組織切片技術(shù)應(yīng)用分解課件

組織切片技術(shù)應(yīng)用分解組織切片技術(shù)應(yīng)用分解1組織石蠟包埋和切片技術(shù)組織切片技術(shù)應(yīng)用分解組織石蠟包埋和切片技術(shù)組織切片技術(shù)應(yīng)用分解2組織石蠟包埋和切片技術(shù)一般步驟：1取材、固定保存原有的形態(tài)結(jié)構(gòu)2洗滌洗脫固定劑3脫水酒精脫水為透明做準(zhǔn)備4透明為透蠟包埋做準(zhǔn)備5透蠟為石蠟包埋做準(zhǔn)備6包埋為切片做準(zhǔn)備7切片一般6-10μm8貼片9染色10封片組織切片技術(shù)應(yīng)用分解組織石蠟包埋和切片技術(shù)一般步驟：組織切片技術(shù)應(yīng)用分解3冰凍切片技術(shù)冰凍切片的種類較多,有低溫恒冷箱冰凍切片法,二氧化碳冰凍切片法,甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法等。一般步驟：1取材2冷凍切片3貼片4酒精固定5染色6封片組織切片技術(shù)應(yīng)用分解冰凍切片技術(shù)冰凍切片的種類較多,有低溫恒冷箱冰凍切片法,4其它制片技術(shù)整封法小型材料如雞胚、蛙胚，經(jīng)固定、染色、脫水、透明、封片，保存。涂片法血液、精液、糞便等，經(jīng)固定、染色、脫水、透明、封片，保存。磨片法牙齒、骨骼、介殼，磨片、封片。浸漬分離法利用藥品使細(xì)胞間質(zhì)溶解，細(xì)胞分離，取單細(xì)胞，染色、脫水、透明、封片，保存。撕碎法材料固定或浸漬到一定程度后，在解剖鏡下撕開(kāi)，取單個(gè)細(xì)胞或纖維染色、封片。壓碎法柔軟的材料，玻片間壓碎，染色、封片。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解其它制片技術(shù)整封法小型材料如雞胚、蛙胚，經(jīng)固定、染色、5組織石蠟包埋和切片技術(shù)步驟（一）材料的采集與分割采集材料應(yīng)根據(jù)制片的目的和要求而定，材料要有代表性，無(wú)病蟲(chóng)害或其它損傷，如要觀察病理解剖，則要取病斑、病癥部位。采下的材料應(yīng)立即放在標(biāo)本箱或濕布包起來(lái)帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分割固定（如有條件也可在試驗(yàn)地采集后進(jìn)行分割固定）。為使固定液能迅速的滲透材料，材料要進(jìn)行分割。分割時(shí)動(dòng)作要迅速。分割塊的大小，宜小不宜大，一般不超過(guò)1cm3，分割后立即殺死固定。

組織切片技術(shù)應(yīng)用分解組織石蠟包埋和切片技術(shù)步驟（一）材料的采集與分割組織切片技術(shù)6（二）殺死與固定殺死動(dòng)物的方法很多，但不論哪種，都要盡力避免動(dòng)物產(chǎn)時(shí)間的陷于痛苦和瀕于死亡狀態(tài)，以免使動(dòng)物的組織細(xì)胞成分結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，或引起病理假象。動(dòng)物殺死后應(yīng)立即取材固定，以免招致會(huì)因失水變形或死后組織變化，組織自溶自組織死亡后就會(huì)開(kāi)始。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解（二）殺死與固定組織切片技術(shù)應(yīng)用分解7固定，就是將新鮮的材料從個(gè)體上取下后立即投入固定劑中，借助化學(xué)藥品的作用使細(xì)胞、組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)保存起來(lái)，不使其改變形態(tài)或變性。固定的意義：防止組織溶解和腐敗使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分沉積保存下來(lái)，保持原有的結(jié)構(gòu)與生活時(shí)相仿。因沉淀及凝固的關(guān)系，使細(xì)胞內(nèi)成分產(chǎn)生不同的折射率，使的細(xì)胞結(jié)構(gòu)變得清晰起來(lái)，而且容易染色。固定劑兼有硬化作用，增加組織硬度，便于后處理。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解固定，就是將新鮮的材料從個(gè)體上取下后立即投入固定劑中，借助化8固定劑的選擇可用于固定劑的藥品應(yīng)符合下列條件：具有很好的穿透性。具有快速的滲透力。不會(huì)改變組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。使細(xì)胞內(nèi)的成分凝固或沉淀。增加細(xì)胞的媒染作用和染色力。使組織適度硬化，易于切片。有保存作用組織切片技術(shù)應(yīng)用分解固定劑的選擇可用于固定劑的藥品應(yīng)符合下列條件：組織切片技術(shù)應(yīng)9常用固定劑的性質(zhì)及使用固定劑有單純固定劑和混合固定劑之分。單純固定劑甲醛（福爾馬林）溶液：市售的為40%甲醛含量。使用時(shí)稀釋為10%即可。特點(diǎn)：滲透力強(qiáng)，但在隨后酒精脫水過(guò)程中收縮很大；不能使蛋白及核蛋白沉淀，對(duì)神經(jīng)、髓鞘固定很好，可固定線粒體、高爾基體?？杀４娼M織。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解常用固定劑的性質(zhì)及使用固定劑有單純固定劑和混合固定劑之分。組10乙醇95%，或100%。特點(diǎn)：可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白。酒精固定的標(biāo)本對(duì)核的染色不良，原因是酒精固定的核蛋白易于溶于水。穿透速度快，硬化顯著，放置過(guò)久會(huì)發(fā)脆，組織收縮厲害。70%酒精可長(zhǎng)期保存材料。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解乙醇95%，或100%。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解11乙酸5%特點(diǎn)：不能沉淀白蛋白，球蛋白，但能沉淀核蛋白，所以染色質(zhì)固定很好。穿透性很好，一般組織只需固定1小時(shí)。組織不會(huì)硬化。缺點(diǎn)：組織易膨脹。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解乙酸5%組織切片技術(shù)應(yīng)用分解12苦味酸（picricacid）強(qiáng)酸特點(diǎn)：易溶于酒精、二甲苯、水，可沉淀一切蛋白，成為不溶于水的蛋白結(jié)合體，但對(duì)脂類無(wú)作用。穿透速度較慢，使組織收縮顯著，一般不單獨(dú)使用。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解苦味酸（picricacid）強(qiáng)酸組織切片技術(shù)應(yīng)用分解134％多聚甲醛溶液進(jìn)行免疫組織化學(xué)方法研究時(shí)常選用該固定液。動(dòng)物灌注固定及后固定（動(dòng)物器官經(jīng)該液灌注后，然后取材，再用該液浸泡2-24小時(shí)）也常選該固定液固定?？捎糜谂囵B(yǎng)細(xì)胞的固定。胚胎材料的固定。單獨(dú)用多聚甲醛固定的細(xì)胞不能使抗體進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此,標(biāo)本固定后必須用非離子去污劑(triton-x

100)透化標(biāo)本。

組織切片技術(shù)應(yīng)用分解4％多聚甲醛溶液組織切片技術(shù)應(yīng)用分解14

4％多聚甲醛溶液（PFA）配制稱取40gPFA溶于裝有500mlDEPC水的玻璃容器（燒杯或燒瓶）中，持續(xù)加熱磁力攪拌至60-65℃,使成乳白色懸液。用1.0mmol/L

的NaOH調(diào)PH至使呈清亮狀（滴加），再加入約500ml

2×PBS，充分混勻（在冰浴或冷水浴中）?？稍贆z測(cè)一下PH，過(guò)濾后定容至1000ml，室溫或4℃（保存?zhèn)溆茫?/p>

組織切片技術(shù)應(yīng)用分解

4％多聚甲醛溶液（PFA）配制組織切片技術(shù)應(yīng)用分解15混合固定劑Zenker氏液升汞（氯化汞，極毒），重鉻酸鉀，硫酸鈉1g，蒸餾水100ml以上為儲(chǔ)存液，儲(chǔ)于棕色瓶中，用時(shí)取95ml儲(chǔ)存液，臨時(shí)加入冰醋酸5ml。常用固定劑，固定時(shí)間12-36小時(shí)，流水沖洗12小時(shí)，70%酒精保存（0.5%碘），脫汞。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解混合固定劑組織切片技術(shù)應(yīng)用分解16Bouin氏液苦味酸飽和水溶液（0.9-1.2%）75ml，甲醛（37-40%）25ml，冰醋酸5ml常用良好的固定劑，適用于一般組織。滲透迅速，固定均勻，組織收縮少，可把一般的細(xì)微結(jié)構(gòu)顯示出來(lái)，對(duì)蘇木精及酸性復(fù)紅易于著色。固定12-24小時(shí)，固定后70%酒精洗滌，保存。特別適用于睪丸活檢組織的固定。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解Bouin氏液組織切片技術(shù)應(yīng)用分解17Carnoy氏液：100%酒精60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml，混合后4℃保存?zhèn)溆?。常用于?xì)胞學(xué)，尤其適于固定染色體，中心粒，固定有絲分裂期細(xì)胞。固定時(shí)間20-40分鐘，大型材料一般不超過(guò)3-4小時(shí)，小鼠睪丸固定30-50分鐘。不能固定太久，否則組織膨脹，硬化。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解Carnoy氏液：100%酒精60ml，氯仿30ml，冰醋酸18固定液（改良液）：95%-100%酒精85ml，冰醋酸5ml，濃甲醛10ml。固定液福爾馬林(38%甲醛)5ml:

冰醋酸5ml:70%酒精90ml又稱標(biāo)準(zhǔn)固定液,萬(wàn)能固定液。適用于一般根,莖,葉,花藥,子房組織切片.在植物形態(tài)解剖研究上應(yīng)用極廣，此固定液最大優(yōu)點(diǎn)是兼有保存劑作用,但對(duì)染色體的觀察效果較差。

組織切片技術(shù)應(yīng)用分解固定液（改良液）：組織切片技術(shù)應(yīng)用分解19（三）洗滌與脫水洗滌，把固定劑從組織中洗脫。酒精無(wú)需沖洗；水溶性固定劑，用流水沖洗；含鉻酸或重鉻酸鉀的固定劑，必須流水沖洗，沖洗時(shí)間與固定時(shí)間相同；含苦味酸的固定劑，流水沖洗12小時(shí)；含氯化汞的固定劑，70%酒精加碘脫汞；去汞后用5%硫代硫酸鈉去碘。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解（三）洗滌與脫水組織切片技術(shù)應(yīng)用分解20脫水是為了組織透蠟，但透蠟之前，要經(jīng)過(guò)二甲苯先行透入?？捎玫拿撍畡阂掖继荻染凭撍浅Ｓ玫姆椒?。丙酮脫水能力比酒精強(qiáng)，但對(duì)組織收縮較大。正丁醇脫水力弱，但對(duì)組織收縮少，可與酒精混合脫水，能溶解石蠟，可不經(jīng)透明直接包埋。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解脫水是為了組織透蠟，但透蠟之前，要經(jīng)過(guò)二甲苯先行透入。組織21（四）透明便于透蠟、包埋。常用透明劑：二甲苯甲苯，可替代二甲苯，但透明較慢。內(nèi)置12-24小時(shí)組織也不變脆，故由于二甲苯。苯氯仿香柏油缺點(diǎn)是透明慢，不宜被石蠟替代。松酯醇適用于一些易碎的組織?？捎诙妆?：4混合透蠟。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解（四）透明組織切片技術(shù)應(yīng)用分解22（五）透蠟及包埋包埋蠟的熔點(diǎn)：軟蠟42-45℃，45-50℃，硬蠟52-54℃，56-60℃要使石蠟硬度與組織硬度相近，組織較硬時(shí)用硬蠟，反之用軟蠟；切片較薄時(shí)用軟蠟（8μm及以下）；室內(nèi)溫度很重要：10-19℃選用52-54℃蠟，室溫高時(shí)用56-58℃蠟。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解（五）透蠟及包埋組織切片技術(shù)應(yīng)用分解23包埋用相應(yīng)的石蠟。使用蠟杯或自制的蠟紙盒包埋。先將一部分液化的石蠟加入杯/盒中，取透蠟好的組織按方位放置與杯/盒，再加入一些液化石蠟，用加熱過(guò)的鑷子在組織周圍游動(dòng)兩圈，消除組織周圍形成的蠟?zāi)?，再加一些液化石蠟，輕吹液化石蠟表面，待出現(xiàn)蠟?zāi)ず蟮怪帽?盒于水中降溫硬化。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解包埋用相應(yīng)的石蠟。使用蠟杯或自制的蠟紙盒包埋。組織切片技術(shù)應(yīng)24（六）切片及貼片使用切片機(jī)連續(xù)切片。厚度6-10μm。注意切片機(jī)的使用。刀的選擇。毛筆的旋轉(zhuǎn)方向。貼片把切片貼于干凈的載玻片上?？少?gòu)買(mǎi)多聚賴氨酸載玻片，也可以自制蛋白液，用時(shí)涂于潔凈的載玻片上。滴加一些蒸餾水，將切片放置于蒸餾水上。加溫，展片，去水，晾干，保存。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解（六）切片及貼片組織切片技術(shù)應(yīng)用分解25（七）染色及封片染色劑：普通組織染色劑蘇木精，伊紅，（HE染色法）；堿性染料結(jié)晶紫、亞甲藍(lán)、天青酸性染料伊紅。結(jié)締組織染色劑Mallory三色染色法：苯胺藍(lán)、橘黃G、酸性復(fù)紅。神經(jīng)組織染色劑：銀染銀鹽沉淀。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解（七）染色及封片組織切片技術(shù)應(yīng)用分解26染料的性質(zhì)發(fā)色團(tuán)助色團(tuán)染料的分類根據(jù)化學(xué)反應(yīng)分為三類：堿性、中性、酸性根據(jù)染色對(duì)象分類：核、胞質(zhì)、脂肪染料。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解染料的性質(zhì)組織切片技術(shù)應(yīng)用分解27石蠟包埋及切片、染色、封片流程1取材、固定（Bouin氏液）0.5X0.5X0.212-24h2洗滌12h3脫水70%酒精45-60min80%酒精45-60min95%酒精45-60min100%酒精30-45min1：1酒精：二甲苯20-30min組織切片技術(shù)應(yīng)用分解石蠟包埋及切片、染色、封片流程1取材、固定（B284透明二甲苯15-20min5透蠟二甲苯：石蠟1：120-30min蠟1，2，3各20-30min6包埋7切片一般6-10μm8貼片37℃過(guò)夜干燥組織切片技術(shù)應(yīng)用分解4透明二甲苯15-20min組織切299染色二甲苯脫蠟1，2各3-5min

二甲苯：酒精1：13-5min100%酒精1-2min95%酒精1-2min80%酒精1-2min50%酒精（可省略）1-2min碘酒精脫汞（只用于升汞固定材料）3-5min蒸餾水1-3min組織切片技術(shù)應(yīng)用分解9染色組織切片技術(shù)應(yīng)用分解30組織切片技術(shù)應(yīng)用分解組織切片技術(shù)應(yīng)用分解31組織石蠟包埋和切片技術(shù)組織切片技術(shù)應(yīng)用分解組織石蠟包埋和切片技術(shù)組織切片技術(shù)應(yīng)用分解32組織石蠟包埋和切片技術(shù)一般步驟：1取材、固定保存原有的形態(tài)結(jié)構(gòu)2洗滌洗脫固定劑3脫水酒精脫水為透明做準(zhǔn)備4透明為透蠟包埋做準(zhǔn)備5透蠟為石蠟包埋做準(zhǔn)備6包埋為切片做準(zhǔn)備7切片一般6-10μm8貼片9染色10封片組織切片技術(shù)應(yīng)用分解組織石蠟包埋和切片技術(shù)一般步驟：組織切片技術(shù)應(yīng)用分解33冰凍切片技術(shù)冰凍切片的種類較多,有低溫恒冷箱冰凍切片法,二氧化碳冰凍切片法,甲醇循環(huán)制冷冰凍切片法等。一般步驟：1取材2冷凍切片3貼片4酒精固定5染色6封片組織切片技術(shù)應(yīng)用分解冰凍切片技術(shù)冰凍切片的種類較多,有低溫恒冷箱冰凍切片法,34其它制片技術(shù)整封法小型材料如雞胚、蛙胚，經(jīng)固定、染色、脫水、透明、封片，保存。涂片法血液、精液、糞便等，經(jīng)固定、染色、脫水、透明、封片，保存。磨片法牙齒、骨骼、介殼，磨片、封片。浸漬分離法利用藥品使細(xì)胞間質(zhì)溶解，細(xì)胞分離，取單細(xì)胞，染色、脫水、透明、封片，保存。撕碎法材料固定或浸漬到一定程度后，在解剖鏡下撕開(kāi)，取單個(gè)細(xì)胞或纖維染色、封片。壓碎法柔軟的材料，玻片間壓碎，染色、封片。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解其它制片技術(shù)整封法小型材料如雞胚、蛙胚，經(jīng)固定、染色、35組織石蠟包埋和切片技術(shù)步驟（一）材料的采集與分割采集材料應(yīng)根據(jù)制片的目的和要求而定，材料要有代表性，無(wú)病蟲(chóng)害或其它損傷，如要觀察病理解剖，則要取病斑、病癥部位。采下的材料應(yīng)立即放在標(biāo)本箱或濕布包起來(lái)帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分割固定（如有條件也可在試驗(yàn)地采集后進(jìn)行分割固定）。為使固定液能迅速的滲透材料，材料要進(jìn)行分割。分割時(shí)動(dòng)作要迅速。分割塊的大小，宜小不宜大，一般不超過(guò)1cm3，分割后立即殺死固定。

組織切片技術(shù)應(yīng)用分解組織石蠟包埋和切片技術(shù)步驟（一）材料的采集與分割組織切片技術(shù)36（二）殺死與固定殺死動(dòng)物的方法很多，但不論哪種，都要盡力避免動(dòng)物產(chǎn)時(shí)間的陷于痛苦和瀕于死亡狀態(tài)，以免使動(dòng)物的組織細(xì)胞成分結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，或引起病理假象。動(dòng)物殺死后應(yīng)立即取材固定，以免招致會(huì)因失水變形或死后組織變化，組織自溶自組織死亡后就會(huì)開(kāi)始。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解（二）殺死與固定組織切片技術(shù)應(yīng)用分解37固定，就是將新鮮的材料從個(gè)體上取下后立即投入固定劑中，借助化學(xué)藥品的作用使細(xì)胞、組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)保存起來(lái)，不使其改變形態(tài)或變性。固定的意義：防止組織溶解和腐敗使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分沉積保存下來(lái)，保持原有的結(jié)構(gòu)與生活時(shí)相仿。因沉淀及凝固的關(guān)系，使細(xì)胞內(nèi)成分產(chǎn)生不同的折射率，使的細(xì)胞結(jié)構(gòu)變得清晰起來(lái)，而且容易染色。固定劑兼有硬化作用，增加組織硬度，便于后處理。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解固定，就是將新鮮的材料從個(gè)體上取下后立即投入固定劑中，借助化38固定劑的選擇可用于固定劑的藥品應(yīng)符合下列條件：具有很好的穿透性。具有快速的滲透力。不會(huì)改變組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。使細(xì)胞內(nèi)的成分凝固或沉淀。增加細(xì)胞的媒染作用和染色力。使組織適度硬化，易于切片。有保存作用組織切片技術(shù)應(yīng)用分解固定劑的選擇可用于固定劑的藥品應(yīng)符合下列條件：組織切片技術(shù)應(yīng)39常用固定劑的性質(zhì)及使用固定劑有單純固定劑和混合固定劑之分。單純固定劑甲醛（福爾馬林）溶液：市售的為40%甲醛含量。使用時(shí)稀釋為10%即可。特點(diǎn)：滲透力強(qiáng)，但在隨后酒精脫水過(guò)程中收縮很大；不能使蛋白及核蛋白沉淀，對(duì)神經(jīng)、髓鞘固定很好，可固定線粒體、高爾基體?？杀４娼M織。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解常用固定劑的性質(zhì)及使用固定劑有單純固定劑和混合固定劑之分。組40乙醇95%，或100%。特點(diǎn)：可沉淀白蛋白、球蛋白、核蛋白。酒精固定的標(biāo)本對(duì)核的染色不良，原因是酒精固定的核蛋白易于溶于水。穿透速度快，硬化顯著，放置過(guò)久會(huì)發(fā)脆，組織收縮厲害。70%酒精可長(zhǎng)期保存材料。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解乙醇95%，或100%。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解41乙酸5%特點(diǎn)：不能沉淀白蛋白，球蛋白，但能沉淀核蛋白，所以染色質(zhì)固定很好。穿透性很好，一般組織只需固定1小時(shí)。組織不會(huì)硬化。缺點(diǎn)：組織易膨脹。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解乙酸5%組織切片技術(shù)應(yīng)用分解42苦味酸（picricacid）強(qiáng)酸特點(diǎn)：易溶于酒精、二甲苯、水，可沉淀一切蛋白，成為不溶于水的蛋白結(jié)合體，但對(duì)脂類無(wú)作用。穿透速度較慢，使組織收縮顯著，一般不單獨(dú)使用。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解苦味酸（picricacid）強(qiáng)酸組織切片技術(shù)應(yīng)用分解434％多聚甲醛溶液進(jìn)行免疫組織化學(xué)方法研究時(shí)常選用該固定液。動(dòng)物灌注固定及后固定（動(dòng)物器官經(jīng)該液灌注后，然后取材，再用該液浸泡2-24小時(shí)）也常選該固定液固定。可用于培養(yǎng)細(xì)胞的固定。胚胎材料的固定。單獨(dú)用多聚甲醛固定的細(xì)胞不能使抗體進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此,標(biāo)本固定后必須用非離子去污劑(triton-x

100)透化標(biāo)本。

組織切片技術(shù)應(yīng)用分解4％多聚甲醛溶液組織切片技術(shù)應(yīng)用分解44

4％多聚甲醛溶液（PFA）配制稱取40gPFA溶于裝有500mlDEPC水的玻璃容器（燒杯或燒瓶）中，持續(xù)加熱磁力攪拌至60-65℃,使成乳白色懸液。用1.0mmol/L

的NaOH調(diào)PH至使呈清亮狀（滴加），再加入約500ml

2×PBS，充分混勻（在冰浴或冷水浴中）?？稍贆z測(cè)一下PH，過(guò)濾后定容至1000ml，室溫或4℃（保存?zhèn)溆茫?/p>

組織切片技術(shù)應(yīng)用分解

4％多聚甲醛溶液（PFA）配制組織切片技術(shù)應(yīng)用分解45混合固定劑Zenker氏液升汞（氯化汞，極毒），重鉻酸鉀，硫酸鈉1g，蒸餾水100ml以上為儲(chǔ)存液，儲(chǔ)于棕色瓶中，用時(shí)取95ml儲(chǔ)存液，臨時(shí)加入冰醋酸5ml。常用固定劑，固定時(shí)間12-36小時(shí)，流水沖洗12小時(shí)，70%酒精保存（0.5%碘），脫汞。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解混合固定劑組織切片技術(shù)應(yīng)用分解46Bouin氏液苦味酸飽和水溶液（0.9-1.2%）75ml，甲醛（37-40%）25ml，冰醋酸5ml常用良好的固定劑，適用于一般組織。滲透迅速，固定均勻，組織收縮少，可把一般的細(xì)微結(jié)構(gòu)顯示出來(lái)，對(duì)蘇木精及酸性復(fù)紅易于著色。固定12-24小時(shí)，固定后70%酒精洗滌，保存。特別適用于睪丸活檢組織的固定。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解Bouin氏液組織切片技術(shù)應(yīng)用分解47Carnoy氏液：100%酒精60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml，混合后4℃保存?zhèn)溆谩３Ｓ糜诩?xì)胞學(xué)，尤其適于固定染色體，中心粒，固定有絲分裂期細(xì)胞。固定時(shí)間20-40分鐘，大型材料一般不超過(guò)3-4小時(shí)，小鼠睪丸固定30-50分鐘。不能固定太久，否則組織膨脹，硬化。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解Carnoy氏液：100%酒精60ml，氯仿30ml，冰醋酸48固定液（改良液）：95%-100%酒精85ml，冰醋酸5ml，濃甲醛10ml。固定液福爾馬林(38%甲醛)5ml:

冰醋酸5ml:70%酒精90ml又稱標(biāo)準(zhǔn)固定液,萬(wàn)能固定液。適用于一般根,莖,葉,花藥,子房組織切片.在植物形態(tài)解剖研究上應(yīng)用極廣，此固定液最大優(yōu)點(diǎn)是兼有保存劑作用,但對(duì)染色體的觀察效果較差。

組織切片技術(shù)應(yīng)用分解固定液（改良液）：組織切片技術(shù)應(yīng)用分解49（三）洗滌與脫水洗滌，把固定劑從組織中洗脫。酒精無(wú)需沖洗；水溶性固定劑，用流水沖洗；含鉻酸或重鉻酸鉀的固定劑，必須流水沖洗，沖洗時(shí)間與固定時(shí)間相同；含苦味酸的固定劑，流水沖洗12小時(shí)；含氯化汞的固定劑，70%酒精加碘脫汞；去汞后用5%硫代硫酸鈉去碘。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解（三）洗滌與脫水組織切片技術(shù)應(yīng)用分解50脫水是為了組織透蠟，但透蠟之前，要經(jīng)過(guò)二甲苯先行透入。可用的脫水劑：乙醇梯度酒精脫水是常用的方法。丙酮脫水能力比酒精強(qiáng)，但對(duì)組織收縮較大。正丁醇脫水力弱，但對(duì)組織收縮少，可與酒精混合脫水，能溶解石蠟，可不經(jīng)透明直接包埋。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解脫水是為了組織透蠟，但透蠟之前，要經(jīng)過(guò)二甲苯先行透入。組織51（四）透明便于透蠟、包埋。常用透明劑：二甲苯甲苯，可替代二甲苯，但透明較慢。內(nèi)置12-24小時(shí)組織也不變脆，故由于二甲苯。苯氯仿香柏油缺點(diǎn)是透明慢，不宜被石蠟替代。松酯醇適用于一些易碎的組織?？捎诙妆?：4混合透蠟。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解（四）透明組織切片技術(shù)應(yīng)用分解52（五）透蠟及包埋包埋蠟的熔點(diǎn)：軟蠟42-45℃，45-50℃，硬蠟52-54℃，56-60℃要使石蠟硬度與組織硬度相近，組織較硬時(shí)用硬蠟，反之用軟蠟；切片較薄時(shí)用軟蠟（8μm及以下）；室內(nèi)溫度很重要：10-19℃選用52-54℃蠟，室溫高時(shí)用56-58℃蠟。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解（五）透蠟及包埋組織切片技術(shù)應(yīng)用分解53包埋用相應(yīng)的石蠟。使用蠟杯或自制的蠟紙盒包埋。先將一部分液化的石蠟加入杯/盒中，取透蠟好的組織按方位放置與杯/盒，再加入一些液化石蠟，用加熱過(guò)的鑷子在組織周圍游動(dòng)兩圈，消除組織周圍形成的蠟?zāi)?，再加一些液化石蠟，輕吹液化石蠟表面，待出現(xiàn)蠟?zāi)ず蟮怪帽?盒于水中降溫硬化。組織切片技術(shù)應(yīng)用分解包埋用相應(yīng)的石蠟。使用蠟杯或自制的蠟紙盒包埋。組織切片技術(shù)應(yīng)54（六）切片及貼片使用切片機(jī)連續(xù)切片。厚度6-10μm。注意切片機(jī)的使用。刀的選擇。毛筆的旋轉(zhuǎn)方向。貼片把切片貼于干凈的載玻片上?？少?gòu)買(mǎi)多聚賴氨酸載