巨細胞病毒感染的實驗室檢查課件

巨細胞病毒感染的實驗室檢查

巨細胞病毒感染的實驗室檢查

內容提要綜述HCMV生物學性質HCMV感染的流行病學HCMV感染的臨床分類HCMV感染的實驗室檢查內容提要綜述綜述巨細胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染在我國流行廣泛，胎兒及免疫力低下的嬰兒易受侵害。肝臟是巨細胞病毒感染的主要靶器官。此外，巨細胞病毒還可侵犯呼吸、神經、血液系統(tǒng)，嚴重者導致胎兒畸形，甚至危及患兒生命。巨細胞病毒感染在健康人群中多表現為亞臨床不顯性感染和潛伏感染。而孕期和兒童巨細胞病毒感染較為嚴重，是引起出生缺陷和各種不可逆損傷的重要因素。HCMV是引起病理性和生理性免疫低下人群發(fā)生疾病的常見病原，亦是導致艾滋病和器官／骨髓移植病人嚴重疾病和增加病死率的重要病因。因此，巨細胞病毒感染早期診治的重要性越來越受到關注。綜述巨細胞病毒(cytomegalov一、HCMV生物學性質HCMV屬皰疹病毒β亞科，是人類皰疹病毒中基因組最大的DNA病毒，CMVDNA為線性雙鏈分子，約235-240kb。HCMV具有嚴格種屬特異性，只能感染人類。HCMV具有增殖緩慢和潛伏--活化的生物學特性，一旦感染，將終身存在于體內。一、HCMV生物學性質HCMV屬皰疹病毒β亞科，是人類皰疹病HCMV的細胞和組織嗜性非常廣泛，任何器官都能受到感染。HCMV組織嗜性與宿主年齡及免疫狀況密切相關。胎兒和新生兒期：神經細胞和唾液腺對HCMV最為敏感，網狀內皮系統(tǒng)也常受累。年長兒和成人：免疫正常時，無論原發(fā)或再發(fā)感染，病毒多局限于唾液腺和腎臟，少數原發(fā)癥狀性感染者可累及淋巴細胞；免疫抑制個體，肺部最常被侵及，并常造成廣泛組織、器官的播散型感染。眼內和顱內HCMV感染主要見于宮內感染、免疫缺陷者。HCMV的細胞和組織嗜性HCMV的細胞和組織嗜性非常廣泛，任何器官都能受到感染。H①活動性感染(Activeinfection)，即產毒性感染

：病毒在宿主細胞核內復制，重者產生核內包涵體，引起細胞病變，受感染細胞溶解死亡；輕者無包涵體形成，可轉變?yōu)闈摲腥?。②潛伏性感?Latentinfection)

：病毒潛伏在某些細胞(巨噬細胞、淋巴細胞和分泌腺細胞等)內，病毒不復制，不能分離到病毒和檢出病毒抗原等復制性標志物，僅能檢出HCMVDNA。當機體免疫抑制時潛伏病毒可活化增殖，形成產毒性感染。③細胞轉化：HCMV基因整合至細胞DNA內，并可表達病毒抗原，細胞因而發(fā)生轉化和增生。④不全感染：HCMV有少量復制，可使細胞功能產生障礙，但無或極少發(fā)生細胞形態(tài)改變。生物學特性——HCMV感染類型①活動性感染(Activeinfection)，即產毒性HCMV致病性HCMV具有多種逃逸宿主免疫攻擊和免疫監(jiān)視的途徑，使其侵入機體后得以長期存在。HCMV是弱致病因子，對免疫正常的健康個體并不具明顯毒力，絕大多數表現為無癥狀或亞臨床型感染；當有免疫抑制(生理性或病理性）時才易引起HCMV感染性疾病。

HCMV致病性HCMV具有多種逃逸宿主免疫攻傳染源感染者是唯一傳染源，可長期或間歇地自鼻咽分泌物、尿、宮頸及陰道分泌物、乳汁、精液、眼淚及血液等排出病毒。CMV感染可常年發(fā)生，無季節(jié)性。原發(fā)感染尤其是先天感染者可持續(xù)排毒數年之久；再發(fā)感染者可間歇排毒。二、HCMV感染的流行病學傳染源二、HCMV感染的流行病學傳播途徑·母嬰傳播~先天感染：病毒經胎盤傳播。生后2周內從新生兒體液中分離到CMV為宮內感染的證據。~圍生期感染：是指新生兒經產道娩出時吸入病毒污染的產道分泌物或攝入帶病毒的母乳所致。·水平傳播~接觸傳播：與排毒者長期接觸，可經唾液、尿、眼淚等傳播。~醫(yī)源性傳播：可經輸血、器官移植等傳播。~性交傳播

傳播途徑·母嬰傳播易感人群機體對巨細胞病毒的易感性取決于年齡、免疫功能狀態(tài)、社會經濟情況等因素。一般年齡越小，其易感性越高、癥狀也愈重。病毒往往以潛伏感染的形式持續(xù)終生，只有當宿主免疫狀態(tài)失去平衡，潛伏的病毒才復活。易感人群發(fā)達國家，社會經濟水準較高人群HCMV抗體陽性率為40％～60％，社會經濟水準較低人群則達80％以上。發(fā)展中國家，80％在3歲以前感染，成人感染率近100％。我國一般人群HCMV抗體陽性率為86％～96％，孕婦95％左右，嬰兒至周歲時已達80％左右。流行狀況流行狀況三、HCMV感染的臨床分類根據感染來源分類

①原發(fā)感染(Primaryinfection)，指初次感染外源性HCMV；②再發(fā)感染(Recurrentinfection)，指內源性潛伏病毒激活(Reactivation)或再次感染(Reinfection)外源性不同的病毒株或更大劑量的同種病毒株。根據原發(fā)感染時間分類①先天性感染：于出生14d內(含14d)，胎盤傳播所致。②圍生期感染：于出生14d內證實無HCMV感染，生后第3～12W內證實有HCMV感染，經產道、感染性母乳或生后不久輸注帶病毒血制品獲得。③產后感染或獲得性感染：在出生12W后經水平傳播途徑獲得HCMV感染。三、HCMV感染的臨床分類根據感染來源分類根據臨床征象分類

①癥狀性感染：

HCMV損害宿主2個或2個以上器官、系統(tǒng)時稱全身性感染，多見于先天感染和免疫缺陷者；若病變主要集中于某一器官或系統(tǒng)，如肝臟或肺臟時，則稱HCMV性肝炎或HCMV性肺炎。常見的HCMV感染性疾?。?/p>

中樞神經系統(tǒng)損害、耳聾、肝炎、肺炎、單核細胞增多綜合征、脈絡膜視網膜炎、胃腸道疾病、心肌炎和其他心臟疾患、內分泌系統(tǒng)、皮膚、牙齒和牙齦發(fā)育缺損等根據臨床征象分類②無癥狀性感染

可有2種情況：患兒有HCMV感染證據但無癥狀和體征；或雖無癥狀，卻有病變臟器體征和／或功能異常。后者又稱亞臨床型感染。

大多數兒童HCMV感染表現為無癥狀性或亞臨床型感染。

②無癥狀性感染診斷HCMV感染性疾病需要尋找活動性HCMV感染的實驗室證據，包括以下方法:1病毒分離2病毒顆粒和巨細胞病毒包涵體檢測3病毒抗原檢測4特異抗體測定5特異性病毒基因(mRNA/DNA)檢測四、巨細胞病毒感染的實驗室檢查診斷HCMV感染性疾病需要尋找活動性HCMV感染的實驗1.病毒分離病毒分離是診斷活動性HCMV感染的金標準，該方法將血、尿、臍血等檢測標本接種到人胚成纖維(HF)細胞，病毒感染細胞后，導致細胞發(fā)生一系列的病理學改變。由于HCMV在體外只能在HF細胞中增殖，且生長速度緩慢，檢測費用高，敏感性較差，易污染，不能快速確診，故該法不適用于臨床檢測，主要用于科研。近年來，將病毒細胞培養(yǎng)與免疫學分析方法結合建立起來的微量病毒檢測技術逐漸應用于臨床，如快速增強組織培養(yǎng)免疫熒光技術，提高了分離陽性率和檢測效率，為病毒感染的早期診斷提供了重要的信息。1.病毒分離病毒分離是診斷活動性HCMV感染的金標準，該2.病毒顆粒和巨細胞病毒包涵體檢測(1)通過電鏡直接觀察感染細胞的病理學改變；(2)通過電鏡觀察胞內病毒顆粒的形態(tài)學變化，該方法作為實驗診斷HCMV感染的可靠方法，現主要應用于科研方面。2.病毒顆粒和巨細胞病毒包涵體檢測(1)通過電鏡直接觀受感染細胞可出現特征性改變：細胞變圓，膨脹，細胞核亦變大，有包涵體形成。核內包涵體周圍與核膜之間有一輪“暈”，因而稱為“貓頭鷹眼細胞”，這種細胞具有形態(tài)學診斷意義。貓頭鷹眼細胞

受感染細胞可出現特征性改變：細胞變圓，膨脹，

3.病毒抗原檢測HCMV的自我復制周期分為:即刻早期、早期及晚期，3個階段中的基因表達產物分別稱為即刻早期抗原(IEA；感染后1小時開始表達)、早期抗原(EA；感染后2～4小時開始表達)、晚期抗原(LA；感染后6～24小時開始表達)即結構抗原。目前，已發(fā)現gp52(ul44)、pp150(ppul32)、pp65(ppul83)、ppul80a等均具有強免疫原性且有保守的DNA序列，其中多形核白細胞中HCMV-pp65抗原血癥被認為是HCMV活動性感染的重要標志，pp65有較好的敏感性，但由于標本的收集要求高和檢測主觀性強，且缺乏統(tǒng)一的診斷標準，限制了其在臨床中的應用。

3.病毒抗原檢測HCMV的自我復制周期分4.特異性抗體測定1.抗HCMVIgM是原發(fā)感染或活動感染的標志。一般在原發(fā)感染2周左右出現，持續(xù)12-28周。再發(fā)感染時常再現，其水平低于原發(fā)感染時。2.抗HCMVIgG在感染后終生存在。觀察到該抗體陽轉是診斷原發(fā)感染的可靠指標。雙份血清抗體滴度≥4倍增高是活動性感染的指標。ELISA法具有比較高的靈敏度和特異性，但是存在‘窗口期’，且受機體免疫狀態(tài)等因素的影響，尤其是免疫缺陷患者、免疫抑制患者或者使用強免疫抑制劑的患者，不能產生能夠被檢測的特異性抗體限度，造成假陰性結果。4.特異性抗體測定1.抗HCMVIgM是原發(fā)感染或活5.特異性病毒基因(mRNA/DNA)檢測HCMV基因轉錄是病毒活躍復制的標志，臨床上常將HCMV基因轉錄產物mRNA的檢測作為診斷HCMV活動性感染的指標。核酸檢測常用的方法包括核酸雜交技術、PCR技術和基因芯片技術。PCR技術應用于HCMV感染的檢測，具有較高的靈敏度和特異性，檢測方法簡便快捷，可作為感染的早期診斷指標。目前，熒光定量PCR法被廣泛應用于HCMV感染的檢測，可動態(tài)監(jiān)測HCMV感染，反映其病毒載量，預示其感染嚴重程度，在HCMV感染診斷中有很好的實用價值。5.特異性病毒基因(mRNA/DNA)檢測HCMV基因總結病毒分離是診斷HCMV活動性感染的金標準，但由于其費用高、易污染、不能快速確診，故該法不適用于臨床檢測?？乖瓩z測有較好的敏感性，但由于標本的收集要求高和檢測主觀性強，更重要的是缺乏統(tǒng)一的診斷標準，限制了其在臨床中的應用。PCR技術運用于HCMV感染的檢測，具有較高的靈敏度和特異性，且需要的標本量小，檢測方法簡便快捷，因此，可作為感染的早期診斷指標。總結病毒分離是診斷HCMV活動性感染的謝謝您的耐心聆聽！謝謝您的耐心聆聽！巨細胞病毒感染的實驗室檢查

巨細胞病毒感染的實驗室檢查

內容提要綜述HCMV生物學性質HCMV感染的流行病學HCMV感染的臨床分類HCMV感染的實驗室檢查內容提要綜述綜述巨細胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染在我國流行廣泛，胎兒及免疫力低下的嬰兒易受侵害。肝臟是巨細胞病毒感染的主要靶器官。此外，巨細胞病毒還可侵犯呼吸、神經、血液系統(tǒng)，嚴重者導致胎兒畸形，甚至危及患兒生命。巨細胞病毒感染在健康人群中多表現為亞臨床不顯性感染和潛伏感染。而孕期和兒童巨細胞病毒感染較為嚴重，是引起出生缺陷和各種不可逆損傷的重要因素。HCMV是引起病理性和生理性免疫低下人群發(fā)生疾病的常見病原，亦是導致艾滋病和器官／骨髓移植病人嚴重疾病和增加病死率的重要病因。因此，巨細胞病毒感染早期診治的重要性越來越受到關注。綜述巨細胞病毒(cytomegalov一、HCMV生物學性質HCMV屬皰疹病毒β亞科，是人類皰疹病毒中基因組最大的DNA病毒，CMVDNA為線性雙鏈分子，約235-240kb。HCMV具有嚴格種屬特異性，只能感染人類。HCMV具有增殖緩慢和潛伏--活化的生物學特性，一旦感染，將終身存在于體內。一、HCMV生物學性質HCMV屬皰疹病毒β亞科，是人類皰疹病HCMV的細胞和組織嗜性非常廣泛，任何器官都能受到感染。HCMV組織嗜性與宿主年齡及免疫狀況密切相關。胎兒和新生兒期：神經細胞和唾液腺對HCMV最為敏感，網狀內皮系統(tǒng)也常受累。年長兒和成人：免疫正常時，無論原發(fā)或再發(fā)感染，病毒多局限于唾液腺和腎臟，少數原發(fā)癥狀性感染者可累及淋巴細胞；免疫抑制個體，肺部最常被侵及，并常造成廣泛組織、器官的播散型感染。眼內和顱內HCMV感染主要見于宮內感染、免疫缺陷者。HCMV的細胞和組織嗜性HCMV的細胞和組織嗜性非常廣泛，任何器官都能受到感染。H①活動性感染(Activeinfection)，即產毒性感染

：病毒在宿主細胞核內復制，重者產生核內包涵體，引起細胞病變，受感染細胞溶解死亡；輕者無包涵體形成，可轉變?yōu)闈摲腥尽＂跐摲愿腥?Latentinfection)

：病毒潛伏在某些細胞(巨噬細胞、淋巴細胞和分泌腺細胞等)內，病毒不復制，不能分離到病毒和檢出病毒抗原等復制性標志物，僅能檢出HCMVDNA。當機體免疫抑制時潛伏病毒可活化增殖，形成產毒性感染。③細胞轉化：HCMV基因整合至細胞DNA內，并可表達病毒抗原，細胞因而發(fā)生轉化和增生。④不全感染：HCMV有少量復制，可使細胞功能產生障礙，但無或極少發(fā)生細胞形態(tài)改變。生物學特性——HCMV感染類型①活動性感染(Activeinfection)，即產毒性HCMV致病性HCMV具有多種逃逸宿主免疫攻擊和免疫監(jiān)視的途徑，使其侵入機體后得以長期存在。HCMV是弱致病因子，對免疫正常的健康個體并不具明顯毒力，絕大多數表現為無癥狀或亞臨床型感染；當有免疫抑制(生理性或病理性）時才易引起HCMV感染性疾病。

HCMV致病性HCMV具有多種逃逸宿主免疫攻傳染源感染者是唯一傳染源，可長期或間歇地自鼻咽分泌物、尿、宮頸及陰道分泌物、乳汁、精液、眼淚及血液等排出病毒。CMV感染可常年發(fā)生，無季節(jié)性。原發(fā)感染尤其是先天感染者可持續(xù)排毒數年之久；再發(fā)感染者可間歇排毒。二、HCMV感染的流行病學傳染源二、HCMV感染的流行病學傳播途徑·母嬰傳播~先天感染：病毒經胎盤傳播。生后2周內從新生兒體液中分離到CMV為宮內感染的證據。~圍生期感染：是指新生兒經產道娩出時吸入病毒污染的產道分泌物或攝入帶病毒的母乳所致?！に絺鞑接觸傳播：與排毒者長期接觸，可經唾液、尿、眼淚等傳播。~醫(yī)源性傳播：可經輸血、器官移植等傳播。~性交傳播

傳播途徑·母嬰傳播易感人群機體對巨細胞病毒的易感性取決于年齡、免疫功能狀態(tài)、社會經濟情況等因素。一般年齡越小，其易感性越高、癥狀也愈重。病毒往往以潛伏感染的形式持續(xù)終生，只有當宿主免疫狀態(tài)失去平衡，潛伏的病毒才復活。易感人群發(fā)達國家，社會經濟水準較高人群HCMV抗體陽性率為40％～60％，社會經濟水準較低人群則達80％以上。發(fā)展中國家，80％在3歲以前感染，成人感染率近100％。我國一般人群HCMV抗體陽性率為86％～96％，孕婦95％左右，嬰兒至周歲時已達80％左右。流行狀況流行狀況三、HCMV感染的臨床分類根據感染來源分類

①原發(fā)感染(Primaryinfection)，指初次感染外源性HCMV；②再發(fā)感染(Recurrentinfection)，指內源性潛伏病毒激活(Reactivation)或再次感染(Reinfection)外源性不同的病毒株或更大劑量的同種病毒株。根據原發(fā)感染時間分類①先天性感染：于出生14d內(含14d)，胎盤傳播所致。②圍生期感染：于出生14d內證實無HCMV感染，生后第3～12W內證實有HCMV感染，經產道、感染性母乳或生后不久輸注帶病毒血制品獲得。③產后感染或獲得性感染：在出生12W后經水平傳播途徑獲得HCMV感染。三、HCMV感染的臨床分類根據感染來源分類根據臨床征象分類

①癥狀性感染：

HCMV損害宿主2個或2個以上器官、系統(tǒng)時稱全身性感染，多見于先天感染和免疫缺陷者；若病變主要集中于某一器官或系統(tǒng)，如肝臟或肺臟時，則稱HCMV性肝炎或HCMV性肺炎。常見的HCMV感染性疾病：

中樞神經系統(tǒng)損害、耳聾、肝炎、肺炎、單核細胞增多綜合征、脈絡膜視網膜炎、胃腸道疾病、心肌炎和其他心臟疾患、內分泌系統(tǒng)、皮膚、牙齒和牙齦發(fā)育缺損等根據臨床征象分類②無癥狀性感染

可有2種情況：患兒有HCMV感染證據但無癥狀和體征；或雖無癥狀，卻有病變臟器體征和／或功能異常。后者又稱亞臨床型感染。

大多數兒童HCMV感染表現為無癥狀性或亞臨床型感染。

②無癥狀性感染診斷HCMV感染性疾病需要尋找活動性HCMV感染的實驗室證據，包括以下方法:1病毒分離2病毒顆粒和巨細胞病毒包涵體檢測3病毒抗原檢測4特異抗體測定5特異性病毒基因(mRNA/DNA)檢測四、巨細胞病毒感染的實驗室檢查診斷HCMV感染性疾病需要尋找活動性HCMV感染的實驗1.病毒分離病毒分離是診斷活動性HCMV感染的金標準，該方法將血、尿、臍血等檢測標本接種到人胚成纖維(HF)細胞，病毒感染細胞后，導致細胞發(fā)生一系列的病理學改變。由于HCMV在體外只能在HF細胞中增殖，且生長速度緩慢，檢測費用高，敏感性較差，易污染，不能快速確診，故該法不適用于臨床檢測，主要用于科研。近年來，將病毒細胞培養(yǎng)與免疫學分析方法結合建立起來的微量病毒檢測技術逐漸應用于臨床，如快速增強組織培養(yǎng)免疫熒光技術，提高了分離陽性率和檢測效率，為病毒感染的早期診斷提供了重要的信息。1.病毒分離病毒分離是診斷活動性HCMV感染的金標準，該2.病毒顆粒和巨細胞病毒包涵體檢測(1)通過電鏡直接觀察感染細胞的病理學改變；(2)通過電鏡觀察胞內病毒顆粒的形態(tài)學變化，該方法作為實驗診斷HCMV感染的可靠方法，現主要應用于科研方面。2.病毒顆粒和巨細胞病毒包涵體檢測(1)通過電鏡直接觀受感染細胞可出現特征性改變：細胞變圓，膨脹，細胞核亦變大，有包涵體形成。核內包涵體周圍與核膜之間有一輪“暈”，因而稱為“貓頭鷹眼細胞”，這種細胞具有形態(tài)學診斷意義。貓頭鷹眼細胞

受感染細胞可出現特征性改變：細胞變圓，膨脹，

3.病毒抗原檢測HCMV的自我復制周期分為:即刻早期、早期及晚期，3個階段中的基因表達產物分別稱為即刻早期抗原(IEA；感染后1小時開始表達)、早期抗原(EA；感染后2～4小時開始表達)、晚期抗原(LA；感染后6～24小時開始表達)即結構抗原。目前，已發(fā)現gp52(ul44)、pp150(ppul32)、pp65(ppul83)、ppul80a等均具有強免疫原性且有保守的DNA序列，其中多形核白細胞中HCMV-pp65抗原血癥被認為是HCMV活動性感染的重要標志，pp