(zhì)量?；颊咔闆r：發(fā)熱感染、脾腫大、彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）及藥物作用。免疫性同種異體免疫作用：HLA-Ⅰ類(lèi)抗體（80%）、HPA抗體、ABO血型抗體。自身免疫作用：ITP患者。藥物免疫作用：肝素、奎寧、頭孢菌素、苯巴比妥、消炎痛、安替比林等血小板輸注無(wú)效的原因臨床輸血與檢驗(yàn)非免疫性血小板輸注無(wú)效的原因臨床輸血與檢驗(yàn)血小板輸注無(wú)效的預(yù)防

輸注質(zhì)量可靠的ABO同型血小板制劑減少患者接觸同種異體血小板抗原的機(jī)會(huì)去除白細(xì)胞的血小板制劑紫外線(xiàn)照射的血小板制劑去除HLA抗原的血小板制劑臨床輸血與檢驗(yàn)血小板輸注無(wú)效的預(yù)防輸注質(zhì)量可靠的ABO同型血小板制劑臨床供者選擇選擇與患者ABO血型相同的供者血小板。RhD陰性患者應(yīng)當(dāng)盡可能輸注RhD陰性供者血小板。選擇與患者HLA相容的供者血小板HLA配合試驗(yàn)（HLA-matching）抗體特異性預(yù)測(cè)試驗(yàn)（ASP）交叉配型試驗(yàn)（crossmatching）靜脈注射免疫球蛋白（IVIG）血漿置換免疫抑制劑抗纖溶藥物

血小板輸注無(wú)效的處理

臨床輸血與檢驗(yàn)供者選擇血小板輸注無(wú)效的處理臨床輸血與檢驗(yàn)胎母同種異體免疫血小板減少癥胎母同種異體免疫血小板減少癥致病機(jī)理與新生兒溶血?。℉DN）相似，前者是由胎兒父母血小板抗原不合引起的血小板減少癥，后者為紅細(xì)胞抗原不合引起的溶血性疾病。由于胎兒遺傳自父親的血小板抗原刺激母體產(chǎn)生IgG型的抗血小板抗體，該抗體能通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒體內(nèi)并與具有相應(yīng)抗原的血小板結(jié)合，此致敏血小板在胎兒的血液循環(huán)中被清除而使得胎兒血小板減少，出現(xiàn)瘀點(diǎn)和瘀斑，其嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)損傷（占已報(bào)道病例的20%）、顱內(nèi)出血（15%-20%）甚至死亡10%）。因多數(shù)病例在出生后才得以診斷，故此病也稱(chēng)作新生兒同種異體免疫血小板減少癥。初次妊娠婦女即可發(fā)生FMAIT，其發(fā)病率大約為1/800-1500。臨床輸血與檢驗(yàn)胎母同種異體免疫血小板減少癥胎母同種異體免疫血小板減少癥致病臨床輸血與檢驗(yàn)臨床輸血與檢驗(yàn)絕大多數(shù)為HPA抗體引起高加索人：抗HPA-1a（78%）抗HPA-5b（19%）其余（3%）亞洲人：主要與抗HPA-4b和抗HPA-5b相關(guān)，2者均能引發(fā)中等嚴(yán)重程度疾病抗-HLA-B27可引發(fā)FMAIT，其準(zhǔn)確機(jī)制尚不清楚。ABO血型系統(tǒng)不相容也會(huì)導(dǎo)致FMAIT。FMAIT的發(fā)病原因臨床輸血與檢驗(yàn)絕大多數(shù)為HPA抗體引起FMAIT的發(fā)病原因臨床輸血與檢驗(yàn)FMAIT患兒病情變化較大，具有自限性，常在出生后2-3周恢復(fù)。輕度血小板減少患兒有時(shí)沒(méi)有任何臨床癥狀。病情較重患兒臨床表現(xiàn)為皮膚、體內(nèi)外黏膜出血，出現(xiàn)紫癜、瘀點(diǎn)或瘀斑。嚴(yán)重患兒可能發(fā)生顱內(nèi)出血，占15%-20%。與FMAIT相關(guān)的ICH80%發(fā)生在子宮內(nèi)，其中14%發(fā)生在妊娠20周前，28%發(fā)生在妊娠30周前。FAMIT的臨床表現(xiàn)臨床輸血與檢驗(yàn)FMAIT患兒病情變化較大，具有自限性，常在出生后2-3周恢母體血清抗HPA抗體檢測(cè)，然而母體抗體水平到預(yù)產(chǎn)期時(shí)逐漸下降，約有30%的病例抗體陰性。父母雙親的HPA基因檢測(cè)，在高加索地區(qū)采取對(duì)其HPA-1和HPA-5基因檢測(cè)，而在亞洲地區(qū)應(yīng)考慮進(jìn)行HPA-4和HPA-5基因檢測(cè)。父母雙親交叉配型實(shí)驗(yàn)，將母體血清與父親血小板進(jìn)行交叉配型實(shí)驗(yàn)，即使不能確切知道不相合的抗原，但這種方法也能發(fā)現(xiàn)母體是否存在血小板同種異體免疫反應(yīng)。FMAIT早期診斷與篩查臨床輸血與檢驗(yàn)?zāi)阁w血清抗HPA抗體檢測(cè)，然而母體抗體水平到預(yù)產(chǎn)期時(shí)逐漸下降血小板相容性檢測(cè)采取預(yù)防和治療措施避免流產(chǎn)、出血等減少血小板輸注無(wú)效避免紫癜、出血和死亡血小板相容性檢測(cè)抗原定型抗體檢測(cè)交叉配型建立血小板供者庫(kù)篩選基因型相容的供者避免血小板抗體的產(chǎn)生診斷血小板免疫性疾病篩查血小板相容性供者臨床輸血與檢驗(yàn)血小板相容性檢測(cè)采取預(yù)防和治療措施減少血小板輸注無(wú)效血小板相血小板抗原定型血清學(xué)定型即用已知特異性抗體檢測(cè)血小板血型抗原缺點(diǎn)：特異性抗體來(lái)源困難---人血清中血小板抗體通常為多特異性---單克隆抗體匱乏，目前國(guó)際上僅有HPA-1a單抗，無(wú)其它HPA單抗。基因定型限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（RFLP）序列特異性寡核苷酸聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSO)序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSP)臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗原定型血清學(xué)定型臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗原定型（PCR-SSP）HPA-1HPA-2HPA-3HPA-4HPA-5HPA-15abababababab陽(yáng)性對(duì)照條帶等位基因條帶1bb2ab3bb4aa5aa15aa用途：（1）健康人群HPA基因分型，建立已知HPA基因型的血小板獻(xiàn)血員庫(kù)。（2）檢測(cè)受者HPA基因型，以便從血小板獻(xiàn)血員庫(kù)中尋找與其HPA基因型相匹配的血小板供者。（3）檢測(cè)患者HPA基因型，輔助臨床胎兒/新生兒免疫性血小板減少癥、輸血后紫癜及血小板輸注無(wú)效癥等疾病病因診斷。（4）對(duì)特定區(qū)域或種族人群HPA基因分型，可為人類(lèi)遺傳學(xué)研究提供相關(guān)資料和證據(jù)。臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗原定型（PCR-SSP）HPA-1HPA-血小板抗體檢測(cè)方法功能性試驗(yàn)酶標(biāo)法熒光法固相凝集法應(yīng)用范圍抗體檢測(cè)√√√√交叉配型√√√性能靈敏度低高極高高特異性不好好一般較好反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)＞2h＞2h＜1h所用儀器不定酶標(biāo)儀熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀平板離心機(jī)16th版AABB評(píng)價(jià)未提及特異性鑒定的可靠方法敏感性高特異性不足血小板交叉配型應(yīng)用最為廣泛的方法方法指標(biāo)臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗體檢測(cè)方法功能性試驗(yàn)酶標(biāo)法熒光法固相凝集法應(yīng)用范圍抗單克隆抗體固著血小板抗原分析（MAIPA）臨床輸血與檢驗(yàn)單克隆抗體固著血小板抗原分析（MAIPA）臨床輸血與檢驗(yàn)單克隆抗體固著血小板抗原分析

（MAIPA）臨床輸血與檢驗(yàn)單克隆抗體固著血小板抗原分析

（MAIPA）臨床輸血與檢驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：特異性檢測(cè)HPA抗體，使得人們?cè)诮鼛啄臧l(fā)現(xiàn)了許多新的血小板特異性抗原。缺點(diǎn)：若待檢血清中抗血小板抗體與鼠單克隆抗體識(shí)別的是同一抗原決定簇，它們將競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合抗原位點(diǎn)而易出現(xiàn)假陰性反應(yīng)。需要將血小板裂解，對(duì)血小板糖蛋白特別是HPA-3a和HPA-15的抗原結(jié)構(gòu)破壞較大，使其抗原性大大減弱，很容易造成漏檢。該方法操作時(shí)間長(zhǎng)（約8h），技術(shù)要求高，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果差異較大等不足也限制了其在臨床上的應(yīng)用。單克隆抗體固著血小板抗原分析（MAIPA）臨床輸血與檢驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：?jiǎn)慰寺】贵w固著血小板抗原分析（MAIPA）臨床輸血與檢修飾的抗原捕獲ELISA分析

（MACE）血小板GPⅡb/ⅢaGPⅡb/Ⅲa裂解人抗血小板GPⅡb/Ⅲa抗體AP-抗人IgG臨床輸血與檢驗(yàn)修飾的抗原捕獲ELISA分析

（MACE）血小板GPⅡb/Ⅲ優(yōu)點(diǎn)：可定量檢測(cè)血清中的血小板特異性抗體。缺點(diǎn)：需要將人血清抗體致敏的血小板裂解，裂解后的血小板膜糖蛋白構(gòu)象表位會(huì)發(fā)生變化而不能與微孔中的鼠抗血小板糖蛋白單克隆抗體結(jié)合，因此導(dǎo)致其抗體檢出率降低。修飾的抗原捕獲ELISA分析

（MACE）臨床輸血與檢驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：可定量檢測(cè)血清中的血小板特異性抗體。修飾的抗原捕獲EL血小板抗體檢測(cè)方法—熒光法A.B.C.D.A：血小板B：血清中血小板抗體C：熒光標(biāo)記抗人IgG抗體D：熒光顯微鏡/流式細(xì)胞儀臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗體檢測(cè)方法—熒光法A.B.C.D.A：血小板臨床輸血血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法抗人IgG臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法抗人IgG臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗體篩檢，包括HLA抗體、HPA抗體及其它血小板反應(yīng)性抗體。輔助血小板相關(guān)免疫性疾病的診斷。血小板交叉配型，為患者篩選相容性的血小板或血小板供者，避免血小板輸注無(wú)效癥的發(fā)生?；颊咦陨砜贵w檢測(cè)，包括血小板結(jié)合抗體和血清中游離抗體。檢測(cè)血小板結(jié)合抗體可將患者血小板平鋪在反應(yīng)孔后，直接加入抗人IgG和指示紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。血清中的游離抗體可通過(guò)患者自身血小板和血清反應(yīng)來(lái)檢測(cè)。用途：血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗體篩檢，包括HLA抗體、HPA抗體及其它血小板反應(yīng)性血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法血小板譜細(xì)胞（三人份O型混合血小板）反應(yīng)板（已包被血小板單抗）血小板單層陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)患者血清/血漿抗人IgG指示紅細(xì)胞（人IgG致敏紅細(xì)胞）50g,5min離心洗滌3次50μl/孔洗滌5次水浴30min陽(yáng)性陰性50μl/孔各50μl/孔200g,5min離心200g,5min離心（一）同種/同種異體抗體檢測(cè)臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法血小板譜細(xì)胞反應(yīng)板血小板單層陽(yáng)血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法抗原：三人份等比例混合O型血小板懸液：1.將有效期內(nèi)機(jī)采血小板用生理鹽水進(jìn)行5-10倍稀釋后混合；2.采血8小時(shí)內(nèi)EDTA/枸櫞酸鈉抗凝全血經(jīng)200g離心10分鐘，取上層2/3PRP混合。3.凍干血小板用生理鹽水稀釋后直接使用。意義：檢測(cè)血小板減少患者，妊娠、移植及待輸血等患者體內(nèi)是否存在血小板抗體。若抗體陽(yáng)性，應(yīng)堅(jiān)持進(jìn)行交叉配型以輸注相容或相合的血小板，提高輸血效果。臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法抗原：三人份等比例混合O型血小血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法抗原：患者自身血小板(因ITP患者體內(nèi)血小板數(shù)量較低，因此試驗(yàn)前需將調(diào)節(jié)血小板濃度至50-100×109/L）。意義：自身免疫性血小板減少癥(ITP)是一類(lèi)由自身抗體導(dǎo)致血小板破壞增多的出血性疾病。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為與體液免疫有關(guān)，機(jī)體對(duì)血小板相關(guān)抗原發(fā)生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生抗血小板抗體，抗體致敏的血小板由單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)迅速清除而發(fā)病，且骨髓巨核細(xì)胞有成熟障礙。ITP的診斷目前仍依賴(lài)臨床表現(xiàn)和骨髓檢查，并以排除血小板減少的其它原因?yàn)榛A(chǔ)，因此，急需特異性強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)室診斷方法和診斷指標(biāo)。檢測(cè)血小板自身抗體已成為ITP診斷的一個(gè)重要指標(biāo)。（二）自身抗體檢測(cè)臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法抗原：患者自身血小板(因ITP血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法直接法：自身結(jié)合抗體檢測(cè)患者血小板反應(yīng)板（已包被血小板單抗）50g,5min離心洗滌3次50μl/孔陽(yáng)性反應(yīng)抗人IgG指示紅細(xì)胞（人IgG致敏紅細(xì)胞）陽(yáng)性陰性各50μl/孔200g,5min離心200g,5min離心陰性反應(yīng)臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法直接法：自身結(jié)合抗體檢測(cè)患者血血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法間接法：自身游離抗體檢測(cè)患者血小板反應(yīng)板（已包被血小板單抗）血小板單層陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)患者血清/血漿抗人IgG指示紅細(xì)胞（人IgG致敏紅細(xì)胞）50g,5min離心洗滌3次50μl/孔洗滌5次水浴30min陽(yáng)性陰性50μl/孔各50μl/孔200g,5min離心200g,5min離心臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法間接法：自身游離抗體檢測(cè)患者血血小板譜細(xì)胞（三人份O型混合血小板）反應(yīng)板（已包被血小板單抗）血小板單層陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)患者血清/血漿抗人IgG指示紅細(xì)胞（人IgG致敏紅細(xì)胞）50g,5min離心洗滌3次50μl/孔洗滌5次水浴30min陽(yáng)性陰性50μl/孔各50μl/孔200g,5min離心200g,5min離心藥物（終濃度100U/ml)血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法（三）藥物依賴(lài)性抗體檢測(cè)注：洗滌液中同樣需加入100U/ml的待檢藥物。臨床輸血與檢驗(yàn)血小板譜細(xì)胞反應(yīng)板血小板單層陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng)患者血清/血漿抗抗原：三人份等比例混合O型血小板懸液：1.將有效期內(nèi)機(jī)采血小板用生理鹽水進(jìn)行5-10倍稀釋后混合；2.采血8小時(shí)內(nèi)EDTA/枸櫞酸鈉抗凝全血經(jīng)200g離心10分鐘，取上層2/3PRP混合。3.凍干血小板用生理鹽水稀釋后直接使用。意義：根據(jù)患者服用/輸注的藥物不同而在試驗(yàn)中加入相應(yīng)的藥物，以確定患者體內(nèi)是否已產(chǎn)生藥物依賴(lài)性血小板抗體，輔助臨床診斷以及采取適當(dāng)?shù)淖o(hù)理措施。血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法臨床輸血與檢驗(yàn)抗原：三人份等比例混合O型血小板懸液：血小板抗體檢測(cè)方法-固血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法（四）交叉配型供血者血小板反應(yīng)板（已包被血小板單抗）血小板單層陽(yáng)性反應(yīng)受血者血清/血漿抗人IgG指示紅細(xì)胞（人IgG致敏紅細(xì)胞）50g,5min離心洗滌3次50μl/孔洗滌5次水浴30min陽(yáng)性陰性50μl/孔各50μl/孔200g,5min離心200g,5min離心陰性反應(yīng)臨床輸血與檢驗(yàn)血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法（四）交叉配型供血者血小板反應(yīng)抗原：與受者ABO同型的供者血小板懸液：1.將有效期內(nèi)機(jī)采血小板用生理鹽水進(jìn)行5-10倍稀釋?zhuān)?.采血8小時(shí)內(nèi)EDTA/枸櫞酸鈉抗凝全血經(jīng)200g離心10分鐘，取上層2/3PRP。意義：為血小板輸血患者提供相容性血小板，減少輸注無(wú)效癥的發(fā)生，為社會(huì)節(jié)約寶貴的血小板資源。血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法臨床輸血與檢驗(yàn)抗原：與受者ABO同型的供者血小板懸液：血小板抗體檢測(cè)方法-200g(1300rpm)離心5min后觀(guān)察結(jié)果取出反應(yīng)板，做好標(biāo)記

加入血小板懸液50μl/孔，振蕩混勻

50g(650rpm)離心5min滴加洗液洗滌3次加入LISS100μl

/孔，待檢樣本50μl

/孔，混勻

37℃水浴孵育30min或氣浴35min滴加洗液洗滌5次加入抗人IgG和指示紅細(xì)胞各50μl

/孔，振蕩混勻抗體檢測(cè)：三人份O型血小板。交叉配型：獻(xiàn)血者血小板EDTA或枸櫞酸鈉抗凝全血：200g離心10min機(jī)采血小板：生理鹽水5-10倍稀釋。血清或血漿樣本，充分離心后檢測(cè)。格局結(jié)果－±1＋2＋3＋4＋血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法臨床輸血與檢驗(yàn)200g(1300rpm)離心5min后觀(guān)察結(jié)果取出反應(yīng)板1.血小板分散均勻，未發(fā)生聚集是本實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵之一。陳舊或已發(fā)生聚集的血小板容易導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果，特別注意不能將血小板放置于4℃冰箱中。血小板懸液的濃度不合適會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果，濃度過(guò)低（小于10×109/l）或太高（高于350×109/l）都會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。

2.待檢的血清或血漿樣本檢測(cè)前應(yīng)充分離心以去除顆粒及聚集物，否則可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。肝素抗凝樣本不能用于本實(shí)驗(yàn)。待檢樣本脂類(lèi)含量高或微生物污染會(huì)造成假陽(yáng)性；纖維蛋白原未充分析出的血清樣本會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。

3.洗滌過(guò)程中須滴加洗液，水流劇烈沖擊會(huì)造成血小板單層的破壞而導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。

4.獻(xiàn)血者與受血者ABO血型不相容或自身IgG抗體結(jié)合到供血者血小板上易引起假陽(yáng)性結(jié)果。5.離心力和離心轉(zhuǎn)數(shù)的換算公式為：Rcf(g)=1.119×105×r×(rpm)2(r單位為cm)。離心時(shí)間及速度不合適，血小板和微孔板結(jié)合差，可能會(huì)減少最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果的敏感性和反應(yīng)強(qiáng)度。注意事項(xiàng)：血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法臨床輸血與檢驗(yàn)1.血小板分散均勻，未發(fā)生聚集是本實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵之一。陳舊或優(yōu)點(diǎn)：不僅快速簡(jiǎn)便，結(jié)果直觀(guān)可靠，而且其敏感性和特異性和免疫熒光法相一致，同時(shí)，采用完整血小板作為抗原進(jìn)行檢測(cè)特別適合于血小板交叉配型。應(yīng)用凍干型血小板進(jìn)行抗體篩檢，方便臨床應(yīng)用，且易于標(biāo)準(zhǔn)化。血清或血漿樣本均可，實(shí)驗(yàn)無(wú)需特殊儀器且1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)，適合于快速血小板抗體檢測(cè)和交叉配型。血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法臨床輸血與檢驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：不僅快速簡(jiǎn)便，結(jié)果直觀(guān)可靠，而且其敏感性和特異性和免疫HPA-1HPA-2HPA-3HPA-4HPA-5HPA-15C11aa2aa3aa4ab5aa15bbC21ab2aa3aa4aa5ab15aaC31aa2ab3bb4aa5aa15aa凍干型血小板抗體篩檢細(xì)胞通過(guò)間接ELISA法采用特異性單克隆抗體檢測(cè)血小板抗體篩檢細(xì)胞凍干前后糖蛋白Ⅱb/Ⅲa、Ⅰa/Ⅱa、Ⅰb/Ⅸ、Ⅳ的抗原性變化是否顯著，同時(shí)用無(wú)關(guān)單抗作為對(duì)照。以P/N值（特異性糖蛋白單抗檢測(cè)值/無(wú)關(guān)單抗檢測(cè)值）作為衡量抗原性的指標(biāo)繪制柱形圖，結(jié)果表明血小板凍干前后上述糖蛋白抗原性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。臨床輸血與檢驗(yàn)HPA-1HPA-2HPA-3HPA-4HPA-5HPA-1HPA-1HPA-2HPA-3HPA-4HPA-5HPA-15ⅠaaaaaaaaaaaaⅡaaaaaaabaabbⅢaaabbbaaaaaa凍干型血小板抗體鑒定譜細(xì)胞臨床輸血與檢驗(yàn)HPA-1HPA-2HPA-3HPA-4HPA-5HPA-1對(duì)844例貧血、白血病、血小板減少及腫瘤等疾病患者進(jìn)行血小板抗體檢測(cè)。其中有效病例766例，其余78例患者病例不祥。檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)如下：病例數(shù)男性女性平均年齡血小板抗體陽(yáng)性數(shù)抗體陽(yáng)性率貧血（包括再障和溶血性貧血）30314016345.955116.8%白血病99524741.602525.25%血小板減少27111642.30933.33%腫瘤60213956.3311.67%出血90424852.3466.67%骨髓纖維化及骨髓異常綜合癥1912755.74736.84%其它病癥168798948.12137.74%總計(jì)76635740947.5411214.62%臨床應(yīng)用：血小板抗體檢測(cè)方法-固相凝集法臨床輸血與檢驗(yàn)對(duì)844例貧血、白血病、血小板減少及腫瘤等疾病患者進(jìn)行血小血小板多抗血小板CD36單抗酶標(biāo)抗鼠IgG底物離心洗滌孵育洗滌孵育洗滌顯色CD36抗原檢測(cè)（酶聯(lián)免疫法）第一個(gè)檢測(cè)血小板CD36抗原的酶免疫試劑操作簡(jiǎn)便快速高通量，易于自動(dòng)化亞洲人（3-11%）缺失CD36抗原CD36抗體血小板輸注無(wú)效新生兒血小板減少臨床輸血與檢驗(yàn)血小板多抗血小板CD36單抗酶標(biāo)抗鼠IgG底物離心洗滌孵育洗注：4F9和4G2為兩株抗人血小板CD36單克隆抗體。Donor1~Donor6為中國(guó)人血小板。臨床輸血與檢驗(yàn)注：4F9和4G2為兩株抗人血小板CD36單克隆抗體。臨床輸問(wèn)題？1.對(duì)血小板輸注無(wú)效的認(rèn)識(shí)？對(duì)于不相合的紅細(xì)胞輸注，人們肯定不能容忍，而對(duì)于不相合的血小板輸注，人們卻認(rèn)為是常規(guī)。事實(shí)上，血小板輸注無(wú)效，往往也伴隨著死亡—出血而亡。2.中國(guó)人群FMAIT致病抗原？3.中國(guó)人群CD36抗原的缺失及其臨床意義？臨床輸血與檢驗(yàn)問(wèn)題？1.對(duì)血小板輸注無(wú)效的認(rèn)識(shí)？臨床輸血與檢驗(yàn)血小板輸血醫(yī)學(xué)的現(xiàn)狀與展望血小板輸血免疫血液學(xué)基礎(chǔ)血小板特異性同種抗原研究進(jìn)展血小板血型的臨床意義血小板臨床輸注研究進(jìn)展展望臨床輸血與檢驗(yàn)血小板輸血醫(yī)學(xué)的現(xiàn)狀與展望血小板輸血免疫血液學(xué)基礎(chǔ)臨床輸血與國(guó)內(nèi)外成份輸血概況美國(guó)(%)日本(%)上海(%)全血0.51.882.03紅細(xì)胞懸液42.8929.2637.01血小板濃縮液39.9640.7726.13新鮮冷凍血漿11.9628.0936.02冷沉淀4.694.11白細(xì)胞0.61臨床輸血與檢驗(yàn)國(guó)內(nèi)外成份輸血概況美國(guó)(%)日本(%)上海(%)全血0.51