第章基因診斷Genediagnosis中國醫(yī)科

第十四章

基因診斷和基因治療

Genediagnosisand

GeneTherapy

第一節(jié)基因診斷

第二節(jié)基因治療

1第一節(jié)基因診斷重組DNA技術(shù)極大地豐富了我們對人類遺傳病分子病理學(xué)的知識(shí)，同時(shí)也提供了從DNA水平對遺傳病進(jìn)行基因診斷的手段?；蛟\斷：就是利用DNA重組技術(shù)從DNA水平檢測人類遺傳性疾病的基因缺陷，又稱DNA分析法。2一、直接診斷

直接檢測致病基因本身的異常。通常使用基因本身或鄰近的DNA序列作為探針，或通過PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，以檢測基因點(diǎn)突變、缺失、插入等異常及性質(zhì)。它主要適用于已知基因異常疾病的診斷。31、Gene缺失遺傳病的診斷1）α地貧的Gene診斷α基因不同程度的缺失引起不同類型的α地貧，α基因缺失1～4個(gè)。正常Gene組用BamHI切割，可得到14kb的片段，而缺失一個(gè)αGene時(shí)可得到10kb片段。BamHIBamHIα2α1α210kb14kbprobe4以αGene為探針，Southernblot方法檢測αα/αααα/α-αα/--α-/----/--

正常缺1缺2缺3缺414kb10kb52）DMD/BMD的缺失診斷（進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良或假肥大型）DMD是一種嚴(yán)重致死性疾?。╔R），臨床癥狀表現(xiàn)肌肉進(jìn)行性萎縮和乏力。BMD臨床癥狀與DMD相似，但癥狀較輕。Gene定位Xp21，Gene2300kb,79個(gè)Exon，cDNA全長13974bp編碼3685Aa，分子量427kD。DMD/BMD70%左右為缺失型，基因很大，缺失可能發(fā)生在不同的部位。應(yīng)用多重PCR擴(kuò)增檢測，判斷缺失狀態(tài)。6多重PCR擴(kuò)增后電泳檢測結(jié)果病例外顯子12345678Pm34350136476052bp53511372、突變型遺傳病的基因診斷例如：鐮形細(xì)胞貧血的Gene診斷已知突變基因編碼β珠蛋白鏈的第6位密碼子GAG——GTG谷Aa——纈Aa81）RFLP診斷

已知限制酶MstII識(shí)別序列MstII1.15kb

CCTGAGG1.35kbx

probeCCTGTGG突變后不能識(shí)別，酶切位點(diǎn)消失，限制酶切片段長度發(fā)生變化。9限制酶切片段電泳后，經(jīng)SouthernBlot檢測，結(jié)果：1.35kb1.15kb

βΑ/βΑβΑ/βSβS/βS

正常鐮狀鐮狀貧血102）ASO探針診斷斷已知突變Gene部部位和性質(zhì)質(zhì)，合成寡寡和苷酸探探針，32P標(biāo)記，進(jìn)進(jìn)行SouthernBlot雜雜交/斑點(diǎn)點(diǎn)雜交。NormalβΑGeneProbe———與正常βΑ雜交MutationββSGeneProbe———與異常βS雜交11斑點(diǎn)雜交結(jié)結(jié)果：βΑ/βΑβΑ/βSβS/βS正常探針突變探針12二、間接診診斷主要通過Gene和和DNA多多態(tài)的連鎖鎖分析作出出診斷。當(dāng)當(dāng)致病基因因雖然已知知，但其異異常尚屬未未知時(shí)，或或疾病Gene本身身尚屬未知知時(shí)，可通通過對受檢檢者及其家家系進(jìn)行連連鎖分析，，推斷受檢檢者是否獲獲得了帶有有致病基因因的染色體體或DNA片段。。連鎖分析是是基于遺傳標(biāo)記與與Gene連鎖，子代是否否獲得遺傳傳標(biāo)記間接接地判斷做做出診斷。。這些遺傳標(biāo)標(biāo)記是基因因組中的DAN多多態(tài)，如：：RFLP，，VNTR等。131、Gene異常不不明確的遺遺傳病的診診斷例：成年型型多囊腎病病——APKD，AD，臨臨床表現(xiàn)為為腰痛，蛋蛋白尿，血血尿，高血血壓，腎盂盂性腎炎，，腎結(jié)石。。最終導(dǎo)致致腎功能衰衰竭和尿毒毒癥。APKD———Gene定位16p13，但致病病基因尚未未克隆，基基因產(chǎn)物的的生化性質(zhì)質(zhì)和疾病發(fā)發(fā)病機(jī)理也也尚未闡明明，但已證證實(shí)APKDGene與αα珠蛋白基基因3`端端附近的一一段小衛(wèi)星星DNA序序列（3`HVR））緊密連鎖鎖，因此，，可以通過過RFLP連鎖分析析進(jìn)行診斷斷。14以3`HVR為probe與與PvuII酶切后后的家系有有關(guān)成員的的Gene組DNA雜交———SouthernBlot雜交Gene組組DNAprobe（（3`HVR）PvuII酶切DNA片段段雜交結(jié)果15結(jié)果果12123455．7kb3．4kb2．3kb16結(jié)果分析患者（I1、、II1和II2）有3.4kb片片段,說明致致病基因與3.4kb片片段連鎖,并并按孟德爾方方式遺傳.II5不含3.4kb片片段,產(chǎn)前診診斷正常.17PCR—RFLP診斷甲型血友病的的基因診斷，，已知甲型血血友病XR，，獲得家系成成員基因組DNA。PCR142bpBcLI142bp99bp43bp電泳結(jié)果分析？p1p2142bp99bp43bpBclIBclI-BclI+18問:1/Ⅱ2、Ⅲ1診診斷；2/Ⅲ1是男或是是女發(fā)??？142bp99bp12123ⅠⅡIII119結(jié)果分析1）先癥者II2具有99bp片段段而發(fā)病，該該片段來自母母親。2）II2有有142bp/99bp雜合子。142bp來來自父親，為為正常片段，，99bp片片段是來自母母親而成為攜攜帶者。3）Ⅲ1為99bp片段段如果是男性性為患者（（99bp片片段來自母親親）；女性為為攜帶者（來來自父母雙方方）20基因診斷意義義現(xiàn)證病人的診診斷：爭取有有效、針對性性治療。產(chǎn)前診斷：意意義更為重要要，預(yù)防遺傳傳病患兒的出出生END219、靜夜四無鄰鄰，荒居舊業(yè)業(yè)貧。。12月-2212月-22Sunday,December25,202210、雨中黃葉樹樹，燈下白頭頭人。。22:20:5722:20:5722:2012/25/202210:20:57PM11、以我我獨(dú)沈沈久，，愧君君相見見頻。。。12月月-2222:20:5722:20Dec-2225-Dec-2212、故人人江海海別，，幾度度隔山山川。。。22:20:5722:20:5722:20Sunday,December25,202213、乍乍見見翻翻疑疑夢夢，，相相悲悲各各問問年年。。。。12月月-2212月月-2222:20:5822:20:58December25,202214、他他鄉(xiāng)鄉(xiāng)生生白白發(fā)發(fā)，，舊舊國國見見青青山山。。。。25十十二二月月202210:20:58下下午午22:20:5812月月-2215、比不了了得就不不比，得得不到的的就不要要。。。。十二月2210:20下下午12月-2222:20December25,202216、行動(dòng)出出成果，，工作出出財(cái)富。。。2022/12/2522:20:5822:20:5825December202217、做前，，能夠環(huán)環(huán)視四周周；做時(shí)時(shí)，你只只能或者者最好沿沿著以腳腳為起點(diǎn)點(diǎn)的射線線向前。。。10:20:58下下午10:20下下午22:20:5812月-229、沒有失敗，，只有暫時(shí)停停止成功！。。12月-2212月-22Sunday,December25,202210、很多事情努努力了未必有有結(jié)果，但是是不努力卻什什么改變也沒沒有。。22:20:5822:20:5822:2012/25/202210:20:58PM11、成功就是是日復(fù)一日日那一點(diǎn)點(diǎn)點(diǎn)小小努力力的積累。。。12月-2222:20:5822:20Dec-2225-Dec-2212、世間成事事，不求其其絕對圓滿滿，留一份份不足，可可得無限完完美。。22:20:5822:20:5822:20Sunday,December25,202213、不不知知香香積積寺寺，，數(shù)數(shù)里里入入云云峰峰。。。。12月月-2212月月-2222:20:5822:20:58December25,202214、意意志志堅(jiān)堅(jiān)強(qiáng)強(qiáng)的的人人能能把把世世界界放放在在手手中中像像泥泥塊塊一一樣樣任任意意揉揉捏捏。。25十十二二月月202210:20:58下下午午22:20:5812月月-2215、楚塞三湘接接，荊門九派派通。。。十二月2210:20下下午12月-2222:20December25,202216、少年十五二二十時(shí)，步行行奪得胡馬騎騎。。2022/12/2522:20:5822:20:5825December202217、空山新雨后后，天氣晚來來秋。。10:20:58下午午10:20下下午22:20:5812月-229、楊柳柳散和和風(fēng)，，青山山澹吾吾慮。。。12月月-2212月月-22Sunday,December25,202210、閱讀讀一切切好書書如同同和過過去最最杰出出的人人談話話。22:20:5822:20:5822:2012/25/202210:20:58PM11、越是沒沒有本領(lǐng)領(lǐng)的就越越加自命命不凡。。12月-2222:20:5822:20Dec-2225-Dec-2212、越是無無能的人人，越喜喜歡挑剔剔別人的的錯(cuò)兒。。22:20:5822:20:5822:20Sunday,December25,202213、知人者者智，自自知者明明。勝人人者有力力，自勝勝者強(qiáng)。。12月-2212月-2222:20:5822:20:58December25,202214、意志堅(jiān)堅(jiān)強(qiáng)的人人能把世世界放在在手中像像泥塊一一樣任意意揉捏。。25十十二月202210:20:58下下午22:20:5812月-2215、最具挑戰(zhàn)戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)戰(zhàn)莫過于提提升自我。。。十二月2210:20下午12月-2222:20December25,202216、業(yè)業(yè)余余生生活活要要有有意意義義，，不不要要越越軌軌。。2022/12/2522:20:5822:20:5825December202217、一一個(gè)個(gè)人人即即使使已已登登上上頂頂峰峰，，也也仍仍要要自自