人酶聯(lián)檢測劑盒使用說明書,人基質(zhì)裂解素(ST3)試劑盒解讀

人酶聯(lián)檢測劑盒使用說明書,人基質(zhì)裂解素（ST③ELISA試劑盒本試劑僅供研究使用供應(yīng)商：上海喬羽生物科技有限公司目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)裂解素（ST③的含量。實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人基質(zhì)裂解素（ST③水平。用純化的轉(zhuǎn)化生長因子（ST③抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入轉(zhuǎn)化生長因子（ST③,再與HR刖記的羊抗鼠抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMBS色。TMBftHRPW的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的轉(zhuǎn)化生長因子（ST③呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（ODfi）,通過標準曲線計算樣品中人基質(zhì)裂解素（ST③濃度。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶標板1塊板(96T)半塊板（48T）塑料膜板蓋1塊半塊標準品：100ng/ml1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)標準品稀釋緩沖液1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)生物素標記的抗OT抗體1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)親和鏈酶素-HRP1瓶(12ml)1瓶(5ml)洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個1個崎標包被板1X481X962-8C保存標準品：45mol/L0.5mlX1瓶0.5mlX1瓶2-8C保存標準品稀釋液1.5mlX1瓶1.5mlX1瓶2-8C保存酶標試劑3mlx1瓶6mlX1瓶2-8C保存樣品稀釋液3mlx1瓶一6mlx1瓶2-8C保存顯色劑A液3mlx1瓶6mlx1瓶2-8C保存顯色劑B液3mlx1瓶6mlx1瓶2-8C保存終止液3mlx1瓶6mlx1瓶2-8C保存濃縮洗滌液（20mlX20倍）X1瓶（20mlX30倍）x1瓶2-8C保存自備材料：.蒸儲水。.加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。.振蕩器及磁力攪拌器等。樣品收集、處理及保存方法：1、血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000Xg離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。血漿……EDTA檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000Xg離心30分鐘去除顆粒。細胞上精液……1000Xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000Xg離心10分鐘，取上清液。保存……如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70C保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37c或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。人基質(zhì)裂解素ELISA試劑盒操作注意事項：試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。?使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取ODfi。加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。安全性：避免直接接觸終止液和底物A、B,一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。實難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。試劑的準備：標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：100ng/ml（6號標準品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul50ng/ml（5號標準品）100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液25ng/ml（4號標準品）100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液12.5ng/ml（3號標準品）100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液6.25ng/ml（2號標準品）100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液3.12ng/ml（1號標準品）100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液0ng/ml（空白對昭）八、、）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul洗滌緩沖液（50X）的稀釋：蒸儲水50倍稀釋。試劑盒性能：靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%人基質(zhì)裂解素ELISA檢測試齊盒操作步驟：使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37c溫育45分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻，37c溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻，37c溫育5分鐘。避免光照。取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。在450nm波長處測定各孔的ODfi。結(jié)果判斷與分析：儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的ODfi以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應(yīng)的OT標準品濃度為橫坐標(X),做得相應(yīng)的曲線，樣品的OT含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的ODfi代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。檢測值范圍：0-100ng/ml敏感度：0.39ng/mlOwnedmaterial:distilledwater.pipettes:5ul,10ul,50ul,100ul,200ul,500ul,1000ul.oscillatorandamagneticstirreretc..Thecollection,processingandpreservationmethodssamples:serumToavoidanycellstimulationduringoperation.Pyrogenandendotoxinfreetube.Bloodwascollectedafter1000xgcentrifugationfor10minutesinserumandredbloodcellsrapidlyandcarefullyisolated.plasmaEDTA,citrateandheparinplasmacanbeusedtodetect.1000*gcentrifugefor30minutestoremoveparticles.cellsupernatant1000*gcentrifugefor10minutestoremoveparticlesandpolymer.homogenateTheorganizationwilladdsalineground.1000*gsupernatantwascentrifugedfor10minutes.saveIfthesamplesarenotusedimmediately,itshouldbedividedintosmallpartsof-70Cpreservation,toavoidrepeatedfreezing.Asfaraspossibledonotusehemolysisorhighbloodlipids.Ifalargenumberofparticlesintheserum,testingpriortocentrifugationorfiltration.Don'tthawat37DEGCorhigherheatingtemperature.Shouldbethawedatroomtemperatureandensuretheuniformfullythawedsamples.HumantissuefactorELISAkit:Thereagentshouldlabelstorageinstructions,returntoroomtemperaturebeforeuse.Thestandardshouldbediscardedafterthinning,cannotbesaved.No-Experimentstripsshouldbeimmediatelyputbackthebag,sealedtopreventspoilage.Otherreagents-notshouldbepackagedorcovered.Donotmixdifferentbatchesofreagents.Shelflifebeforeuse.]usingdisposablesuctionheadtoavoidcrosscontaminationandabsorbtheterminationoftheliquidandthesubstrateofaandBliquid,avoidusingmetalpartsofthesampleaddingdevice.Plasticcontainerconfigurationwashingliquid-clean.Allsamplesofingredientsandmixwellbeforeuseinthekit.ThesubstrateAshouldbevolatile,avoidlongtimetoopenthelid.TheBsubstrateissensitivetolight,avoidlongtimeexposuretolight.Avoidhandcontact,toxic.Aftercompletionoftheexperimentshouldbeimmediatelyreadod.Theaddedreagentsshouldbeconsistentinordertoensurethatallreactionplateholeincubationtime.Thetemperatureinaccordancewiththeamountofliquidandthesequenceofinstructionsindicatedtime,sterileoperation.Safety:toavoiddirectcontactwiththestopsolutionandthesubstrateA,B,onceexposedtothesefluids,washwithwaterassoonaspossible.toeatanddrink,donotsmokeorusecosmetics.don'tlearnanyoftheingredientsofthereagentboxwiththemouth.Preparationofreagent:standardserialdilutionstandardshouldbepreparedintheexperiment,cannotbestored.Thedilutionstandardosc川atingmixing.Pressthedilutionratiointhetable:OnehundredNg/ml(StandardNo.6)timestheoriginalconcentrationwithoutdilutiondirectlyinto50ulFiftyNg/ml(5standard)standardproductoriginaltimesstandard100uljoined100uldilutionTwenty-fiveNg/ml(4standard)standard100ulStandardNo.5productwith100uldiluentTwelvepointfiveNg/ml(3standard)standard100ulStandardNo.4productwith100uldiluentSixpointtwofiveNg/ml(2standard)standard100ulStandardNo.3productwith100uldiluentThreepointonetwoNg/ml(1standard)standard100ulStandardNo.2productwith100uldiluentZeroNg/ml(blankcontrol)theoriginalconcentrationtimeswithoutdilutiondirectlyinto50ul2washingbuffer(50*)dilution:distilledwaterdiluted50times.Theperformanceofkit:sensitivity:minimumdetectionconcentrationislessthan1standard.Lineardilution.SamplelinearregressioncorrelationwithexpectedconcentrationcoefficientRvalueis0.990.:nospecificreactionwithothercytokines.repeatability:plate,platebetweenthecoefficientsofvariationwerelessthan10%.HumantissuefactorELISAkitsteps:beforeuse,allreagentsandmixing.Don'tmaketheliquidtoproducealargeamountoffoam,soastoavoidwhenaddingalotofbubbles,theerroronthesample.accordingtodeterminethenumberofsamplenumberplusstandardstripnumber.Eachstandardandblankshouldbewells.Eachsampleisdeterminedbythenumberofthem,canusecomplexholetodocomplexhole.dilutedafterstandard50ulinreactionhole,addedtothesample50ULinreactionholetobemeasured.Immediatelyjoinedthe50ULantibodybiotin.Coverfilmplate,gentlyshake,37degrees45minutesofincubation.leftholeliquid,eachholefilledwithwashingliquid,oscillating30secondsoffthewashingliquid,patdrywithabsorbentpaper.Thisoperationisrepeated4times.Ifyouusethewashingmachinewashing,washingtimesincreasea.perholeaddingchainaffinityenzyme-HRP100ul,gentlyoscillatingmixing,37degrees30minutesincubation.leftholeliquid,eachholefilledwithwashingliquid,oscillating30secondsoffthewashingliquid,patdrywithabsorbentpaper.Thisoperationisrepeated4times.Ifyouusethewashingmachinewashing,washingtimesin