腫瘤分子診斷課件

腫瘤分子診斷服務介紹腫瘤分子診斷2標準化用藥個體化用藥標準化用藥個體化用藥標準療法1標準療法2標準療法32標準化用藥個體化用藥標準化用藥個體化用藥標準療法1標準療法腫瘤藥物與相關靶標腫瘤藥物與相關靶標4如何實現(xiàn)個體化用藥？分子分型藥物療效4如何實現(xiàn)個體化用藥？分子分型藥物療效目前的服務目前的平臺目前的客戶腫瘤TaqMan-ARMs醫(yī)院感染性疾病測序健康管理公司新生兒篩查實時定量PCR研究所qPCR-HRM藥廠循環(huán)腫瘤細胞（CTC）保險公司目前的服務目前的平臺目前的客戶腫瘤TaqMan-ARMs醫(yī)院體細胞基因突變檢測mRNA表達檢測循環(huán)腫瘤細胞（CTC)檢測基因多態(tài)性檢測體細胞基因突變檢測mRNA表達檢測循環(huán)腫瘤細胞（CTC)檢測體細胞基因突變檢測EGFR,K-RAS,B-RAF，C-KIT體細胞基因突變檢測EGFR,K-RAS,B-RAF，C-1、基因突變檢測技術

8——qPCR-HRM（可用于血漿標本檢測）——Taqman-ARMS（與國際獲批的技術相當）——DNA測序（基因突變檢測的金標準技術）1、基因突變檢測技術

8——qPCR-HRM（可用于血漿標突變檢測技術之一Taqman-ARMS9所有定量PCR儀均可使用。

主要用于各類組織，包括手術、穿刺或鏡檢組織類。2小時即可完成檢測試劑盒商業(yè)化程度高，臨床認可程度高

國內(nèi)已有試劑盒獲批SFDA突變檢測技術之一Taqman-ARMS9所有定量PCR突變檢測技術之一

qPCR-HRM10qPCR-HRM技術是基于高效穩(wěn)健的PCR上的高分辨熔解曲線分析（High-ResolutionMelting）技術，靈敏度可以達到1%-0.1%，既能檢測已知突變，也能檢測未知突變。

qPCR-HRM的突變檢測已獲國際多中心雙盲實驗驗證（JournalofMolecularDiagnostics,Vol.11,No.6,November2009）。實例圖：利用HRM技術對7個樣本分別進行EGFR（左圖）、KRAS（右圖）突變檢測，紅色表示該樣本發(fā)生突變，藍色表示未突變，藍色橫直線為陰性對照。左圖顯示2個樣本發(fā)生了EGFR突變；右圖顯示4個樣本發(fā)生了KRAS突變。EGFRKRAS突變檢測技術之一qPCR-HRM10qPC11血漿EGFR突變檢測：18號外顯子：無突變19號外顯子：突變20號外顯子：無突變21號外顯子：無突變附圖主要特點：

實現(xiàn)血漿中來自腫瘤的微量DNA的突變檢測。

目前所做的臨床實驗中，血漿EGFR檢測結(jié)果與其手術標本之間的整體符合率符合率達到91.25%。

是臨床上不能手術、也同時不愿穿刺患者的替代檢測方案；也可獲得性耐藥進行預先檢測。qPCR-HRM用于血漿微量突變檢測11血漿EGFR突變檢測：主要特點：qPCR-HRM用于血國際公認的分子檢測金標準有明確的物價收費實驗流程較復雜，需要大型儀器突變檢測技術之一

DNA測序國際公認的分子檢測金標準突變檢測技術之一DNA測序腫瘤類型靶向藥物基因療效佳的情況非小細胞肺癌易瑞沙（Iressa）特羅凱（Tarceva）EGFRKRASEGFR突變/KRAS野生胃腸間質(zhì)瘤格列衛(wèi)（Gleevec）C-KitC-kit第11外顯子突變/PDGFR突變結(jié)直腸癌愛必妥KRASBRAF野生型突變檢測項目列舉腫瘤類型靶向藥物基因療效佳的情況非小細胞肺癌易瑞沙（IresEGFR突變檢測EGFRE19/E21敏感突變

適合使用TKI藥物治療耐藥位點檢測T790MEGFR突變檢測EGFRE19/E21敏感突變耐藥位K-RAS突變檢測K-RAS突變檢測BRAFNCCN2010年NCCN《結(jié)直腸癌臨床實踐指南》指出：K-ras基因為野生型而同時具有BRAFV600E突變的患者，靶向EGFR抗體治療無效。BRAF-V600E檢測腫瘤學臨床實踐指南（中國版）2010第一版BRAFNCCN2010年NCCN《結(jié)直腸癌臨床實踐指導腫瘤靶向治療的靶標藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容檢測結(jié)果預測內(nèi)容吉非替尼/厄洛替尼EGFR基因突變野生型耐藥突變型敏感西妥昔單抗K-ras，B-raf基因突變野生型敏感突變型耐藥伊馬替尼C-Kit基因突變野生型耐藥突變型敏感指導腫瘤靶向治療的靶標藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容檢測結(jié)果預測內(nèi)基因多態(tài)性檢測與藥物代謝毒性(UGT1A1,CYP,DPD)基因多態(tài)性檢測與藥物代謝毒性2022/12/1819單核苷酸多態(tài)性（SNP）是最常見的基因變異至少1%的人群絕大多數(shù)人群共有序列GtoCSNP

位點變異的序列最常見的基因多態(tài)性SNP2022/12/1619單核苷酸多態(tài)性（SNP）是最常見的基2022/12/1820為什么

SNPs重要?個體1個體2=SNPvariationsinDNASNP標志基因A基因B基因ASNP可能使基因B產(chǎn)生變異的蛋白質(zhì)分子2022/12/1620為什么SNPs重要?個體1個體2022/12/1821個體的SNP譜SNP譜ASNP譜BSNP譜CSNP譜FSNP譜ESNP譜D2022/12/1621個體的SNP譜SNP譜ASNP2022/12/1822SNP譜有助于確定藥物的療效和副作用乳腺癌病人個體的SNP譜可以分成不同的類型SNP譜A對藥物有期望的反應對藥物沒有期望的反應SNP譜A的人對藥物有期望的反應SNP譜ESNP譜BSNP譜CSNP譜D2022/12/1622SNP譜有助于確定藥物的療效和副作藥物代謝與SNP檢測化療藥物在體內(nèi)經(jīng)過吸收、代謝、分布和清除，通過其活性物質(zhì)對治療靶點的直接攻擊而發(fā)揮作用，整個過程需要多種蛋白質(zhì)/酶的共同參與和協(xié)同作用。SNP主要是指在基因組水平上變異頻率大于1%的單核苷酸變異所引起的DNA序列多態(tài)性，多態(tài)性會導致不同個體體內(nèi)各種蛋白，酶活性的差異，因此導致藥物使用情況的不同。藥物代謝與SNP檢測化療藥物在體內(nèi)經(jīng)過吸收、代謝、分布和清除膽紅素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因（UGT1A1）UGT1A1*27(C686A)或UGT1A1*28[(TA)7TAA]:

野生型：6個TA

UGT1A1*6(G211A)：使UGT1A1的轉(zhuǎn)錄活性下降了三分之二。導致對伊立替康的毒性增加。FDA提示：UGT1A1的多態(tài)性-伊立替康的毒性增加(6TA)此型的酶活性是野生型的49％

。膽紅素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因（UGT1A1）UGT1CYP19A1多態(tài)性影響芳香化酶抑制劑療效25CYP19A1是芳香化酶的編碼基因，臨床研究已證實有著很大的影響作用。在接受芳香化酶抑制劑治療的乳腺癌患者中，攜帶CYP19A1基因rs4646（G>T）突變患者的治療效果較無此突變的患者顯著2-4（下圖）。CYP19A1rs4646（G>T）SNP是乳腺癌患者接受芳香化酶抑制劑治療療效的有效預測指標。

如圖一項對乳腺癌患者的臨床研究顯示：CYP19A1基因rs4646突變的患者使用芳香化酶抑制劑藥物療效明顯優(yōu)于野生型患者（p<0.0001）1。參考文獻

1.IanESetal.NEnglJMed.2003;384:2431-42.

2.RamonCetal.ClinCancerRes.2008;14:811-6.

3.LunardiGetal.JClinOncol.2009;27:555.

4.FaschingPAetal.BreastCancerResTr.2008;112:89-98.CYP19A1多態(tài)性影響芳香化酶抑制劑療效25CYP19A基因表達檢測（mRNA表達）(ERCC1\BRCA1\TUBB3\TS)基因表達檢測（mRNA表達）基因表達檢測指標（靶向藥物）相關腫瘤藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容檢測結(jié)果預測內(nèi)容結(jié)直腸癌貝伐單抗VEGFRmRNA表達水平高療效好低療效差乳腺癌曲妥珠單抗HER-2FISH/mRNA表達水平高療效好低療效差肝癌索拉非尼pDGFRmRNA表達水平低療效好高療效差基因表達檢測指標（靶向藥物）相關腫瘤藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容28靶向藥物項目名稱樣本結(jié)果療效關系曲妥珠單抗HER2乳腺癌（手術/穿刺）+陽性療效好↑-↓HER2基因表達檢測采用RT-PCR方法替代FISH或免疫組化方法，臨床準確率達97%以上。主要特點：客觀，不用人為觀察。時間短，整個檢測60分鐘左右完成。高通量，一次可以檢測6人份。28靶向藥物項目名稱樣本結(jié)果療效關系曲妥珠HER2乳腺癌（手PDGFRα低表達患者的無進展生存期和總生存期明顯長于高表達患者索拉菲尼檢測基因-PDGFRPDGFRα低表達患者的無進展生存期和總生存期明顯長于高表貝伐單抗檢測基因-VEGFR貝伐單抗檢測基因-VEGFR化療藥物與檢測靶標藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容奧沙利鉑/卡鉑/順鉑ERCC1/BRCA1mRNA表達水平

5-FU/培美曲賽TSmRNA表達水平紫杉醇/多西紫杉醇/長春瑞濱STUBB3,STMN1mRNA表達水平替莫唑胺MGMTmRNA表達水平阿霉素/表柔比星TOPOⅡamRNA表達水平吉西他濱RRM1mRNA表達水平化療藥物與檢測靶標藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容奧沙利鉑/卡鉑/順ERCC1表達與鉑類藥物療效相關的臨床數(shù)據(jù)ERCC1陰性患者，能從鉑類輔助化療中獲益.ERCC1表達與鉑類藥物療效相關的臨床數(shù)據(jù)ERCC1陰性患BRCA1/2表達與鉑類藥物療效相關的臨床數(shù)據(jù)BRCA1過度表達鉑類耐藥的預測因子抗微管類藥物的敏感因子BRCA1/2表達與鉑類藥物療效相關的臨床數(shù)據(jù)BRCA1過34低TSmRNA水平的腫瘤患者接受氟類化療的效果較好，中位生存期較長。

TS低表達的患者對培美曲賽的療效好。TS高表達影響氟類和培美曲塞藥效ShirotaYetal.JClinOncol.2001;19:4298-30434TS高表達影響氟類和培美曲塞藥效ShirotaYet化療藥物與檢測靶標藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容檢測結(jié)果預測內(nèi)容奧沙利鉑/卡鉑/順鉑ERCC1/BRCA1mRNA表達水平

高療效差低療效好5-FU/培美曲賽TSmRNA表達水平高療效差低療效好紫杉醇/多西紫杉醇/長春瑞濱STUBB3,STMN1mRNA表達水平高療效差低療效好替莫唑胺MGMTmRNA表達水平高療效差低療效好阿霉素/表柔比星TOPOⅡamRNA表達水平高療效好低療效差吉西他濱RRM1mRNA表達水平高療效差低療效好化療藥物與檢測靶標藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容檢測結(jié)果預測內(nèi)容奧小結(jié)分子靶標分類靶向藥物靶標基因突變EGFR突變K-RAS突變B-RAF突變基因表達VEGFR表達pDGFR表達HER-2表達化療藥物靶標基因表達ERCC1表達TS表達RRM1表達基因多態(tài)性UGT1A1多態(tài)性CYP19A1多態(tài)性DPD多態(tài)性小結(jié)分子靶標分類靶向藥物靶標基因突變EGFR突變K-R藥物名稱靶標檢測內(nèi)容化療藥物鉑類ERCC1，BRCA1mRNA水平，2項XRCC1，

GSTP1，

MRP2基因多態(tài)性，4項（女，6項）BRCA1(女)異環(huán)磷酰胺CYP2C9*3基因多態(tài)性，1項絲裂霉素NQO1基因多態(tài)性，1項依托泊苷TopoⅡαmRNA水平，1項CYP3A4*4,MDR1基因多態(tài)性，2項紫杉醇/多西紫杉醇/長春瑞濱TUBB3,STMN1mRNA水平，2項CYP8*3基因多態(tài)性，1項伊立替康UGT1A1*6,

UGT1A1*28基因多態(tài)性，2項吉西他濱RRM1mRNA水平，1項CDA基因多態(tài)性，1項培美曲賽TSmRNA水平，1項靶向藥物吉非替尼/厄洛替尼EGFR(Exon19/20/21)基因突變，3項西妥昔單抗K-ras,B-raf基因突變，3項EGFRmRNA水平，1項貝伐單抗VEGFRmRNA水平，1項NSCLC個體化用藥系統(tǒng)方案藥物名稱靶標檢測內(nèi)容化療藥物鉑類ERCC1，BRCA1mRN

遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌（HNPCC)是由DNA錯配修復基因（MMR)發(fā)生基因突變導致的一種單基因的顯性遺傳疾病，又稱lynch綜合癥，發(fā)生基因異常的個體其患發(fā)結(jié)直腸癌的風險約為60%。HNPCC實驗室檢測流程

遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌（HNPCC)是由DNA1背景介紹之HNPCC與MMRMSI目前已發(fā)現(xiàn)的導致人類HNPCC發(fā)生的MMR有MSH2、MLH1、MSH6、PMS1、PMS2，其中MSH2和MLH1基因的功能最重要，其突變占已發(fā)現(xiàn)突變的90%左右。391背景介紹之HNPCC與MMRMSI目前已發(fā)現(xiàn)的導致人類1背景介紹之HNPCC與MMRMSI研究顯示，

約有86%-95%的HNPCC具有MSI特征，

而散發(fā)型大腸癌中只有16%。MSI所產(chǎn)生的遺傳不穩(wěn)定性將加速惡性腫瘤的發(fā)生。1997年美國NCI(nationalcancerinstitution)將MSI確定為檢測和篩選HNPCC的重要方法之一，并推薦將BAT26、BAT25、D2S123、D5S346和D17S2505個位點作為檢測HNPCC的位點。401背景介紹之HNPCC與MMRMSI研究顯示，約有86實驗室檢測流程MSI檢測MLH1，MSH2，MSH6突變篩查MLH1，MSH2，MSH6熱點突變檢測實驗室檢測流程MSI檢測MLH1，MSH2，MSH6MLH1HNPCC檢測項目檢測名稱檢測技術臨床意義MSI（5個位點）PCR+片段分析法HNPCC風險評估明確是否檢測MMR突變MLH1,MSH2,MSH6基因突變檢測（35個外顯子）DNA測序HNPCC鑒別診斷確定突變位點，評估家族中高危個體風險熱點突變檢測DNA測序確定家族中是否存在已知的突變HNPCC檢測項目檢測名稱檢測技術臨床意義MSI（5個位點）標本要求檢測名稱標本要求MSI檢測病理蠟塊一份（或白片10片），外加5ml抗凝外周血，4度運達MLH1,MSH2,MSH6基因突變檢測病理蠟塊一份（或白片10片），常溫運達熱點突變檢測5ml抗凝外周血，4度運達標本要求檢測名稱標本要求MSI檢測病理蠟塊一份（或白片10片腫瘤在變"WecanlookattumorsforchangesattheDNA,RNAandproteinlevels.Itcertainlygivesusawayoflookingatwhatishappeninginsideatumor,andthat'sveryexciting."

Dr.GordonMillsChairSystemsBiologyMDAndersonCancerCenterHouston,TxAsreportedin“TheCancerTest”–TIME

(June

14,2007)腫瘤在變"Wecanlookattumorsfor循環(huán)腫瘤細胞1869年AustMedJ，Ashworth最早在轉(zhuǎn)移性癌癥患者血液中觀察到。2005年NEnglJMed，Cristofanilli證實治療前CTC數(shù)目是轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者無進展生存期和總生存期的獨立預測因子。循環(huán)腫瘤細胞指從實體瘤中脫離出來并進入外周血液循環(huán)的腫瘤細胞。原發(fā)腫瘤血管生成侵潤侵入血管內(nèi)侵入血管外

(CTC)血管內(nèi)增殖

(CTM)轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移播散腫瘤細胞（DTC）微轉(zhuǎn)移休眠灶循環(huán)腫瘤細胞（CTC）循環(huán)腫瘤

微栓（CTM）凋亡的CTC侵潤腫瘤細胞

擴增血管生成上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）間質(zhì)－上皮轉(zhuǎn)化（MET）轉(zhuǎn)移到骨髓和其他器官循環(huán)腫瘤細胞循環(huán)腫瘤細胞指從實體瘤中脫離出來并進入外周獲取CTC需要解決的技術問題從紅細胞和白細胞中富集惡性腫瘤細胞

將惡性腫瘤細胞與紅細胞、白細胞、正常上皮細胞、造血干細胞等區(qū)分開來每10mL血液中可能僅含有幾個到幾十個循環(huán)腫瘤細胞，而10mL血液中含有的白細胞約有1億個，紅細胞有500億個。獲取CTC需要解決的技術問題從紅細胞和白細胞中富集惡性腫瘤細三種技術過濾法ISET:

IsolationbySizeofEpithelialTumorcells8μm孔徑過濾膜，漏檢體積較小的腫瘤細胞敏感性低梯度密度法腫瘤細胞和單核細胞密度小于1.077g/mlCTC純度低，混入較多白細胞腫瘤細胞會遷移至血漿層，而聚集后容易下沉聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)對細胞有毒性免疫磁珠法腫瘤細胞表面抗原EpCAM與包繞著磁珠的特異性單抗相結(jié)合CellSearch細胞保存方法長達96小時實驗室室間差異小EpCAM的假陽性和假陰性三種技術過濾法ISET:

IsolationbySiz90年代中期開始摸索捕獲、分析CTC的方法1999-2003大量臨床實驗建立CellSearch與CTC的臨床相關數(shù)據(jù)2004獲得美國FDA批準用于臨床2009ClevelandClinic十大醫(yī)學突破第一名

2009PrixGalienUSA最佳醫(yī)學技術獎2010.1中國CTC在復發(fā)轉(zhuǎn)移乳腺癌上的應用注冊實驗

2011.5

CTC在小細胞肺癌上的應用實驗研究

……CellSearch是全球第一也是唯一經(jīng)FDA批準可用于臨床的循環(huán)腫瘤細胞（CTC）產(chǎn)品1983磁流體90年代中期開始摸索捕獲、分析CTC的方法1999-2003白細胞Anti-CD45CD45NucleusDAPI如何鑒別出CTC?藻紅蛋白

(PE)變藻藍蛋白(APC)CTCAnti-EpCAM磁珠Anti-CK-PENucleusDAPICKEpCAM在CellSearch?檢測中，CTC被設定為：EpCamCK-8,18和/或19DAPICD45+++-白細胞Anti-CD45CD45Nucleus如何鑒別出CTCellSave

儲存管CellSearch

CTC檢測試劑盒CellSearch:自動化的CTC分離、富集和計數(shù)CellTracksAutoPrep系統(tǒng)磁巢MagnestCellTracksAnalyzerII96小時穩(wěn)定2004年FDA批準CTC質(zhì)控試劑盒磁力

捕獲FIRSTANDONLYAPPROVEDCellSave儲存管CellSearchCellS切點的意義——評估預后切點的意義——評估預后CTC數(shù)量變化是預后改變的重要預測CTC數(shù)量變化是預后改變的重要預測CTC計數(shù)CTC的分子特性指示預后快速療效評估輔助檢測抗癌藥物的反應——作為預測和/或藥物動力學生物標志物判斷病人是否需要輔助化療檢測癌癥復發(fā)輔助診斷實時活檢——腫瘤的生物學行為闡明預后和預計的分子學特征檢測抗藥情況——基于獲得連續(xù)樣本的便利性提高對生物過程機制的了解發(fā)現(xiàn)并鑒定新治療靶點CTC的應用：從細胞計數(shù)到分子特性CTC計數(shù)CTC的分子特性指示預后實時活檢——腫瘤的生物學行腫瘤分子診斷服務介紹腫瘤分子診斷55標準化用藥個體化用藥標準化用藥個體化用藥標準療法1標準療法2標準療法32標準化用藥個體化用藥標準化用藥個體化用藥標準療法1標準療法腫瘤藥物與相關靶標腫瘤藥物與相關靶標57如何實現(xiàn)個體化用藥？分子分型藥物療效4如何實現(xiàn)個體化用藥？分子分型藥物療效目前的服務目前的平臺目前的客戶腫瘤TaqMan-ARMs醫(yī)院感染性疾病測序健康管理公司新生兒篩查實時定量PCR研究所qPCR-HRM藥廠循環(huán)腫瘤細胞（CTC）保險公司目前的服務目前的平臺目前的客戶腫瘤TaqMan-ARMs醫(yī)院體細胞基因突變檢測mRNA表達檢測循環(huán)腫瘤細胞（CTC)檢測基因多態(tài)性檢測體細胞基因突變檢測mRNA表達檢測循環(huán)腫瘤細胞（CTC)檢測體細胞基因突變檢測EGFR,K-RAS,B-RAF，C-KIT體細胞基因突變檢測EGFR,K-RAS,B-RAF，C-1、基因突變檢測技術

61——qPCR-HRM（可用于血漿標本檢測）——Taqman-ARMS（與國際獲批的技術相當）——DNA測序（基因突變檢測的金標準技術）1、基因突變檢測技術

8——qPCR-HRM（可用于血漿標突變檢測技術之一Taqman-ARMS62所有定量PCR儀均可使用。

主要用于各類組織，包括手術、穿刺或鏡檢組織類。2小時即可完成檢測試劑盒商業(yè)化程度高，臨床認可程度高

國內(nèi)已有試劑盒獲批SFDA突變檢測技術之一Taqman-ARMS9所有定量PCR突變檢測技術之一

qPCR-HRM63qPCR-HRM技術是基于高效穩(wěn)健的PCR上的高分辨熔解曲線分析（High-ResolutionMelting）技術，靈敏度可以達到1%-0.1%，既能檢測已知突變，也能檢測未知突變。

qPCR-HRM的突變檢測已獲國際多中心雙盲實驗驗證（JournalofMolecularDiagnostics,Vol.11,No.6,November2009）。實例圖：利用HRM技術對7個樣本分別進行EGFR（左圖）、KRAS（右圖）突變檢測，紅色表示該樣本發(fā)生突變，藍色表示未突變，藍色橫直線為陰性對照。左圖顯示2個樣本發(fā)生了EGFR突變；右圖顯示4個樣本發(fā)生了KRAS突變。EGFRKRAS突變檢測技術之一qPCR-HRM10qPC64血漿EGFR突變檢測：18號外顯子：無突變19號外顯子：突變20號外顯子：無突變21號外顯子：無突變附圖主要特點：

實現(xiàn)血漿中來自腫瘤的微量DNA的突變檢測。

目前所做的臨床實驗中，血漿EGFR檢測結(jié)果與其手術標本之間的整體符合率符合率達到91.25%。

是臨床上不能手術、也同時不愿穿刺患者的替代檢測方案；也可獲得性耐藥進行預先檢測。qPCR-HRM用于血漿微量突變檢測11血漿EGFR突變檢測：主要特點：qPCR-HRM用于血國際公認的分子檢測金標準有明確的物價收費實驗流程較復雜，需要大型儀器突變檢測技術之一

DNA測序國際公認的分子檢測金標準突變檢測技術之一DNA測序腫瘤類型靶向藥物基因療效佳的情況非小細胞肺癌易瑞沙（Iressa）特羅凱（Tarceva）EGFRKRASEGFR突變/KRAS野生胃腸間質(zhì)瘤格列衛(wèi)（Gleevec）C-KitC-kit第11外顯子突變/PDGFR突變結(jié)直腸癌愛必妥KRASBRAF野生型突變檢測項目列舉腫瘤類型靶向藥物基因療效佳的情況非小細胞肺癌易瑞沙（IresEGFR突變檢測EGFRE19/E21敏感突變

適合使用TKI藥物治療耐藥位點檢測T790MEGFR突變檢測EGFRE19/E21敏感突變耐藥位K-RAS突變檢測K-RAS突變檢測BRAFNCCN2010年NCCN《結(jié)直腸癌臨床實踐指南》指出：K-ras基因為野生型而同時具有BRAFV600E突變的患者，靶向EGFR抗體治療無效。BRAF-V600E檢測腫瘤學臨床實踐指南（中國版）2010第一版BRAFNCCN2010年NCCN《結(jié)直腸癌臨床實踐指導腫瘤靶向治療的靶標藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容檢測結(jié)果預測內(nèi)容吉非替尼/厄洛替尼EGFR基因突變野生型耐藥突變型敏感西妥昔單抗K-ras，B-raf基因突變野生型敏感突變型耐藥伊馬替尼C-Kit基因突變野生型耐藥突變型敏感指導腫瘤靶向治療的靶標藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容檢測結(jié)果預測內(nèi)基因多態(tài)性檢測與藥物代謝毒性(UGT1A1,CYP,DPD)基因多態(tài)性檢測與藥物代謝毒性2022/12/1872單核苷酸多態(tài)性（SNP）是最常見的基因變異至少1%的人群絕大多數(shù)人群共有序列GtoCSNP

位點變異的序列最常見的基因多態(tài)性SNP2022/12/1619單核苷酸多態(tài)性（SNP）是最常見的基2022/12/1873為什么

SNPs重要?個體1個體2=SNPvariationsinDNASNP標志基因A基因B基因ASNP可能使基因B產(chǎn)生變異的蛋白質(zhì)分子2022/12/1620為什么SNPs重要?個體1個體2022/12/1874個體的SNP譜SNP譜ASNP譜BSNP譜CSNP譜FSNP譜ESNP譜D2022/12/1621個體的SNP譜SNP譜ASNP2022/12/1875SNP譜有助于確定藥物的療效和副作用乳腺癌病人個體的SNP譜可以分成不同的類型SNP譜A對藥物有期望的反應對藥物沒有期望的反應SNP譜A的人對藥物有期望的反應SNP譜ESNP譜BSNP譜CSNP譜D2022/12/1622SNP譜有助于確定藥物的療效和副作藥物代謝與SNP檢測化療藥物在體內(nèi)經(jīng)過吸收、代謝、分布和清除，通過其活性物質(zhì)對治療靶點的直接攻擊而發(fā)揮作用，整個過程需要多種蛋白質(zhì)/酶的共同參與和協(xié)同作用。SNP主要是指在基因組水平上變異頻率大于1%的單核苷酸變異所引起的DNA序列多態(tài)性，多態(tài)性會導致不同個體體內(nèi)各種蛋白，酶活性的差異，因此導致藥物使用情況的不同。藥物代謝與SNP檢測化療藥物在體內(nèi)經(jīng)過吸收、代謝、分布和清除膽紅素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因（UGT1A1）UGT1A1*27(C686A)或UGT1A1*28[(TA)7TAA]:

野生型：6個TA

UGT1A1*6(G211A)：使UGT1A1的轉(zhuǎn)錄活性下降了三分之二。導致對伊立替康的毒性增加。FDA提示：UGT1A1的多態(tài)性-伊立替康的毒性增加(6TA)此型的酶活性是野生型的49％

。膽紅素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶基因（UGT1A1）UGT1CYP19A1多態(tài)性影響芳香化酶抑制劑療效78CYP19A1是芳香化酶的編碼基因，臨床研究已證實有著很大的影響作用。在接受芳香化酶抑制劑治療的乳腺癌患者中，攜帶CYP19A1基因rs4646（G>T）突變患者的治療效果較無此突變的患者顯著2-4（下圖）。CYP19A1rs4646（G>T）SNP是乳腺癌患者接受芳香化酶抑制劑治療療效的有效預測指標。

如圖一項對乳腺癌患者的臨床研究顯示：CYP19A1基因rs4646突變的患者使用芳香化酶抑制劑藥物療效明顯優(yōu)于野生型患者（p<0.0001）1。參考文獻

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4.FaschingPAetal.BreastCancerResTr.2008;112:89-98.CYP19A1多態(tài)性影響芳香化酶抑制劑療效25CYP19A基因表達檢測（mRNA表達）(ERCC1\BRCA1\TUBB3\TS)基因表達檢測（mRNA表達）基因表達檢測指標（靶向藥物）相關腫瘤藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容檢測結(jié)果預測內(nèi)容結(jié)直腸癌貝伐單抗VEGFRmRNA表達水平高療效好低療效差乳腺癌曲妥珠單抗HER-2FISH/mRNA表達水平高療效好低療效差肝癌索拉非尼pDGFRmRNA表達水平低療效好高療效差基因表達檢測指標（靶向藥物）相關腫瘤藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容81靶向藥物項目名稱樣本結(jié)果療效關系曲妥珠單抗HER2乳腺癌（手術/穿刺）+陽性療效好↑-↓HER2基因表達檢測采用RT-PCR方法替代FISH或免疫組化方法，臨床準確率達97%以上。主要特點：客觀，不用人為觀察。時間短，整個檢測60分鐘左右完成。高通量，一次可以檢測6人份。28靶向藥物項目名稱樣本結(jié)果療效關系曲妥珠HER2乳腺癌（手PDGFRα低表達患者的無進展生存期和總生存期明顯長于高表達患者索拉菲尼檢測基因-PDGFRPDGFRα低表達患者的無進展生存期和總生存期明顯長于高表貝伐單抗檢測基因-VEGFR貝伐單抗檢測基因-VEGFR化療藥物與檢測靶標藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容奧沙利鉑/卡鉑/順鉑ERCC1/BRCA1mRNA表達水平

5-FU/培美曲賽TSmRNA表達水平紫杉醇/多西紫杉醇/長春瑞濱STUBB3,STMN1mRNA表達水平替莫唑胺MGMTmRNA表達水平阿霉素/表柔比星TOPOⅡamRNA表達水平吉西他濱RRM1mRNA表達水平化療藥物與檢測靶標藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容奧沙利鉑/卡鉑/順ERCC1表達與鉑類藥物療效相關的臨床數(shù)據(jù)ERCC1陰性患者，能從鉑類輔助化療中獲益.ERCC1表達與鉑類藥物療效相關的臨床數(shù)據(jù)ERCC1陰性患BRCA1/2表達與鉑類藥物療效相關的臨床數(shù)據(jù)BRCA1過度表達鉑類耐藥的預測因子抗微管類藥物的敏感因子BRCA1/2表達與鉑類藥物療效相關的臨床數(shù)據(jù)BRCA1過87低TSmRNA水平的腫瘤患者接受氟類化療的效果較好，中位生存期較長。

TS低表達的患者對培美曲賽的療效好。TS高表達影響氟類和培美曲塞藥效ShirotaYetal.JClinOncol.2001;19:4298-30434TS高表達影響氟類和培美曲塞藥效ShirotaYet化療藥物與檢測靶標藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容檢測結(jié)果預測內(nèi)容奧沙利鉑/卡鉑/順鉑ERCC1/BRCA1mRNA表達水平

高療效差低療效好5-FU/培美曲賽TSmRNA表達水平高療效差低療效好紫杉醇/多西紫杉醇/長春瑞濱STUBB3,STMN1mRNA表達水平高療效差低療效好替莫唑胺MGMTmRNA表達水平高療效差低療效好阿霉素/表柔比星TOPOⅡamRNA表達水平高療效好低療效差吉西他濱RRM1mRNA表達水平高療效差低療效好化療藥物與檢測靶標藥物名稱檢測靶標檢測內(nèi)容檢測結(jié)果預測內(nèi)容奧小結(jié)分子靶標分類靶向藥物靶標基因突變EGFR突變K-RAS突變B-RAF突變基因表達VEGFR表達pDGFR表達HER-2表達化療藥物靶標基因表達ERCC1表達TS表達RRM1表達基因多態(tài)性UGT1A1多態(tài)性CYP19A1多態(tài)性DPD多態(tài)性小結(jié)分子靶標分類靶向藥物靶標基因突變EGFR突變K-R藥物名稱靶標檢測內(nèi)容化療藥物鉑類ERCC1，BRCA1mRNA水平，2項XRCC1，

GSTP1，

MRP2基因多態(tài)性，4項（女，6項）BRCA1(女)異環(huán)磷酰胺CYP2C9*3基因多態(tài)性，1項絲裂霉素NQO1基因多態(tài)性，1項依托泊苷TopoⅡαmRNA水平，1項CYP3A4*4,MDR1基因多態(tài)性，2項紫杉醇/多西紫杉醇/長春瑞濱TUBB3,STMN1mRNA水平，2項CYP8*3基因多態(tài)性，1項伊立替康UGT1A1*6,

UGT1A1*28基因多態(tài)性，2項吉西他濱RRM1mRNA水平，1項CDA基因多態(tài)性，1項培美曲賽TSmRNA水平，1項靶向藥物吉非替尼/厄洛替尼EGFR(Exon19/20/21)基因突變，3項西妥昔單抗K-ras,B-raf基因突變，3項EGFRmRNA水平，1項貝伐單抗VEGFRmRNA水平，1項NSCLC個體化用藥系統(tǒng)方案藥物名稱靶標檢測內(nèi)容化療藥物鉑類ERCC1，BRCA1mRN

遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌（HNPCC)是由DNA錯配修復基因（MMR)發(fā)生基因突變導致的一種單基因的顯性遺傳疾病，又稱lynch綜合癥，發(fā)生基因異常的個體其患發(fā)結(jié)直腸癌的風險約為60%。HNPCC實驗室檢測流程

遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌（HNPCC)是由DNA1背景介紹之HNPCC與MMRMSI目前已發(fā)現(xiàn)的導致人類HNPCC發(fā)生的MMR有MSH2、MLH1、MSH6、PMS1、PMS2，其中MSH2和MLH1基因的功能最重要，其突變占已發(fā)現(xiàn)突變的90%左右。921背景介紹之HNPCC與MMRMSI目前已發(fā)現(xiàn)的導致人類1背景介紹之HNPCC與MMRMSI研究顯示，

約有86%-95%的HNPCC具有MSI特征，

而散發(fā)型大腸癌中只有16%。MSI所產(chǎn)生的遺傳不穩(wěn)定性將加速惡性腫瘤的發(fā)生。1997年美國NCI(nationalcancerinstitution)將MSI確定為檢測和篩選HNPCC的重要方法之一，并推薦將BAT26、BAT25、D2S123、D5S346和D17S2505個位點作為檢測HNPCC的位點。931背景介紹之HNPCC與MMRMSI研究顯示，約有86實驗室檢測流程MSI檢測MLH1，MSH2，MSH6突變篩查MLH1，MSH2，MSH6熱點突變檢測實驗室檢測流程MSI檢測MLH1，MSH2，MSH6MLH1HNPCC檢測項目檢測名稱檢測技術臨床意義MSI（5個位點）PCR+片段分析法HNPCC風險評估明確是否檢測MMR突變MLH1,MSH2,MSH6基因突變檢測（35個外顯子）DNA測序HNPCC鑒別診斷確定突變位點，評估家族中高危個體風險熱點突變檢測DNA測序確定家族中是否存在已知的突變HNPCC檢測項目檢測名稱檢測技術臨床意義MSI（5個位點）標本要求檢測名稱標本要求MSI檢測病理蠟塊一份（或白片10片），外加5ml抗凝外周血，4度運達MLH1,MSH2,MSH6基因突變檢測病理蠟塊一份（或白片10片），常溫運達熱點突變檢測5ml抗凝外周血，4度運達標本要求檢測名稱標本要求MSI檢測病理蠟塊一份（或白片10片腫瘤在變"WecanlookattumorsforchangesattheDNA,RNAandproteinlevels.Itcertainlygivesusawayoflookingatwhatishappeninginsideatumor,andthat'sveryexciting."

Dr.GordonMillsChairSystemsBiologyMDAndersonCancerCenterHouston,TxAsreportedin“TheCancerTest”–TIME

(June

14,2007)腫瘤在變"Wecanlookattumorsfor循環(huán)腫瘤細胞1869年AustMedJ，Ashworth最早在轉(zhuǎn)移性癌癥患者血液中觀察到。2005年N