干柱色譜講解

PAGEPAGE23干柱色譜指用干填充劑裝成的柱進(jìn)行層析分離的方法，屬于液一固層權(quán)的范疇。其特點(diǎn)是將固定相裝在塑料薄膜柱中可以將柱子上分開(kāi)的各成分任意切開(kāi)。此法已廣泛用于有機(jī)化合物的實(shí)驗(yàn)制備性分離?；驹砼c薄層色譜相同，尤其是不加粘合劑的干板薄層，因此薄層的分離條件可以套用到干柱色譜上。它的優(yōu)點(diǎn)是：(1)分離效果比濕裝柱高。(2)分離條件可用薄層色譜探索，并可把薄層的最佳分離條件直接套用到干柱色譜。(3)由于采用了塑料薄膜柱，對(duì)有熒光或顏色的物質(zhì)，可在紫外線燈下將已分離的各層色帶分別切開(kāi)，避免常規(guī)液相色譜中因流出液收集不當(dāng)而造成的各成分的交叉。(4）適用于制備性分離。(5)設(shè)備簡(jiǎn)單，消耗溶劑少，工時(shí)省。其主要缺點(diǎn)是樣品容量比濕裝柱小，因此，消耗填充劑量大。裝柱非常重要，必須使柱子堅(jiān)實(shí)、平整、均勻，無(wú)空隙，否則會(huì)影響分離效果。介紹一下干法上柱子(干柱色譜)．中國(guó)植提論壇|植提網(wǎng)3N&?0c+\%\6k,X4n+X

１，材料：玻璃柱（聚乙烯柱，PVC柱子），玻璃柱比較常用，（聚乙烯和PVC柱子通常用聚乙烯，PVC薄膜卷成，套在一個(gè)砂濾漏斗上，以漏斗的出口為柱子的出口；也有廠家制作出售的，但是現(xiàn)在已經(jīng)很少見(jiàn)了)

硅膠（柱層析用，有時(shí)后使用泵加壓柱的時(shí)候還可以用薄層用的硅膠H）．4V'^0T.C'T1f

２，硅膠用量：硅膠根據(jù)樣品量用量計(jì)算,一般為（樣品：硅膠）1：70-100左右計(jì)算硅膠用量．也可以根據(jù)手頭的柱子大小計(jì)算所需的硅膠量．（經(jīng)驗(yàn)算式:硅膠量（g）=柱體積ml＊１.５，本算式僅限于３００目硅膠，若是５００目硅膠大約為１.８．另外如果是濕法裝柱子不同的溶劑對(duì)硅膠的溶脹度不一樣，所以系數(shù)還會(huì)小些，一般為１.３）中國(guó)植提論壇|植提網(wǎng)t%Y7\2u6]!]

３，裝法：將硅膠先在１００度的烘箱內(nèi)烘１小時(shí)，也可以不烘，視硅膠的質(zhì)量確定（含水率％）．然后將硅膠徐徐加入柱子中，注意在通風(fēng)櫥里操作，或者帶上口罩．\$N,q*n*Q1t'S.Z

將硅膠加好之后，蹲實(shí)．可以將柱子在較厚的膠皮墊上顛至硅膠表面不再下沉；也可以用膠墊，膠塞從下到上敲擊柱子外壁；還可以用真空泵在出口處抽；總之就是使硅膠緊密無(wú)氣泡，這個(gè)步驟很重要．最后柱子硅膠表面平整而結(jié)實(shí)(S!c8G3T0u|)F#B

４，裝樣：將伴好樣品的硅膠揮干溶劑后，加在硅膠柱上，敲實(shí)，上樣要平．

５，加上保護(hù)空白硅膠，或者棉花，硅藻土．就可以開(kāi)始洗脫柱子了．

６，展開(kāi)劑：要按照TLC可以分開(kāi)的條件再稍加大極性溶媒的比例為好?？梢蕴荻认疵?，也可以等度洗脫，根據(jù)不同的需求來(lái)定．

７，切割柱子：（如果想節(jié)省溶劑，可以采用這個(gè)辦法）將柱子根據(jù)色帶，熒光帶將其用分割成不的部位，標(biāo)記．將柱內(nèi)溶劑放干后，將聚乙烯和PVC柱子根據(jù)記號(hào)直接用刀切割；玻璃柱子可以自制長(zhǎng)把的勺子根據(jù)不同的部位分段掏取，然后裝在不同的柱子中，分別用極性溶劑洗脫，收集洗脫液，即得．

裝柱時(shí)注意要實(shí)，，展開(kāi)最好一次成功，連續(xù)為好

有機(jī)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)經(jīng)過(guò)任一反應(yīng)所合成的有機(jī)化合物，一般總是與許多其它物質(zhì)（其中包括進(jìn)行反應(yīng)的原料、副產(chǎn)物、溶劑等）共存于反應(yīng)體系中，因此在有機(jī)制備中，常需要從復(fù)雜的混合物中分離出所需的物質(zhì)。本人從事實(shí)驗(yàn)小試多年，總結(jié)經(jīng)驗(yàn)如下：

1、重結(jié)晶技術(shù)：

重結(jié)晶是提純固體有機(jī)化合物常用的方法之一。

眾所周知，固體有機(jī)物在任何一溶劑中的溶解度，均隨溫度的升高而增加，所以將一個(gè)有機(jī)化合物在某溶劑中，在較高溫度時(shí)制備成飽和溶液，然后使其冷卻到室溫或降至室溫一下，即會(huì)有部分成結(jié)晶析出。利用溶劑與被提純物和雜質(zhì)的溶解度不同，讓雜質(zhì)全部留在溶液或大部分留在溶液；當(dāng)然，有時(shí)一開(kāi)始析出的結(jié)晶也可能是雜質(zhì)，而需要的組分則在溶液中。通過(guò)，上述我們知道影響重結(jié)晶純化的重要因素是：溶劑的選擇；熱溶液的制備；冷卻析晶

（1）溶劑的選擇

溶劑選擇的條件：

a不與被提純物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；

b溶劑沸點(diǎn)較低，易除去（常壓、減壓蒸餾除去）；

c對(duì)所需組分在高溫和低溫條件下溶解度差異盡量大，而對(duì)雜質(zhì)的溶解度要么很大，要么很?。?/p>

d溶劑價(jià)格便宜、毒性小，容易回收，操作安全。（2）熱溶液的制備

很多人認(rèn)為，制備熱溶液就是將溶液加熱至一定溫度，然后將要結(jié)晶的混合物溶解其中。其實(shí)，熱溶液的制備還是有很多的講究的。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)我認(rèn)為首先，必須先了解選用的溶劑的沸點(diǎn)，熱溶液的溫度應(yīng)同其沸點(diǎn)有一段距離，否則溶劑揮發(fā)量太大，不僅影響重結(jié)晶效果，還會(huì)危害身體健康；其次，熱溶并不是一口氣加入混合物使其溶解，最好的操作應(yīng)該是在升溫的過(guò)程中不斷的攪拌加入混合物，使其飽和。

（3）冷卻析晶

通?？煞譃槌兀ㄊ覝兀⒌蜏匚鼍煞N。至于采用哪種方法則決定于結(jié)晶速度的快慢，晶形要求等因素。如果結(jié)晶速度快，一般采用常溫（室溫，自然冷卻）結(jié)晶，而對(duì)于一些有特殊要求（如，不易結(jié)晶，結(jié)晶慢等）可采用低溫結(jié)晶方式（先自然冷卻至室溫，至于冰箱保鮮層緩慢降溫）。一般來(lái)說(shuō)，我們希望在最短的時(shí)間里得到結(jié)晶，常采用非常手段（如，至于冷水中，冷卻過(guò)程中加以振搖），這要是可以加快結(jié)晶速度，但是它也帶來(lái)很大的弊端。因?yàn)?，快速冷卻，振搖得到的結(jié)晶大多較細(xì)，表面積大，吸附母液多，且容易夾有雜質(zhì)（快速結(jié)晶中雜質(zhì)包裹在晶體中）。

所以，最好是采用自然冷卻。當(dāng)然，加快結(jié)晶的辦法也是有的：用玻璃棒摩擦瓶壁；加入少量晶種引晶。

（4）結(jié)晶的過(guò)濾和洗滌

將析出的結(jié)晶的冷溶液和結(jié)晶的混合物，用抽濾法分出結(jié)晶；瓶中殘留的結(jié)晶，可用少量濾液沖洗幾次，一并轉(zhuǎn)移至布氏漏斗，把母液盡量抽干；用刮刀、空心塞把結(jié)晶壓緊，以便抽干結(jié)晶吸附的含雜質(zhì)的母液；用適量的洗滌液清洗2～3次，可用玻璃棒或刮刀輕輕攪動(dòng)。

（5）結(jié)晶的干燥

若重結(jié)晶的溶劑是石油醚等低沸點(diǎn)溶劑可放于通風(fēng)廚中自然涼干（不吸水的前提下），如果是乙醇等沸點(diǎn)較高的溶劑一定要在高于其沸點(diǎn)10℃的烘箱中放置1～2小時(shí)（低于結(jié)晶熔點(diǎn)20℃以上）。干燥至恒重后，及時(shí)至于干燥器中保存待用。

（6）操作案例

取1.00g4－羥基脯氨酸，在升溫條件下（升溫至55～60℃）加入到乙醇（95％）中，邊用玻棒攪拌溶解，室溫放置，自然冷卻（可用玻棒輕輕摩擦瓶壁），有結(jié)晶析出，冷卻至室溫，布氏漏斗抽濾，空心塞壓緊，水少量洗滌，壓緊抽干，烘箱升溫至2、柱層析技術(shù)：

柱層析通?？煞譃椋焊芍V和濕柱色譜兩種。

這里我將介紹最常用的濕柱色譜以下習(xí)慣稱(chēng)柱層析。

化學(xué)反應(yīng)中得到的產(chǎn)物中通常混有反應(yīng)物、副產(chǎn)物、溶劑（統(tǒng)稱(chēng)雜質(zhì)）的，為進(jìn)行數(shù)據(jù)測(cè)試或則雜質(zhì)在對(duì)下一步反應(yīng)有影響，這時(shí)我們就得盡量的除去這些雜質(zhì)。固體結(jié)晶可通過(guò)上述的重結(jié)晶方法進(jìn)行純化，但對(duì)在要求較高時(shí)通過(guò)重結(jié)晶得到的純度顯然無(wú)法滿足要求；而且對(duì)于液體（油狀物）這一類(lèi)產(chǎn)物時(shí)又不可能通過(guò)柱層析進(jìn)行實(shí)現(xiàn)。這時(shí)，就需要采用柱層析的方法進(jìn)行純化處理以期獲得合格的化合物。將白了，柱層析就是利用不同物質(zhì)在洗脫劑中的展開(kāi)速度不同（跑的快慢曾讀）而進(jìn)行分離。目前，我們最常用的就是以硅膠、氧化鋁兩種物質(zhì)為填充劑的色譜柱，常稱(chēng)為：硅膠柱和氧化鋁柱。這里我們重點(diǎn)介紹便宜且工業(yè)化應(yīng)用廣泛的硅膠柱。

首先，就是確定選用哪種直徑的柱子進(jìn)行柱層析操作。通常實(shí)驗(yàn)室采用直徑在0.5～10cm的柱子，柱高50～70cm。這時(shí)就得根據(jù)你要過(guò)柱的量來(lái)選擇了，通常<0.8g一般采用2.0左右的柱子；2.5cm的柱子用于0.8～2.5g樣品的過(guò)柱；3.5、4cm的柱子用于2.5～5g；6cm的柱子一般用于>5g的混合物。其次，選擇好要用的柱子后就得考慮采用的填料，一般實(shí)驗(yàn)室內(nèi)都采用硅膠填料。硅膠用量差不多為分離物質(zhì)量的40倍左右，當(dāng)然，這也不是絕對(duì)的。如果只是用來(lái)普通的過(guò)濾用用量就可以少下來(lái)。一般用度來(lái)算的話，就是裝柱量在25～30cm為宜（純屬本人經(jīng)過(guò)幾百根柱子下來(lái)的經(jīng)驗(yàn)），太長(zhǎng)則分離時(shí)間太久，短了分離效果不好。接下來(lái)就是考慮如何裝柱了，通常一般實(shí)驗(yàn)室內(nèi)很少碰上無(wú)水、無(wú)氧柱，大家接觸多的是普通柱。本人覺(jué)得濕裝柱屢試不爽，具體操作就是，先往柱中放入少量棉花，加入少量沙子（普通，清洗干凈）加入一定量的洗脫劑，把硅膠溶解于洗脫劑中裝柱，用吸氣球加快硅膠沉淀，再在硅膠上層加入少量沙子形成沙層（1cm左右），這樣一根柱子就裝好了。然后就是上樣（你的樣品需要先濃縮蒸掉大部分溶劑剩下少量剛好成溶液有一定的流動(dòng)性，用膠頭滴管上樣），上樣完就可以開(kāi)始洗脫了，（如果你的樣品是有熒光的那你可以先用薄層板展開(kāi)，知道所要的產(chǎn)物點(diǎn)的Rf值及雜質(zhì)點(diǎn)的Rf值這樣就能夠很好的配制洗脫劑的極性程度，因?yàn)楸影甯枘z色譜柱的原理一樣可以在薄層板展開(kāi)劑的基礎(chǔ)上稍微的調(diào)整一下極性比例），剛開(kāi)始洗脫時(shí)可以采用石油醚等極性小的溶劑先進(jìn)行沖洗然后再用配好的洗脫劑進(jìn)行洗脫，可以用吸氣球進(jìn)行人工加壓，加快洗脫速度。

溶液接收及檢測(cè)：一般采用幾個(gè)三角瓶（錐形瓶）進(jìn)行收集，通過(guò)薄層板（有熒光時(shí)，若沒(méi)有熒光看一下有沒(méi)有色帶收集色帶，如果二者都沒(méi)有那你有點(diǎn)麻煩）判斷要的產(chǎn)物下來(lái)沒(méi)有，下來(lái)后開(kāi)始可以少量收集，接下來(lái)收集量大一點(diǎn)，快沒(méi)熒光時(shí)收集量小一些，對(duì)收集的幾瓶子洗脫液進(jìn)行薄層展開(kāi)，合并同一高度的溶液，濃縮，經(jīng)過(guò)這樣的掐頭去尾就可以得到符合要求的樣品了。

再給大家一個(gè)本人操作的案例一個(gè)：

取某樣品3.80g柱層析；柱子：φ35×260硅膠（300～400目）200ml，石油醚裝柱，少量二氯甲烷溶解，上樣。洗脫，石油醚150ml+洗脫劑（石油醚:丙酮＝4:1）60ml×8。薄層板展開(kāi)顯示3、4、5樣品為所需樣品，合并，濃縮得黃色油狀物1.22g。關(guān)于過(guò)柱的實(shí)驗(yàn)方法和技巧.

常說(shuō)的過(guò)柱子應(yīng)該叫柱層析分離，也叫柱色譜。我們常用的是以硅膠或氧化鋁作固定相

的吸附柱。由于柱分的經(jīng)驗(yàn)成分太多，所以下面我就幾年來(lái)過(guò)柱的體會(huì)寫(xiě)些心得，希望

能有所幫助。

柱子可以分為：加壓，常壓，減壓。

壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度，減少產(chǎn)品收集的時(shí)間，但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù)。所

以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效率最高的，但是時(shí)間也最長(zhǎng)，比如天然化合物的分

離，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的。

減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺(jué)能夠節(jié)省一半甚至更多，但是由于大量的空氣通過(guò)

硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝結(jié)），以及有些比較易分解的東西可能得

不到，而且還必須同時(shí)使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時(shí)間長(zhǎng)）。以前曾經(jīng)大量的過(guò)

減壓柱，對(duì)它有比較深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒(méi)動(dòng)過(guò)減壓的念

頭了。

加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類(lèi)似，只不過(guò)外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力

的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚(yú)缸供氣的就行）。特別是在容易分解

的樣品的分離中適用。壓力不可過(guò)大，不然溶劑走的太快就會(huì)減低分離效果。個(gè)人覺(jué)得

加壓柱在普通的有機(jī)化合物的分離中是比較適用的。

關(guān)于柱子的尺寸，應(yīng)該是粗長(zhǎng)的最好。柱子長(zhǎng)了，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點(diǎn)就小（反映在柱子上就是樣品層比較?。@樣相對(duì)的減小了分離的難度。試想如果柱子十厘米，而樣品就有二厘米，那么分離的難度可想而知，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層只有0.5厘米，那么各組分就比較容易得到完全分離了。當(dāng)然采用粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，不過(guò)這些成本相對(duì)于產(chǎn)品來(lái)說(shuō)也許就不算什么了（有些不環(huán)保的說(shuō)，不過(guò)溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費(fèi)）。

現(xiàn)在見(jiàn)到的柱子徑高比一般在1：5～10，書(shū)中寫(xiě)硅膠量是樣品量的30～40倍，具體的選

擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開(kāi)（是指在所需組分Rf在0.2～0.4，雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少用硅膠，用小柱子（例如200毫克的樣品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我覺(jué)得可以增加柱子的直徑，比如用3cm的，也可以減小淋洗劑的極性等等。

關(guān)于無(wú)水無(wú)氧柱，適用于對(duì)氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品。

可以濕柱，也可以干柱。不過(guò)在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次，因?yàn)槿軇┖凸?/p>

膠飽和時(shí)放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，畢竟要分離的是敏感的東東，小心不為過(guò)。也

是因?yàn)榉蛛x的東西比較敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。至于是

加壓、常壓、減壓，隨需而定。因?yàn)槭莝chlenk操作，所以點(diǎn)板是個(gè)問(wèn)題，如果樣品是顯色的，恭喜了，不用點(diǎn)板，直接看柱子上的色帶就行了。如果樣品無(wú)色，只好準(zhǔn)備幾十個(gè)schlenk瓶，一瓶一瓶的點(diǎn)，不過(guò)幾次之后就知道樣品在哪，也就可以省些了。像我以前過(guò)一根無(wú)水無(wú)氧柱，需要六個(gè)schlenk，現(xiàn)在只一個(gè)就能把所要的全收集到。無(wú)水無(wú)氧柱中用的比較多的是用氧化鋁作固定相。因?yàn)楣枘z中有大量的羥基裸露在外，很容易是樣品分解，特別是金屬有機(jī)化合物和含磷化合物。而氧化鋁可以做成堿性、中性和酸性的，選擇余地比較大，但是比硅膠要貴些。聽(tīng)說(shuō)有個(gè)方法，就是用石英做柱子,然后用HF254做固定相，這樣在柱子外面用紫外燈一照就知道產(chǎn)品在哪里了，沒(méi)有驗(yàn)證過(guò)。哪位做過(guò)可以提出來(lái)大家參詳參詳。

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※關(guān)于濕法、干法上樣。

濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶劑越少越好，不然溶劑就成了淋洗劑了。很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒(méi)關(guān)系。可是有的上樣后在硅膠上又會(huì)析出，這一般都是比較大量的樣品才會(huì)出現(xiàn)，是因?yàn)楣枘z對(duì)樣品的吸附飽和，而樣品本身又是比較好的固體才會(huì)發(fā)生，這就應(yīng)該先重結(jié)晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，如果不能重結(jié)晶那就不管它了，直接過(guò)就是了，樣品隨著淋洗劑流動(dòng)會(huì)溶解的。有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱（比如DMF,DMSO等，會(huì)隨著溶劑一起走，顯色是一個(gè)很長(zhǎng)的脫尾），這時(shí)就必須用干法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說(shuō)法是1：1，我覺(jué)得是越少越好，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說(shuō)明有的樣品沒(méi)有吸附在硅膠上）。

溶劑的選擇。

當(dāng)然是最便宜，最安全，最環(huán)保的了。所以大多選用石油醚，乙酸乙酯。文獻(xiàn)中有寫(xiě)用

正己烷的，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過(guò)因

為極性很小，有時(shí)還是非它不可。乙醚也可以用，但是就是容易睡覺(jué)，注意保持清醒別

讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅膠的吸

附是一個(gè)放熱過(guò)程，所以夏天的時(shí)候經(jīng)常會(huì)在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時(shí)候會(huì)好一些

。甲醇，據(jù)說(shuō)能溶解部分的硅膠，所以產(chǎn)品如果想過(guò)元素分析的話要留神，應(yīng)該經(jīng)過(guò)后

繼處理，比如說(shuō)重結(jié)晶等。其他的溶劑用的相對(duì)較少，要依個(gè)人的不同需要選擇了。由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛），我們這里是用10升或25升的塑料桶裝的，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。經(jīng)常能夠從送來(lái)的大桶底部看見(jiàn)有色的雜質(zhì)，其他的雜質(zhì)就可想而知了，所以在比較嚴(yán)格的柱分時(shí)就要對(duì)溶劑重蒸。當(dāng)然過(guò)原料時(shí)就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。

另外溶劑在過(guò)柱子后最好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費(fèi)，缺點(diǎn)

是要消耗一定的人工。這里要注意的是，一般在過(guò)柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油醚和

乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會(huì)導(dǎo)致極性的變化，一般會(huì)使得極性變大，在梯度淋

洗時(shí)比較合適，正好極性越來(lái)越大了。在過(guò)完柱子后，溶劑最后回收要采用常壓，因?yàn)?/p>

在減壓旋蒸時(shí)會(huì)有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來(lái)，常壓時(shí)就會(huì)減少這種現(xiàn)象，如果雜質(zhì)和

你下面要過(guò)的樣品有反應(yīng)那就慘了。

關(guān)于操作問(wèn)題。

1裝柱。

柱子下面的活塞一定不要涂潤(rùn)滑劑，會(huì)被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以采用四氟節(jié)門(mén)的。

干法和濕法裝柱覺(jué)得沒(méi)什么區(qū)別，只要能把柱子裝實(shí)就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊

密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會(huì)從一側(cè)斜著下來(lái)）。書(shū)中寫(xiě)

的都是不能見(jiàn)到氣泡，我覺(jué)得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒(méi)太大的影響，一加壓氣泡就

全下來(lái)了。當(dāng)然如果你裝的柱子總是有氣泡就說(shuō)明需要多練習(xí)了。但是柱子更忌諱的是

開(kāi)裂，甭管豎的還是橫的，都會(huì)影響分離效果，甚至作廢！

2加樣。

用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開(kāi)，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再

加少量的低極性溶劑，然后再打開(kāi)活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。

加入淋洗劑，一開(kāi)始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了）

，加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。

3淋洗劑的選擇。

感覺(jué)上要使所需點(diǎn)在rf0.2～0.3左右的比較好。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開(kāi)，過(guò)

柱子就用那種極性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分開(kāi)，因?yàn)橹邮且?/p>

個(gè)多次爬板的狀態(tài)，可以通過(guò)公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3

）的三次方或四次方大。

4樣品的收集。

用硅膠作固定相過(guò)柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡。所以如果樣品與硅膠的吸附比

較強(qiáng)的話，就不容易流出。這樣就會(huì)發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以

采用氧化鋁作固定相。另外，收集的試管大小要以樣品量而定，特別是小量樣品，如果用大試管，可能一根就收到了三個(gè)樣品，wuwu。如果都用小試管那工作量又太大。

5最后的處理。

柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會(huì)累積到產(chǎn)品中，所以如果想送

分析，最好用少量的溶劑洗滌一下，因?yàn)榇蟛糠值碾s質(zhì)是溶在溶劑里的，一洗基本就沒(méi)

了，必要時(shí)進(jìn)行重結(jié)晶。另外，再過(guò)柱的時(shí)候，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)氣泡，一是和使用的溶劑有關(guān)，如果是易揮發(fā)的溶劑，如乙醚、二氯甲烷等，在室溫稍高的情況下，很容易出現(xiàn)這種現(xiàn)象，因此，在室溫高的時(shí)候，可以選擇沸點(diǎn)較高，揮發(fā)相對(duì)小的溶劑。還有，使用混合溶劑時(shí)，使用的兩種溶劑的沸點(diǎn)應(yīng)該相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而乙醚卻要選擇30－60的石油醚。二是：不論是用帶砂板的還是塞棉花的，在裝柱之前，都要將空氣用加壓的方法將空氣排干，這樣就可避免柱中有空氣！過(guò)柱子需要耐心，不要著急.

萃取水溶液常用溶劑

B.P.（℃）可燃性**毒性**

注

苯

80.1

3

3

易成乳濁液***;很適宜從緩沖液中提取生物堿及酚類(lèi)

2－丁醇99.5

1

3

高沸點(diǎn);很適宜從緩沖液中提取水溶性物質(zhì)

正丁醇118.0

1

3

水飽和后使用,為常用從水中萃取中等極性物質(zhì)的濃劑.

四氯化碳76.5

0

4

易干燥;很適宜非極性物質(zhì)

氯仿

61.7

0

4

能形成乳濁液易干燥

二乙醚34.5

4

2

吸收大量水;優(yōu)良的通用溶劑

二異丙醚69

5

2

長(zhǎng)期儲(chǔ)存后能形成爆炸性過(guò)氧化物;很適宜從磷酸鹽緩沖的溶液中提取羧酸

乙酸乙酯77.1

3

1

吸附大量水;很適宜極性物質(zhì)

二氯甲烷40

0

1

會(huì)形成乳濁液,易干燥

正戊烷36.1

4

1

烴類(lèi)易于干燥

正己烷69

4

1

對(duì)于極性物質(zhì)均為不良溶劑

正庚烷98.4

3

1

用于有機(jī)液體較強(qiáng)的去水劑

試劑*

與水形成的化合物注

Na**

NaOH,H2

用于烴和醚的去水很出色;不得用于人和鹵代烴

CaH2

Ca(OH)2,H2

最佳去水劑之一;比LiALH4緩慢但效率高相對(duì)較安全.用于烴,醚,胺,酯,C4和更高級(jí)的醇

(勿用于C1,C2,C3醇),不得用于醛和活潑羧基化合物

LiALH4***LiOH,AL(OH)3,H2只使用于惰性溶劑[烴基,芳基鹵(不能用于烷基鹵),醚];能與任何酸性氫和大多數(shù)功能團(tuán)

(鹵,?基,硝基,等等)反應(yīng).使用時(shí)要小心;多余者可慢慢加入乙酸乙酯加以破壞.

BaO或CaoBa(OH)2或Ca(OH)2慢而有效;主要適用于醇類(lèi)和醚類(lèi),但不易用于對(duì)強(qiáng)堿敏感的化合物

P2O5HPO3,H3PO4,H4P2O7非常快而且效率高,高度耐酸,建議先預(yù)干燥.僅用于惰性化合物(尤其適用于烴,醚,鹵代烴

,酸,酐)

用于有機(jī)溶劑的中等強(qiáng)度的干燥劑

干燥劑

容量

速率

注

CaSO4

1/2H2O

極快（1）

以商品名Drieritt出售，加或不加顏色指示劑；非常有效，干時(shí)，指示劑（CoCL2）呈蘭

色，吸水后變成粉紅色（容量CoCL2.6H2O）；適用的溫度范圍為－50～＋86度。某些有機(jī)

溶劑能使CoCL2瀝出或改變顏色（如丙酮，醇類(lèi)，吡啶等）

CaCL2

6H2O

極快（2）

不是很有效；只用于烴或鹵代烴（與含氮和含氮化合物形成溶劑化物，絡(luò)合物，或發(fā)生反

應(yīng)）。

MgSO4

7H2O

極快（4）

出色的通用干燥劑；非常惰性單可能呈弱酸性(避免用于對(duì)酸極敏感的化合物),可能溶于

某些有機(jī)溶劑.

4A分子篩

高

塊（30）

非常有效;建議先用普通干燥劑后用此物(見(jiàn)下述有關(guān)分子篩的詳情)3A分子篩也是出色的

干燥劑

NaSO4

10H2O

慢（290）

非常溫和,非常有效,便宜,高容量;很適于初步干燥,但不可以使溶劑受熱.

K2CO3

2H2O

快

對(duì)于酯腈酮,特別是醇,是良好的干燥劑,不可以用于酸性化合物.

NaOH,KOH

極高

快

高效但只適用于不會(huì)使他們?nèi)芙獾亩栊匀芤?特別適用于胺.

H2SO4

極高

極快

極為有效,但只限于用來(lái)干燥飽和烴或芳香烴或鹵代烴(硫酸會(huì)與烯或其他堿性化合物作用

二使之損失)

氧化鋁或硅膠（SiO2）極高極快

特別適用于烴,應(yīng)該研細(xì);用過(guò)后加熱(SiO2為300度，Al2O3為500度)就可以重新活化。TLC鋪板經(jīng)驗(yàn)大全！?。”由V（TLC）的使用指南

綜述：

薄層色譜（TLC）是一種非常有用的跟蹤反應(yīng)的手段，還可以用于柱色譜分離中合適溶劑的選擇。薄層色譜常用的固定相有氧化鋁或硅膠，它們是極性很大（標(biāo)準(zhǔn)）或者是非極性的（反相）。流動(dòng)相則是一種極性待選的溶劑。在5.301中以及大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)中，都將使用標(biāo)準(zhǔn)硅膠板。將溶液中的反應(yīng)混合物點(diǎn)在薄板上，然后利用毛細(xì)作用使溶劑（或混合溶劑）沿板向上移動(dòng)進(jìn)行展開(kāi)。根據(jù)混合物中組分的極性，不同化合物將會(huì)在薄板上移動(dòng)不同的距離。極性強(qiáng)的化合物會(huì)“粘”在極性的硅膠上，在薄板上移動(dòng)的距離比較短。而非極性的物質(zhì)將會(huì)在流動(dòng)的溶劑相中保留較長(zhǎng)的時(shí)間從而在板上移動(dòng)較大的距離。化合物移動(dòng)的距離大小用Rf值來(lái)表達(dá)。這是一個(gè)位于0～1之間的數(shù)值，它的定義為：化合物距離基線（最先點(diǎn)樣時(shí)已經(jīng)確定）的距離除以溶劑的前鋒距離基線的距離。

薄層色譜（TLC）實(shí)驗(yàn)步驟：

1)切割薄板。通常，買(mǎi)來(lái)的硅膠板都是方形的玻璃板，必需用鉆石頭玻璃刀按照模板的形狀進(jìn)行切割。在切割玻璃之前，用尺子和鉛筆在薄板的硅膠面上輕輕地標(biāo)出基線的位置（注意不要損壞硅膠面）。借助鋒利的玻璃切割刀和一把引導(dǎo)尺，你便可方便地進(jìn)行玻璃切割。當(dāng)整塊玻璃被切割后，你就可以進(jìn)一步將其分成若干獨(dú)立的小塊了。（開(kāi)始的時(shí)候，也許你會(huì)感到有一些難度，但經(jīng)過(guò)一些訓(xùn)練以后，你便會(huì)熟練地掌握該項(xiàng)技術(shù)。）

2)選取合適的溶劑體系?；衔镌诒“迳弦苿?dòng)距離的多少取決于所選取的溶劑不同。在戊烷和己烷等非極性溶劑中，大多數(shù)極性物質(zhì)不會(huì)移動(dòng)，但是非極性化合物會(huì)在薄板上移動(dòng)一定距離。相反，極性溶劑通常會(huì)將非極性的化合物推到溶劑的前段而將極性化合物推離基線。一個(gè)好的溶劑體系應(yīng)該使混合物中所有的化合物都離開(kāi)基線，但并不使所有化合物都到達(dá)溶劑前端，Rf值最好在0.15~0.85之間。雖然這個(gè)條件不一定都能滿足，但這應(yīng)該作為薄層色譜分析的目標(biāo)（在柱色譜中，合適的溶劑應(yīng)該滿足Rf在0.2~0.3之間）。那么，應(yīng)該選取哪些溶劑呢？一些標(biāo)準(zhǔn)溶劑和他們的相對(duì)極性（從LLP中摘錄）列于如下：

強(qiáng)極性溶劑：

甲醇〉乙醇〉異丙醇

中等極性溶劑：

乙氰〉乙酸乙酯〉氯仿〉二氯甲烷〉乙醚〉甲苯

非極性溶劑：

環(huán)己烷，石油醚，己烷，戊烷

常用混合溶劑：

乙酸乙酯/己烷：常用濃度0~30%。但有時(shí)較難在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上完全除去溶劑。

乙醚/戊烷體系：濃度為0~40%的比較常用。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上非常容易除去。

乙醇/己烷或戊烷：對(duì)強(qiáng)極性化合物5~30%比較合適。

二氯甲烷/己烷或戊烷：5~30%，當(dāng)其他混合溶劑失敗時(shí)可以考慮使用。

3)將1~2mL選定的溶劑體系倒入展開(kāi)池中，在展開(kāi)池中放置一大塊濾紙。

4)將化合物在標(biāo)記過(guò)的基線處進(jìn)行點(diǎn)樣。我們用的點(diǎn)樣器是買(mǎi)來(lái)的，此外，點(diǎn)樣器也可從加熱過(guò)的Pasteur吸管上拔下（你可以參照UROP）。在跟蹤反應(yīng)進(jìn)行時(shí)，一定要點(diǎn)上起始反應(yīng)物、反應(yīng)混合物以及兩者的混合物。

5)展開(kāi)：讓溶劑向上展開(kāi)約90%的薄板長(zhǎng)度。

6)從展開(kāi)池中取出薄板并且馬上用鉛筆標(biāo)注出溶劑到達(dá)的前沿位置。根據(jù)這個(gè)算Rf的數(shù)值。

7)讓薄板上的溶劑揮發(fā)掉。

8)用非破壞性技術(shù)觀察薄板。最好的非破壞性方法就是用紫外燈進(jìn)行觀察。將薄板放在紫外燈下，用鉛筆標(biāo)出所有有紫外活性的點(diǎn)。盡管在5.301中不用這種方法，但我們將采用另一常用的無(wú)損方法--用碘染色法。（你可以參看UROP）。

9)用破壞性方式觀測(cè)薄板。當(dāng)化合物沒(méi)有紫外活性的時(shí)候，只能采用這種方法。在5.301中，提供了很多非常有用的染色劑。使用染色劑時(shí)，將干燥的薄板用鑷子夾起并放入染色劑中，確保從基線到溶劑前沿都被浸沒(méi)。用紙巾擦干薄板的背面。將薄板放在加熱板上觀察斑點(diǎn)的變化。在斑點(diǎn)變得可見(jiàn)而且背景顏色未能遮蓋住斑點(diǎn)之前，將薄板從加熱板上取下。

10)根據(jù)初始薄層色譜結(jié)果修改溶劑體系的選擇。如果想讓Rf變得更大一些，可使溶劑體系極性更強(qiáng)些；如果想讓Rf變小，就應(yīng)該使溶劑體系的極性減小些。如果在薄板上點(diǎn)樣變成了條紋狀而不是一個(gè)圓圈狀，那么你的樣品濃度可能太高了。稀釋樣品后再進(jìn)行一次薄板層析，如果還是不能奏效，就應(yīng)該考慮換一種溶劑體系。

11)做好TLC標(biāo)記，計(jì)算每個(gè)斑點(diǎn)的Rf值，并且在筆記本中畫(huà)出圖樣。

TLC顯色試劑的選擇顯色試劑顯色劑可以分成兩大類(lèi)：一類(lèi)是檢查一般有機(jī)化合物的通用顯色劑；另一類(lèi)是根據(jù)化合物分類(lèi)或特殊官能團(tuán)設(shè)計(jì)的專(zhuān)屬性顯色劑。顯色劑種類(lèi)繁多，本章只能列舉一些常用的顯色劑。l．通用顯色劑

硫酸常用的有四種溶液：硫酸-水(1：1)溶液；硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液；1.5mol／L硫酸溶液與0.5-1.5mol／L硫酸銨溶液，噴后110oC烤15min，不同有機(jī)化合物顯不同顏色。

0.5％碘的氯仿溶液對(duì)很多化合物顯黃棕色。

中性0.05％高錳酸鉀溶液易還原性化合物在淡紅背景上顯黃色。

堿性高錳酸鉀試劑還原性化合物在淡紅色背景上顯黃色。溶液I：1％高錳酸鉀溶液；溶液Ⅱ：5％碳酸鈉溶液；溶液I和溶液Ⅱ等量混合應(yīng)用。

酸性高錳酸鉀試劑噴1.6％高錳酸鉀濃硫酸溶液(溶解時(shí)注意防止爆炸)，噴后薄層于180oC加熱15～20min。

酸性重鉻酸鉀試劑噴5％重鉻酸鉀濃硫酸溶液，必要時(shí)150oC烤薄層。

5％磷鉬酸乙醇溶液噴后120oC烘烤，還原性化合物顯藍(lán)色，再用氨氣薰，則背景變?yōu)闊o(wú)色。

⑧鐵氰化鉀-三氯化鐵試劑還原性物質(zhì)顯藍(lán)色，再?lài)?mol／L鹽酸溶液，則藍(lán)色加深。溶液I：1％鐵氰化鉀溶液；溶液Ⅱ：2％三氯化鐵溶液；臨用前將溶液I和溶液Ⅱ等量混合。

2．專(zhuān)屬性顯色劑由于化合物種類(lèi)繁多，因此專(zhuān)屬性顯色劑也是很多的，現(xiàn)將在各類(lèi)化合物中最常用的顯色劑列舉如下：

(1)烴類(lèi)

①硝酸銀／過(guò)氧化氫檢出物：鹵代烴類(lèi)。溶液：硝酸銀O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀釋至200ml，再加30％過(guò)氧化氫1滴。方法：噴后置未過(guò)濾的紫外光下照射；結(jié)果：斑點(diǎn)呈暗黑色。

②熒光素／溴檢出物：不飽和烴。溶液：I．熒光素0.1g溶于乙醇lOOml；Ⅱ．5％溴的四氯化碳溶液。方法：先噴(I)，然后置含溴蒸氣容器內(nèi)，熒光素轉(zhuǎn)變?yōu)樗匿鍩晒馑?曙紅)，熒光消失，不飽和烴斑點(diǎn)由于溴的加成，阻止生成曙紅而保留熒光，多數(shù)不飽和烴在粉紅色背景上呈黃色。

③四氯鄰苯二甲酸酐檢出物：芳香烴。溶液：2％四氯鄰苯二甲酸酐的丙酮與氯代苯(10：1)的溶液。方法：噴后置紫外光下觀察。

④甲醛／硫酸檢出物：多環(huán)芳烴。溶液：37％甲醛溶液O.2ml溶于濃硫酸l0ml。

(2)醇類(lèi)

3，5一二硝基苯酰氯檢出物：醇類(lèi)。溶液：I．2％本品甲苯溶液；Ⅱ．0.5％氫氧化鈉溶液；Ⅲ．O.002％羅丹明溶液。方法：先噴(I)，在空氣中干燥過(guò)夜，用蒸氣薰2min，將紙或薄層通過(guò)試液(Ⅱ)30s，噴水洗，趁濕通過(guò)(Ⅲ)15s，空氣干燥，紫外燈下觀察。

硝酸鈰銨檢出物：醇類(lèi)。溶液：I．1％硝酸鈰銨的0.2mol／L硝酸溶液；Ⅱ．N,N-二甲基-對(duì)苯二胺鹽酸鹽1.5g溶于甲醇、水與乙酸(128m1+25m1+1．5m1)混合液中，用前將(I)與(Ⅱ)等量混合。噴板后于105oC加熱5min。

③香草醛／硫酸檢出物：高級(jí)醇、酚、甾類(lèi)及精油。溶液：香草醛1g溶于硫酸lOOml。方法：噴后于120oC加熱至呈色最深。④二苯基苦基偕肼’檢出物：醇類(lèi)、萜烯、羰基、酯與醚類(lèi)。溶液：本品15mg溶于氯仿25ml中。方法：噴后于110oC加熱5～lOmin。結(jié)果：紫色背景呈黃色斑點(diǎn)。

(3)醛酮類(lèi)

品紅／亞硫酸檢出物：醛基化合物。溶液：I．0.01%品紅溶液，通入二氧化硫直至無(wú)色；Ⅱ．0.05mol／L氯化汞溶液；Ⅲ．O.05mol／L硫酸溶液。方法：將I、Ⅱ、Ⅲ以1：1：10混合，用水稀釋至l00ml。

鄰聯(lián)茴香胺檢出物：醛類(lèi)、酮類(lèi)。溶液：本品乙酸飽和溶液。

2，4-二硝基苯肼檢出物：醛基、酮基及酮糖。溶液：I．0.4％本品的2mol／L鹽酸溶液；Ⅱ．本品O.1g溶于乙醇l00ml中，加濃鹽酸lml。方法：噴溶液I或Ⅱ后，立即噴鐵氰化鉀的2mol／L鹽酸溶液。結(jié)果：飽和酮立即呈藍(lán)色；飽和醛反應(yīng)慢，呈橄欖綠色；不飽和羰基化合物不顯色。

繞丹寧檢出物：類(lèi)胡蘿卜素醛類(lèi)。溶液：I．1%～5%繞丹寧乙醇溶液；Ⅱ．25%氫氧化銨或27%氫氧化鈉溶液。方法：先噴溶液I，再?lài)娙芤孩?，干燥?/p>

(4)有機(jī)酸類(lèi)

1
溴甲酚綠檢出物：有機(jī)酸類(lèi)。溶液：溴甲酚綠0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml。方法：浸板。結(jié)果：藍(lán)色背景產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)。

2
高錳酸鉀／硫酸檢出物：脂肪酸衍生物。溶液：見(jiàn)通用顯色劑酸性高錳酸鉀。

3
過(guò)氧化氫檢出物：芳香酸。溶液：0.3%過(guò)氧化氫溶液。方法：噴后置紫外光(365nm)下觀察。結(jié)果：呈強(qiáng)藍(lán)色熒光。

4
2，5
6-二氯苯酚-靛酚鈉檢出物：有機(jī)酸與酮酸。溶液：0.1%本品的乙醇溶液。方法：噴后微溫。結(jié)果：藍(lán)色背景呈紅色。

(5)酚類(lèi)

1
Emerson試劑(4-氨基安替比林／鐵氰化鉀(Ⅲ))檢出物：酚類(lèi)、芳香胺類(lèi)及揮發(fā)油。溶液：I．4-氨基安替比林1g溶于乙醇100ml；Ⅱ．鐵氰化鉀(Ⅲ)4g溶于水50ml，2
用乙醇稀釋至100ml。方法：先噴溶液I，3
在熱空氣中干燥5min，4
再?lài)娙芤孩颍?
再于熱空氣中干燥5min，6
然后將板置含有氨蒸氣(25％氨溶液)的密閉容器中。結(jié)果：斑點(diǎn)呈橙-淡紅色。揮發(fā)油在亮黃色背景下呈紅色斑點(diǎn)。

7
Boute反應(yīng)檢出物：酚類(lèi)、氯、溴、烷基代酚。方法：將薄層置有NO2蒸氣(含濃硝酸)的容器中3～10min，8
再用NH2蒸氣(濃氨液)處理。

9
氯醌(四氯代對(duì)苯醌)檢出物：酚類(lèi)。溶液：1％本品的甲苯溶液。

10
DDQ(二氯二氰基苯醌)試劑檢出物：酚類(lèi)。溶液：2％本品的甲苯溶液11
TCNE(四氰基乙烯)試劑檢出物：酚類(lèi)、芳香碳?xì)浠?、雜環(huán)類(lèi)、芳香胺類(lèi)。溶液：0.5%～1%本品的甲苯溶液。

12
Gibb’s(2，13
6-二溴苯醌氯亞胺)試劑檢出物：酚類(lèi)。溶液：2%本品的甲醇溶液。⑦氯化鐵檢出物：酚類(lèi)、羥酰胺酸。溶液：1%～5%氯化鐵的0.5mol／L鹽酸溶液。結(jié)果：酚類(lèi)呈藍(lán)色、羥酰胺酸呈紅色。

(6)含氮化合物

①FCNP(硝普鈉／鐵氰化物)試劑檢出物：脂肪族含氮化物，如氨基氰、胍、脲與硫脲及其衍生物，肌酸及肌酐。溶液：10％氫氧化鈉溶液、10％硝普鈉溶液、10％鐵氰化鉀溶液與水按1：1：1：3混合，在室溫至少放置20min，冰箱保存數(shù)周，用前將混合液與丙酮等體積混合。

②Dragendorff(碘化鉍鉀試劑)試劑檢出物：芳香族含氮化合物，如生物堿類(lèi)、抗心律不齊藥物。溶液：I．堿式硝酸鉍0.85g溶于10ml冰醋酸及40ml水中；Ⅱ．碘化鉀8g溶于水20ml中。將上述溶液I及Ⅱ等量混合，置棕色瓶中作為儲(chǔ)備液，用前取儲(chǔ)備液lml、冰醋酸2ml與水l0ml混合。結(jié)果：呈橘紅色斑點(diǎn)。

4-甲基傘形酮檢出物：含氮雜環(huán)化合物。溶液：本品0.02g溶于乙醇35ml，加水至100ml。方法：噴板后置25％氨水蒸氣的容器中,取出后于紫外燈(365nm)下觀察。

碘鉑酸鉀檢出物：生物堿類(lèi)及有機(jī)含氮化物。溶液：10％六氯鉑酸溶液3ml與水97ml混合，加6％碘化鉀溶液，混勻。臨用前配制。

硫酸高鈰銨／硫酸檢出物：生物堿及含碘有機(jī)化物。溶液：硫酸鈰1g混懸于4ml水中，加三氯乙酸1g，煮沸，逐滴加入濃硫酸直至混濁消失。方法：噴后薄層于1l0oC加熱數(shù)分鐘。結(jié)果：阿樸嗎啡、馬錢(qián)子堿、秋水仙堿、罌粟堿、毒扁豆堿與有機(jī)碘化物均能檢出⑥Ehrlich(對(duì)二甲氨基苯甲醛／鹽酸)試劑檢出物：吲哚衍生物及胺類(lèi)。溶液：1％本品的濃鹽酸溶液與甲醇按1：1混合。方法：噴后板于50oC加熱20min。結(jié)果：呈不同顏色的斑點(diǎn)。

(7)胺類(lèi)

①硝酸／乙醇檢出物：脂肪族胺類(lèi)。溶液：50滴65％硝酸于乙醇100ml中。方法：需要時(shí)120oC加熱。

②2，6-二氯醌氯亞胺檢出物：抗氧劑、酰胺(辣椒素)、伯、仲脂肪胺、仲、叔芳香胺、芳香碳?xì)浠?、藥物、苯氧基乙酸除草劑等。溶液：新鮮制備的0.5％～2％本品乙醇溶液。方法：噴后薄層于110oC加熱10min，再用氨蒸氣處理。

③茜素檢出物：胺類(lèi)。溶液：O.1％本品的乙醇溶液。

④丁二酮單肟／氯化鎳檢出物：胺類(lèi)。溶液：I．丁二酮單肟1.2g溶于熱水35ml中，加氯化鎳0．95g，冷卻后加濃氨水2ml；Ⅱ．鹽酸羥胺0.12g溶于200ml水中。方法：將溶液I及Ⅱ混合，放置1天，過(guò)濾。

（5）Pauly(對(duì)氨基苯磺酸)試劑檢出物：酚類(lèi)、胺類(lèi)和能偶合的雜環(huán)化合物。溶液：磺酸4．5g溶于溫?zé)岬?2mol／L鹽酸45ml中，用水稀釋至500ml，取lOml于冰中冷卻，加4．5％亞硝酸鈉冷溶液lOml，于OoC放置15min。用前加等體積10％碳酸鈉溶液。

硫氰酸鈷(Ⅱ)．檢出物：生物堿、伯、仲、叔胺類(lèi)。溶液：硫氰酸銨3g與氯化鈷1g溶于水20ml。結(jié)果：白色至粉紅色背景上呈藍(lán)色斑點(diǎn)，2h后顏色消退。若將薄層噴水或放入飽和水蒸氣容器內(nèi)，可重現(xiàn)色點(diǎn)。

1，2-萘醌-4-磺酸鈉檢出物：芳香胺類(lèi)。溶液：本品0.5g溶于95ml水，加乙酸5ml，濾去不溶物即得。方法：噴后反應(yīng)30min顯色。

葡萄糖／磷酸檢出物：芳香胺類(lèi)。溶液：葡萄糖2g溶于85％磷酸l0ml與水40ml混合液中，再加乙醇與正丁醇各30ml。方法：噴后于115℃加熱l0min。

8)硝基及亞硝基化合物

①α-萘胺檢出物：3，5一二硝基苯甲酸酯、二硝基苯甲酰胺。溶液：I．O．5％α-萘胺乙醇溶液；Ⅱ．10％氫氧化鉀甲醇溶液。方法：先噴溶液I，再?lài)娙芤孩?。結(jié)果：呈紅褐色斑點(diǎn)。②二苯胺／氯化鈀檢出物：亞硝胺類(lèi)。溶液：1.5％二苯胺乙醇溶液與0.1g氯化鈀的0.2％氯化鈉溶液lOOml，按5：1混合。方法:噴后置紫外光(254nm)下觀察。結(jié)果：顯紫色斑點(diǎn)。

(9)氨基酸及肽類(lèi)

①茚三酮檢出物：氨基酸、胺與氨基糖類(lèi)。溶液：本品O.2g溶于乙醇l00ml中。方法：噴后于110oC加熱。結(jié)果：呈紅紫色斑點(diǎn)。

②茚三酮／乙酸鎘檢出物：氨基酸及雜環(huán)胺類(lèi)。溶液：茚三酮1g及乙酸鎘2.5g溶于l0ml冰醋酸中，用乙醇稀釋至500ml。方法：噴后于120oC加熱20min。

③1，2-萘醌-4-磺酸鈉檢出物：氨基酸。溶液：臨用前將本品O.02g溶于5%碳酸鈉l00ml中。方法：噴后室溫干燥。結(jié)果：不同氨基酸呈不同色點(diǎn)。

④靛紅／乙酸鋅檢出物：氨基酸與某些肽類(lèi)。溶液：靛紅1g與乙酸鋅1g溶于95％異丙醇l00ml中，加熱至80oC，冷卻后加乙酸1ml，冰箱保存。方法：噴后于80～85"C加熱30min。

⑤茚三酮／冰醋酸檢出物：二肽及三肽。溶液：1％茚三酮吡啶溶液與冰醋酸按5：1混合。方法：噴后于l00oC加熱5min。

⑥香草醛檢出物：氨基酸及胺類(lèi)。溶液：I．本品1g溶于丙醇50ml中;Ⅱ．1mol／L氫氧化鉀溶液lml，用乙醇稀釋至lOOml。方法：先噴溶液I后于110oC干燥l0min，再?lài)娙芤孩?，?10oC再干燥l0min，于紫外光(365nm)下觀察。

(10)甾類(lèi)

①香草醛／硫酸檢出物：甾體激素。溶液：1％香草醛濃硫酸溶液。方法：噴后于105℃加熱5min。

②氯化錳檢出物：雌激素類(lèi)。溶液：氯化錳0.2g溶于含硫酸2ml的甲醇60ml中。方法：噴后置紫外光(365nm)下觀察。

③高氯酸檢出物：甾體激素。溶液：5％高氯酸甲醇溶液。方法：噴后于110oC加熱5min，置紫外光(365nm)下觀察。

④三氯化銻／乙酸檢出物：甾類(lèi)與二萜類(lèi)。溶液：三氯化銻20g溶于乙酸20ml與氯仿60ml混合液中。方法：噴后于100oC加熱5min，紫外光長(zhǎng)波下觀察。結(jié)果：二萜類(lèi)斑點(diǎn)呈紅黃-藍(lán)紫色。

⑤對(duì)甲苯磺酸檢出物：甾族化合物、黃酮類(lèi)與兒茶酸類(lèi)。溶液：20％本品的氯仿溶液。方法：噴后于100oC加熱數(shù)分鐘，紫外光長(zhǎng)波下觀察。結(jié)果：斑點(diǎn)呈熒光。

⑥氯磺酸／乙酸檢出物：三萜、甾醇與甾族化合物。溶液：氯磺酸5ml在冷卻下加乙酸l0ml溶解。方法：噴后于130oC加熱5～l0min，置紫外光長(zhǎng)波下觀察。結(jié)果；斑點(diǎn)顯熒光。

(11)糖類(lèi)

①茴香胺、鄰苯二酸試劑檢出物：碳?xì)浠衔铩Ｈ芤海?.23g茴香胺及1.66g鄰苯二酸于l00ml95％乙醇中的溶液。方法：噴霧或浸漬。結(jié)果：己糖呈綠色、甲基戊糖呈黃綠色、戊糖呈紫色、糖醛酸呈棕色。

②四乙酸鉛／2，7一二氯熒光素檢出物：甙類(lèi)、酚類(lèi)、糖酸類(lèi)溶液：I．2％四乙酸鉛的冰醋酸溶液；Ⅱ．1％2，7一二氯熒光素乙醇溶液。取溶液I、Ⅱ各5ml混勻，用干燥的苯或甲苯稀釋至200ml，試劑溶液只能穩(wěn)定2h。方法：浸板。

③鄰氨基聯(lián)苯／磷酸檢出物：糖類(lèi)。溶液：O.3g鄰氨基聯(lián)苯加85％磷酸5ml與乙醇95ml。方法：噴板后llOoC加熱15～20min。結(jié)果：斑點(diǎn)呈褐色。

④苯胺／二苯胺／磷酸檢出物：還原糖。溶液：4g二苯胺、4ml苯胺與20ml85％磷酸共溶于200ml丙酮中。方法：噴后于85℃加熱l0min。結(jié)果：產(chǎn)生各種顏色。1，4-己醛糖、低聚糖呈藍(lán)色。

⑤雙甲酮／磷酸檢出物：酮糖。溶液：雙甲酮(5，5-二甲基環(huán)己烷-1，3-二酮)10.3g溶于90ml乙醇與l0ml85％磷酸中。方法：噴板后于110oC加熱15～20min。結(jié)果：日光下觀察，白色背景上呈黃色斑點(diǎn)，紫外光長(zhǎng)波下呈藍(lán)色熒光。

⑥聯(lián)苯胺／三氯乙酸檢出物：糖類(lèi)。溶液：0.5g聯(lián)苯胺溶于l0ml乙酸，再加10ml40％三氯乙酸水溶液，用乙醇稀釋至l00ml。方法：噴后置紫外光下照射15min。結(jié)果：斑點(diǎn)呈灰棕-紅褐色。

⑦對(duì)二甲氨基苯甲醛／乙酰丙酮檢出物：氨基糖類(lèi)。溶液：I.5ml50％氫氧化鉀溶液與20ml乙醇混勻，取此溶液0.5ml，加乙酰丙酮0.5ml與正丁醇50ml的混合液l0ml，此兩種溶液均需新鮮配制，臨用前混合；Ⅱ.1g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶于30ml乙醇中，再加30ml濃鹽酸，需要時(shí)此溶液可用正丁醇180ml稀釋。方法：先噴I后于105oC加熱5min，再?lài)姠颍缓笥?0℃干燥5min。結(jié)果：斑點(diǎn)呈紅色

論壇問(wèn)答：

1在薄層層析中，展開(kāi)劑的選擇很重要，我從事合成時(shí)間不長(zhǎng)，每次選展開(kāi)劑的時(shí)候都不是很恰當(dāng)，請(qǐng)各位經(jīng)驗(yàn)豐富的老師賜教

一種簡(jiǎn)單的辦法是根據(jù)你產(chǎn)的溶解性選擇一種極性最強(qiáng)的溶劑學(xué)（如醇類(lèi)，乙氰等），再根據(jù)你實(shí)際展開(kāi)的情況慢慢加入極性弱的溶劑（如四氯化碳、石油醚、二氯甲烷等）調(diào)節(jié)體系的極性。以得到最好的展開(kāi)效果。

把我的祖?zhèn)髅胤礁嬖V你吧

PE(60-90)

EtAc/PE=1:2

EtAc/PE/AcOH=15:5:1

EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2:1:1:1

8年來(lái)我用這四種體系,沒(méi)有出現(xiàn)過(guò)什么問(wèn)題.

我一直在用的是乙酸乙酯：環(huán)已烷，不斷調(diào)節(jié)比例，直到有滿意的Rf值，有拖尾時(shí)可能要加酸或堿，我一般乙酸和三乙胺。我用了好幾年了，都還好。不妨一試

從展開(kāi)的角度上來(lái)看，確實(shí)能行，如果是分離就不一定行了

分離的話只好調(diào)低一點(diǎn)Rf，還是可以的

氨基酸都有專(zhuān)用的展開(kāi)劑，常用丁醇和水，再加酸堿

極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng)

極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng)

極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng)

拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸

2請(qǐng)問(wèn)：制備薄層板子爬完后，東西怎么取下來(lái)？在不回流的條件下（20-30度）單用甲醇攪半個(gè)小時(shí)可不可以？還有就是我在另外一本書(shū)上看到說(shuō)用乙醇好一些，因?yàn)榧状蓟匕压枘z里帶的雜質(zhì)也沖下來(lái)，實(shí)在不知該怎辦好，請(qǐng)哪位高手幫忙解答解答吧。謝謝先！

如果你所要的東西與想要分離的東西在板子上分的很開(kāi)，你可以把帶有產(chǎn)品的一部分硅膠刮下來(lái)，用乙酸乙脂（參考2樓意見(jiàn)）浸泡，然后慮掉硅膠，把溶劑蒸干就可以了么！

謝謝您的指教，用乙酸乙酯的話，要不要回流?。繒r(shí)間大概要多長(zhǎng)？溫度低的話硅膠上的東西會(huì)不會(huì)掉不下來(lái)呀？還有就是用乙酸乙酯的話，極性夠嗎？能徹底把東西從硅膠上交換下來(lái)嗎？

我一般用丙酮。不要加熱。用洗脫管洗脫，而不是浸泡后過(guò)濾。

乙酸乙酯的極性通常是足夠的，不放心的話可多加點(diǎn)乙酸乙酯，但不要加熱。刮下來(lái)的硅膠粉末加乙酸乙酯，室溫?cái)嚢?小時(shí)，我做過(guò)上百次從沒(méi)遇到問(wèn)題。只要在板上能分開(kāi)，得到的樣品去做400M核磁基本看不出雜質(zhì)。

但我也有很多經(jīng)驗(yàn)表明用甲醇也沒(méi)問(wèn)題。極性比較大的東東（比如用純乙酸乙酯也不好爬起來(lái)的），還是需要用甲醇的，如果板好的的話，雜質(zhì)是不會(huì)有的，但可能會(huì)有少量硅膠帶下。我最推薦用二氯甲烷，容易蒸干，而且NMR簡(jiǎn)單，但可能洗脫能力較乙酸乙酯稍差，對(duì)一般的化合物還是夠了。

請(qǐng)問(wèn)chemie用二氯甲烷極性夠嗎？硅膠上的東西很難下來(lái)吧？還有請(qǐng)問(wèn)lanthanum洗脫管是什么啊？我好像從沒(méi)用到過(guò)呀！

你想想，你一般爬板或過(guò)柱用的洗脫劑極性有多大？既然能從硅膠柱上沖下來(lái)，又何愁不能從硅膠上洗下來(lái)呢？洗脫管我也沒(méi)用過(guò)，愿聞其詳。

洗脫管就是一個(gè)玻璃管，下面縮口，就像一個(gè)小柱子，沒(méi)活塞罷了。使用時(shí)塞一小塊脫脂棉，將從板上刮下的硅膠粉末倒進(jìn)里面，加丙酮洗脫，下面用圓底燒瓶收集滴下來(lái)的洗脫液。既不必加熱也不必?cái)嚢?。用純丙酮作為洗脫劑，?duì)于通常極性（氯仿：甲醇=4：1，硅膠H，CMC，Rf>0.2）的物質(zhì)，均能完全洗脫。如果極性更大，請(qǐng)?jiān)囉眉状肌Ｌ厥馕镔|(zhì)由于溶解性原因，請(qǐng)?jiān)囉枚燃淄椋缛祁?lèi)。

我一直用砂板漏斗，更省心，硅膠粉末也不會(huì)沖下來(lái)。

砂芯漏斗不好洗，尤其對(duì)于不溶物如硅膠。用酒精或者洗液浸泡除去有機(jī)物，用水反沖可以除去大部分無(wú)機(jī)物和不溶物，可總會(huì)有些進(jìn)入狹縫里的除不干凈。感覺(jué)不爽。

請(qǐng)問(wèn)，為什么不使用浸泡后過(guò)濾的方法呢？我為了方便起見(jiàn)一直用的是這種方法，可是發(fā)現(xiàn)對(duì)收率影響比較大，這里面是不是有什么道理呢？

制備薄層的問(wèn)題就是收率比柱層析低很多，死吸附嚴(yán)重，因?yàn)橹右恢痹谟萌軇_。但沒(méi)有辦法，不過(guò)適用于樣品量較少的情況。我有很多核磁都是拿板分的。不推薦使用甲醇浸泡，會(huì)有硅膠峰，氫譜高場(chǎng)區(qū)不好看。我一般是用乙酸乙酯或THF浸泡，室溫下振搖1～2小時(shí)，沙芯漏斗過(guò)濾后旋干即可。

3我要的是氨基酸甲酯,現(xiàn)在合成了它的鹽酸鹽,用飽和碳酸氫鈉溶液調(diào)PH到弱堿性后,無(wú)法萃取出來(lái)(用過(guò)乙醚和乙酸乙酯萃取,大部分還在水里),請(qǐng)教各位大俠如何解決?

你不要用水，不要用碳酸氫鈉，而是用有機(jī)溶劑加三乙胺調(diào)至pH＝8－9左右，季銨鹽析出，濾掉，剩余你的產(chǎn)品在溶劑中，但不要用乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃等極性大的溶劑，會(huì)把季銨鹽溶解，最好選用甲苯、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷之類(lèi)的中等極性的溶劑。

三乙胺的鹽酸鹽溶于二氯甲烷，而且我做過(guò)鹽酸鹽在二氯甲烷中加三乙胺，得不到酯在二氯甲烷中通入氨氣后可得酯，氯化銨在二氯甲烷中基本不溶解

將你的鹽酸鹽分散在乙醚中，然后通氨氣。過(guò)濾，濾餅是氯化銨，濾液蒸干，就是你要的氨基酸酯了。我以前做的丙氨酸乙酯，從酸到酯，收率80％以上。

3過(guò)極性大的物質(zhì)用反柱法。用活性炭，價(jià)廉，效果如何？C18等價(jià)高，再生效果如何？

望作過(guò)這方面工作的老師指導(dǎo)心得。我分離的樣品后兩個(gè)點(diǎn)不易出來(lái)，加大極性時(shí)則托尾混在一起出來(lái)，打算用極性柱

C18價(jià)格高，但只要好好用，別用氯仿等溶劑洗，一根柱子可以反復(fù)用很多次的?；钚蕴汲c(diǎn)量少的雜質(zhì)還行，特別是脫色效果好。你的樣品沒(méi)說(shuō)明性質(zhì)，不好給你建議

c8,c18的柱子，用甲醇：水，梯度洗脫，效果好！

若是酸或胺可以加一點(diǎn)醋酸或三乙胺采用比點(diǎn)板極性小的展開(kāi)劑慢慢過(guò).

4最近需要用制備型的薄層，但是以前又沒(méi)有接觸過(guò)，請(qǐng)問(wèn)制備型薄層的ＣＭＣ黏合劑溶液的濃度多少是最好