鏈球菌腸球菌課件

目的要求：1.掌握鏈球菌屬及腸球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法。2.掌握鏈球菌及鏈球菌的菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)及染色性。目的要求：1步驟與方法1、觀察菌落將菌株接種于血瓊脂平板上，35℃孵育18-24h后觀察菌落，記錄菌落大小、形態(tài)、表面、邊緣、透明及顏色、有無(wú)溶血及特點(diǎn)。將肺炎鏈球菌繼續(xù)孵育2-3天看菌落中心有無(wú)凹陷呈“臍狀”。步驟與方法1、觀察菌落2鏈球菌的溶血性鏈球菌的溶血性3β溶血性鏈球菌β溶血性鏈球菌42、形態(tài)觀察涂片、革蘭氏染色鏡檢，記錄鏡下細(xì)菌染色性、大小、形態(tài)、排列及莢膜。

2、形態(tài)觀察5肺炎鏈球菌S.pneumoniae形態(tài)與染色：G+球菌,矛頭狀,成雙排列，寬端相對(duì)，尖端向外,有莢膜肺炎鏈球菌S.pneumoniae形態(tài)與染色：G+球菌6肺炎鏈球菌革蘭染色有莢膜肺炎鏈球菌革蘭染色有莢膜7將菌株接種于血瓊脂平板上，35℃孵育18-24h后觀察菌落，腸球菌在血瓊脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周圍可出現(xiàn)α溶血環(huán)，也可無(wú)溶血環(huán)。pneumoniae方法：挑取菌落2-3個(gè)轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為乳化均勻的菌懸液，置37℃水浴15min。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。原理：Lancefield根據(jù)鏈球菌細(xì)胞壁中多糖抗原的不同，將鏈球菌分為20多個(gè)群，對(duì)人類治病的多數(shù)為A群，偶見(jiàn)B、C、D、F、G群。在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。培養(yǎng)特性：培養(yǎng)48h后，菌落有自溶現(xiàn)象，菌落的中心會(huì)出現(xiàn)凹陷，像“肚臍”稱臍狀凹陷。肺炎鏈球菌革蘭染色有莢膜結(jié)果判斷：在2-10min內(nèi)發(fā)生膠乳凝集，為陽(yáng)性。血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。（2）膽汁-七葉苷試驗(yàn)：原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。方法：取待檢菌純培養(yǎng)物接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)48h，3000r/min離心30min,吸取上清液0.在反應(yīng)板個(gè)空內(nèi)分別滴加稀釋血清、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清1滴（50ul），再于各孔內(nèi)滴加1滴溶血素“O”溶液，輕搖1min混勻，最后在各孔內(nèi)分別滴加1滴ASO膠乳試劑，輕搖3min后觀察結(jié)果。8ml于另一試管，加入FeCl30.原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。初次分離需提供5%-10%的CO2。掌握鏈球菌及鏈球菌的菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)及染色性。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。肺炎鏈球菌莢膜染色特點(diǎn)將菌株接種于血瓊脂平板上，35℃孵育18-24h后觀察菌落，8肺炎鏈球菌S.pneumoniae

培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)要求高，兼性厭氧。初次分離需提供5%-10%的CO2。18-24h后血平板上形成灰白色、圓形、針尖樣的菌落。菌落周圍有草綠色溶血環(huán)。肺炎鏈球菌S.pneumoniae

培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)9肺炎鏈球菌S.pneumoniae培養(yǎng)特性：培養(yǎng)48h后，菌落有自溶現(xiàn)象，菌落的中心會(huì)出現(xiàn)凹陷，像“肚臍”稱臍狀凹陷。肺炎鏈球菌S.pneumoniae培養(yǎng)特性：培養(yǎng)48h10肺炎鏈球菌S.pneumoniae

主要生化反應(yīng)

optochin試驗(yàn):

含5μgoptochin紙片貼于涂布有待測(cè)菌的平板上35℃孵育過(guò)夜，抑菌圈大于14mm即為敏感。甲型溶血鏈球菌(R)肺炎鏈球菌(S)肺炎鏈球菌S.pneumoniae

主要生化反應(yīng)甲型溶11膽汁溶菌試驗(yàn)原理：膽汁或膽鹽能活化肺炎鏈球菌的自溶酶，促進(jìn)細(xì)菌細(xì)胞膜破損或菌體裂解而自溶。方法：A、平板法：在血瓊脂平板上選擇出待檢的草綠色溶血的菌落，觀察記錄菌落特點(diǎn)，然后于菌落上加一滴去氧膽酸鈉溶液，35℃孵育15-30min觀察結(jié)果。膽汁溶菌試驗(yàn)12B、試管法：將甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌血清肉湯培養(yǎng)液1ml分別加入2支試管，再于各管中加入去氧膽酸鈉溶液0.1ml，搖勻后置于37℃水浴30min后觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：平板法若菌落消失為陽(yáng)性，不消失為陰性，試管法若液體由渾濁變透明為陽(yáng)性，不透明為陰性，此試驗(yàn)是鑒別甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌的重要試驗(yàn)，后者陽(yáng)性。B、試管法：將甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌血清肉湯培養(yǎng)液1ml分別13痰標(biāo)本肺炎鏈球菌革蘭染色痰標(biāo)本肺炎鏈球菌革蘭染色14A群(化膿性)鏈球菌

生物學(xué)性狀

球形或橢圓形，鏈狀排列，革蘭染色陽(yáng)性(G＋)，

無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛，透明質(zhì)酸的莢膜。1.

形態(tài)與染色A群(化膿性)鏈球菌生物學(xué)性狀球形或橢圓形，鏈狀15化膿性鏈球菌化膿性鏈球菌16A群(化膿性)鏈球菌

生物學(xué)性狀

營(yíng)養(yǎng)要求高：血平板或含血清培養(yǎng)基；

液體培養(yǎng)為沉淀生長(zhǎng)；

血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同

菌株溶血不一，

多數(shù)有透明溶血環(huán)(b溶血現(xiàn)象)。2.培養(yǎng)特性A群(化膿性)鏈球菌生物學(xué)性狀營(yíng)養(yǎng)要求高：血平板或含血清17桿菌肽敏感試驗(yàn)原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.04U/片）貼于平板上，35℃孵育18-24h觀察。結(jié)果判斷：出現(xiàn)抑菌環(huán)為敏感，推斷為A群化膿性鏈球菌。桿菌肽敏感試驗(yàn)18掌握鏈球菌屬及腸球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。原理：B群鏈球菌有馬尿酸水解酶，可水解馬尿酸為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可與FeCl3，結(jié)合形成苯甲酸鐵沉淀。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。將肺炎鏈球菌繼續(xù)孵育2-3天看菌落中心有無(wú)凹陷呈“臍狀”。在反應(yīng)板個(gè)空內(nèi)分別滴加稀釋血清、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清1滴（50ul），再于各孔內(nèi)滴加1滴溶血素“O”溶液，輕搖1min混勻，最后在各孔內(nèi)分別滴加1滴ASO膠乳試劑，輕搖3min后觀察結(jié)果。原理：培養(yǎng)基的膽汁對(duì)某些細(xì)菌有抑制作用，只有既能在膽汁中生長(zhǎng)，又能水解七葉苷的細(xì)菌才能表現(xiàn)出對(duì)七葉苷的水解活性。結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。pneumoniae同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。pneumoniae掌握鏈球菌屬及腸球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法。結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。原理：腸球菌有很強(qiáng)的耐鹽能力，能在65g/LNaCl血清肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而鏈球菌的耐鹽能力較弱，在此培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。初次分離需提供5%-10%的CO2。在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。04U/片）貼于平板上，35℃孵育18-24h觀察。無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛，透明質(zhì)酸的莢膜。方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.掌握鏈球菌及鏈球菌的菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)及染色性。B化膿性鏈球菌桿菌肽陽(yáng)性掌握鏈球菌屬及腸球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法。B化膿性鏈球菌桿19B群無(wú)乳鏈球菌B群無(wú)乳鏈球菌20CAMP試驗(yàn)原理：B群溶血性鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，該物質(zhì)可促進(jìn)金黃色葡萄球菌β溶血素的活性，故在血瓊脂平板上兩菌交界處溶血能力增強(qiáng)，形成箭頭狀透明溶血區(qū)。方法：在羊血瓊脂平板上，用金黃色葡萄球菌劃種一條橫線，在將被檢菌距金葡菌接種線3mm處直角接種一短線，35℃培養(yǎng)18-24h觀察結(jié)果。同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。CAMP試驗(yàn)21

結(jié)果報(bào)告：在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。結(jié)果報(bào)告：22無(wú)乳鏈球菌CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性無(wú)乳鏈球菌CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性23CAMP陽(yáng)性CAMP陽(yáng)性24馬尿酸水解試驗(yàn)原理：B群鏈球菌有馬尿酸水解酶，可水解馬尿酸為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可與FeCl3，結(jié)合形成苯甲酸鐵沉淀。方法：取待檢菌純培養(yǎng)物接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)48h，3000r/min離心30min,吸取上清液0.8ml于另一試管，加入FeCl30.2ml，立即混勻，10-15min觀察結(jié)果。

結(jié)果：出現(xiàn)恒定沉淀物為陽(yáng)性。馬尿酸水解試驗(yàn)253、生化反應(yīng)

1）觸酶試驗(yàn)：鏈球菌屬為陰性。3、生化反應(yīng)26（6）血清學(xué)試驗(yàn)（鏈球菌快速分群乳膠凝集試驗(yàn)）原理：Lancefield根據(jù)鏈球菌細(xì)胞壁中多糖抗原的不同，將鏈球菌分為20多個(gè)群，對(duì)人類治病的多數(shù)為A群，偶見(jiàn)B、C、D、F、G群。用這6群抗原的兔免疫血清分別致敏的乳膠顆粒，與具有相應(yīng)群特異性抗原的鏈球菌發(fā)生間接乳膠凝集反應(yīng)，可在10min內(nèi)對(duì)鏈球菌作出主要的分群鑒定。（6）血清學(xué)試驗(yàn)（鏈球菌快速分群乳膠凝集試驗(yàn)）27

方法：挑取菌落2-3個(gè)轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為乳化均勻的菌懸液，置37℃水浴15min。在卡片的相應(yīng)區(qū)域滴加一滴A、B、C、D、F、G致敏膠乳，再加入處理后的菌懸液一滴分別與膠乳混勻，同時(shí)在卡片相應(yīng)區(qū)域加一滴控制液與任意一滴致敏乳膠混勻，作為陽(yáng)性對(duì)照，輕搖卡片，觀察結(jié)果。方法：挑取菌落2-3個(gè)轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為28原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。原理：抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被適量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗體，多余抗“O”抗體與ASO膠乳試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛，透明質(zhì)酸的莢膜。待檢菌與哪群致敏膠乳凝集就表明該菌為相應(yīng)血清群的鏈球菌。原理：腸球菌有很強(qiáng)的耐鹽能力，能在65g/LNaCl血清肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而鏈球菌的耐鹽能力較弱，在此培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。涂片、革蘭氏染色鏡檢，記錄鏡下細(xì)菌染色性、大小、形態(tài)、排列及莢膜。原理：B群鏈球菌有馬尿酸水解酶，可水解馬尿酸為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可與FeCl3，結(jié)合形成苯甲酸鐵沉淀。在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。1ml，搖勻后置于37℃水浴30min后觀察結(jié)果。在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。方法：挑取菌落2-3個(gè)轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為乳化均勻的菌懸液，置37℃水浴15min。培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)要求高，兼性厭氧。腸球菌能在膽汁中生長(zhǎng)，并水解七葉苷，使培養(yǎng)基變黑。8ml于另一試管，加入FeCl30.方法：取待檢菌純培養(yǎng)物接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)48h，3000r/min離心30min,吸取上清液0.在反應(yīng)板個(gè)空內(nèi)分別滴加稀釋血清、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清1滴（50ul），再于各孔內(nèi)滴加1滴溶血素“O”溶液，輕搖1min混勻，最后在各孔內(nèi)分別滴加1滴ASO膠乳試劑，輕搖3min后觀察結(jié)果。optochin試驗(yàn):含5μgoptochin紙片貼于涂布有待測(cè)菌的平板上35℃孵育過(guò)夜，抑菌圈大于14mm即為敏感。掌握鏈球菌及鏈球菌的菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)及染色性。方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.pneumoniae方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。方法：挑取菌落2-3個(gè)轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為乳化均勻的菌懸液，置37℃水浴15min。（3）65g/LNaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)：原理：腸球菌有很強(qiáng)的耐鹽能力，能在65g/LNaCl血清肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而鏈球菌的耐鹽能力較弱，在此培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。鏈球菌屬為陰性。結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。04U/片）貼于平板上，35℃孵育18-24h觀察。原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。原理：多數(shù)腸球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR），釋放出β-萘基酰胺，與PYR試劑作用形成紅色復(fù)合物。培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)要求高，兼性厭氧。（6）血清學(xué)試驗(yàn)（鏈球菌快速分群乳膠凝集試驗(yàn)）pneumoniae在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。將菌株接種于血瓊脂平板上，35℃孵育18-24h后觀察菌落，腸球菌在血瓊脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周圍可出現(xiàn)α溶血環(huán)，也可無(wú)溶血環(huán)。結(jié)果判斷：在2-10min內(nèi)發(fā)生膠乳凝集，為陽(yáng)性。營(yíng)養(yǎng)要求高：血平板或含血清培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)為沉淀生長(zhǎng)；在卡片的相應(yīng)區(qū)域滴加一滴A、B、C、D、F、G致敏膠乳，再加入處理后的菌懸液一滴分別與膠乳混勻，同時(shí)在卡片相應(yīng)區(qū)域加一滴控制液與任意一滴致敏乳膠混勻，作為陽(yáng)性對(duì)照，輕搖卡片，觀察結(jié)果。待檢菌與哪群致敏膠乳凝集就表明該菌為相應(yīng)血清群的鏈球菌。結(jié)果判斷：在2-10min內(nèi)發(fā)生膠乳凝集，為陽(yáng)性。待檢菌與哪群致敏膠乳凝集就表明該菌為相應(yīng)血清群的鏈球菌。原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌29Lancefield血清凝集分型Lancefield血清凝集分型30鏈球菌腸球菌課件31（7）膠乳凝集試驗(yàn)：原理：抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被適量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗體，多余抗“O”抗體與ASO膠乳試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。（7）膠乳凝集試驗(yàn)：32

方法：先將病人血清56℃30min滅活，然后用生理鹽水做1：15稀釋。在反應(yīng)板個(gè)空內(nèi)分別滴加稀釋血清、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清1滴（50ul），再于各孔內(nèi)滴加1滴溶血素“O”溶液，輕搖1min混勻，最后在各孔內(nèi)分別滴加1滴ASO膠乳試劑，輕搖3min后觀察結(jié)果。方法：先將病人血清56℃30min滅活，33

結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。ASO陽(yáng)性可認(rèn)為患者近期受溶血性鏈球菌感染過(guò)，可輔助診斷風(fēng)濕熱、腎小球腎炎等疾病。結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。ASO陽(yáng)34鏈球菌腸球菌課件35腸球菌屬步驟和方法1、菌落觀察:

將菌株接種于血瓊脂平板上，35℃孵育18-24h后觀察菌落，腸球菌在血瓊脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周圍可出現(xiàn)α溶血環(huán)，也可無(wú)溶血環(huán)。

腸球菌屬步驟和方法362、形態(tài)觀察涂片、革蘭氏染色鏡檢，記錄鏡下細(xì)菌染色性、大小、形態(tài)及排列。腸球菌形態(tài)類似鏈球菌，為單個(gè)、成雙或短鏈狀排列的卵圓形革蘭氏陽(yáng)性球菌。2、形態(tài)觀察373、生化反應(yīng)：（1）觸酶試驗(yàn)：腸球菌屬為陰性反應(yīng)。（2）膽汁-七葉苷試驗(yàn)：原理：培養(yǎng)基的膽汁對(duì)某些細(xì)菌有抑制作用，只有既能在膽汁中生長(zhǎng)，又能水解七葉苷的細(xì)菌才能表現(xiàn)出對(duì)七葉苷的水解活性。腸球菌能在膽汁中生長(zhǎng)，并水解七葉苷，使培養(yǎng)基變黑。3、生化反應(yīng)：38

方法：將被檢菌1~3個(gè)菌落接種于膽汁-七葉苷瓊脂培養(yǎng)基，35℃孵育18~24h。結(jié)果：細(xì)菌生長(zhǎng)，且培養(yǎng)基變黑色或棕褐色為陽(yáng)性，不變色為陰性。腸球菌為陽(yáng)性。方法：將被檢菌1~3個(gè)菌落接種于膽汁-39（3）65g/LNaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)：原理：腸球菌有很強(qiáng)的耐鹽能力，能在65g/LNaCl血清肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而鏈球菌的耐鹽能力較弱，在此培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。結(jié)果：細(xì)菌生長(zhǎng)且使得培養(yǎng)基變黃為陽(yáng)性，不生長(zhǎng)為陰性，腸球菌為陽(yáng)性。（3）65g/LNaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)：40（3）PYR試驗(yàn)：原理：多數(shù)腸球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR），釋放出β-萘基酰胺，與PYR試劑作用形成紅色復(fù)合物。

方法：挑取被檢菌落在含有PYR的紙片上涂擦，35℃孵育5min，再于紙片上滴加PYR試劑，觀察紙片顏色。結(jié)果：約1min后紙片呈紅色為陽(yáng)性，不變色為陰性。腸球菌、A群鏈球菌和某些凝固酶陰性的葡萄球菌為陽(yáng)性。（3）PYR試驗(yàn)：41鏈球菌腸球菌課件42肺炎鏈球菌S.pneumoniae

主要生化反應(yīng)

optochin試驗(yàn):

含5μgoptochin紙片貼于涂布有待測(cè)菌的平板上35℃孵育過(guò)夜，抑菌圈大于14mm即為敏感。甲型溶血鏈球菌(R)肺炎鏈球菌(S)肺炎鏈球菌S.pneumoniae

主要生化反應(yīng)甲型溶43方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.原理：B群鏈球菌有馬尿酸水解酶，可水解馬尿酸為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可與FeCl3，結(jié)合形成苯甲酸鐵沉淀。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。多數(shù)有透明溶血環(huán)(b溶血現(xiàn)象)。optochin試驗(yàn):含5μgoptochin紙片貼于涂布有待測(cè)菌的平板上35℃孵育過(guò)夜，抑菌圈大于14mm即為敏感。肺炎鏈球菌莢膜染色特點(diǎn)鏈球菌屬為陰性。pneumoniae球形或橢圓形，鏈狀排列，革蘭染色陽(yáng)性(G＋)，方法：將被檢菌1~3個(gè)菌落接種于膽汁-七葉苷瓊脂培養(yǎng)基，35℃孵育18~24h。待檢菌與哪群致敏膠乳凝集就表明該菌為相應(yīng)血清群的鏈球菌。結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。涂片、革蘭氏染色鏡檢，記錄鏡下細(xì)菌染色性、大小、形態(tài)、排列及莢膜。原理：B群溶血性鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，該物質(zhì)可促進(jìn)金黃色葡萄球菌β溶血素的活性，故在血瓊脂平板上兩菌交界處溶血能力增強(qiáng)，形成箭頭狀透明溶血區(qū)。optochin試驗(yàn):含5μgoptochin紙片貼于涂布有待測(cè)菌的平板上35℃孵育過(guò)夜，抑菌圈大于14mm即為敏感。（6）血清學(xué)試驗(yàn)（鏈球菌快速分群乳膠凝集試驗(yàn)）在反應(yīng)板個(gè)空內(nèi)分別滴加稀釋血清、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清1滴（50ul），再于各孔內(nèi)滴加1滴溶血素“O”溶液，輕搖1min混勻，最后在各孔內(nèi)分別滴加1滴ASO膠乳試劑，輕搖3min后觀察結(jié)果。（6）血清學(xué)試驗(yàn)（鏈球菌快速分群乳膠凝集試驗(yàn)）將菌株接種于血瓊脂平板上，35℃孵育18-24h后觀察菌落，記錄菌落大小、形態(tài)、表面、邊緣、透明及顏色、有無(wú)溶血及特點(diǎn)。結(jié)果：細(xì)菌生長(zhǎng)且使得培養(yǎng)基變黃為陽(yáng)性，不生長(zhǎng)為陰性，腸球菌為陽(yáng)性。pneumoniae方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.化膿性鏈球菌方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.化44桿菌肽敏感試驗(yàn)原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.04U/片）貼于平板上，35℃孵育18-24h觀察。結(jié)果判斷：出現(xiàn)抑菌環(huán)為敏感，推斷為A群化膿性鏈球菌。桿菌肽敏感試驗(yàn)45

結(jié)果報(bào)告：在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。結(jié)果報(bào)告：46馬尿酸水解試驗(yàn)原理：B群鏈球菌有馬尿酸水解酶，可水解馬尿酸為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可與FeCl3，結(jié)合形成苯甲酸鐵沉淀。方法：取待檢菌純培養(yǎng)物接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)48h，3000r/min離心30min,吸取上清液0.8ml于另一試管，加入FeCl30.2ml，立即混勻，10-15min觀察結(jié)果。

結(jié)果：出現(xiàn)恒定沉淀物為陽(yáng)性。馬尿酸水解試驗(yàn)47（7）膠乳凝集試驗(yàn)：原理：抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被適量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗體，多余抗“O”抗體與ASO膠乳試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。（7）膠乳凝集試驗(yàn)：48（3）65g/LNaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)：原理：腸球菌有很強(qiáng)的耐鹽能力，能在65g/LNaCl血清肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而鏈球菌的耐鹽能力較弱，在此培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。結(jié)果：細(xì)菌生長(zhǎng)且使得培養(yǎng)基變黃為陽(yáng)性，不生長(zhǎng)為陰性，腸球菌為陽(yáng)性。（3）65g/LNaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)：49掌握鏈球菌及鏈球菌的菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)及染色性。方法：取待檢菌純培養(yǎng)物接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)48h，3000r/min離心30min,吸取上清液0.B、試管法：將甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌血清肉湯培養(yǎng)液1ml分別加入2支試管，再于各管中加入去氧膽酸鈉溶液0.原理：B群溶血性鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，該物質(zhì)可促進(jìn)金黃色葡萄球菌β溶血素的活性，故在血瓊脂平板上兩菌交界處溶血能力增強(qiáng)，形成箭頭狀透明溶血區(qū)。（6）血清學(xué)試驗(yàn)（鏈球菌快速分群乳膠凝集試驗(yàn)）原理：腸球菌有很強(qiáng)的耐鹽能力，能在65g/LNaCl血清肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而鏈球菌的耐鹽能力較弱，在此培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。原理：抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被適量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗體，多余抗“O”抗體與ASO膠乳試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。原理：B群溶血性鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，該物質(zhì)可促進(jìn)金黃色葡萄球菌β溶血素的活性，故在血瓊脂平板上兩菌交界處溶血能力增強(qiáng)，形成箭頭狀透明溶血區(qū)。在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。原理：抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被適量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗體，多余抗“O”抗體與ASO膠乳試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。腸球菌、A群鏈球菌和某些凝固酶陰性的葡萄球菌為陽(yáng)性。方法：在羊血瓊脂平板上，用金黃色葡萄球菌劃種一條橫線，在將被檢菌距金葡菌接種線3mm處直角接種一短線，35℃培養(yǎng)18-24h觀察結(jié)果。原理：多數(shù)腸球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR），釋放出β-萘基酰胺，與PYR試劑作用形成紅色復(fù)合物。方法：挑取菌落2-3個(gè)轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為乳化均勻的菌懸液，置37℃水浴15min。方法：取待檢菌純培養(yǎng)物接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)48h，3000r/min離心30min,吸取上清液0.待檢菌與哪群致敏膠乳凝集就表明該菌為相應(yīng)血清群的鏈球菌。原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.涂片、革蘭氏染色鏡檢，記錄鏡下細(xì)菌染色性、大小、形態(tài)、排列及莢膜。2ml，立即混勻，10-15min觀察結(jié)果。2ml，立即混勻，10-15min觀察結(jié)果。掌握鏈球菌及鏈球菌的菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)及染色性。50目的要求：1.掌握鏈球菌屬及腸球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法。2.掌握鏈球菌及鏈球菌的菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)及染色性。目的要求：51步驟與方法1、觀察菌落將菌株接種于血瓊脂平板上，35℃孵育18-24h后觀察菌落，記錄菌落大小、形態(tài)、表面、邊緣、透明及顏色、有無(wú)溶血及特點(diǎn)。將肺炎鏈球菌繼續(xù)孵育2-3天看菌落中心有無(wú)凹陷呈“臍狀”。步驟與方法1、觀察菌落52鏈球菌的溶血性鏈球菌的溶血性53β溶血性鏈球菌β溶血性鏈球菌542、形態(tài)觀察涂片、革蘭氏染色鏡檢，記錄鏡下細(xì)菌染色性、大小、形態(tài)、排列及莢膜。

2、形態(tài)觀察55肺炎鏈球菌S.pneumoniae形態(tài)與染色：G+球菌,矛頭狀,成雙排列，寬端相對(duì)，尖端向外,有莢膜肺炎鏈球菌S.pneumoniae形態(tài)與染色：G+球菌56肺炎鏈球菌革蘭染色有莢膜肺炎鏈球菌革蘭染色有莢膜57將菌株接種于血瓊脂平板上，35℃孵育18-24h后觀察菌落，腸球菌在血瓊脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周圍可出現(xiàn)α溶血環(huán)，也可無(wú)溶血環(huán)。pneumoniae方法：挑取菌落2-3個(gè)轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為乳化均勻的菌懸液，置37℃水浴15min。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。原理：Lancefield根據(jù)鏈球菌細(xì)胞壁中多糖抗原的不同，將鏈球菌分為20多個(gè)群，對(duì)人類治病的多數(shù)為A群，偶見(jiàn)B、C、D、F、G群。在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。培養(yǎng)特性：培養(yǎng)48h后，菌落有自溶現(xiàn)象，菌落的中心會(huì)出現(xiàn)凹陷，像“肚臍”稱臍狀凹陷。肺炎鏈球菌革蘭染色有莢膜結(jié)果判斷：在2-10min內(nèi)發(fā)生膠乳凝集，為陽(yáng)性。血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。（2）膽汁-七葉苷試驗(yàn)：原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。方法：取待檢菌純培養(yǎng)物接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)48h，3000r/min離心30min,吸取上清液0.在反應(yīng)板個(gè)空內(nèi)分別滴加稀釋血清、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清1滴（50ul），再于各孔內(nèi)滴加1滴溶血素“O”溶液，輕搖1min混勻，最后在各孔內(nèi)分別滴加1滴ASO膠乳試劑，輕搖3min后觀察結(jié)果。8ml于另一試管，加入FeCl30.原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。初次分離需提供5%-10%的CO2。掌握鏈球菌及鏈球菌的菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)及染色性。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。肺炎鏈球菌莢膜染色特點(diǎn)將菌株接種于血瓊脂平板上，35℃孵育18-24h后觀察菌落，58肺炎鏈球菌S.pneumoniae

培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)要求高，兼性厭氧。初次分離需提供5%-10%的CO2。18-24h后血平板上形成灰白色、圓形、針尖樣的菌落。菌落周圍有草綠色溶血環(huán)。肺炎鏈球菌S.pneumoniae

培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)59肺炎鏈球菌S.pneumoniae培養(yǎng)特性：培養(yǎng)48h后，菌落有自溶現(xiàn)象，菌落的中心會(huì)出現(xiàn)凹陷，像“肚臍”稱臍狀凹陷。肺炎鏈球菌S.pneumoniae培養(yǎng)特性：培養(yǎng)48h60肺炎鏈球菌S.pneumoniae

主要生化反應(yīng)

optochin試驗(yàn):

含5μgoptochin紙片貼于涂布有待測(cè)菌的平板上35℃孵育過(guò)夜，抑菌圈大于14mm即為敏感。甲型溶血鏈球菌(R)肺炎鏈球菌(S)肺炎鏈球菌S.pneumoniae

主要生化反應(yīng)甲型溶61膽汁溶菌試驗(yàn)原理：膽汁或膽鹽能活化肺炎鏈球菌的自溶酶，促進(jìn)細(xì)菌細(xì)胞膜破損或菌體裂解而自溶。方法：A、平板法：在血瓊脂平板上選擇出待檢的草綠色溶血的菌落，觀察記錄菌落特點(diǎn)，然后于菌落上加一滴去氧膽酸鈉溶液，35℃孵育15-30min觀察結(jié)果。膽汁溶菌試驗(yàn)62B、試管法：將甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌血清肉湯培養(yǎng)液1ml分別加入2支試管，再于各管中加入去氧膽酸鈉溶液0.1ml，搖勻后置于37℃水浴30min后觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：平板法若菌落消失為陽(yáng)性，不消失為陰性，試管法若液體由渾濁變透明為陽(yáng)性，不透明為陰性，此試驗(yàn)是鑒別甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌的重要試驗(yàn)，后者陽(yáng)性。B、試管法：將甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌血清肉湯培養(yǎng)液1ml分別63痰標(biāo)本肺炎鏈球菌革蘭染色痰標(biāo)本肺炎鏈球菌革蘭染色64A群(化膿性)鏈球菌

生物學(xué)性狀

球形或橢圓形，鏈狀排列，革蘭染色陽(yáng)性(G＋)，

無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛，透明質(zhì)酸的莢膜。1.

形態(tài)與染色A群(化膿性)鏈球菌生物學(xué)性狀球形或橢圓形，鏈狀65化膿性鏈球菌化膿性鏈球菌66A群(化膿性)鏈球菌

生物學(xué)性狀

營(yíng)養(yǎng)要求高：血平板或含血清培養(yǎng)基；

液體培養(yǎng)為沉淀生長(zhǎng)；

血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同

菌株溶血不一，

多數(shù)有透明溶血環(huán)(b溶血現(xiàn)象)。2.培養(yǎng)特性A群(化膿性)鏈球菌生物學(xué)性狀營(yíng)養(yǎng)要求高：血平板或含血清67桿菌肽敏感試驗(yàn)原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.04U/片）貼于平板上，35℃孵育18-24h觀察。結(jié)果判斷：出現(xiàn)抑菌環(huán)為敏感，推斷為A群化膿性鏈球菌。桿菌肽敏感試驗(yàn)68掌握鏈球菌屬及腸球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。原理：B群鏈球菌有馬尿酸水解酶，可水解馬尿酸為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可與FeCl3，結(jié)合形成苯甲酸鐵沉淀。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。將肺炎鏈球菌繼續(xù)孵育2-3天看菌落中心有無(wú)凹陷呈“臍狀”。在反應(yīng)板個(gè)空內(nèi)分別滴加稀釋血清、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清1滴（50ul），再于各孔內(nèi)滴加1滴溶血素“O”溶液，輕搖1min混勻，最后在各孔內(nèi)分別滴加1滴ASO膠乳試劑，輕搖3min后觀察結(jié)果。原理：培養(yǎng)基的膽汁對(duì)某些細(xì)菌有抑制作用，只有既能在膽汁中生長(zhǎng)，又能水解七葉苷的細(xì)菌才能表現(xiàn)出對(duì)七葉苷的水解活性。結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。pneumoniae同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。pneumoniae掌握鏈球菌屬及腸球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法。結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。原理：腸球菌有很強(qiáng)的耐鹽能力，能在65g/LNaCl血清肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而鏈球菌的耐鹽能力較弱，在此培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。初次分離需提供5%-10%的CO2。在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。04U/片）貼于平板上，35℃孵育18-24h觀察。無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛，透明質(zhì)酸的莢膜。方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.掌握鏈球菌及鏈球菌的菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)及染色性。B化膿性鏈球菌桿菌肽陽(yáng)性掌握鏈球菌屬及腸球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法。B化膿性鏈球菌桿69B群無(wú)乳鏈球菌B群無(wú)乳鏈球菌70CAMP試驗(yàn)原理：B群溶血性鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，該物質(zhì)可促進(jìn)金黃色葡萄球菌β溶血素的活性，故在血瓊脂平板上兩菌交界處溶血能力增強(qiáng)，形成箭頭狀透明溶血區(qū)。方法：在羊血瓊脂平板上，用金黃色葡萄球菌劃種一條橫線，在將被檢菌距金葡菌接種線3mm處直角接種一短線，35℃培養(yǎng)18-24h觀察結(jié)果。同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。CAMP試驗(yàn)71

結(jié)果報(bào)告：在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。結(jié)果報(bào)告：72無(wú)乳鏈球菌CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性無(wú)乳鏈球菌CAMP試驗(yàn)陽(yáng)性73CAMP陽(yáng)性CAMP陽(yáng)性74馬尿酸水解試驗(yàn)原理：B群鏈球菌有馬尿酸水解酶，可水解馬尿酸為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可與FeCl3，結(jié)合形成苯甲酸鐵沉淀。方法：取待檢菌純培養(yǎng)物接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)48h，3000r/min離心30min,吸取上清液0.8ml于另一試管，加入FeCl30.2ml，立即混勻，10-15min觀察結(jié)果。

結(jié)果：出現(xiàn)恒定沉淀物為陽(yáng)性。馬尿酸水解試驗(yàn)753、生化反應(yīng)

1）觸酶試驗(yàn)：鏈球菌屬為陰性。3、生化反應(yīng)76（6）血清學(xué)試驗(yàn)（鏈球菌快速分群乳膠凝集試驗(yàn)）原理：Lancefield根據(jù)鏈球菌細(xì)胞壁中多糖抗原的不同，將鏈球菌分為20多個(gè)群，對(duì)人類治病的多數(shù)為A群，偶見(jiàn)B、C、D、F、G群。用這6群抗原的兔免疫血清分別致敏的乳膠顆粒，與具有相應(yīng)群特異性抗原的鏈球菌發(fā)生間接乳膠凝集反應(yīng)，可在10min內(nèi)對(duì)鏈球菌作出主要的分群鑒定。（6）血清學(xué)試驗(yàn)（鏈球菌快速分群乳膠凝集試驗(yàn)）77

方法：挑取菌落2-3個(gè)轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為乳化均勻的菌懸液，置37℃水浴15min。在卡片的相應(yīng)區(qū)域滴加一滴A、B、C、D、F、G致敏膠乳，再加入處理后的菌懸液一滴分別與膠乳混勻，同時(shí)在卡片相應(yīng)區(qū)域加一滴控制液與任意一滴致敏乳膠混勻，作為陽(yáng)性對(duì)照，輕搖卡片，觀察結(jié)果。方法：挑取菌落2-3個(gè)轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為78原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。原理：抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被適量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗體，多余抗“O”抗體與ASO膠乳試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛，透明質(zhì)酸的莢膜。待檢菌與哪群致敏膠乳凝集就表明該菌為相應(yīng)血清群的鏈球菌。原理：腸球菌有很強(qiáng)的耐鹽能力，能在65g/LNaCl血清肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而鏈球菌的耐鹽能力較弱，在此培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。涂片、革蘭氏染色鏡檢，記錄鏡下細(xì)菌染色性、大小、形態(tài)、排列及莢膜。原理：B群鏈球菌有馬尿酸水解酶，可水解馬尿酸為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可與FeCl3，結(jié)合形成苯甲酸鐵沉淀。在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。1ml，搖勻后置于37℃水浴30min后觀察結(jié)果。在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。方法：挑取菌落2-3個(gè)轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為乳化均勻的菌懸液，置37℃水浴15min。培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)要求高，兼性厭氧。腸球菌能在膽汁中生長(zhǎng)，并水解七葉苷，使培養(yǎng)基變黑。8ml于另一試管，加入FeCl30.方法：取待檢菌純培養(yǎng)物接種于馬尿酸鈉培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)48h，3000r/min離心30min,吸取上清液0.在反應(yīng)板個(gè)空內(nèi)分別滴加稀釋血清、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清1滴（50ul），再于各孔內(nèi)滴加1滴溶血素“O”溶液，輕搖1min混勻，最后在各孔內(nèi)分別滴加1滴ASO膠乳試劑，輕搖3min后觀察結(jié)果。optochin試驗(yàn):含5μgoptochin紙片貼于涂布有待測(cè)菌的平板上35℃孵育過(guò)夜，抑菌圈大于14mm即為敏感。掌握鏈球菌及鏈球菌的菌落特點(diǎn)、菌體形態(tài)及染色性。方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.pneumoniae方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。方法：挑取菌落2-3個(gè)轉(zhuǎn)種于含有提取酶的試管中，使其成為乳化均勻的菌懸液，置37℃水浴15min。（3）65g/LNaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)：原理：腸球菌有很強(qiáng)的耐鹽能力，能在65g/LNaCl血清肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而鏈球菌的耐鹽能力較弱，在此培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。鏈球菌屬為陰性。結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。04U/片）貼于平板上，35℃孵育18-24h觀察。原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。原理：多數(shù)腸球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR），釋放出β-萘基酰胺，與PYR試劑作用形成紅色復(fù)合物。培養(yǎng)特性：營(yíng)養(yǎng)要求高，兼性厭氧。（6）血清學(xué)試驗(yàn)（鏈球菌快速分群乳膠凝集試驗(yàn)）pneumoniae在兩種細(xì)菌劃線的交接處出現(xiàn)箭頭型透明溶血區(qū)為陽(yáng)性，否則為陰性，此試驗(yàn)為B群鏈球菌與其他鏈球菌鑒別的重要試驗(yàn)，無(wú)乳鏈球菌為陽(yáng)性，其他為陰性。將菌株接種于血瓊脂平板上，35℃孵育18-24h后觀察菌落，腸球菌在血瓊脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周圍可出現(xiàn)α溶血環(huán)，也可無(wú)溶血環(huán)。結(jié)果判斷：在2-10min內(nèi)發(fā)生膠乳凝集，為陽(yáng)性。營(yíng)養(yǎng)要求高：血平板或含血清培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)為沉淀生長(zhǎng)；在卡片的相應(yīng)區(qū)域滴加一滴A、B、C、D、F、G致敏膠乳，再加入處理后的菌懸液一滴分別與膠乳混勻，同時(shí)在卡片相應(yīng)區(qū)域加一滴控制液與任意一滴致敏乳膠混勻，作為陽(yáng)性對(duì)照，輕搖卡片，觀察結(jié)果。待檢菌與哪群致敏膠乳凝集就表明該菌為相應(yīng)血清群的鏈球菌。結(jié)果判斷：在2-10min內(nèi)發(fā)生膠乳凝集，為陽(yáng)性。待檢菌與哪群致敏膠乳凝集就表明該菌為相應(yīng)血清群的鏈球菌。原理：A群化膿性鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，而其他鏈球菌79Lancefield血清凝集分型Lancefield血清凝集分型80鏈球菌腸球菌課件81（7）膠乳凝集試驗(yàn)：原理：抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被適量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗體，多余抗“O”抗體與ASO膠乳試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。（7）膠乳凝集試驗(yàn)：82

方法：先將病人血清56℃30min滅活，然后用生理鹽水做1：15稀釋。在反應(yīng)板個(gè)空內(nèi)分別滴加稀釋血清、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清1滴（50ul），再于各孔內(nèi)滴加1滴溶血素“O”溶液，輕搖1min混勻，最后在各孔內(nèi)分別滴加1滴ASO膠乳試劑，輕搖3min后觀察結(jié)果。方法：先將病人血清56℃30min滅活，83

結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。ASO陽(yáng)性可認(rèn)為患者近期受溶血性鏈球菌感染過(guò)，可輔助診斷風(fēng)濕熱、腎小球腎炎等疾病。結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。ASO陽(yáng)84鏈球菌腸球菌課件85腸球菌屬步驟和方法1、菌落觀察:

將菌株接種于血瓊脂平板上，35℃孵育18-24h后觀察菌落，腸球菌在血瓊脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周圍可出現(xiàn)α溶血環(huán)，也可無(wú)溶血環(huán)。

腸球菌屬步驟和方法862、形態(tài)觀察涂片、革蘭氏染色鏡檢，記錄鏡下細(xì)菌染色性、大小、形態(tài)及排列。腸球菌形態(tài)類似鏈球菌，為單個(gè)、成雙或短鏈狀排列的卵圓形革蘭氏陽(yáng)性球菌。2、形態(tài)觀察873、生化反應(yīng)：（1）觸酶試驗(yàn)：腸球菌屬為陰性反應(yīng)。（2）膽汁-七葉苷試驗(yàn)：原理：培養(yǎng)基的膽汁對(duì)某些細(xì)菌有抑制作用，只有既能在膽汁中生長(zhǎng)，又能水解七葉苷的細(xì)菌才能表現(xiàn)出對(duì)七葉苷的水解活性。腸球菌能在膽汁中生長(zhǎng)，并水解七葉苷，使培養(yǎng)基變黑。3、生化反應(yīng)：88

方法：將被檢菌1~3個(gè)菌落接種于膽汁-七葉苷瓊脂培養(yǎng)基，35℃孵育18~24h。結(jié)果：細(xì)菌生長(zhǎng)，且培養(yǎng)基變黑色或棕褐色為陽(yáng)性，不變色為陰性。腸球菌為陽(yáng)性。方法：將被檢菌1~3個(gè)菌落接種于膽汁-89（3）65g/LNaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)：原理：腸球菌有很強(qiáng)的耐鹽能力，能在65g/LNaCl血清肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而鏈球菌的耐鹽能力較弱，在此培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。結(jié)果：細(xì)菌生長(zhǎng)且使得培養(yǎng)基變黃為陽(yáng)性，不生長(zhǎng)為陰性，腸球菌為陽(yáng)性。（3）65g/LNaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)：90（3）PYR試驗(yàn)：原理：多數(shù)腸球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR），釋放出β-萘基酰胺，與PYR試劑作用形成紅色復(fù)合物。

方法：挑取被檢菌落在含有PYR的紙片上涂擦，35℃孵育5min，再于紙片上滴加PYR試劑，觀察紙片顏色。結(jié)果：約1min后紙片呈紅色為陽(yáng)性，不變色為陰性。腸球菌、A群鏈球菌和某些凝固酶陰性的葡萄球菌為陽(yáng)性。（3）PYR試驗(yàn)：91鏈球菌腸球菌課件92肺炎鏈球菌S.pneumoniae

主要生化反應(yīng)

optochin試驗(yàn):

含5μgoptochin紙片貼于涂布有待測(cè)菌的平板上35℃孵育過(guò)夜，抑菌圈大于14mm即為敏感。甲型溶血鏈球菌(R)肺炎鏈球菌(S)肺炎鏈球菌S.pneumoniae

主要生化反應(yīng)甲型溶93方法：挑取被檢菌落，密涂于血瓊脂平板上，將桿菌肽紙片（0.原理：B群鏈球菌有馬尿酸水解酶，可水解馬尿酸為苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可與FeCl3，結(jié)合形成苯甲酸鐵沉淀。方法：將待檢菌接種65g/LNaCl血清肉湯中，35℃孵育18-24h。多數(shù)有透明溶血環(huán)(b溶血現(xiàn)象)。optochin試驗(yàn):含5μgoptochin紙片貼于涂布有待測(cè)菌的平板上35℃孵育過(guò)夜，抑菌圈大于14mm即為敏感。肺炎鏈球菌莢膜染色特點(diǎn)鏈球菌屬為陰性。pneumoniae球形或橢圓形，鏈狀排列，革蘭染色陽(yáng)性(G＋)，方法：將被檢菌1~3個(gè)菌落接種于膽汁-七葉苷瓊脂培養(yǎng)基，35℃孵育18~24h。待檢菌與哪群致敏膠乳凝集就表明該菌為相應(yīng)血清群的鏈球菌。結(jié)果判斷：出現(xiàn)凝集為陽(yáng)性、不凝集為陰性。涂片、革蘭氏染色鏡檢，記錄鏡下細(xì)菌染色性、大小、形態(tài)、排列及莢膜。原理：B群溶血性鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，該物質(zhì)可促進(jìn)金黃色葡萄球菌β溶血素的活性，故在血瓊脂平板上兩菌交界處溶血能力增強(qiáng)，形成箭頭狀透明溶血區(qū)。optochin試驗(yàn):含5μgoptochin紙片貼于涂布有待測(cè)菌的平板上35℃孵育過(guò)夜，抑菌圈大于14mm即為敏感。（6）血清學(xué)試驗(yàn)（鏈球菌快速分群乳膠凝集試驗(yàn)）在反應(yīng)板個(gè)空內(nèi)分別滴加稀釋血清、陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清1滴（50ul），再于各孔內(nèi)滴加1滴溶血素“O”溶液，輕搖1min混勻，最后在各孔內(nèi)分別滴加1滴ASO膠乳試劑，輕搖3min后觀察結(jié)果。（6）血清學(xué)試驗(yàn)（鏈球菌