獸醫(yī)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)課件

獸醫(yī)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物醫(yī)學(xué)、制藥專(zhuān)業(yè)本課程實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)一藥理實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)實(shí)驗(yàn)二

不同給藥途徑對(duì)藥物效應(yīng)的影響實(shí)驗(yàn)三藥物的協(xié)同作用和拮抗作用實(shí)驗(yàn)四動(dòng)物機(jī)能狀態(tài)對(duì)藥物作用的影響

實(shí)驗(yàn)五利多卡因和普魯卡因的表面麻醉作用觀察實(shí)驗(yàn)六藥物敏感性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)七磺胺類(lèi)藥物內(nèi)服給藥后的血中藥物濃度測(cè)定實(shí)驗(yàn)八

鏈霉素急性毒性反應(yīng)及解救實(shí)驗(yàn)九有機(jī)磷酸酯類(lèi)中毒及解救實(shí)驗(yàn)一藥理實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)目的掌握基本操作，鍛煉動(dòng)手、動(dòng)腦能力；更好地掌握藥理學(xué)基本理論知識(shí)；培養(yǎng)科學(xué)思維實(shí)驗(yàn)報(bào)告的書(shū)寫(xiě)題目目的原理材料：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，器材，藥品方法：用自己的語(yǔ)言簡(jiǎn)單扼要描述出來(lái)；結(jié)果：要求真實(shí)、清楚；討論：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較、分析；實(shí)驗(yàn)中有哪些不足之處；結(jié)果異常或失敗的原因；結(jié)論：將實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行歸納總結(jié)，應(yīng)帶有提示性質(zhì)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基本原則隨機(jī)原則使每一實(shí)驗(yàn)對(duì)象都有同等的機(jī)會(huì)抽到實(shí)驗(yàn)組或?qū)φ战M中，除處理因素外其他因素盡可能均衡一致，從而抵消非實(shí)驗(yàn)因素的影響。對(duì)照原則組間對(duì)照：陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照，同因素不同水平對(duì)照；自身前后對(duì)照重復(fù)原則實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物的選擇小白鼠：適用于需大量動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)，如某些藥物的篩選，半數(shù)致死量的測(cè)定。也較適用于避孕藥實(shí)驗(yàn)、抗炎鎮(zhèn)痛藥實(shí)驗(yàn)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥實(shí)驗(yàn)、抗腫瘤藥及抗衰老藥實(shí)驗(yàn)等。大白鼠：比較適用于抗炎藥物實(shí)驗(yàn)，血壓測(cè)定、利膽、利尿藥實(shí)驗(yàn)，也可用于進(jìn)行亞急性和慢性毒性實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物動(dòng)物的選擇

豚鼠：因其對(duì)組胺敏感，并易于致敏，故常被選用于抗過(guò)敏藥、平喘藥和抗組胺藥的實(shí)驗(yàn)。也常用于離體心臟、心房、腸管實(shí)驗(yàn)。又因它對(duì)結(jié)核敏感，常用于抗結(jié)核病藥的實(shí)驗(yàn)。家兔：常用于觀察研究腦電生理作用，藥物對(duì)小腸的作用。由于家兔體溫變化敏感，也常用于體溫實(shí)驗(yàn)，用于熱原檢查。狗：狗是記錄血壓，呼吸最常用的大動(dòng)物。還可利用狗做成胃瘺、腸瘺，以觀察藥物對(duì)胃腸蠕動(dòng)和分泌的影響。在進(jìn)行慢性毒性實(shí)驗(yàn)時(shí)，也常采用狗。動(dòng)物捉拿及固定方法豚鼠

豚鼠性情溫和不咬人，用手握住軀干即可。家兔

可用一手抓住家兔頸背部皮膚，將兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿勢(shì)。在進(jìn)行仰位手術(shù)操作時(shí)，可用繩帶將其四肢仰位捆綁在兔手術(shù)臺(tái)上。頭部用兔頭固定夾固定。動(dòng)物的給藥方法小白鼠

腹腔注射(i.p.)：以左手固定小鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度角將針頭從下腹部向頭端刺入腹腔。進(jìn)針部位不宜過(guò)高，刺入不宜太深，以免傷及內(nèi)臟。小鼠腹腔注射量一般為0.1-0.3ml／l0g?！痢碳∪庾⑸洌╥.m.）：小鼠因肌肉較少，很少采用肌肉注射，若有需要可注射于股部肌肉，多選后腿上部外側(cè)，一處注射量不超過(guò)0.1mL。動(dòng)物的給藥方法家兔

灌胃：需兩人合作進(jìn)行。一人取坐位用兩腿夾持兔身，左手握家兔雙耳，右手抓住兩前肢。另一人將木制開(kāi)口器橫插家兔口內(nèi)，壓住舌頭并固定之。取8號(hào)導(dǎo)尿管從開(kāi)口器中部小孔插入食道。插管時(shí)如誤入氣管會(huì)出現(xiàn)動(dòng)物的掙扎和呼吸困難。也可將導(dǎo)尿管的外端浸入水中，如有氣泡吹出，表示插在氣管內(nèi)，此時(shí)應(yīng)拔管重插。當(dāng)判明導(dǎo)尿管在食道以?xún)?nèi)后，用注射器接通導(dǎo)尿管將藥液推入。動(dòng)物的給藥方法家兔

皮下、肌肉、腹腔注射：給藥方法基本上同小鼠，唯針頭可稍大，給藥量可稍多。皮下與肌內(nèi)為0.5-1.0/mg，腹腔為1.0-5.0ml/mg

靜脈注射：將家兔置固定箱內(nèi)，撥去耳殼外緣的毛，選擇一條比較明顯的耳緣靜脈（兔耳外緣的血管為靜脈，中央的血管為動(dòng)脈，如圖），用酒精棉球涂擦皮膚，使血管顯露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指墊在兔耳注射處的下面，右手持注射器，將針頭從近耳尖處刺入，當(dāng)確認(rèn)針頭在血管中后，將藥液推入。實(shí)驗(yàn)二

不同給藥途徑對(duì)藥物效應(yīng)的影響

實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察不同給藥途徑對(duì)藥物效應(yīng)的影響。實(shí)驗(yàn)材料

l.0ml注射器、針頭、小鼠灌胃針頭、燒杯、普通天平、3.5％硫酸鎂溶液觀察指標(biāo)

動(dòng)物活動(dòng)增加情況、呼吸急促、反射亢進(jìn)、震顫、驚厥及死亡時(shí)間、炭末推進(jìn)率等。實(shí)驗(yàn)方法取禁食12h的昆明種小鼠3只，稱(chēng)重，分別標(biāo)為對(duì)照組、灌胃組和腹腔注射組按以下給藥：

A：對(duì)照組：灌胃給生理鹽水0.2ml/10g；

B：灌胃組：灌胃給3.5％硫酸鎂溶液0.2ml/10g；

C：腹腔注射組：腹腔注射給3.5％硫酸鎂溶液0.2ml/10g。給藥后注意觀察動(dòng)物的活動(dòng)情況，是否有肌肉松弛的表現(xiàn)。

15min后每只小鼠均灌胃給予5%炭末阿拉伯膠混懸液0.2ml。

炭末灌胃后15min，將小鼠脫臼處死，剖開(kāi)腹腔，取出胃腸道。剪去附著在腸管上的腸系膜,將腸管不加牽引地輕輕地平鋪在玻璃板上(玻璃板上滴少許鹽水)。以幽門(mén)為起點(diǎn),測(cè)量炭末在腸管內(nèi)的移動(dòng)距離和小腸(自幽門(mén)至回盲部)的全長(zhǎng),計(jì)算每只小鼠炭末的移動(dòng)距離占小腸全長(zhǎng)百分率，比較3組動(dòng)物的活動(dòng)狀況和胃腸炭末推進(jìn)率有何不同。思考討論題

灌胃和腹腔注射給硫酸鎂的效應(yīng)有哪些不同？為什么？本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)臨床用藥有何提示？

實(shí)驗(yàn)三藥物的協(xié)同作用和拮抗作用目的觀察激動(dòng)劑與拮抗劑之間的相互作用材料兔子１只，0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%鹽酸腎上腺素注液,0.2%硝酸毛果蕓香堿注射液項(xiàng)目正常毛果蕓香堿腎上腺素阿托品瞳孔大小左眼

右眼

記錄

討論題

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中如何說(shuō)明藥物的協(xié)同作用和拮抗作用？

實(shí)驗(yàn)四

動(dòng)物機(jī)能狀態(tài)對(duì)藥物作用的影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私鈾C(jī)體在肝、腎功能正?；虍惓r(shí)，對(duì)某些藥物的作用可能產(chǎn)生影響，從而認(rèn)識(shí)臨床用藥時(shí)應(yīng)該注

意的有關(guān)問(wèn)題。實(shí)驗(yàn)要求掌握小白鼠肝、腎損傷病理模型的制備；掌握它們大體解剖的病理變化。認(rèn)識(shí)動(dòng)物機(jī)能狀態(tài)對(duì)藥物體內(nèi)過(guò)程的影響，從而引起藥物作用的變化，引申臨床用藥時(shí)的注意事項(xiàng)。實(shí)驗(yàn)五

利多卡因和普魯卡因的表面麻醉作用觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私饫嗫ㄒ蚝推蒸斂ㄒ虻谋砻媛樽碜饔玫牟町?，認(rèn)識(shí)如何選擇麻醉藥。實(shí)驗(yàn)要求掌握滴眼給藥的方法；在相同的時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，分別觀察給予兩藥后，左、右眼表面麻醉的情況；結(jié)合兩藥的藥理特性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析，并了解作為表面麻醉時(shí)臨床選藥的依據(jù)。實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備儀器：固定箱，剪刀，滴管。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容取兔1只，放入兔固定箱內(nèi)，剪去睫毛，用兔須觸試角膜表面，觀察并記錄眨眼反射情況。在兔的左眼滴入利多卡因溶液；在右眼滴入普魯卡因溶液。均為1%。在給藥后2、5、10、20、30、40分鐘分別觀察比較兩眼的眨眼反射的差異。實(shí)驗(yàn)六藥物敏感性實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)內(nèi)容藥物敏感實(shí)驗(yàn)——紙片法定量藥敏實(shí)驗(yàn)——試管二倍稀釋法學(xué)習(xí)要求掌握兩種藥物敏感實(shí)驗(yàn)的原理、方法及注意事項(xiàng)。藥敏紙片的人工制作定性濾紙用打孔器打成直徑6mm的圓片，每100片放入一小瓶中，160℃干熱滅菌1---2小時(shí)，或用高壓滅菌（6.8kg30min）后在60℃條件下烘干。（此應(yīng)提前做好）抗菌藥物的濃度（指有效藥物濃度）

青霉素200U/ml其它抗菌藥物1000ug/ml

磺胺類(lèi)藥物10mg/ml中草藥制劑1g/ml

慶大霉素4萬(wàn)單位/ml，稀釋為1000單位/ml。（臨床上可按照藥品使用說(shuō)明書(shū)，如上面標(biāo)明5克本品可拌50千克飼料，其換算方法為l克本品可拌10千克飼料，也就是1克本品拌l0000克飼料，相當(dāng)于藥品濃度為l克本品加l0000毫升蒸餾水。）用無(wú)菌操作法將欲測(cè)的抗菌藥物溶液1ml，加入100片紙片中，置冰箱內(nèi)1—2小時(shí)，用下列方法烘干：培養(yǎng)皿烘干法：將浸有抗菌藥液的紙片攤平在培養(yǎng)皿中，于37℃的溫箱內(nèi)保持2--3小時(shí)即可干燥，或放在無(wú)菌室內(nèi)過(guò)夜干燥。將制好的各種藥物紙片裝入無(wú)菌小瓶中，置冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?。并用?biāo)準(zhǔn)敏感菌株做敏感性實(shí)驗(yàn)，記錄抑菌環(huán)的直徑。干燥的藥敏紙片可保存6個(gè)月。使用前用標(biāo)準(zhǔn)的敏感菌株做藥物敏感實(shí)驗(yàn)，若抑菌環(huán)比原來(lái)小，則表明該紙片已失效。紙片法每組約7-8個(gè)平皿（每人1個(gè)），每個(gè)平皿約20毫升瓊脂培養(yǎng)基，即約200ml。按照每組500毫升瓊脂培養(yǎng)基、100毫升肉湯培養(yǎng)基準(zhǔn)備。每平皿約4張紙片，每班約240張以上。將瓊脂培養(yǎng)基熔融后，每個(gè)平皿倒入約20毫升，晾干后，用玻棒蘸含菌棉球（玻棒、棉球均事先消毒）涂抹均勻后晾干。用鑷子夾紙片，每個(gè)平皿貼4張紙片，要使紙片全部緊貼培養(yǎng)基。為保證均勻，可于平皿背部劃出貼紙片點(diǎn)。36攝氏度培養(yǎng)過(guò)夜。測(cè)量寬度。試管稀釋法每組2排試管，每排10支。共80支。將慶大霉素用肉湯稀釋液成64微克/毫升。每班20毫升即可。挑選10支無(wú)菌試管編號(hào)1—10。無(wú)菌加入1.0毫升肉湯至第2到10管內(nèi)。將64微克/毫升慶大霉素液體，分別加1.0毫升至第1、2管，將第2管混合后取1.0毫升至第3管，依次至第9管，再?gòu)牡?管取1.0毫升丟去，第10管不加抗生素作陽(yáng)性對(duì)照。試管稀釋法另準(zhǔn)備肉湯管不加抗生素、細(xì)菌作陰性對(duì)照。第1—10管分別加入已增菌6小時(shí)的細(xì)菌濃度約為105-106cfu/ml菌液1.0毫升（細(xì)菌菌齡為16-18小時(shí)，McFarlandNo0.5管細(xì)菌濃度1.5×108cfu/ml，然后用用肉湯1：200稀釋?zhuān)?。培養(yǎng)和結(jié)果判讀：35℃培養(yǎng)16-24小時(shí)，肉眼觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。陽(yáng)性可見(jiàn)混濁生長(zhǎng)，陰性可見(jiàn)澄清。最終各試管慶大霉素濃度：321684210.50.250微克/毫升實(shí)驗(yàn)七磺胺類(lèi)藥物內(nèi)服給藥后的血中藥物濃度測(cè)定

目的了解磺胺嘧啶非血管內(nèi)一次給藥后血藥濃度隨時(shí)間變化的規(guī)律。原理已知磺胺嘧啶等磺胺類(lèi)藥物在酸性環(huán)境下其苯環(huán)上的氨基（—NH2）將被離子化而生成銨類(lèi)化合物（—NH3+）。后者與亞硝酸鈉反應(yīng)可發(fā)生重氮化反應(yīng)進(jìn)而生成重氮鹽（—N＝N+—）。該化合物在堿性條件下可與麝香草酚生成橙黃色化合物。在525nm波長(zhǎng)下比色，其光密度與磺胺嘧啶的濃度成正比。根據(jù)上述原理,在給受試家兔一次靜脈注射一定劑量的磺胺嘧啶后,于不同時(shí)間點(diǎn)采集其靜脈血樣,采用比色法對(duì)各樣品中磺胺嘧啶的血藥濃度進(jìn)行定量分析,并以血藥濃度對(duì)相應(yīng)時(shí)間作圖,從而獲得磺胺嘧啶的靜脈給藥后的藥時(shí)曲。

動(dòng)物3kg左右家兔一只藥品20％磺胺嘧啶（sulfadiazine，SD）、7.5％三氯醋酸、0.1％SD標(biāo)準(zhǔn)液、0.5％亞硝酸鈉、0.5％麝香草酚（用20％NaOH配制）、1000u/mL肝素生理鹽水、3％戊巴比妥鈉、蒸餾水。器材721分光光度計(jì)、離心機(jī)、磅秤、手術(shù)器械、動(dòng)脈夾、尼龍插管（或玻璃插管、硅膠管）、兔手術(shù)臺(tái)、注射器（5mL）及針頭、移液器（0.01～1mL）、吸頭、試管、離心管、試管架、玻璃記號(hào)筆、藥棉、紗布、計(jì)算機(jī)。方法與步驟血中藥物濃度測(cè)定麻醉：全麻或局麻均可。取兔一只（實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)不禁水），記錄體重和性別，耳緣靜脈注射3％戊巴比妥鈉0.8～1.0mL/kg麻醉，仰位固定于兔手術(shù)臺(tái)上。手術(shù)：頸部手術(shù)區(qū)剪毛，切皮約6cm左右，鈍性分離皮下組織和肌肉，氣管插管，分離出頸總動(dòng)脈約2～3cm左右，在其下穿兩根細(xì)線(xiàn)，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，保留近心端。耳緣靜脈注射1000u/mL肝素1mL/kg。插管：用動(dòng)脈夾夾住動(dòng)脈近心端，再于兩線(xiàn)中間的一段動(dòng)脈上剪一“V”型切口，插入尼龍管，用線(xiàn)結(jié)扎牢固，以備取血用。方法與步驟血中藥物濃度測(cè)定取血：打開(kāi)動(dòng)脈夾放取空白血樣0.4mL，分別放入1號(hào)管（空白管）和2號(hào)管（標(biāo)準(zhǔn)管）各0.2mL搖勻靜置。而后腹腔注射20％SD1.5mL/kg，分別于注射后5、15、30、45、75、120、180、240、300分鐘時(shí)由動(dòng)脈取血0.2mL加到含有7.5％三氯醋酸2.7mL的試管中搖勻。標(biāo)準(zhǔn)管加入0.1％SD標(biāo)準(zhǔn)液0.1mL，其余各管加蒸餾水0.1mL搖勻。顯色：將上述各管離心5分鐘（1500-2000轉(zhuǎn)/分），取上清液1.5mL，加0.5％亞硝酸鈉0.5mL，搖勻后，再加入0.5％麝香草酚1mL后溶液為橙色。測(cè)定：于分光光度計(jì)在525nm波長(zhǎng)下測(cè)定各樣品管的光密度值。計(jì)算血中藥物濃度：根據(jù)同一種溶液濃度與光密度成正比的原理，可用空白血標(biāo)準(zhǔn)管濃度及其光密度值求算出樣品管的磺胺藥物濃度。結(jié)果與處理將所得數(shù)據(jù)用計(jì)算機(jī)軟件繪制藥物的藥時(shí)曲線(xiàn)。注意事項(xiàng)每次取血前要先將插管中的殘血放掉。每吸取一個(gè)血樣時(shí)，必須更換吸量管，若只用一支吸量管時(shí)必須將其中的殘液用生理鹽水沖凈。將血樣加到三氯醋酸試管中應(yīng)立即搖勻，否則易出現(xiàn)血凝塊。實(shí)驗(yàn)八

鏈霉素急性毒性反應(yīng)及解救實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察鏈霉素對(duì)小白鼠的毒性反應(yīng)，掌握其中毒機(jī)理；觀察氯化鈣的對(duì)抗作用，掌握其解毒機(jī)理。實(shí)驗(yàn)要求加深對(duì)抗菌藥物鏈霉素中毒機(jī)理的認(rèn)識(shí)；加深對(duì)氯化鈣藥理作用的認(rèn)識(shí)，從而認(rèn)識(shí)到氯化鈣作為同類(lèi)中毒機(jī)理引起的中毒的解毒藥的臨床意義。實(shí)驗(yàn)儀器、設(shè)備注射器，針頭藥物：小白鼠腹腔注射鏈霉素。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容正常小白鼠六只，分為三組：a組小白鼠兩只，腹腔注射鏈霉素；b組小白鼠兩只，腹腔注射鏈霉素，出現(xiàn)中毒反應(yīng)后，再腹腔注射氯化鈣，觀察其反應(yīng)。c組小白鼠兩只，腹腔注射生理鹽水，作對(duì)照。觀察各組小白鼠的變化，分析中毒原因及氯化鈣對(duì)抗的原理。實(shí)驗(yàn)九有機(jī)磷酸酯類(lèi)中毒及解救實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

有機(jī)磷酸酯類(lèi)中毒的癥狀和血液膽堿酯酶活力的抑制情況。握較阿托品和解磷定解救有機(jī)磷酸酯類(lèi)中毒的作用原理。實(shí)驗(yàn)原理

有機(jī)磷酸酯類(lèi)中毒后，膽堿酯酶(chE)活性受到抑制，失去水解乙酰膽堿(Ach)的能力，Ach在體內(nèi)蓄積，引起一系列中毒癥狀(M樣、N樣和中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀)?？鼓憠A藥阿托品能拮抗Ach的作用，解除有機(jī)磷酸酯類(lèi)中毒M樣癥狀。膽堿酯酶復(fù)活藥解磷定能使被有機(jī)磷酸酯類(lèi)抑制的膽堿酯酶活性恢復(fù)，對(duì)M及N樣癥狀有效。兩藥合用可提高解救效果。實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物