病原性病菌的分離鑒定及提高檢出率課件

進(jìn)行病原性細(xì)菌的分離鑒定

如何提高檢出率？

四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)教研室

劉衡川電話：028-8550209713982287006

進(jìn)行病原性細(xì)菌的分離鑒定

如1標(biāo)本處理增菌培養(yǎng)或修復(fù)培養(yǎng)標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告標(biāo)本處理增菌培養(yǎng)標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告2標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告采集：正確采集方法,時(shí)間、種類運(yùn)送：溫度、時(shí)間、培養(yǎng)基處理：集菌、減少雜菌、生物過濾、修復(fù)培養(yǎng)標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告采集：正確采集方法,時(shí)間、3樣品的種類和來源衛(wèi)生指標(biāo)微生物病原微生物采集：正確采集方法,時(shí)間、種類運(yùn)送：溫度、時(shí)間、培養(yǎng)基處理：集菌、減少雜菌

、生物過濾、修復(fù)培養(yǎng)一、樣品采集、運(yùn)送、處理樣品的種類和來源一、樣品采集、運(yùn)送、處理4肉類生肉：取屠宰后兩腿內(nèi)側(cè)肌或背最長(zhǎng)肌100g/只熟肉：醬鹵制品，熏肉及灌腸取樣不少于200g，燒烤制品應(yīng)取樣50cm2熟禽：每份樣品1只香肚：每份樣品1個(gè)肉松：每份樣品200g要不同部位采取GB4789.1影響樣品代表性的因素采樣量采樣部位采樣時(shí)間采樣的隨機(jī)性和均勻性批號(hào)

肉類生肉：取屠宰后兩腿內(nèi)側(cè)肌或背最長(zhǎng)肌要不GB47895病原性病菌的分離鑒定及提高檢出率課件6病原性病菌的分離鑒定及提高檢出率課件7酸處理：軍團(tuán)菌：1份樣品+1份1.2mol/L酸緩沖劑，pH2.2，5min，中和后接種結(jié)核分支桿菌：1份痰樣品+2~4倍的4%硫酸，室溫30min，作用？堿處理：結(jié)核分支桿菌：1份痰標(biāo)本+2~4倍量2%NaOH，室溫5~10min，作用？(一)樣品處理酸處理：(一)樣品處理8酶處理：結(jié)核分支桿菌：1份痰標(biāo)本+1~2倍量的0.1%胰蛋白酶，室溫5min，作用？消毒劑處理：結(jié)核分支桿菌：1份痰標(biāo)本+1/2倍量0.3%苯扎溴胺，室溫5min，作用？加熱處理：軍團(tuán)菌：50℃水浴30min炭疽桿菌：65℃水浴30min或85℃5min(一)樣品處理酶處理：(一)樣品處理9中和消毒劑處理：硫代硫酸鈉中和含氯消毒劑，如檢測(cè)自來水的細(xì)菌，檢測(cè)水標(biāo)本的軍團(tuán)菌等生物過濾：鉤端螺旋體—小白鼠—肺軍團(tuán)菌—豚鼠—肺(一)樣品處理中和消毒劑處理：(一)樣品處理1035℃2.5%CO23~7天標(biāo)本快速診斷直接涂片染色DFAELISAGimene染色酸、熱處理豚鼠腹腔雞胚卵黃囊卵黃PBS液腹腔液脾懸液4~5天分離培養(yǎng)可疑菌落純培養(yǎng)初步報(bào)告鑒定試驗(yàn)染色鏡檢生化反應(yīng)血清學(xué)試驗(yàn)氣相色譜DNA相關(guān)度測(cè)定報(bào)告出現(xiàn)癥狀酸、熱處理35℃2.5%CO23~7天標(biāo)本快速診斷直DFAEL11標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告濃縮沉淀法過濾法吸附法免疫磁珠法損傷菌的復(fù)蘇標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告濃縮沉淀法過濾法吸附法免疫磁珠法1212/16/202213(二)樣品濃縮常用方法沉淀法過濾法細(xì)菌：離心沉淀，3000r/min,30min

差速離心：去除雜質(zhì)，收集菌體

絮凝劑沉淀：FeCl3+NaOH→Fe(OH)3↓病毒：高速或超速離心機(jī)細(xì)菌：在負(fù)壓或正壓作用下，通過

0.45μm孔徑的濾膜病毒：通過膜的靜電吸附濃縮過濾法還可消除樣品中的抑制劑過濾法濾膜：硝酸纖維素、醋酸纖維12/12/202213(二)樣品濃縮常用方法沉淀法過濾法細(xì)1312/16/202214過濾法12/12/202214過濾法1412/16/202215吸附法非特異性吸附：化學(xué)制劑形成沉淀，共沉淀細(xì)菌特異性吸附：利用配體與受體的親和力，吸附待檢微生物。

如流感病毒血凝素可與紅細(xì)胞結(jié)合，低速離心收集紅細(xì)胞，即達(dá)到濃縮病毒的目的(二)樣品濃縮12/12/202215吸附法非特異性吸附：化學(xué)制劑形成沉淀15捕獲清洗釋放固相包被的抗體捕獲目標(biāo)細(xì)菌洗滌程序減少雜菌用特異性酶切割抗體以釋放活菌細(xì)胞免疫磁珠法磁珠-抗體與抗原結(jié)合(二)樣品濃縮捕獲清洗釋放固相包被的抗體洗滌程序減少雜菌用特異性酶切割抗體16修復(fù)培養(yǎng)微生物受到嚴(yán)重?fù)p傷后，一般培養(yǎng)方法不生長(zhǎng)亞致死性損傷的致病菌，普通培養(yǎng)方法無法培養(yǎng)而造成假陰性人類食用后有患病的潛在威脅，當(dāng)受損細(xì)菌進(jìn)入人體，得到修復(fù)產(chǎn)生致病性(三)損傷菌的復(fù)蘇修復(fù)培養(yǎng)(三)損傷菌的復(fù)蘇17加工食品日益增多,細(xì)菌受損因素：熱冷凍冷藏干燥高滲透壓消毒劑防腐劑添加劑(三)損傷菌的復(fù)蘇加工食品日益增多,細(xì)菌受損因素：熱高滲透壓(三)損傷菌的復(fù)蘇18修復(fù)培養(yǎng)方法：增加營(yíng)養(yǎng)成分：如肉浸汁、胰胨、蛋白胨、各種氨基酸、活性酶蛋白、ATP、丙酮酸等簡(jiǎn)單的低級(jí)培養(yǎng)基：緩沖蛋白胨水，蛋白胨、Nacl、磷酸緩沖液緩沖液等高滲培養(yǎng)基、含有血清培養(yǎng)基無抑制劑的培養(yǎng)基改變pH降低培養(yǎng)溫度(三)損傷菌的復(fù)蘇修復(fù)培養(yǎng)方法：(三)損傷菌的復(fù)蘇19（3）彎曲桿菌：樣品先于0.3％琥珀酸鈉、0.01％胱氨酸-HCl和抗生素的布氏肉湯，37℃培養(yǎng)6h再加多黏菌素B，42℃，微需氧培養(yǎng)損傷菌的恢復(fù)國(guó)際上較公認(rèn)的一些方法：（1）副溶血弧菌：用3％NaCl蛋白胨水，35℃培養(yǎng)2h前增菌（2）耶爾森氏菌屬：4℃培養(yǎng)前，先25℃培養(yǎng)4h，前增菌（3）彎曲桿菌：損傷菌的恢復(fù)國(guó)際上較公認(rèn)的一些方法：20（4）大腸菌群、糞大腸菌群、副溶血弧菌、糞鏈球菌和金黃色葡萄球菌的MPN測(cè)定法：樣品接種STB培養(yǎng)基，35～37℃，4～16h前增菌每管再加雙料選擇性肉湯培養(yǎng)基。再按原法進(jìn)行

（5）表面覆蓋平板法：樣品傾注無選擇性營(yíng)養(yǎng)豐富的瓊脂的平板，25～37℃，1～4h，恢復(fù)受傷菌再依據(jù)欲計(jì)數(shù)的細(xì)菌類別，覆蓋一層約10～12ml的選擇性培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。按原法進(jìn)行（4）大腸菌群、糞大腸菌群、副溶血弧菌、糞鏈球菌和金黃色葡萄21（6）濾膜平板法：混勻的樣品1ml，涂布于孔徑450μm的濾膜上置無選擇性的瓊脂平板培養(yǎng)基上，37℃，4h，恢復(fù)受傷細(xì)菌然后將濾膜置于選擇性瓊脂平板培養(yǎng)基上，40℃18h，計(jì)數(shù)糞大腸菌群（6）濾膜平板法：22標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告選擇合適的分離培養(yǎng)方法增加樣品接種量挑選多個(gè)可疑菌落進(jìn)行鑒定增加分離平板的種類培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告選擇合適的分離培養(yǎng)方法增加樣品接23增菌培養(yǎng)、弱選擇性和強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基各一種培養(yǎng)條件：溫度、濕度、氣體等。如幽門螺桿菌二、選擇合適的分離培養(yǎng)方法增菌培養(yǎng)、弱選擇性和強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基各一種二、選擇合適的分離培24四、挑選多個(gè)可疑菌落進(jìn)行鑒定三、增加樣品接種量四、挑選多個(gè)可疑菌落進(jìn)行鑒定三、增加樣品接種量25阪歧腸桿菌檢驗(yàn)方法

—FDA方法

100、10、1g樣品各三份（分別溶于9份45℃無菌蒸餾水）

36℃過夜10ml培養(yǎng)液+90ml的EE肉湯，混勻

36℃過夜

涂布法或劃線法接種VRBG瓊脂

36℃過夜

選擇可疑菌落劃線接種于TSA瓊脂上

25℃48-72h選擇黃色菌落用API20E和氧化酶試驗(yàn)確證333g樣品阪歧腸桿菌檢驗(yàn)方法

26阪歧腸桿菌檢驗(yàn)方法每一增菌培養(yǎng)物接種2個(gè)VRBG平板(結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂），0.1ml/平板，用無菌玻璃棒涂布36℃過夜挑取5個(gè)可疑菌落，劃線接種5個(gè)TSA平板，25℃48~72h典型菌落形態(tài)：菌落周圍紫色沉淀環(huán)阪歧腸桿菌檢驗(yàn)方法每一增菌培養(yǎng)物接種2個(gè)VRBG平板(結(jié)晶紫27選用敏感的、特異的選擇性平板或鑒別平板進(jìn)行分離培養(yǎng)免疫熒光菌球法

五、增加分離平板的種類選用敏感的、特異的選擇性平板或鑒別平板進(jìn)行分離培養(yǎng)五、增加分28非軍團(tuán)菌Legionellapneumophila(灰蘭色可疑菌落)

GVPC平板非軍團(tuán)菌LegionellapneumophilaG29李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基

ListeriaChromagenicmedium用于李斯特菌的選擇性分離鑒別，24h可初步判定結(jié)果單增李斯特菌:

綠色，周圍有暈圈綿羊李斯特菌:

綠色，周圍有暈圈英諾克李特菌:綠色李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基

ListeriaChromageni30科瑪嘉顯色培養(yǎng)基單增李斯特菌藍(lán)色菌落，并帶有白色脂質(zhì)溶解環(huán)科瑪嘉顯色培養(yǎng)基單增李斯特菌藍(lán)色菌落，并帶有白色脂質(zhì)溶解環(huán)31O157:H7ID顯色培養(yǎng)基典型菌落單增李斯特菌O157:H7ID顯色培養(yǎng)基典型菌落單增李斯特菌32大腸桿菌O157:H7顯色培養(yǎng)基用于大腸桿菌O157:H7的選擇性分離鑒別，24h可初步判定結(jié)果O157:H7:

紫紅色其他大腸桿菌:

藍(lán)色其他:無色或被抑制大腸桿菌O157:H7顯色培養(yǎng)基用于大腸桿菌O157:H7的33沙門菌顯色培養(yǎng)基(陸橋)沙門菌的選擇性分離鑒別，18~24h可初步判定結(jié)果沙門菌

紅色大腸桿菌

黃色沙門菌顯色培養(yǎng)基(陸橋)沙門菌的選擇性分離鑒別，18~2434沙門氏菌菌落(紫)(CHROMagar顯色培養(yǎng)基)沙門菌顯色培養(yǎng)基沙門氏菌菌落特征（紅）(海博公司顯色培養(yǎng)基)沙門氏菌菌落(紫)沙門菌顯色培養(yǎng)基沙門氏菌菌落特征（紅）(海35BairdParker培養(yǎng)基+RPFR1試劑:BairdParker基礎(chǔ)瓊脂R2試劑:RPF配方(兔血漿+纖維蛋白原試驗(yàn))凝固酶陽性葡萄球菌:菌落周圍形成沉淀圈BairdParker培養(yǎng)基+RPFR1試劑:36弧菌顯色培養(yǎng)基

VibrioChromagenicmedium用于副溶血性弧菌的分離鑒別，24h可初步判定結(jié)果副溶血性弧菌:紫紅色創(chuàng)傷弧菌:藍(lán)綠色霍亂弧菌:藍(lán)綠色擬態(tài)弧菌:藍(lán)綠色溶藻弧菌:無色弧菌顯色培養(yǎng)基

VibrioChromagenicmed37分子生物學(xué)方法：熒光定量PCR單克隆抗體免疫熒光免疫磁珠技術(shù)全自動(dòng)微生物分析儀器

標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告選用敏感的、特異的鑒定方法分子生物學(xué)方法：熒光定量PCR標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告選38儀器檢測(cè)法VIDAS應(yīng)用酶聯(lián)免疫原理制造的全自動(dòng)免疫分析儀，用熒光分析技術(shù)通過固相吸附器，用已知抗體捕捉目標(biāo)生物體，然后用帶熒光的酶聯(lián)抗體結(jié)合，充分沖洗，激發(fā)光源檢測(cè)，自動(dòng)讀結(jié)果優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，快速，48h內(nèi)鑒定沙門菌、大腸桿菌O157:H7、單核李斯特菌，空腸彎曲桿菌和葡萄球菌腸毒素等儀器檢測(cè)法VIDAS39VIDAS免疫檢測(cè)原理

免疫捕獲：

抗體捕捉目標(biāo)抗原

免疫夾心：

酶抗體與抗原結(jié)合

檢測(cè)：儀器測(cè)量熒光強(qiáng)度370nm450nmVIDAS免疫檢測(cè)原理抗體捕捉目標(biāo)抗原酶抗體與抗原結(jié)合40免疫濃縮原理捕獲清洗釋放固相包被的抗體捕獲目標(biāo)細(xì)菌洗滌程序減少雜菌用特異性酶切割抗體以釋放活菌細(xì)胞免疫濃縮原理捕獲清洗釋放固相包被的抗體洗滌程序減少雜菌用特異41VIDAS

VIDAS42將30個(gè)細(xì)菌鑒定必需的生化反應(yīng)培養(yǎng)基固定到卡片上培養(yǎng)后，儀器判斷顯色反應(yīng)利用數(shù)值法進(jìn)行判定根據(jù)鑒定的微生物種類的不同，設(shè)計(jì)不同的鑒定卡片，如革蘭陰性菌卡、革蘭陽性菌卡、酵母菌卡等生物梅里埃自動(dòng)微生物檢測(cè)儀將30個(gè)細(xì)菌鑒定必需的生化反應(yīng)培養(yǎng)基固定到卡片上生物梅里埃自431.鑒定范圍廣：腸道G-桿菌、非發(fā)酵G-桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、G+和G-厭氧菌、淋球菌等2.有20多種藥敏試卡3.功能廣泛：可同時(shí)連接自動(dòng)免疫診斷系統(tǒng)，食品質(zhì)量鑒定Lactometer系統(tǒng)等4.設(shè)有多種程序，可根據(jù)不同需要加以調(diào)整5.自動(dòng)化程度高，一次性消耗品少

6.快速、動(dòng)態(tài)分析7.封閉式操作自動(dòng)微生物檢測(cè)儀1.鑒定范圍廣：腸道G-桿菌、非發(fā)酵G-桿菌、葡萄球菌、44生物梅里埃自動(dòng)微生物檢測(cè)儀檢測(cè)時(shí)間80%臨床分離株鑒定:平均檢測(cè)時(shí)間5h鑒定+藥敏:平均檢測(cè)時(shí)間6h自動(dòng)化金標(biāo)準(zhǔn)生物梅里埃自動(dòng)微生物檢測(cè)儀檢測(cè)時(shí)間80%臨床分離株自動(dòng)化金45商品化生化鑒定系統(tǒng)VITEKGEN+一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片卡片含有干燥的抗菌藥物和生化基質(zhì)制備一定濃度的欲鑒定菌株的菌懸液將菌懸液接種到各種細(xì)菌的卡片中放入具有讀數(shù)功能的孵箱內(nèi)每隔一定時(shí)間，儀器自動(dòng)檢測(cè)發(fā)酵情況換算成能被計(jì)算機(jī)所接受的生物編碼最后由計(jì)算機(jī)判定，打印出鑒定結(jié)果商品化生化鑒定系統(tǒng)VITEKGEN+46第1位數(shù)第2位數(shù)第3位數(shù)第4位數(shù)第5位數(shù)第6位數(shù)第7位數(shù)結(jié)果判定ONPGADHLDCODCCITH2SURETDAINDVPGELGLUMANINOSORRGASACMELAMYARAOX124124124124124124124反應(yīng)結(jié)果-+++++-----+++++-+-+-沙門菌應(yīng)得數(shù)值024124000004124104020組合編碼6704752API20E是根據(jù)快速酶促反應(yīng)及代謝產(chǎn)物的檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的一種細(xì)菌編碼鑒定方法廣泛應(yīng)用于臨床、食品中革蘭陰性桿菌的快速鑒定第1位數(shù)第2位數(shù)第3位數(shù)第4位數(shù)第5位數(shù)第6位數(shù)第7位數(shù)結(jié)果47自動(dòng)核酸純化系統(tǒng)應(yīng)用面廣：病毒、細(xì)菌的核酸提取，富集增菌試劑開放：可使用各家公司的核酸磁珠提取試劑盒速度快：20min內(nèi)完成咽拭子H1N1核酸提取使用方便：僅需一步加入試劑cKingFishermL-50-1000μl-15個(gè)樣品/批KingFisher-20-200μl-24個(gè)樣品/批-50-1000μl96樣品/批KingFisher96自動(dòng)核酸純化系統(tǒng)應(yīng)用面廣：病毒、細(xì)菌的核酸提取，富集增菌cK48多病原體復(fù)合檢測(cè)系統(tǒng)－－液相懸浮芯片系統(tǒng)多指標(biāo)同步分析（flexiblemulti-analyteprofiling,xMAP）未來的一個(gè)主要檢測(cè)技術(shù)！多病原體復(fù)合檢測(cè)系統(tǒng)－－液相懸浮芯片系統(tǒng)未來的一個(gè)主要檢測(cè)技49病原性病菌的分離鑒定及提高檢出率課件50病原性病菌的分離鑒定及提高檢出率課件51病原性病菌的分離鑒定及提高檢出率課件52DATA!DATA!DATA!DATA!Ex1Ex2Em1Em3Em2DD

Read100eachcolorbeadinassay

1-100beadsetsavail.ReadedBead-BasedTechnologyDATA!DATA!DATA!DATA!Ex1Ex2Em1E53多指標(biāo)同步分析

(flexiblemulti-analyteprofiling,xMAP)上世紀(jì)90年代，美國(guó)Luminex公司將流式細(xì)胞儀、數(shù)字信號(hào)處理器和激光檢測(cè)裝置相結(jié)合具有多指標(biāo)同步分析功能懸浮芯片技術(shù)(suspensionarray)液態(tài)芯片技術(shù)(liquidchip)廣泛應(yīng)用于細(xì)菌、病毒、單核苷酸多態(tài)性(SNP)檢測(cè)等領(lǐng)域多指標(biāo)同步分析

(flexiblemulti-analyt54技術(shù)核心是特制直徑5.6μm的聚苯乙烯微球每種微球按嚴(yán)格比例摻入2種不同熒光染料每種染料有10種濃度梯度，兩種染料搭配比例的不同，可將微球分為100種每種微球都有獨(dú)特的光譜地址根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?，微球表面?biāo)記可以捕獲相應(yīng)目標(biāo)分子的配體，在雜交過程中加入熒光標(biāo)記，反應(yīng)后檢測(cè)多指標(biāo)同步分析(xMAP)技術(shù)核心是特制直徑5.6μm的聚苯乙烯微球多指標(biāo)同步分析(x55在同一反應(yīng)體系加入不同的微球，即可實(shí)現(xiàn)高通量標(biāo)記的微球與樣品中待檢目標(biāo)分子作用，在液流帶動(dòng)下通過流式細(xì)胞儀，兩束不同波長(zhǎng)的激光檢測(cè)每個(gè)微球：635nm的紅色激光→區(qū)分微球種類532nm的綠色激光→熒光強(qiáng)度當(dāng)標(biāo)記的待測(cè)樣本與特定微球上的探針結(jié)合，儀器檢測(cè)兩束激光所發(fā)的光計(jì)算機(jī)自動(dòng)分析特定微球上的平均熒光強(qiáng)度多指標(biāo)同步分析(xMAP)在同一反應(yīng)體系加入不同的微球，即可實(shí)現(xiàn)高通量多指標(biāo)同步分析(56脈沖場(chǎng)電泳系統(tǒng)－菌株鑒定系統(tǒng)全球脈沖網(wǎng)的標(biāo)準(zhǔn)平臺(tái)菌株鑒定?追蹤溯源脈沖場(chǎng)電泳系統(tǒng)－菌株鑒定系統(tǒng)全球脈沖網(wǎng)的標(biāo)準(zhǔn)平臺(tái)菌株鑒定?追57多功能熒光酶標(biāo)儀熒光檢測(cè)（包括時(shí)間分辨熒光）化學(xué)發(fā)光檢測(cè)Elisa酶聯(lián)免疫檢測(cè)檢測(cè)靈敏度大大提高多功能熒光酶標(biāo)儀熒光檢測(cè)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)Elisa酶聯(lián)免疫檢測(cè)58七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制購(gòu)買有質(zhì)量認(rèn)證的成品培養(yǎng)基新購(gòu)買的成品培養(yǎng)基鑒定后使用

理化指標(biāo)微生物學(xué)方法營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基選擇性增菌培養(yǎng)基七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制購(gòu)買有質(zhì)量認(rèn)證的成品培養(yǎng)基理化指標(biāo)59七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制—理化指標(biāo)pH值：25℃時(shí)的測(cè)定值，±0.2比色法：用指示劑在不同pH溶液中的顏色變化，與標(biāo)準(zhǔn)比色管或比色板相比電極式pH計(jì)：用可測(cè)定固體的特殊電極pH值、凝膠強(qiáng)度、色澤、澄清度、水分含量七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制—理化指標(biāo)pH值：25℃時(shí)的測(cè)定值，±060七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

—微生物學(xué)方法靈敏度測(cè)定法混合增菌培養(yǎng)法測(cè)定增菌倍數(shù)法特異性測(cè)定方法七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

61七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

—營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基靈敏度測(cè)定法質(zhì)控菌株：乙型溶血性鏈球菌32210短小芽孢桿菌7316實(shí)驗(yàn)方法1.制備實(shí)驗(yàn)菌108菌懸液，10倍稀釋至10-82.選取適宜的3~4個(gè)連續(xù)稀釋度，接種1mL于9mL待測(cè)試的培養(yǎng)基中，每個(gè)稀釋度接種3管，37℃培養(yǎng)3天3.以接種管2/3生長(zhǎng)的最高稀釋度為該培養(yǎng)基靈敏度七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

—62七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

—選擇性增菌培養(yǎng)基混合增菌培養(yǎng)法(SC肉湯)質(zhì)控菌株：鼠傷寒沙門氏菌和大腸桿菌實(shí)驗(yàn)方法

將沙門氏菌和大腸桿菌肉湯新鮮培養(yǎng)物按1:99混合，接種SC肉湯，35℃18~24h，適當(dāng)稀釋，涂布麥康凱瓊脂，平板上應(yīng)90%以上為沙門氏菌,大腸桿菌菌落應(yīng)<10%。七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

—選擇性63七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

—選擇性增菌培養(yǎng)基測(cè)定增菌倍數(shù)法(TTB)質(zhì)控菌株：鼠傷寒沙菌和糞鏈球菌實(shí)驗(yàn)方法

增菌后平板菌落計(jì)數(shù)平均值×105增菌前平板菌落計(jì)數(shù)平均值沙門菌增菌倍數(shù)=≥105增菌后平板菌落計(jì)數(shù)平均值×105增菌前平板菌落計(jì)數(shù)平均值糞鏈球菌增菌倍數(shù)=≤102合格指標(biāo)：沙門菌應(yīng)增菌105倍以上大腸桿菌和糞鏈球菌增菌應(yīng)低于102七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

—選擇性64七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制—選擇性分離培養(yǎng)基含菌量約100~1000CFU菌懸液涂布平板按ISO/TS11133-1要求，接種目標(biāo)陽性菌、弱生長(zhǎng)陽性菌株、呈現(xiàn)不同生化特性的菌株和非目標(biāo)菌（被抑制菌株）觀察菌種的典型生長(zhǎng)情況，并通過靈敏度、特異性對(duì)培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行控制靈敏度：目標(biāo)菌100~1000cfu/板特異性：目標(biāo)菌生長(zhǎng)良好，特性典型，非目標(biāo)菌不生長(zhǎng)七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制—選擇性分離培養(yǎng)基含菌量約100~10065干粉培養(yǎng)基使用注意事項(xiàng)搖勻后準(zhǔn)確稱量蒸餾水或去離子水配制用中性玻璃質(zhì)容器加熱溶解時(shí)適當(dāng)攪拌，不能過度加熱含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌后，不能長(zhǎng)時(shí)間處于高溫狀態(tài)干粉培養(yǎng)基保存陰涼、干燥、避光保存，不能放置冰箱保存，防止受潮結(jié)塊保質(zhì)期：開封后6個(gè)月稱量后迅速擰緊瓶蓋，潮濕結(jié)塊不能再使用干粉培養(yǎng)基使用注意事項(xiàng)搖勻后準(zhǔn)確稱量干粉培養(yǎng)基保存陰涼、干燥66物質(zhì)儲(chǔ)備知識(shí)儲(chǔ)備責(zé)任心、事業(yè)心、榮譽(yù)感團(tuán)結(jié)合作：科室內(nèi)、外科室耐心、信心只有有所為，才能有所地位提高檢出率的方法用陽性、陰性菌株與標(biāo)本同步進(jìn)行試驗(yàn)，特別是生化反應(yīng)

八、設(shè)陽性、陰性對(duì)照物質(zhì)儲(chǔ)備提高檢出率的方法用陽性、陰性菌株與標(biāo)本同步進(jìn)行671.樣品采集、樣品運(yùn)送2.樣品處理：集菌、減少雜菌、生物過濾、修復(fù)培養(yǎng)3.增加樣品接種量4.挑選多個(gè)可疑菌落鑒定5.增加分離平板的種類

6.選擇合適的分離培養(yǎng)方法7.選用敏感的、特異的鑒定方法提高檢出率的方法8.培養(yǎng)基的質(zhì)量控制9.用陽性、陰性菌株與標(biāo)本同步進(jìn)行試驗(yàn)10.物質(zhì)儲(chǔ)備，技術(shù)儲(chǔ)備11.責(zé)任心、事業(yè)心、榮譽(yù)感12.團(tuán)結(jié)合作、團(tuán)隊(duì)精神13.“獵人的精神”14.耐心、信心15.計(jì)劃、演習(xí)1.樣品采集、樣品運(yùn)送提高檢出率的方法8.培養(yǎng)基的質(zhì)量控制68臨床相關(guān)知識(shí)：所致疾病感染量癥狀體癥潛伏期病程并發(fā)癥愈后病死率治療原則致病機(jī)制分離培養(yǎng)標(biāo)本增菌培養(yǎng)流行病學(xué)：傳染源傳播途徑易感人群季節(jié)分布地區(qū)分布年齡分布性別分布純培養(yǎng)鑒定、分型確診報(bào)告培養(yǎng)特性生化反應(yīng)生理特性染色性形態(tài)、排列特殊結(jié)構(gòu)抗原結(jié)構(gòu)抵抗力、生態(tài)生物學(xué)特性實(shí)驗(yàn)室生物安全社自會(huì)然因因素素分類分子生物學(xué)臨床相關(guān)知識(shí)：分離培養(yǎng)標(biāo)本增菌培養(yǎng)流行病學(xué)：純培養(yǎng)鑒定、分型69培養(yǎng)基對(duì)照：檢查滅菌是否合格培養(yǎng)基+試驗(yàn)菌培養(yǎng)基+試驗(yàn)菌(靈敏度菌量)制劑對(duì)照：

培養(yǎng)基+標(biāo)本+試驗(yàn)菌

環(huán)境對(duì)照無菌制劑的檢查應(yīng)設(shè)的對(duì)照？培養(yǎng)基對(duì)照：檢查滅菌是否合格無菌制劑的檢查應(yīng)設(shè)的對(duì)照？70食品衛(wèi)生微生物檢查的結(jié)果解釋1.大腸菌群：陽性；菌落總數(shù)：＜102.大腸菌群的試驗(yàn)結(jié)果：3×10.0ml3×1.0ml3×0.1ml013食品衛(wèi)生微生物檢查的結(jié)果解釋3×10.0ml3×1.0ml371敬作拋磚之引，以求美玉之來。

謝謝！謝謝！72進(jìn)行病原性細(xì)菌的分離鑒定

如何提高檢出率？

四川大學(xué)華西公共衛(wèi)生學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)教研室

劉衡川電話：028-8550209713982287006

進(jìn)行病原性細(xì)菌的分離鑒定

如73標(biāo)本處理增菌培養(yǎng)或修復(fù)培養(yǎng)標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告標(biāo)本處理增菌培養(yǎng)標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告74標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告采集：正確采集方法,時(shí)間、種類運(yùn)送：溫度、時(shí)間、培養(yǎng)基處理：集菌、減少雜菌、生物過濾、修復(fù)培養(yǎng)標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告采集：正確采集方法,時(shí)間、75樣品的種類和來源衛(wèi)生指標(biāo)微生物病原微生物采集：正確采集方法,時(shí)間、種類運(yùn)送：溫度、時(shí)間、培養(yǎng)基處理：集菌、減少雜菌

、生物過濾、修復(fù)培養(yǎng)一、樣品采集、運(yùn)送、處理樣品的種類和來源一、樣品采集、運(yùn)送、處理76肉類生肉：取屠宰后兩腿內(nèi)側(cè)肌或背最長(zhǎng)肌100g/只熟肉：醬鹵制品，熏肉及灌腸取樣不少于200g，燒烤制品應(yīng)取樣50cm2熟禽：每份樣品1只香肚：每份樣品1個(gè)肉松：每份樣品200g要不同部位采取GB4789.1影響樣品代表性的因素采樣量采樣部位采樣時(shí)間采樣的隨機(jī)性和均勻性批號(hào)

肉類生肉：取屠宰后兩腿內(nèi)側(cè)肌或背最長(zhǎng)肌要不GB478977病原性病菌的分離鑒定及提高檢出率課件78病原性病菌的分離鑒定及提高檢出率課件79酸處理：軍團(tuán)菌：1份樣品+1份1.2mol/L酸緩沖劑，pH2.2，5min，中和后接種結(jié)核分支桿菌：1份痰樣品+2~4倍的4%硫酸，室溫30min，作用？堿處理：結(jié)核分支桿菌：1份痰標(biāo)本+2~4倍量2%NaOH，室溫5~10min，作用？(一)樣品處理酸處理：(一)樣品處理80酶處理：結(jié)核分支桿菌：1份痰標(biāo)本+1~2倍量的0.1%胰蛋白酶，室溫5min，作用？消毒劑處理：結(jié)核分支桿菌：1份痰標(biāo)本+1/2倍量0.3%苯扎溴胺，室溫5min，作用？加熱處理：軍團(tuán)菌：50℃水浴30min炭疽桿菌：65℃水浴30min或85℃5min(一)樣品處理酶處理：(一)樣品處理81中和消毒劑處理：硫代硫酸鈉中和含氯消毒劑，如檢測(cè)自來水的細(xì)菌，檢測(cè)水標(biāo)本的軍團(tuán)菌等生物過濾：鉤端螺旋體—小白鼠—肺軍團(tuán)菌—豚鼠—肺(一)樣品處理中和消毒劑處理：(一)樣品處理8235℃2.5%CO23~7天標(biāo)本快速診斷直接涂片染色DFAELISAGimene染色酸、熱處理豚鼠腹腔雞胚卵黃囊卵黃PBS液腹腔液脾懸液4~5天分離培養(yǎng)可疑菌落純培養(yǎng)初步報(bào)告鑒定試驗(yàn)染色鏡檢生化反應(yīng)血清學(xué)試驗(yàn)氣相色譜DNA相關(guān)度測(cè)定報(bào)告出現(xiàn)癥狀酸、熱處理35℃2.5%CO23~7天標(biāo)本快速診斷直DFAEL83標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告濃縮沉淀法過濾法吸附法免疫磁珠法損傷菌的復(fù)蘇標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告濃縮沉淀法過濾法吸附法免疫磁珠法8412/16/202285(二)樣品濃縮常用方法沉淀法過濾法細(xì)菌：離心沉淀，3000r/min,30min

差速離心：去除雜質(zhì)，收集菌體

絮凝劑沉淀：FeCl3+NaOH→Fe(OH)3↓病毒：高速或超速離心機(jī)細(xì)菌：在負(fù)壓或正壓作用下，通過

0.45μm孔徑的濾膜病毒：通過膜的靜電吸附濃縮過濾法還可消除樣品中的抑制劑過濾法濾膜：硝酸纖維素、醋酸纖維12/12/202213(二)樣品濃縮常用方法沉淀法過濾法細(xì)8512/16/202286過濾法12/12/202214過濾法8612/16/202287吸附法非特異性吸附：化學(xué)制劑形成沉淀，共沉淀細(xì)菌特異性吸附：利用配體與受體的親和力，吸附待檢微生物。

如流感病毒血凝素可與紅細(xì)胞結(jié)合，低速離心收集紅細(xì)胞，即達(dá)到濃縮病毒的目的(二)樣品濃縮12/12/202215吸附法非特異性吸附：化學(xué)制劑形成沉淀87捕獲清洗釋放固相包被的抗體捕獲目標(biāo)細(xì)菌洗滌程序減少雜菌用特異性酶切割抗體以釋放活菌細(xì)胞免疫磁珠法磁珠-抗體與抗原結(jié)合(二)樣品濃縮捕獲清洗釋放固相包被的抗體洗滌程序減少雜菌用特異性酶切割抗體88修復(fù)培養(yǎng)微生物受到嚴(yán)重?fù)p傷后，一般培養(yǎng)方法不生長(zhǎng)亞致死性損傷的致病菌，普通培養(yǎng)方法無法培養(yǎng)而造成假陰性人類食用后有患病的潛在威脅，當(dāng)受損細(xì)菌進(jìn)入人體，得到修復(fù)產(chǎn)生致病性(三)損傷菌的復(fù)蘇修復(fù)培養(yǎng)(三)損傷菌的復(fù)蘇89加工食品日益增多,細(xì)菌受損因素：熱冷凍冷藏干燥高滲透壓消毒劑防腐劑添加劑(三)損傷菌的復(fù)蘇加工食品日益增多,細(xì)菌受損因素：熱高滲透壓(三)損傷菌的復(fù)蘇90修復(fù)培養(yǎng)方法：增加營(yíng)養(yǎng)成分：如肉浸汁、胰胨、蛋白胨、各種氨基酸、活性酶蛋白、ATP、丙酮酸等簡(jiǎn)單的低級(jí)培養(yǎng)基：緩沖蛋白胨水，蛋白胨、Nacl、磷酸緩沖液緩沖液等高滲培養(yǎng)基、含有血清培養(yǎng)基無抑制劑的培養(yǎng)基改變pH降低培養(yǎng)溫度(三)損傷菌的復(fù)蘇修復(fù)培養(yǎng)方法：(三)損傷菌的復(fù)蘇91（3）彎曲桿菌：樣品先于0.3％琥珀酸鈉、0.01％胱氨酸-HCl和抗生素的布氏肉湯，37℃培養(yǎng)6h再加多黏菌素B，42℃，微需氧培養(yǎng)損傷菌的恢復(fù)國(guó)際上較公認(rèn)的一些方法：（1）副溶血弧菌：用3％NaCl蛋白胨水，35℃培養(yǎng)2h前增菌（2）耶爾森氏菌屬：4℃培養(yǎng)前，先25℃培養(yǎng)4h，前增菌（3）彎曲桿菌：損傷菌的恢復(fù)國(guó)際上較公認(rèn)的一些方法：92（4）大腸菌群、糞大腸菌群、副溶血弧菌、糞鏈球菌和金黃色葡萄球菌的MPN測(cè)定法：樣品接種STB培養(yǎng)基，35～37℃，4～16h前增菌每管再加雙料選擇性肉湯培養(yǎng)基。再按原法進(jìn)行

（5）表面覆蓋平板法：樣品傾注無選擇性營(yíng)養(yǎng)豐富的瓊脂的平板，25～37℃，1～4h，恢復(fù)受傷菌再依據(jù)欲計(jì)數(shù)的細(xì)菌類別，覆蓋一層約10～12ml的選擇性培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。按原法進(jìn)行（4）大腸菌群、糞大腸菌群、副溶血弧菌、糞鏈球菌和金黃色葡萄93（6）濾膜平板法：混勻的樣品1ml，涂布于孔徑450μm的濾膜上置無選擇性的瓊脂平板培養(yǎng)基上，37℃，4h，恢復(fù)受傷細(xì)菌然后將濾膜置于選擇性瓊脂平板培養(yǎng)基上，40℃18h，計(jì)數(shù)糞大腸菌群（6）濾膜平板法：94標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告選擇合適的分離培養(yǎng)方法增加樣品接種量挑選多個(gè)可疑菌落進(jìn)行鑒定增加分離平板的種類培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告選擇合適的分離培養(yǎng)方法增加樣品接95增菌培養(yǎng)、弱選擇性和強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基各一種培養(yǎng)條件：溫度、濕度、氣體等。如幽門螺桿菌二、選擇合適的分離培養(yǎng)方法增菌培養(yǎng)、弱選擇性和強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基各一種二、選擇合適的分離培96四、挑選多個(gè)可疑菌落進(jìn)行鑒定三、增加樣品接種量四、挑選多個(gè)可疑菌落進(jìn)行鑒定三、增加樣品接種量97阪歧腸桿菌檢驗(yàn)方法

—FDA方法

100、10、1g樣品各三份（分別溶于9份45℃無菌蒸餾水）

36℃過夜10ml培養(yǎng)液+90ml的EE肉湯，混勻

36℃過夜

涂布法或劃線法接種VRBG瓊脂

36℃過夜

選擇可疑菌落劃線接種于TSA瓊脂上

25℃48-72h選擇黃色菌落用API20E和氧化酶試驗(yàn)確證333g樣品阪歧腸桿菌檢驗(yàn)方法

98阪歧腸桿菌檢驗(yàn)方法每一增菌培養(yǎng)物接種2個(gè)VRBG平板(結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂），0.1ml/平板，用無菌玻璃棒涂布36℃過夜挑取5個(gè)可疑菌落，劃線接種5個(gè)TSA平板，25℃48~72h典型菌落形態(tài)：菌落周圍紫色沉淀環(huán)阪歧腸桿菌檢驗(yàn)方法每一增菌培養(yǎng)物接種2個(gè)VRBG平板(結(jié)晶紫99選用敏感的、特異的選擇性平板或鑒別平板進(jìn)行分離培養(yǎng)免疫熒光菌球法

五、增加分離平板的種類選用敏感的、特異的選擇性平板或鑒別平板進(jìn)行分離培養(yǎng)五、增加分100非軍團(tuán)菌Legionellapneumophila(灰蘭色可疑菌落)

GVPC平板非軍團(tuán)菌LegionellapneumophilaG101李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基

ListeriaChromagenicmedium用于李斯特菌的選擇性分離鑒別，24h可初步判定結(jié)果單增李斯特菌:

綠色，周圍有暈圈綿羊李斯特菌:

綠色，周圍有暈圈英諾克李特菌:綠色李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基

ListeriaChromageni102科瑪嘉顯色培養(yǎng)基單增李斯特菌藍(lán)色菌落，并帶有白色脂質(zhì)溶解環(huán)科瑪嘉顯色培養(yǎng)基單增李斯特菌藍(lán)色菌落，并帶有白色脂質(zhì)溶解環(huán)103O157:H7ID顯色培養(yǎng)基典型菌落單增李斯特菌O157:H7ID顯色培養(yǎng)基典型菌落單增李斯特菌104大腸桿菌O157:H7顯色培養(yǎng)基用于大腸桿菌O157:H7的選擇性分離鑒別，24h可初步判定結(jié)果O157:H7:

紫紅色其他大腸桿菌:

藍(lán)色其他:無色或被抑制大腸桿菌O157:H7顯色培養(yǎng)基用于大腸桿菌O157:H7的105沙門菌顯色培養(yǎng)基(陸橋)沙門菌的選擇性分離鑒別，18~24h可初步判定結(jié)果沙門菌

紅色大腸桿菌

黃色沙門菌顯色培養(yǎng)基(陸橋)沙門菌的選擇性分離鑒別，18~24106沙門氏菌菌落(紫)(CHROMagar顯色培養(yǎng)基)沙門菌顯色培養(yǎng)基沙門氏菌菌落特征（紅）(海博公司顯色培養(yǎng)基)沙門氏菌菌落(紫)沙門菌顯色培養(yǎng)基沙門氏菌菌落特征（紅）(海107BairdParker培養(yǎng)基+RPFR1試劑:BairdParker基礎(chǔ)瓊脂R2試劑:RPF配方(兔血漿+纖維蛋白原試驗(yàn))凝固酶陽性葡萄球菌:菌落周圍形成沉淀圈BairdParker培養(yǎng)基+RPFR1試劑:108弧菌顯色培養(yǎng)基

VibrioChromagenicmedium用于副溶血性弧菌的分離鑒別，24h可初步判定結(jié)果副溶血性弧菌:紫紅色創(chuàng)傷弧菌:藍(lán)綠色霍亂弧菌:藍(lán)綠色擬態(tài)弧菌:藍(lán)綠色溶藻弧菌:無色弧菌顯色培養(yǎng)基

VibrioChromagenicmed109分子生物學(xué)方法：熒光定量PCR單克隆抗體免疫熒光免疫磁珠技術(shù)全自動(dòng)微生物分析儀器

標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告選用敏感的、特異的鑒定方法分子生物學(xué)方法：熒光定量PCR標(biāo)本分離培養(yǎng)可疑菌落鑒定報(bào)告選110儀器檢測(cè)法VIDAS應(yīng)用酶聯(lián)免疫原理制造的全自動(dòng)免疫分析儀，用熒光分析技術(shù)通過固相吸附器，用已知抗體捕捉目標(biāo)生物體，然后用帶熒光的酶聯(lián)抗體結(jié)合，充分沖洗，激發(fā)光源檢測(cè)，自動(dòng)讀結(jié)果優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，快速，48h內(nèi)鑒定沙門菌、大腸桿菌O157:H7、單核李斯特菌，空腸彎曲桿菌和葡萄球菌腸毒素等儀器檢測(cè)法VIDAS111VIDAS免疫檢測(cè)原理

免疫捕獲：

抗體捕捉目標(biāo)抗原

免疫夾心：

酶抗體與抗原結(jié)合

檢測(cè)：儀器測(cè)量熒光強(qiáng)度370nm450nmVIDAS免疫檢測(cè)原理抗體捕捉目標(biāo)抗原酶抗體與抗原結(jié)合112免疫濃縮原理捕獲清洗釋放固相包被的抗體捕獲目標(biāo)細(xì)菌洗滌程序減少雜菌用特異性酶切割抗體以釋放活菌細(xì)胞免疫濃縮原理捕獲清洗釋放固相包被的抗體洗滌程序減少雜菌用特異113VIDAS

VIDAS114將30個(gè)細(xì)菌鑒定必需的生化反應(yīng)培養(yǎng)基固定到卡片上培養(yǎng)后，儀器判斷顯色反應(yīng)利用數(shù)值法進(jìn)行判定根據(jù)鑒定的微生物種類的不同，設(shè)計(jì)不同的鑒定卡片，如革蘭陰性菌卡、革蘭陽性菌卡、酵母菌卡等生物梅里埃自動(dòng)微生物檢測(cè)儀將30個(gè)細(xì)菌鑒定必需的生化反應(yīng)培養(yǎng)基固定到卡片上生物梅里埃自1151.鑒定范圍廣：腸道G-桿菌、非發(fā)酵G-桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、G+和G-厭氧菌、淋球菌等2.有20多種藥敏試卡3.功能廣泛：可同時(shí)連接自動(dòng)免疫診斷系統(tǒng)，食品質(zhì)量鑒定Lactometer系統(tǒng)等4.設(shè)有多種程序，可根據(jù)不同需要加以調(diào)整5.自動(dòng)化程度高，一次性消耗品少

6.快速、動(dòng)態(tài)分析7.封閉式操作自動(dòng)微生物檢測(cè)儀1.鑒定范圍廣：腸道G-桿菌、非發(fā)酵G-桿菌、葡萄球菌、116生物梅里埃自動(dòng)微生物檢測(cè)儀檢測(cè)時(shí)間80%臨床分離株鑒定:平均檢測(cè)時(shí)間5h鑒定+藥敏:平均檢測(cè)時(shí)間6h自動(dòng)化金標(biāo)準(zhǔn)生物梅里埃自動(dòng)微生物檢測(cè)儀檢測(cè)時(shí)間80%臨床分離株自動(dòng)化金117商品化生化鑒定系統(tǒng)VITEKGEN+一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片卡片含有干燥的抗菌藥物和生化基質(zhì)制備一定濃度的欲鑒定菌株的菌懸液將菌懸液接種到各種細(xì)菌的卡片中放入具有讀數(shù)功能的孵箱內(nèi)每隔一定時(shí)間，儀器自動(dòng)檢測(cè)發(fā)酵情況換算成能被計(jì)算機(jī)所接受的生物編碼最后由計(jì)算機(jī)判定，打印出鑒定結(jié)果商品化生化鑒定系統(tǒng)VITEKGEN+118第1位數(shù)第2位數(shù)第3位數(shù)第4位數(shù)第5位數(shù)第6位數(shù)第7位數(shù)結(jié)果判定ONPGADHLDCODCCITH2SURETDAINDVPGELGLUMANINOSORRGASACMELAMYARAOX124124124124124124124反應(yīng)結(jié)果-+++++-----+++++-+-+-沙門菌應(yīng)得數(shù)值024124000004124104020組合編碼6704752API20E是根據(jù)快速酶促反應(yīng)及代謝產(chǎn)物的檢測(cè)技術(shù)發(fā)展的一種細(xì)菌編碼鑒定方法廣泛應(yīng)用于臨床、食品中革蘭陰性桿菌的快速鑒定第1位數(shù)第2位數(shù)第3位數(shù)第4位數(shù)第5位數(shù)第6位數(shù)第7位數(shù)結(jié)果119自動(dòng)核酸純化系統(tǒng)應(yīng)用面廣：病毒、細(xì)菌的核酸提取，富集增菌試劑開放：可使用各家公司的核酸磁珠提取試劑盒速度快：20min內(nèi)完成咽拭子H1N1核酸提取使用方便：僅需一步加入試劑cKingFishermL-50-1000μl-15個(gè)樣品/批KingFisher-20-200μl-24個(gè)樣品/批-50-1000μl96樣品/批KingFisher96自動(dòng)核酸純化系統(tǒng)應(yīng)用面廣：病毒、細(xì)菌的核酸提取，富集增菌cK120多病原體復(fù)合檢測(cè)系統(tǒng)－－液相懸浮芯片系統(tǒng)多指標(biāo)同步分析（flexiblemulti-analyteprofiling,xMAP）未來的一個(gè)主要檢測(cè)技術(shù)！多病原體復(fù)合檢測(cè)系統(tǒng)－－液相懸浮芯片系統(tǒng)未來的一個(gè)主要檢測(cè)技121病原性病菌的分離鑒定及提高檢出率課件122病原性病菌的分離鑒定及提高檢出率課件123病原性病菌的分離鑒定及提高檢出率課件124DATA!DATA!DATA!DATA!Ex1Ex2Em1Em3Em2DD

Read100eachcolorbeadinassay

1-100beadsetsavail.ReadedBead-BasedTechnologyDATA!DATA!DATA!DATA!Ex1Ex2Em1E125多指標(biāo)同步分析

(flexiblemulti-analyteprofiling,xMAP)上世紀(jì)90年代，美國(guó)Luminex公司將流式細(xì)胞儀、數(shù)字信號(hào)處理器和激光檢測(cè)裝置相結(jié)合具有多指標(biāo)同步分析功能懸浮芯片技術(shù)(suspensionarray)液態(tài)芯片技術(shù)(liquidchip)廣泛應(yīng)用于細(xì)菌、病毒、單核苷酸多態(tài)性(SNP)檢測(cè)等領(lǐng)域多指標(biāo)同步分析

(flexiblemulti-analyt126技術(shù)核心是特制直徑5.6μm的聚苯乙烯微球每種微球按嚴(yán)格比例摻入2種不同熒光染料每種染料有10種濃度梯度，兩種染料搭配比例的不同，可將微球分為100種每種微球都有獨(dú)特的光譜地址根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康模⑶虮砻鏄?biāo)記可以捕獲相應(yīng)目標(biāo)分子的配體，在雜交過程中加入熒光標(biāo)記，反應(yīng)后檢測(cè)多指標(biāo)同步分析(xMAP)技術(shù)核心是特制直徑5.6μm的聚苯乙烯微球多指標(biāo)同步分析(x127在同一反應(yīng)體系加入不同的微球，即可實(shí)現(xiàn)高通量標(biāo)記的微球與樣品中待檢目標(biāo)分子作用，在液流帶動(dòng)下通過流式細(xì)胞儀，兩束不同波長(zhǎng)的激光檢測(cè)每個(gè)微球：635nm的紅色激光→區(qū)分微球種類532nm的綠色激光→熒光強(qiáng)度當(dāng)標(biāo)記的待測(cè)樣本與特定微球上的探針結(jié)合，儀器檢測(cè)兩束激光所發(fā)的光計(jì)算機(jī)自動(dòng)分析特定微球上的平均熒光強(qiáng)度多指標(biāo)同步分析(xMAP)在同一反應(yīng)體系加入不同的微球，即可實(shí)現(xiàn)高通量多指標(biāo)同步分析(128脈沖場(chǎng)電泳系統(tǒng)－菌株鑒定系統(tǒng)全球脈沖網(wǎng)的標(biāo)準(zhǔn)平臺(tái)菌株鑒定?追蹤溯源脈沖場(chǎng)電泳系統(tǒng)－菌株鑒定系統(tǒng)全球脈沖網(wǎng)的標(biāo)準(zhǔn)平臺(tái)菌株鑒定?追129多功能熒光酶標(biāo)儀熒光檢測(cè)（包括時(shí)間分辨熒光）化學(xué)發(fā)光檢測(cè)Elisa酶聯(lián)免疫檢測(cè)檢測(cè)靈敏度大大提高多功能熒光酶標(biāo)儀熒光檢測(cè)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)Elisa酶聯(lián)免疫檢測(cè)130七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制購(gòu)買有質(zhì)量認(rèn)證的成品培養(yǎng)基新購(gòu)買的成品培養(yǎng)基鑒定后使用

理化指標(biāo)微生物學(xué)方法營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基選擇性增菌培養(yǎng)基七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制購(gòu)買有質(zhì)量認(rèn)證的成品培養(yǎng)基理化指標(biāo)131七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制—理化指標(biāo)pH值：25℃時(shí)的測(cè)定值，±0.2比色法：用指示劑在不同pH溶液中的顏色變化，與標(biāo)準(zhǔn)比色管或比色板相比電極式pH計(jì)：用可測(cè)定固體的特殊電極pH值、凝膠強(qiáng)度、色澤、澄清度、水分含量七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制—理化指標(biāo)pH值：25℃時(shí)的測(cè)定值，±0132七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

—微生物學(xué)方法靈敏度測(cè)定法混合增菌培養(yǎng)法測(cè)定增菌倍數(shù)法特異性測(cè)定方法七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制

133七、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制