第11章嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)

第十一章

嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)一、概述二、正嗜肝DNA病毒屬

(一)土撥鼠肝炎病毒(WHV)(二)地松鼠肝炎病毒(GSHV)(三)樹松鼠肝炎病毒(TSHV)三、禽嗜肝DNA病毒屬(一)鴨乙型肝炎病毒(DHBV)(二)蒼鷺乙型肝炎病毒(HHBV)主要參考文獻(xiàn)

一、概

述很久以前人們就認(rèn)識(shí)到肝炎是一種傳染病，但直到上個(gè)世紀(jì)60年代末，才弄清乙型肝炎病毒(HBV)是傳染性肝炎的一個(gè)重要病因。Dane等(1970)和Robinson等人對(duì)HBV的發(fā)現(xiàn)及其生物學(xué)特性鑒定做出了重要貢獻(xiàn)。但由于該病毒宿主范圍狹窄，又不能在培養(yǎng)的細(xì)胞中增殖，因而對(duì)其研究的進(jìn)展不大。直到90年代以后，HBV感染動(dòng)物模型的建立以及分子遺傳學(xué)的誕生，尤其是HBV基因組克隆的成功，用克隆的HBVDNA可以進(jìn)行體外轉(zhuǎn)染試驗(yàn)，才使人們對(duì)HBV有了更清楚的了解。嗜肝DNA病毒科具有相似的病毒粒子結(jié)構(gòu)和嗜肝特性以及明確的種屬特異性。并可導(dǎo)致持續(xù)性病毒感染。HBV，WHV等可引起慢性活動(dòng)性肝炎和原發(fā)性肝細(xì)胞癌。本科病毒與其他已知病毒科病毒的主要不同點(diǎn)，包括具有部分單鏈的雙鏈DNA基因組、大量顆粒性囊膜抗原分泌到宿主血液中以及由反轉(zhuǎn)錄酶參與形成病毒粒子的獨(dú)特復(fù)制機(jī)理等。1.分類現(xiàn)狀嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)下設(shè)2個(gè)屬：正嗜肝DNA病毒屬和禽嗜肝DNA病毒屬。詳細(xì)分類情況見表11-1。近年來(lái)，在牛、馬、羊、豬、雞等多種動(dòng)物體內(nèi)檢測(cè)到與嗜肝DNA病毒相關(guān)性抗原或類似的病毒粒子，但均未正式確定為獨(dú)立的病毒種。表11-1.嗜肝DNA病毒科的分類現(xiàn)狀科屬代表株成員嗜肝DNA病毒科（Hepadnaviridae）正嗜肝DNA病毒屬人乙型肝炎病毒(HBV)土撥鼠肝炎病毒(Woodchuckhepatitisvirus,WHV)地松鼠肝炎病毒(GroundSquirrelhepatitisvirus,GSHV)樹松鼠肝炎病毒(TreeSquirrelhepatitisvirus,TSHV)禽嗜肝DNA病毒屬鴨乙型肝炎病毒(DuckhepatitisBvirus,DHBV)蒼鷺乙型肝炎病毒(HeronhepatitisBvirus,HHBV)2.形態(tài)結(jié)構(gòu)本科病毒具有相似的病毒粒子結(jié)構(gòu)。嗜肝DNA病毒完整的病毒粒子呈球型，直徑40～49nm(禽嗜肝DNA病毒為45～65nm)。它由囊膜和核衣殼組成，囊膜厚7nm。攜帶乙肝病毒表面抗原（HBsAg），無(wú)表面突起；內(nèi)部核衣殼呈二十面體對(duì)稱，直徑27～35nm(禽嗜肝DNA病毒為35～40nm)，有180個(gè)殼粒，以T=3對(duì)稱排列。核衣殼內(nèi)部含有一個(gè)環(huán)狀DNA分子、DNA多聚酶、DNA結(jié)合蛋白以及蛋白激酶活性。核衣殼攜帶乙肝病毒核心抗原（HBcAg）；在慢性乙型肝炎患者或感染動(dòng)物血清中，可見到無(wú)DNA的22nm左右的球型或纖維狀脂蛋白顆粒。當(dāng)血清中存在毒粒時(shí)，血清中還可發(fā)現(xiàn)一種與核衣殼有關(guān)的可溶性抗原，稱為乙肝病毒e抗原（HBeAg）。外膜攜帶的HBsAg的抗原性比較復(fù)雜，有一個(gè)屬特異性的共同抗原決定簇“a”和至少兩個(gè)亞型決定簇“d/y”和“w/r”。“a”決定簇又可分為a1，a2，a3（Soulieretal1973）；“w”決定簇又可分為w1，w2，w3，w4（Bancroftetal1972;Holland1975），此外，尚有少見的亞型決定簇q、g、n、x和t（Feitelson1985）。其中最常見的主要血清型為adw、adr和ayw。亞型的地區(qū)分布不同（Gourouce—Pautyetal1983），我國(guó)以adr為主，adw次之。而新疆、西藏、內(nèi)蒙等地區(qū)則以ayw為主。二、嗜肝DNA病毒基因組結(jié)構(gòu)與功能嗜肝DNA病毒核酸為具有部分單鏈和部分雙鏈的非共價(jià)閉合環(huán)狀DNA分子，病毒粒子的分子量約為1.6×103～1.8×103kDa，沉降系數(shù)約15S；G+C含量48%。其中一條鏈(負(fù)鏈，與mRNA互補(bǔ))具有全長(zhǎng)序列(3.0～3.3kb)，另一條鏈(正鏈)長(zhǎng)1.7～2.8kb不等，完全雙鏈的克隆的DNA約3.2kb。長(zhǎng)(負(fù))鏈具有一個(gè)242bp缺口(在禽嗜肝DNA病毒為50bp)，其位置起始于短(正)鏈的5'端，兩條鏈的5'端重迭240bp，通過(guò)粘端堿基配對(duì)保持DNA的環(huán)狀構(gòu)型。長(zhǎng)鏈5'端具有共價(jià)結(jié)合的末端蛋白，病毒粒子核心具有DNA聚合酶/反轉(zhuǎn)錄酶，該酶利用短鏈DNA的3'端作為引物修復(fù)單鏈區(qū)以形成全長(zhǎng)的雙鏈分子。HBV病毒基因組有4個(gè)重迭或部分重迭的開放閱讀框架(ORF)，它們均在長(zhǎng)(負(fù))鏈上，方向相同。一個(gè)ORF(S基因)編碼主要的表面抗原(HBsAg)多肽(24kDa)，該基因前有一個(gè)“前S區(qū)”，帶2個(gè)框內(nèi)起始密碼，它們是較少的33kDa和39kDaHBsAg多肽的起始位點(diǎn)。第二個(gè)ORF(C基因)編碼主要的核心抗原(HBcAg)多肽(22kDa或21kDa)，該基因前有一“前C區(qū)”，編碼29個(gè)氨基酸(aa)。最長(zhǎng)的ORF(P基因)占整個(gè)基因組的80%，與其它三個(gè)ORF重迭，它編碼反轉(zhuǎn)錄酶、病毒DNA聚合酶和RNaseH以及連接于基因組的末端蛋白。第四個(gè)ORF稱為X基因，在體外轉(zhuǎn)染試驗(yàn)中呈現(xiàn)反式作用活性，但自然感染中的作用尚不清楚。已知的WHV和GSHV均具有上述4個(gè)ORF，至少在WHV和GSHV，X基因?qū)τ诓《緩?fù)制是必需的。DHBV缺乏X基因。三、病毒蛋白及其功能

HBV囊膜由下述病毒編碼的蛋白組成：S蛋白、M蛋白和L蛋白。病毒核心含有一種主要蛋白，P22或P21。2種主要S多肽分別為P24和GP27，它們的氨基酸組成相同，差別于GP27為糖基化的。M蛋白GP33和GP36由P24和N端另外55個(gè)氨基酸組成，差異在于糖基化的程度，它們具有“前S2”結(jié)構(gòu)域。L蛋白P39和GP42比M蛋白再多出120個(gè)氨基酸，差異在于前者未糖基化，后者糖基化了，兩者具有“前S1”和“前S嗜肝DNA病毒的脂質(zhì)(類)分布在表面抗原顆粒和完整病毒粒子中，它們可能來(lái)源于宿主細(xì)胞的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，包括磷脂、固醇和脂肪酸。嗜肝DNA病毒的糖類成分主要是病毒囊膜中存在的N聚糖和甘露糖。HBV主要有3種抗原:分別為HBsAg、HBcAg和HBeAg。HBsAg與中和性作用有關(guān)。HBsAg與WHV和GSHV的類似抗原(WHsAg和GSHsAg)間呈現(xiàn)一定的交叉反應(yīng)，但與DHBV的類似抗原(DHBsAg)間無(wú)交叉反應(yīng)。HBcAg為病毒核心的主要抗原。HBeAg是在病毒復(fù)制活躍時(shí)的宿主血清中檢測(cè)到的一種可溶性蛋白(抗原)，它與HBcAg的大部分氨基酸序列相同，其羧基末端的149aa與HBcAg氨基末端相同，因此兩者具有共同的抗原決定簇，但由于兩者的氨基末端(HBeAg)和羧基末端(HBcAg)分別多出一段氨基酸序列，彼此又各有不同的抗原決定簇。HBcAg與WHV和GSHV的相應(yīng)抗原(WHcAg和GSHcAg)的交叉反應(yīng)比表面抗原間的交叉反應(yīng)強(qiáng)。四、病毒的復(fù)制周期及分子感染機(jī)理

在HBV感染人的肝臟中至少發(fā)現(xiàn)3種主要的RNA轉(zhuǎn)錄體，分別為3.4kb、2.4kb和2.1kb，它們具有不同的5'端(均有帽結(jié)構(gòu))和相似的3'端，最短的轉(zhuǎn)錄體(2.1kb)起始于前S區(qū)中段，比基因組還長(zhǎng)的轉(zhuǎn)錄體(3.4kb)起始位點(diǎn)靠近C基因起始密碼處。2.1kbmRNA和2.4kbmRNA似乎僅發(fā)現(xiàn)于表達(dá)HBsAg的細(xì)胞中，3種轉(zhuǎn)錄體均出現(xiàn)于支持病毒復(fù)制的細(xì)胞內(nèi)。P39或GP42由2.4kbmRNA翻譯產(chǎn)生，GP33或GP36由2.1kbmRNA翻譯產(chǎn)生，P24或GP27由2.1kbmRNA和其它可能的2kb左右的mRNA翻譯產(chǎn)生，C抗原由3.4kbmRNA翻譯產(chǎn)生。其它嗜肝DNA病毒也具有類似的幾種轉(zhuǎn)錄體。嗜肝DNA病毒的復(fù)制包括幾個(gè)獨(dú)特的步驟：產(chǎn)生共價(jià)閉合環(huán)狀DNA分子(cccDNA)；合成較大的正鏈RNA(3.4kb)，包裝入病毒核心顆粒中作為負(fù)鏈DNA合成的模板(反轉(zhuǎn)錄)；RNaseH酶切直接重復(fù)序列DR1和DR2后，存留的正鏈DNA5'端的轉(zhuǎn)位作用引發(fā)以負(fù)鏈DNA為模板合成正鏈DNA。裝配成成熟病毒粒子后，由細(xì)胞中釋放出來(lái)。完整的HBV粒子和空心的HBV核衣殼的成熟部位似乎為感染肝細(xì)胞的核和胞漿。HBsAg僅在胞漿中和胞膜上檢測(cè)到，但HBV成熟的確切機(jī)理尚缺乏可靠的證據(jù)。嗜肝DNA病毒呈現(xiàn)高度宿主特異性，例如，已知道HBV的唯一宿主是人，但黑猩猩和長(zhǎng)臂猿可經(jīng)實(shí)驗(yàn)感染。DHBV主要感染北京鴨，也可實(shí)驗(yàn)感染野鴨，但雞和鵝等其它家禽對(duì)DHBV不敏感。嗜肝DNA病毒可存活于那些與感染者粘膜或皮膚創(chuàng)口接觸的物品表面，如醫(yī)療、實(shí)驗(yàn)器材等。盡管曾有報(bào)道某些蚊蟲和臭蟲含有HBsAg，但尚無(wú)有關(guān)經(jīng)昆蟲載體傳播的直接證據(jù)。二、正嗜肝DNA病毒屬(Orthohepadnavirus)

正嗜肝DNA病毒包括所有哺乳動(dòng)物嗜肝DNA病毒。其代表種是人乙型肝炎病毒(HBV)。由于HBV對(duì)人類的危害十分嚴(yán)重,對(duì)其研究已經(jīng)非常細(xì)致。事實(shí)上，有關(guān)嗜肝DNA病毒的資料大多數(shù)來(lái)自于對(duì)HBV的研究。目前已經(jīng)明確的正嗜肝DNA病毒屬的動(dòng)物病毒成員包括土撥鼠肝炎病毒(WHV)、地松鼠肝炎病毒(GSHV)。此外還有關(guān)于樹松鼠肝炎病毒(TSHV)的報(bào)道。(一)土撥鼠肝炎病毒(Woodchuckhepatitisvirus)

60至70年代,在美國(guó)費(fèi)城動(dòng)物園的一個(gè)土撥鼠(Marmotamonax)群中流行著一種類似人乙型肝炎的疾病。1977年5月，在該群的102例尸檢的土撥鼠中發(fā)現(xiàn)23例原發(fā)性肝癌，平均59月齡(23～106月齡)。肝臟的典型特征為肝實(shí)質(zhì)門區(qū)和竇狀隙炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，膽管、膽小管增生，肝細(xì)胞變性、壞死，并出現(xiàn)各種類型的炎性細(xì)胞。檢測(cè)這些土撥鼠血清證實(shí)15%具有含DNA聚合酶的HBV樣顆粒。這是土撥鼠肝炎病毒(WHV)的首次報(bào)道。在隨后的調(diào)查中，發(fā)現(xiàn)土撥鼠中WHV的感染率極高。1978～1979年間在賓夕法尼亞?wèn)|南部、新澤西中部和馬里蘭中北部捕獲的217只土撥鼠中，WHV感染率分別為1978：7/51(13.7%)；1979：28/166(16.9%)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)1979年捕獲的166只土撥鼠中49只具有WHV抗體(29.5%)。1.形態(tài)特征

WHV是繼HBV后發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)哺乳動(dòng)物嗜肝DNA病毒，其形態(tài)特征與HBV十分相似。電鏡可見3種不同的顆粒：一種為40～50nm的雙層膜顆粒，它是完整的病毒粒子，相當(dāng)于HBV的Dane顆粒；另一種為直徑20～22nm的球形顆粒；第三種為直徑20～22nm、長(zhǎng)短不一的絲狀顆粒。完整病毒粒子平均CsCl浮密度1.215g/cm3，另外有一個(gè)浮密度為1.2.理化學(xué)特性克隆的WHV基因組DNA約3.3kb，與HBV的核苷酸序列同源性為70%。SDS分析表明，WHV表面抗原(WHsAg)有6種成分，分子量分別為22、25、35、37、39和42kDa。在慢性感染的土撥鼠肝臟中可檢測(cè)到2個(gè)主要轉(zhuǎn)錄體，分別為2.1kb和3.7kb。2.1kbmRNA為S基因的主要轉(zhuǎn)錄體，編碼WHsAg；3.7kbmRNA比WHV基因組DNA略大，可參與WHV所有蛋白質(zhì)的表達(dá)，可編碼WHV核心抗原(WHcAg)，同時(shí)作為反轉(zhuǎn)錄的模板，為前基因組RNA。3.培養(yǎng)特性免疫組織化學(xué)和超微結(jié)構(gòu)分析WHV感染的土撥鼠肝組織發(fā)現(xiàn)WHsAg以微粒或包涵體形式存在于肝細(xì)胞漿中,WHsAg陽(yáng)性細(xì)胞分布于肝小葉周圍區(qū)。WHcAg主要位于細(xì)胞漿中，而不存在于核內(nèi)(與HBcAg不同)。電鏡檢查提示在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中有許多絲狀結(jié)構(gòu)(直徑18～20nm)，無(wú)囊膜的核心顆粒(直徑18～20nm)僅見于胞漿中。有囊膜的顆粒(直徑42～45nm)見于粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)，它們與血清中見到的顆粒在形態(tài)上相同。這表明WHsAg主要在肝細(xì)胞漿中產(chǎn)生，并且似乎迅速裝配成病毒粒子。由WHV感染的土撥鼠分離的外周血淋巴細(xì)胞帶有低水平的非復(fù)制型WHVDNA。當(dāng)這樣的細(xì)胞以脂多糖(LPS)活化時(shí)，可誘導(dǎo)細(xì)胞中WHVDNA復(fù)制，3天后出現(xiàn)WHV核心顆粒，含有WHVDNA復(fù)制中間體、RNA/DNA雜交分子及活化的內(nèi)源性DNA聚合酶。LPS誘導(dǎo)5～7天可見成熟病毒粒子釋放到培養(yǎng)液中。這為循環(huán)淋巴細(xì)胞的慢性WHV感染可重新活化提供了線索。用這樣培養(yǎng)的WHV粒子對(duì)成年土撥鼠進(jìn)行接種試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)注射后8～10周可檢測(cè)到急性感染的血清學(xué)指標(biāo)，并可引起急性肝炎。WHV呈現(xiàn)明顯的組織嗜性，對(duì)實(shí)驗(yàn)感染W(wǎng)HV15個(gè)月后的土撥鼠(包括慢性感染者和急性感染血清學(xué)恢復(fù)者)的10種組織(外周血淋巴細(xì)胞、淋巴結(jié)、脾臟、骨髓、胸腺、胰腺、腎臟、卵巢、睪丸和肝臟)進(jìn)行核酸分析，發(fā)現(xiàn)每只土撥鼠都有幾種組織存在WHV核酸。不同組織和動(dòng)物個(gè)體在WHV核酸出現(xiàn)的頻度、水平以及組織分布和病毒基因組形式上都有差異。肝臟中含有最多的病毒。WHVDNA復(fù)制僅見于慢性感染土撥鼠的肝臟和脾臟內(nèi)，脾臟是所有肝外器官中含有部分雙鏈病毒基因組最多的器官?？祻?fù)動(dòng)物的任何組織均未發(fā)現(xiàn)復(fù)制型WHVDNA。WHVDNA在慢性攜帶者的肝細(xì)胞中分布是均勻的，相反，在肝外組織以及康復(fù)動(dòng)物的肝臟，僅見于分散的細(xì)胞灶中。在另一項(xiàng)研究中，對(duì)肝臟和5種主要淋巴器官(外周血淋巴細(xì)胞、淋巴結(jié)、骨髓、脾臟和胸腺)進(jìn)行了檢測(cè)，在65周內(nèi)的不同時(shí)期將實(shí)驗(yàn)感染的土撥鼠剖殺，發(fā)現(xiàn)WHV感染并不限于肝臟，而且發(fā)生于淋巴系統(tǒng)的主要器官。最先檢測(cè)到WHVDNA的細(xì)胞是骨髓中的淋巴細(xì)胞，其次是肝臟、脾臟、外周血淋巴細(xì)胞、淋巴結(jié)，最后是胸腺。1989年，Aldrich等證明土撥鼠原代肝細(xì)胞對(duì)WHV和GSHV體外感染是敏感的，可產(chǎn)生特異性病毒DNA。蘇拉滅、聚凝膠(polybrene)或ddCTP可阻斷WHV的感染，感染后2天可檢測(cè)到cccDNA，它是病毒RNA轉(zhuǎn)錄的模板。直到感染后7～10天還幾乎檢測(cè)不到病毒復(fù)制中間體，但在以后的幾周中，這種病毒DNA中間體迅速增加。5.病原性

在自然感染的土撥鼠中曾發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的慢性肝炎和肝細(xì)胞癌病例。利用新生土撥鼠實(shí)驗(yàn)感染已證明WHV感染與腫瘤存在一定相關(guān)性。用WHV陽(yáng)性血清進(jìn)行土撥鼠實(shí)驗(yàn)感染，可引發(fā)急性肝炎，肝損傷類似于HBV感染猩猩和人的肝損傷，肝臟中的小壞死灶與淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及少量中性粒細(xì)胞和漿細(xì)胞的聚集有關(guān)。WHV引起的肝炎分為兩種情況：(1)肝門區(qū)肝炎，WHcAg聚集于細(xì)胞漿，而WHsAg位于肝細(xì)胞膜上；(2)門靜脈周圍肝炎，WHcAg位于核內(nèi)，WHsAg主要分布于細(xì)胞漿中。由肝門區(qū)向門靜脈周圍擴(kuò)散似乎是因抗WHV免疫應(yīng)答的部分恢復(fù)不足以抑制病毒復(fù)制而引起的。在重癥肝炎時(shí)，可見到腎臟、脾臟中WHsAg和免疫球蛋白的沉積。1985年，Roth等分析了16個(gè)自然慢性感染W(wǎng)HV的土撥鼠的肝臟，發(fā)現(xiàn)15個(gè)具有慢性肝炎特征，其中10個(gè)呈現(xiàn)慢性活動(dòng)性肝炎，4個(gè)為慢性持續(xù)性肝炎，1個(gè)為肝硬化伴有結(jié)節(jié)性再生。1992年，Peters等在對(duì)705只土撥鼠的病理材料進(jìn)行回顧性分析中，發(fā)現(xiàn)26只有腎小球損傷，組織學(xué)和免疫組織化學(xué)檢測(cè)表明有6只存在免疫介導(dǎo)的腎小球腎炎。6只土撥鼠均為WHV攜帶者，3只患腎小球腎炎，其中2只還有腎小球基底膜增生。這3只土撥鼠的腎小管基底膜上存在宿主免疫球蛋白，其中2只的腎小管周圍有WHcAg。所有3只土撥鼠腎小球內(nèi)均含WHcAg。WHsAg的沉積情況類似于WHcAg，不同的是僅見于混合型腎炎的土撥鼠毛細(xì)管襻周圍。其它3只土撥鼠發(fā)生腎小管基底膜增生，WHsAg和宿主免疫球蛋白主要沉積于腎小管基底膜，未檢測(cè)到WHcAg。透射電鏡分析表明腎小管基底膜增厚，所有6只土撥鼠的腎小管基底膜均有電子致密沉積物。6.傳播與分布

土撥鼠為WHV的自然宿主。該病毒最先發(fā)現(xiàn)于北美洲土撥鼠中，1988年，Jin等報(bào)道了中國(guó)土撥鼠可實(shí)驗(yàn)感染W(wǎng)HV，說(shuō)明不同品種的土撥鼠均可感染。雌性土撥鼠比雄性土撥鼠更易感。不同地區(qū)的土撥鼠感染率不同。對(duì)WHV流行群體出生的新生土撥鼠和胎鼠檢查表明，WHV可垂直感染。

(二)地松鼠肝炎病毒(Groundsquirrelhepatitis

virus)

1980年，Marion等報(bào)道在美國(guó)加利福尼亞北部地區(qū)的健康Beechy地松鼠中發(fā)現(xiàn)了具有HBV和WHV特征的病毒，即地松鼠肝炎病毒(GSHV)。1.形態(tài)特征GSHV病毒粒子的直徑比HBV略大，約47nm，具有厚7nm的外部囊膜和內(nèi)部球形核心。在GSHV感染動(dòng)物血清中也見到三種類型的顆粒，其突出特點(diǎn)是球形表面抗原顆粒直徑15～25nm，含量最少，而纖維狀表面抗原顆粒直徑20～25nm，長(zhǎng)度可達(dá)750nm（是HBV纖維狀顆粒的3倍），這種顆粒含量最多。2.理化學(xué)特性

GSHV基因組大小與HBV相近，約3.2kb～3.3kb。DNA具有一個(gè)PvuⅡ位點(diǎn)和2個(gè)EcoRⅠ位點(diǎn)，這一點(diǎn)與HBV不同。由血清分離的球形顆粒含有23kDa和27kDa兩種多肽。在SDS分析中比HBsAg顆粒的2種主要多肽遷移率快。

GSHV和WHV表面抗原多肽具有相似的肽圖。根據(jù)DNA推測(cè)的蛋白質(zhì)間同源性，GSHV與WHV之間為78%，GSHV與HBV間為43%。GSHV有2種主要轉(zhuǎn)錄體，分別為23kb和35kb，它們都是未剪接的。具有相同的多聚腺苷酸尾。23kbmRNA編碼主要表面抗原(S)多肽和前表面抗原(preS)多肽；35kbmRNA編碼核心抗原(C)，同時(shí)有些分子可作為前基因組RNA。利用NP40處理可顯著降低GSHV的感染性。

4.病原性

GSHV最初分離自健康地松鼠體內(nèi)，雖然也有少量關(guān)于GSHV攜帶者發(fā)生肝癌的報(bào)道，但僅見于持續(xù)感染較長(zhǎng)時(shí)間（4歲以上)后。其致癌性明顯比WHV弱，而且WHV引起肝癌時(shí)間明顯早于GSHV。有人用自然感染的地松鼠血清接種敏感的地松鼠，60%的動(dòng)物在2～3個(gè)月后發(fā)生GSHsAg抗原血癥，少數(shù)動(dòng)物持續(xù)病毒血癥達(dá)9個(gè)月之久。GSHV也表現(xiàn)出強(qiáng)嗜肝特性，在感染動(dòng)物肝臟中可檢測(cè)到病毒DNA。然而急性感染后肝損傷不明顯?？寺〉腉SHVDNA經(jīng)肝內(nèi)接種具有感染性，表現(xiàn)出與接種GSHV病毒粒子相似的特征，但經(jīng)靜脈注射無(wú)感染性。

5.傳播與分布GSHV的自然宿主是地松鼠，不同品種的地松鼠均可感染，GSHV不能感染親緣關(guān)系相近的松鼠，但金花鼠（Chipmunk）可經(jīng)GSHV病毒粒子或克隆的GSHVDNA實(shí)驗(yàn)感染。經(jīng)非腸道途徑接種大鼠、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均不能引起感染。GSHV的感染無(wú)性別差異，但存在地區(qū)性，在分別距離感染群70英里和300英里的2個(gè)地松鼠群中未發(fā)現(xiàn)感染者。(三)樹松鼠肝炎病毒(Treesquirrel

hepatitisvirus)樹松鼠肝炎病毒(TSHV)首先發(fā)現(xiàn)于美國(guó)賓夕法尼亞Reeding附近捕獲的樹松鼠(Sciuruscarolinensispennssylvanicus)。1986年，F(xiàn)eitelson等用檢測(cè)HBV血清學(xué)標(biāo)志的試劑對(duì)94只樹松鼠血清進(jìn)行檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)一例陽(yáng)性，但純化的HBsAg或HBcAg與樹松鼠系列稀釋血清反應(yīng)時(shí)，證明許多具有抗HBs和抗HBc交叉反應(yīng)性抗體。組織學(xué)檢查表明14只動(dòng)物呈現(xiàn)明顯的彌散性壞死灶、門靜脈周圍浸潤(rùn)、膽管周圍炎和/或膽管增生等與病毒性肝炎相一致的變化。其中3只樹松鼠體內(nèi)的病毒DNA聚合酶活性呈陽(yáng)性。經(jīng)密度梯度離心純化的抗原顆粒大小為21～35nm，平均25nm，類似于球形HBsAg或HBcAg顆粒，但未見到成熟病毒粒子。將TSHV相關(guān)性顆粒進(jìn)行SDS分析，觀察到2個(gè)主要蛋白條帶，分別為15.5kDa(p15.5)和17kDa(p17)，某些凝膠上還有另一個(gè)主條帶，14.5kDa(p14.5)。隨后的肽圖分析表明這三種主要成分與HBV、WHV和GSHV的主要表面抗原密切相關(guān)，說(shuō)明它們是TSHV的表面抗原相關(guān)多肽。在SDSPAGE中還可見到另外3條稀淡的條帶，分別為19kDa(p19)、20kDa(p20)和35kDa(p35)，其中p35可能是HBcAg相關(guān)性蛋白質(zhì)。二、禽嗜肝DNA病毒屬(Avihepadnavirus)

禽嗜肝DNA病毒屬的代表種為鴨乙型肝炎病毒(DHBV)，目前該屬已確定的病毒還包括蒼鷺乙型肝炎病毒(HHBV)，其中DHBV一直作為研究HBV、篩選和驗(yàn)證中西藥物抗病毒活性的動(dòng)物病毒模型，通過(guò)研究DHBV感染鴨闡明了嗜肝DNA病毒的復(fù)制過(guò)程。(一)鴨乙型肝炎病毒(DuckhepatitisBvirus)1.形態(tài)特征

DHBV成熟病毒粒子直徑45～65nm不等，蔗糖浮密度為1.15～1.16g/cm2.理化學(xué)特性

DHBV基因組DNA約3kb，與HBV的核苷酸序列同源性極低，但推測(cè)的氨基酸序列十分相似。DHBV基因組編碼3個(gè)ORF，P、S和C，均位于長(zhǎng)鏈上，方向相同。該病毒缺乏正嗜肝DNA病毒所擁有的XORF，在感染鴨體內(nèi)可檢測(cè)到3種主要轉(zhuǎn)錄體，大小分別為3.5kb、2.7kb和2.5kb，其中3.5kbmRNA可作為反轉(zhuǎn)錄模板。SDS分析DHBV囊膜蛋白僅見3個(gè)條帶：18.5kDa、30kDa和38.5kDa。

5.病原性在DHBV感染流行地區(qū)，可見到病毒相關(guān)的各種肝病，包括慢性肝炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌。盡管在肝癌鴨的肝臟中可檢測(cè)到整合型DHBVDNA，而且DHBV感染鴨患肝癌的比率明顯高于未感染鴨，表明DHBV與肝癌發(fā)生間存在一定的相關(guān)性，但該病毒引起肝癌的確切機(jī)理尚不清楚。值得注意的是，DHBV相關(guān)性肝癌僅見于我國(guó)啟東縣等少數(shù)地區(qū)，有人報(bào)道對(duì)DHBV感染鴨進(jìn)行連續(xù)幾年的觀察未發(fā)現(xiàn)肝癌，認(rèn)為肝癌的發(fā)生受多種因素的影響。其中年齡是個(gè)重要因素，通常商品鴨在2歲以內(nèi)，而發(fā)生肝硬化和肝癌需要較長(zhǎng)時(shí)間。用DHBV感染鴨血清接種敏感雛鴨或成鴨均可引起持續(xù)性感染和高滴度病毒血癥，病毒侵及的器官主要是肝臟。利用克隆的DHBVDNA經(jīng)肝內(nèi)注射，可引起雛鴨病毒血癥，產(chǎn)生與自然感染類似的感染狀態(tài)。人工感染實(shí)驗(yàn)表明，DHBV接種時(shí)間與發(fā)生的感染類型存在相關(guān)性，3日齡之前接種引起持續(xù)性病毒血癥，而3日齡之后接種引起持續(xù)性或暫時(shí)性病毒血癥，且僅發(fā)生輕度肝炎。

(二)蒼鷺乙型肝炎病毒(HeronhepatitisBvirus)1988年，Sprengel等報(bào)道了德國(guó)灰色蒼鷺(Ardeacinerea)體內(nèi)的一種DHBV相關(guān)性嗜肝DNA病毒，即蒼鷺乙型肝炎病毒(HHBV)。電鏡下可見血清中有兩種直徑40～60nm的顆粒，與DHBV十分相似，直徑較小的囊膜顆粒明顯多于成熟的病毒粒子。HHBV基因組為具有部分單鏈的雙鏈閉合環(huán)狀DNA分子，長(zhǎng)約3.0kb，含3個(gè)ORF：preC/C，preS/S和P，同樣缺乏哺乳動(dòng)物嗜肝DNA病毒所具有的XORF。HHBV的限制性酶切圖與DHBV有很大不同，兩者的核苷酸序列同源性為78.5%，低于嚙齒類動(dòng)物嗜肝DNA病毒W(wǎng)HV與GSHV間的核苷酸序列同源性(83.6%)。HHBV具有與DHBV相似的蛋白質(zhì)組成。HHBV僅感染蒼鷺，不能感染北京鴨。參考文獻(xiàn)王能進(jìn)等，1995。復(fù)方乙肝解毒丸抗DHBV的研究Ⅱ：治療效果及病理形態(tài)觀察。中國(guó)畜禽傳染病。1：6－8田佩玉等，1991。電鏡觀察鴨乙型肝炎病毒在北京鴨肝內(nèi)的形態(tài)發(fā)生和繁殖動(dòng)態(tài)。中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)。13（2）：108-111冷靜、徐秉棟，1992。雛鴨鴨乙型肝炎病毒人工感染的研究。中華病理學(xué)雜志。21（3）：160-163應(yīng)越英等，1989。鴨乙型肝炎病毒感染的研究。中華病理學(xué)雜志。18（1）：2－4

周翊鐘等，1980。一種可能與鴨肝炎和肝癌相關(guān)的病毒。上海醫(yī)學(xué)。3（11）：1－3侯云德，1990。分子病毒學(xué)。北京：學(xué)苑出版社唐紅等，1990。家畜和家禽中類乙型肝炎病毒存在的初步血清學(xué)調(diào)查。華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)。21（2）：181-184瞿滌等，1992。七個(gè)鴨種攜帶鴨乙型肝炎病毒的研究。中華傳染病學(xué)雜志。4（3）：133－135Aldrich,C.E.,etal.,1989.Invitroinfectionofwoodchuckhepatocyteswithwoodchuckhepatitisvirusandgroundsquirrelhepatitisvirus.Virology,172:247-252Blumberg,B.S.,etal.,1989.HepatitisBvirusandhepatocellularcarcinomatreatmentofHBVcarrierswithphyllanthusamarus.CancerDetectPrev.,14:195-201Condreay,L.D.,etal.,1990.EfficientduckhepatitisBvirusproductionbyanavianlivertumorcellline.J.Virol.,64:3249-3258

Cote,P.J.,Gerin,J.L.,1983.NonoverlappingantigenicsitesofwoodchuckhepatitisvirussurfaceantigenandtheircrossreactivitywithgroundsquirrelhepatitisvirusandhepatitisBvirussurfaceantigens.J.Virol.,47:15-23Dane,D.S.,Cameron,C.H.,1970.ViruslikepartitlesinserumofpatientswithAustraliaantigenassociatedhepatitis.Lancet,1:695-698DeWilde,G.A.,Heijtink,R.A.,1993.ImmunodiscassayforscreeningduckhepatitisBsurfaceantigeninserum,livertissueandculturedhepatocytes.J.Virol.Methods,43:41-51Feitelson,M.A.,etal.,1986.TreesquirrelhepatitisBVirus:Antigenicandstructuralcharacterization.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,83:2994-2997Feitelson,M.A.,Clayton,M.M.,1990.Xantigen/antigodymarkersinhepadnavirusinfections.AntibodiestotheXgeneproduct(s).Gastroenterology,99:500-507Freiman,J.S.,Cossart,E.,1986.NaturalduckhepatitisBvirusinfectioninAustralia.

Aust.J.Exp.Biol.Med.Sci.,64:477-484Freiman,J.S.,etal.,1988.Experiment