藥理學實驗系列儀器培訓教程20110810課件

藥理學實驗系列儀器使用技術(shù)教程藥理學實驗的目的和任務(wù)

藥理學是生物學、醫(yī)學和藥學的橋梁學科之一，具有很強的實驗依賴性。藥理學實驗教學不僅是藥理學教學的補充，而且是培養(yǎng)學生思維、鍛煉學生技能的實踐性課程。目的是通過實驗使同學們所學的基本理論和基本知識得到進一步驗證和理解，培養(yǎng)同學們嚴肅的科學態(tài)度和嚴謹?shù)目茖W作風。任務(wù)是通過實驗課使同學們掌握研究藥理學的基本實驗技能和實驗方法，為今后從事科學研究工作打下良好的基礎(chǔ)。實驗儀器設(shè)備的使用技能是藥理學實驗必不可少的，極其重要的環(huán)節(jié)。下面就介紹幾種常用的藥理實驗儀器：1.FT-200型動物跑步機

設(shè)備名稱：動物跑步機

規(guī)格型號：FT-200型

生產(chǎn)廠家：成都泰盟科技有限公司

產(chǎn)品簡介：FT-200動物跑步機配備有動物跑道，通過后端一個刺激裝置來強迫動物持續(xù)奔跑，儀器自動記錄動物所受電擊次數(shù)和跑道上的奔跑總時間。可用于疲勞實驗、運動協(xié)調(diào)實驗、中樞神經(jīng)抑制實驗、骨骼肌松弛實驗研究，觀察藥物對受試動物運動及協(xié)調(diào)能力的影響，也可用于大、小鼠抗疲勞實驗，評測藥物對動物體能的影響。

操作規(guī)程

（1）實驗前一周，在喂食30分鐘后，先進行跑步機適應(yīng)訓練；

（2）將實驗動物（大鼠或小鼠）放入跑步帶上，蓋上玻璃蓋；打開電源開關(guān)；設(shè)定好“定時時間”、“轉(zhuǎn)速”和“大/小鼠”的工作模式及調(diào)節(jié)刺激電流旋鈕，按下“啟/停”按鈕，系統(tǒng)自動開始記錄；

（3）末次給藥后30、60分鐘，將實驗動物放在跑步機上，設(shè)置實驗參數(shù)，按“啟/?！卑粹o進行動物體能測試。

提示：可采用逐漸增加速度與坡度的方法使動物奔跑直至力竭(exhaustion)，參數(shù)設(shè)置可參考下表(Bedfordetal.,1979)所列。若鼠落入電擊區(qū)，而經(jīng)過多次電擊仍無法起身往前跑即判定已經(jīng)力竭，記錄開始跑步至力竭的跑步時間。

（4）當實驗動物在跑步帶一頭落下時，液晶顯示器上對應(yīng)的該通道將停止計時，同時動物落帶次數(shù)加1。實驗動物會因受電擊后離開刺激源，繼續(xù)在跑步帶上活動，此時通道計時繼續(xù)累加。實驗用時到達設(shè)定時間后，實驗停止。坡度(%)速度(mph)持續(xù)時間(分)08.23515.231019.331026.831130.33注意事項

（1）成年標準體重的大小鼠為宜，大鼠體重200g左右，小鼠體重20g左右；

（2）在通風、安靜、相對昏暗的環(huán)境下進行實驗。

（3）實驗動物體能較好者電擊次數(shù)相對較少，而奔跑時間相對較長。

2.MT-200型Morris水迷宮視頻跟蹤分析系統(tǒng)

設(shè)備名稱：Morris水迷宮視頻跟蹤分析系統(tǒng)規(guī)格型號：MT-200型生產(chǎn)廠家：成都泰盟科技有限公司產(chǎn)品簡介：大小鼠厭惡處于水中的狀態(tài)，同時游泳對于大小鼠來說十分消耗體力，因此在水中它們會本能的尋找水中的休息場所。尋找休息場所的行為涉及到一個復(fù)雜的記憶過程，包括收集與空間定位有關(guān)的視覺信息，再對這些信息進行處理、整理、記憶、加固、然后再取出，目的是能成功的航行并且找到隱藏在水中的站臺，最終從水中逃脫。Morris水迷宮（Morriswatermaze,MWM）實驗是一種強迫實驗動物（大鼠、小鼠）游泳，學習尋找隱藏在水中平臺的一種實驗，主要用于測試實驗動物對空間位置感和方向感（空間定位）的學習記憶能力。操作規(guī)程

（1）將圓形反應(yīng)水箱與固定支架放置在適當位置，將攝象頭固定在圓形水箱垂直上方。在水池中注入清水，然后注入適量新鮮牛奶或奶粉，使水池成為不透明的乳白色。

（2）將平臺置于某一象限中央，且使水面高于平臺0.5～2cm（根據(jù)實驗動物的大小決定），使動物無法憑視覺辨別水中平臺的位置。將實驗動物（大小鼠）用實驗室常見的苦味酸在實驗動物的頭部和背部涂抹成較大相連的區(qū)域作為標記色。

（3）將攝像頭用視頻信號電纜與計算機上的捕捉卡相聯(lián)接。完成加密狗和軟件系統(tǒng)的安裝。啟動軟件，進入軟件主界面。

（4）調(diào)整攝象鏡頭位置和焦距，使視頻顯示范圍剛好覆蓋整個容器水區(qū)域。以屏幕上的黑色基準線為準，移動水容器使容器上的標記點與準線相重合。（若屏幕上未出現(xiàn)黑色基準線則可通過選擇屏幕右側(cè)的“顯示基準”顯示）。

（5）點擊“新建項目”開始新的實驗項目，點擊“場景設(shè)定”來進行實驗場景的設(shè)定：按住鼠標左鍵在左側(cè)標記點按下不放，拖動鼠標沿著左側(cè)標記點到右側(cè)標記點放開鼠標。然后按住鼠標左鍵在上側(cè)標記點按下不放，拖動鼠標沿著上側(cè)標記點到下側(cè)標記點放開鼠標。則系統(tǒng)自動根據(jù)以上標記畫出場景（10）在軟件主界面右方中部有“實驗設(shè)置”面板，其中有“定位航行實驗”，“空間搜索實驗”，兩種實驗類型可根據(jù)實驗需求選擇，系統(tǒng)默認為“定位航行實驗”。

①定位航行實驗觀察和記錄小鼠尋找并爬上平臺的路線圖及所需時間，即記錄其潛伏期和游泳速度，無設(shè)定時間限制。

②空間搜索實驗要求動物在設(shè)定時間內(nèi)能否能夠找到平臺，用于測量動物對平臺空間位置記憶的保持能力。

（11）在“動物編號”選擇框中選擇本次實驗的小鼠編號，然后放入實驗動物（小鼠、大鼠），點擊“開始實驗”進行實驗。

（12）訓練：

①每日將動物頭朝池壁按東、南、西、北4個入水點分別放入水池，將站臺置于某一象限中央，實驗過程保持站臺位置不變。

②每次實驗以120s為限，系統(tǒng)自動記錄動物從入水點到達站臺所需時間以及在這段時間內(nèi)的游泳路程，以所需時間作為學習和記憶成績，若設(shè)定時間內(nèi)未找到站臺，計算機停止跟蹤，記錄時間為120s。

③訓練中若動物在120s內(nèi)找到站臺，讓其在站臺上停留20s，若動物未找到站臺，將其放在站臺上使其停留20s。20S后將其從平臺上拿下，休息一分鐘后再次開始訓練。一般正常動物經(jīng)5～6個訓練日可學會以最快最佳的軌跡找到平臺的正確位置。注意事項

（1）在訓練時，動物需要利用實驗室內(nèi)的固有環(huán)境和設(shè)施的空間定位作為參照物來綜合判斷安全位置或途徑，所以實驗時，實驗室內(nèi)的一切設(shè)備的位置（包括儀器、工作臺、門窗、燈具、椅子等）以及實驗者的位置都需保持相對固定，以減小實驗誤差。

（2）動物上平臺后，讓其環(huán)顧四周20秒時間，讓其辨別記憶空間線索。

（3）實驗結(jié)束后注意動物的除濕保暖。3.PL-200型熱刺痛儀

設(shè)備名稱：熱刺痛儀

規(guī)格型號：PL-200型

生產(chǎn)廠家：成都泰盟科技有限公司

產(chǎn)品簡介：利用一定強度的溫熱刺激動物軀體某一部分，從而產(chǎn)生疼痛反應(yīng)，以刺激開始至出現(xiàn)反應(yīng)的潛伏期作為測痛指標評價藥物疼痛能力，適用于篩選作用較強的鎮(zhèn)痛藥物。PL-200熱刺痛儀采用高聚光燈產(chǎn)生可變強度的輻射光束，經(jīng)過紅外濾光鏡聚焦照射大小鼠后肢足底中心處皮膚，以大小鼠迅速抬起后肢作為疼痛反應(yīng)指標，給藥前、后痛閾值的變化來測定藥物的效應(yīng)。

操作規(guī)程

（1）預(yù)熱：打開主機電源，按“開始”鍵點亮刺激光源，預(yù)熱３０秒，按下“設(shè)置”按鈕設(shè)置實驗參數(shù)，例如組別、實驗停止時間，光照強度等。

（2）選擇體重200g左右的大鼠或體重20g左右的小鼠，分別放入實驗平臺上的鼠盒內(nèi)，待動物適應(yīng)保持安靜后開始實驗。

（3）移動平臺下方的熱輻射刺激筒至大小鼠后足部位，使光源發(fā)射中心正對動物足底，按下刺激筒上的開始按鈕，儀器開始計時，并發(fā)射出紅外光刺激動物后足部位，動物受刺激抬起或移動后足，儀器自動感應(yīng)此動作立即停止計時，實驗結(jié)束。

（4）自照射開始至迅速抬起后肢的潛伏期時間（s）作為該鼠的痛閾值。一般連測2次，取其平均值作為基礎(chǔ)痛閾（對照潛伏期）。注意事項

（1）須在動物安靜狀態(tài)下開始實驗，大鼠安靜時間一般為２min，小鼠一般要５～１０min。

（2）實驗時注意對準動物后足底部中心區(qū)域；

（3）照射強度的調(diào)節(jié)使得實驗結(jié)果應(yīng)該一般為１０秒為宜；

（4）不要在短時間內(nèi)重復(fù)照射同一只動物的同一部位；

（5）設(shè)定恰當?shù)恼丈渫Ｖ箷r間，到設(shè)定時間后儀器自動停止照射可防止對痛覺不敏感動物足底造成損傷。操作規(guī)程

（1）預(yù)熱接通儀器相關(guān)設(shè)備連線，打開開關(guān)進行預(yù)熱儀器5分鐘；

（2）實驗前，請將測量燒杯裝滿130ml左右清水，并放在工作面上，蓋上保護蓋。

（3）設(shè)置實驗參數(shù)，根據(jù)液晶屏提示踩下腳踏開關(guān)或按下清零鍵，完成清零操作。

（4）用記號筆在大小鼠后肢踝關(guān)節(jié)周圍作上記號，測量時拉直放入量杯，使記號線與與量杯水位線相平，穩(wěn)定后等儀器發(fā)出“滴滴”提示音后，踩下腳踏開關(guān)或按測量按鈕得出結(jié)果。

5.RB-200型智能熱板儀

設(shè)備名稱：智能熱板儀

規(guī)格型號：RB-200型

生產(chǎn)廠家：成都泰盟科技有限公司

產(chǎn)品簡介：利用一定強度的溫熱刺激動物軀體某一部分，從而產(chǎn)生疼痛反應(yīng)，以刺激開始至出現(xiàn)反應(yīng)的時間為潛伏期作為測痛指標評價藥物抗疼痛能力，適用于篩選作用較強的鎮(zhèn)痛藥物。熱刺激強度在45～55℃，在這一范圍內(nèi)動物可產(chǎn)生明顯的痛反應(yīng)，又不致造成皮膚灼傷，此為熱刺激法。RB-200熱板儀就是利用上述原理，將大小鼠放到預(yù)先加熱到55°C左右的金屬板上，以舔后足作為疼痛反應(yīng)指標，測定潛伏期，觀察給藥前、后痛閾值的變化。注意事項

（1）實驗前應(yīng)篩選動物，一般將反應(yīng)潛伏期小于5s或大于30s的動物篩除。

（2）雄性鼠可能因為陰囊下降而受刺激，故本實驗宜用雌性鼠。

（3）室溫對實驗有影響，過低動物反應(yīng)遲鈍，過高則敏感，易引起跳躍。室溫13~18℃范圍內(nèi)動物波動較小。

（4）不同個體對熱板刺激反應(yīng)有不同表現(xiàn)，多數(shù)舔足，故常采用舔足為痛反應(yīng)指標，有些動物反應(yīng)易跳躍而不舔足，還有的老鼠只在熱板上快速走動而不出現(xiàn)舔足反應(yīng).舔足反應(yīng)為一保護反應(yīng)，而跳躍為逃避反應(yīng)。故實驗中只宜取其一為指標，將其他反應(yīng)鼠剔除。

（5）為防止足部燙傷，若痛閾值超過60s，即停止測試而按60s計。6.SW-200型光熱尾痛儀

設(shè)備名稱：光熱尾痛儀

規(guī)格型號：SW-200型

生產(chǎn)廠家：成都泰盟科技有限公司

產(chǎn)品簡介：用小型聚光燈產(chǎn)生一定強度的紅外光束，通過透鏡聚焦照射大鼠或小鼠的尾巴來致痛，從而產(chǎn)生疼痛反應(yīng)，以刺激開始至出現(xiàn)甩尾反應(yīng)的時間作為潛伏期測痛指標，以給藥前、后痛閾值的變化來測定藥物的效應(yīng)，評價藥物疼痛能力，適用于篩選作用較強的鎮(zhèn)痛藥物。

注意事項

（1）大鼠體重200g左右，小鼠體重20g左右，裝入特制的固定筒內(nèi)；

（2）一般選擇5s左右引起甩尾的動物供實驗用，少于3s或大于10s，表示動物反應(yīng)過于靈敏或遲鈍，舍棄不用；

（3）室溫的影響：由于鼠尾表面積很大，易于散熱，改變室溫可使尾溫發(fā)生相應(yīng)變化，隨著室溫的升高，甩尾閾值降低。實驗時，最好將室溫維持在20℃左右，并且每日同一時間進行。

（4）測痛部位，通常選用鼠尾下1/3處，但反復(fù)連續(xù)測定時，應(yīng)將測痛部位稍加移動，防止局部燙傷影響測定效果，注意排除明顯的動物自主甩尾行為。

（5）避免動物在固定筒內(nèi)自由旋轉(zhuǎn)，鼠尾照射位置改變會得出較大差異的結(jié)果。7.ZB-200型疲勞轉(zhuǎn)棒儀

設(shè)備名稱：疲勞轉(zhuǎn)棒儀

規(guī)格型號：ZB-200型

生產(chǎn)廠家：成都泰盟科技有限公司

產(chǎn)品簡介：動物在旋轉(zhuǎn)的棒上為保持身體平衡不致跌下，需要向轉(zhuǎn)動棒的反方向移動，并保持四肢肌肉協(xié)調(diào)運動，否則將從棒上落下。有中樞抑制作用和肌肉松弛作用的藥物，可縮短動物從棒上落下的時間，此法反映動物的被動活動。操作規(guī)程

（1）將6只小鼠分別放在轉(zhuǎn)棒的6個通道上，設(shè)置好“日期”、“轉(zhuǎn)速”、“TRAIN”（訓練模式）；

（2）轉(zhuǎn)速設(shè)置為16r/min，按下“啟/停”按鈕，儀器開始計時，并勻加速運動到設(shè)置到的轉(zhuǎn)速后作勻速轉(zhuǎn)動，選擇能在棒上3min而不落下的動物進行實驗，此時為篩選適應(yīng)過程，不記錄數(shù)據(jù)；

（3）將已訓練的實驗動物分組，設(shè)置好“轉(zhuǎn)速”、“定時時間”、“TEST0”（順時針）或“TEST”（逆時針），按下“啟/?！卑粹o，把小鼠放在旋轉(zhuǎn)棒上的同時遮擋一下本通道落棒感應(yīng)器，系統(tǒng)發(fā)出提示音，觸發(fā)計時，當任意通道的小鼠落棒時，對應(yīng)的液晶顯示器上的通道將停止計時。

（4）統(tǒng)計落棒的百分率，并比較對照組和給藥組的差異；注意事項

（1）成年標準體重的小鼠為宜，小鼠體重20g左右；

（2）在通風、安靜、相對昏暗的環(huán)境下進行實驗。

（3）可做疲勞實驗、骨骼肌松馳實驗、中樞神經(jīng)抑制實驗以及其它需用運動方式檢測藥物作用的實驗，如毒性對運動能力的影響，體內(nèi)某種物質(zhì)缺乏對運動能力的影響，心腦血管藥物對運動能力的影響等等。8.ZZ-6型小鼠自主活動儀

設(shè)備名稱：小鼠自主活動儀

規(guī)格型號：ZZ-6型

生產(chǎn)廠家：成都泰盟科技有限公司

產(chǎn)品簡介：中樞鎮(zhèn)靜安定作用的研究，主要以行為測量為主，行為測定是在整體動物自由活動或清醒狀態(tài)下進行的。自主活動多用大、小鼠測定，它們的自主活動可分為兩種類型：一是移動活動（前進、后退、旋轉(zhuǎn)）；二是原地活動（站立、潔身、嗅）等，自主活動反映動物的中樞興奮、抑制狀態(tài)，探究水平和情緒狀態(tài)。操作規(guī)程

1)實驗前應(yīng)選取健康活潑的小鼠分組，每一劑量組需10~20只，同時設(shè)立正常對照；

2)連上電源，注意接地，打開自主活動測試儀電源開關(guān)；設(shè)置參數(shù)：包括日期和設(shè)定實驗測試時間，定時時間一般為5min~10min；

3)可同時將6只小鼠放入反應(yīng)箱每格一只，蓋好上蓋，待動物先適應(yīng)3min；

4)按啟動鍵，測量開始，反應(yīng)箱中小鼠有活動或站立時，將實時顯示數(shù)據(jù)的變化,小鼠站立時將不改變活動次數(shù)，到達設(shè)定時間時，測量結(jié)束。

5)打開電腦，打開小鼠自主活動儀軟件。點擊數(shù)據(jù)采集控制按鈕，設(shè)置采集時間，一般為5min，5min后電腦會自動下一次采集，若要終止數(shù)據(jù)采集，可以按數(shù)據(jù)采集控制按鈕，點擊停止實驗即可。

6)數(shù)據(jù)可以輸出為spss，點擊導(dǎo)出spss按鈕，默認為c盤，導(dǎo)出的數(shù)據(jù)可以用excle軟件進一步處理。

注意事項

（1）動物選擇應(yīng)注意種屬、性別、體重、健康狀況的選擇保持條件一致；

（2）應(yīng)選擇健康活潑的小鼠，健康狀況不佳的動物活動偏少，不利于對鎮(zhèn)靜作用的觀察；

（3）觀察動物活動的實驗環(huán)境要求相對安靜；室內(nèi)恒溫、恒濕，實驗者盡可能少走動，以免驚擾動物，影響對行為活動的觀察。

（4）晝夜節(jié)律：生命體的生理、生化和行為都有晝夜節(jié)律變化，一般來說大鼠和小鼠的活動在10：00以前和16：00以后要比12：00左右要多，故同一實驗應(yīng)在1日內(nèi)相對固定時間內(nèi)進行。

（5）如果藥物行為效應(yīng)受集體性激素的影響比較大，可盡量用雄性動物做實驗。

（6）捉拿小鼠宜輕，放入活動箱內(nèi)先適應(yīng)3min后再正式測定。

（7）給藥后根據(jù)藥物作用的快慢和維持時間，調(diào)整觀察記錄時間。

藥理學實驗課要求

為保證實驗課的正常秩序，培養(yǎng)學生良好的實驗習慣，養(yǎng)成嚴謹?shù)目蒲衅焚|(zhì)，提高學生的綜合素質(zhì)，根據(jù)中心制定實驗習慣評定標準特要求如下：

1、必須接受實驗室安全、節(jié)約、環(huán)保教育或?qū)嶒灠踩瓤荚嚥缓细裾?，禁止上實驗課。