茶產(chǎn)品特定成分檢驗培訓(xùn)教材課件

第四章茶產(chǎn)品特定成分檢驗茶葉特定成分概述茶產(chǎn)品特定成分檢驗第四章茶產(chǎn)品特定成分檢驗茶葉特定成分概述1教學(xué)目的和要求了解茶產(chǎn)品特定成分檢驗的含義、作用理解茶產(chǎn)品特定成分檢驗的一般內(nèi)容、原理掌握茶產(chǎn)品特定成分檢驗的依據(jù)方法教學(xué)目的和要求2第一節(jié)茶產(chǎn)品特定成分概述茶作為一種特殊的食品，廣受消費者的歡迎。茶葉已經(jīng)成為世界性飲品，目前全世界有30多億人飲茶。茶葉的品飲是人們工作、生活的重要組成部分。茶葉的質(zhì)量安全直接或間接與人們的生活質(zhì)量密切相關(guān)。消費者從單純追求茶葉產(chǎn)品的品味、營養(yǎng)發(fā)展到關(guān)注食品的質(zhì)量安全和對身體的調(diào)節(jié)功能，從解渴功能類食品發(fā)展到天然、營養(yǎng)、以及有益于健康的質(zhì)量安全型食品。第一節(jié)茶產(chǎn)品特定成分概述茶作為一種特殊的食品，廣受消費者3茶葉區(qū)別于其他食品的主要原因是其特有的化學(xué)成分。茶產(chǎn)品特定成分檢驗是對茶主要的化學(xué)成分進行的檢驗，主要有水分檢驗，灰分檢驗，水浸出物檢驗，茶多酚檢驗，咖啡堿檢驗，其他茶一般成分檢驗（茶紅素、茶黃素、粗纖維、茶滋味）等。茶葉區(qū)別于其他食品的主要原因是其特有的化學(xué)成分。4茶產(chǎn)品特定成分檢驗的意義和作用茶產(chǎn)品特定成分是其區(qū)別于其他食品的重要標(biāo)志，是衡量茶產(chǎn)品質(zhì)量的重要依據(jù)；提高茶產(chǎn)品質(zhì)量，可以推動生產(chǎn)的發(fā)展；茶產(chǎn)品質(zhì)量是進入市場的通行證；茶產(chǎn)品質(zhì)量是茶產(chǎn)業(yè)生存、發(fā)展的基礎(chǔ)；茶產(chǎn)品質(zhì)量是消費者生活健康的重要保障。茶產(chǎn)品特定成分檢驗的意義和作用5茶產(chǎn)品檢驗的類別出廠檢驗：每批產(chǎn)品均應(yīng)做出廠檢驗，經(jīng)檢驗合格簽發(fā)合格證后，方可出廠。檢驗項目一般為：感官品質(zhì)、碎茶和粉末、水分、總灰分、凈含量等；型式檢驗：產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的檢驗項目都進行檢驗。檢驗周期每年2次。有下列情況時，應(yīng)進行型式檢驗：如原料有較大改變，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量時；停產(chǎn)半年以上恢復(fù)生產(chǎn)時；國家法定質(zhì)量監(jiān)督機構(gòu)提出型式檢驗要求時。茶學(xué)研究檢驗茶產(chǎn)品檢驗的類別6第二節(jié)特定化學(xué)成分檢驗一、水分檢驗水分：在常壓條件下，試樣經(jīng)規(guī)定的溫度加熱至恒重時的質(zhì)量損失。檢驗方法依據(jù)：水分測定方法較多，檢驗時依據(jù)各類茶產(chǎn)品水分檢驗標(biāo)準(zhǔn)，在此以GB/T8304-2013《茶水分測定》為例。測定原理：試樣于103℃±2℃的電熱恒溫干燥箱中加熱至恒重，稱重，并計算試樣損失的質(zhì)量即為水分。第二節(jié)特定化學(xué)成分檢驗一、水分檢驗7儀器及用具樣品容器:清潔、干燥、避光、密閉的玻璃或不與樣品發(fā)生反應(yīng)的的材料制成；大小以能裝滿磨碎樣為宜鋁質(zhì)或玻璃質(zhì)烘皿：具蓋，內(nèi)徑75mm~80mm電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱：溫控103℃±2℃干燥器：內(nèi)盛有效干燥劑分析天平：感量0.001g儀器及用具8操作方法取樣：按GB/T8302的規(guī)定取樣。試樣制備：按GB/T8303的規(guī)定制備樣茶。烘皿的準(zhǔn)備：將潔凈的烘皿連同蓋置于103℃±2℃的干燥箱內(nèi)（皿蓋打開斜至皿邊），加熱1h，加蓋取出，于干燥器內(nèi)冷卻至室溫。稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。操作方法9測定仲裁法（103℃±2℃恒重法）：稱取5g（準(zhǔn)確至0.001g）試樣于已知質(zhì)量的烘皿中，置于103℃±2℃干燥箱內(nèi)（皿蓋打開斜至皿邊）。加熱4h，加蓋取出，于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱量。再置于干燥箱內(nèi)加熱1h，加蓋取出，于干燥器內(nèi)冷卻，稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。重復(fù)加熱1h的操作，直至連續(xù)兩次稱量差不超過0.005g，即為恒重，以最小稱量為準(zhǔn)?？焖俜ǎ?20℃烘干法）：稱取5g（準(zhǔn)確至0.001g）試樣于已知質(zhì)量的烘皿中，置于120干燥箱內(nèi)（皿蓋打開斜至皿邊）。以2min內(nèi)回升到120℃時計算，加熱1h，加蓋取出，于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。測定10結(jié)果計算：茶葉水分含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示如果符合重復(fù)性要求，取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果（保留小數(shù)點后1位）。重復(fù)性：在重復(fù)條件下同一樣品獲得的測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5%。注：用第二法測定茶葉水分，重復(fù)性達(dá)不到要求時，按第一法規(guī)定進行測定。結(jié)果計算：茶葉水分含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示11二、水浸出物檢驗水浸出物：在規(guī)定條件下，用沸水浸出茶葉中的水可溶性物質(zhì)。檢驗方法依據(jù)：GB/T8305-2013《茶水浸出物測定》測定原理：用沸水回流提取茶葉中的水可溶性物質(zhì)，再經(jīng)過濾、沖洗、干燥、稱量浸提后的茶渣，計算水浸出物含量。二、水浸出物檢驗12儀器及用具電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱：溫控120℃±2℃沸水浴布氏漏斗連同減壓抽濾裝置鋁質(zhì)或玻璃質(zhì)烘皿：具蓋，內(nèi)徑75mm~80mm干燥器：內(nèi)盛有效干燥劑分析天平：感量0.001g錐形瓶：500mL磨碎機：由不吸收水分的材料制成；死角盡可能小，易于清掃；內(nèi)裝孔徑為3mm的篩子。儀器及用具13操作方法取樣：按GB/T8302的規(guī)定取樣。試樣制備：先用磨碎機將少量試樣磨碎，棄去，在磨碎其余部分。烘皿準(zhǔn)備：將潔凈的烘皿連同15cm定性快速濾紙置于120℃±2℃的恒溫干燥箱內(nèi)，皿蓋打開斜至皿邊，烘干1h，加蓋取出，在干燥器內(nèi)冷卻至室溫。稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。操作方法14測定步驟：稱取2g（準(zhǔn)確至0.001g）磨碎試樣于500mL錐形瓶中，加沸蒸餾水300mL，立即移入沸水浴中浸提45min（每隔10min搖動一次）。浸提完畢后立即趁熱減壓過濾（用處理過的濾紙）。用約150mL沸蒸餾水洗滌茶渣數(shù)次，將茶渣連同已知質(zhì)量的濾紙移入烘皿內(nèi)，然后移入120℃±2℃的恒溫干燥箱內(nèi)，皿蓋打開斜至皿邊，烘干1h，加蓋取出，冷卻1h后再烘1h，立即移入干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。測定步驟：稱取2g（準(zhǔn)確至0.001g）磨碎試樣于500m15結(jié)果計算計算方法：茶葉中水浸出物含量以干態(tài)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示：

如果符合重復(fù)性要求，取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果，結(jié)果保留小數(shù)點后1位。重復(fù)性：在重復(fù)條件下同一樣品獲得的測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的2%。結(jié)果計算16三、總灰分檢驗總灰分：在規(guī)定條件下，茶葉經(jīng)525℃±25℃灼燒灰化后所得的殘渣。檢驗方法依據(jù)：GB/T8306-2013《茶總灰分測定》測定原理：試樣經(jīng)525℃±25℃加熱灼燒，分解有機物至恒重。三、總灰分檢驗17儀器及用具坩堝：鉑金、瓷質(zhì)或者其他不會被測定條件影響的材質(zhì)。高型、容量30mL。電熱板。高溫電爐：能溫控525℃±25℃。干燥器：內(nèi)盛有效干燥劑。坩堝鉗。分析天平：感量0.001g。儀器及用具18操作方法取樣：按GB/T8302的規(guī)定。試樣制備：按GB/T8303的規(guī)定。坩堝的準(zhǔn)備：將潔凈的坩堝置于525℃±25℃高溫電爐內(nèi)，灼燒1h，待爐溫降至300℃左右時取出坩堝，于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。操作方法19測定方法：稱取混勻的磨碎試樣2g（準(zhǔn)確至0.001g）于坩堝內(nèi)，在電熱板上徐徐加熱，使試樣充分炭化至無煙，將坩堝移入525℃±25℃高溫電爐內(nèi)，灼燒至無炭粒（不少于2h），待爐溫降至300℃左右時，取出坩堝，置于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱量。再移入高溫電爐內(nèi)以525℃±25℃溫度灼燒1h，取出，冷卻，稱量。再移入高溫電爐內(nèi)，灼燒30min，取出，冷卻，稱量。重復(fù)此操作，直至連續(xù)兩次稱量差不超過0.001g為止。以最小稱量為準(zhǔn)。其他：必要時，可保留總會分供水溶性灰分和水不溶性灰分的測定。測定方法：稱取混勻的磨碎試樣2g（準(zhǔn)確至0.001g）于坩20結(jié)果計算計算方法：茶葉總灰分含量以干態(tài)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示：如果重復(fù)性符合要求，取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果（保留小數(shù)點后1位）。重復(fù)性：在重復(fù)條件下同一樣品獲得的測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5%。結(jié)果計算21四、水溶性灰分和水不溶性灰分檢驗水溶性灰分：在規(guī)定條件下，總灰分中溶于水的部分。水不溶性灰分：在規(guī)定條件下，總灰分中不溶于水的部分。檢驗方法依據(jù)：GB5009.4-2016《食品國家安全標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測定》（替代原GB/T8307-2013茶水溶性灰分和水不溶性灰分測定、GB/T8308-2013茶酸不溶性灰分測定）。測定原理：用熱水提取總灰分，經(jīng)無灰濾紙過濾、灼燒、稱量殘留物，測得水不溶性灰分，由總灰分和水不溶性灰分的質(zhì)量之差計算水溶性灰分。四、水溶性灰分和水不溶性灰分檢驗22儀器及用具高溫爐：最高溫度≥950℃。分析天平：感量分別為0.1mg、1mg、0.1g。石英坩堝或瓷坩堝。干燥器(內(nèi)有干燥劑)。無灰濾紙。漏斗。表面皿：直徑6cm。燒杯(高型)：容量100mL。恒溫水浴鍋：控溫精度±2℃。儀器及用具23操作方法坩堝預(yù)處理：取大小適宜的石英坩堝或瓷坩堝置高溫爐中，在550℃±25℃下灼燒30min，冷卻至200℃左右，取出，放入干燥器中冷卻30min，準(zhǔn)確稱量。重復(fù)灼燒至前后兩次稱量相差不超過0.5mg為恒重。稱樣：灰分大于或等于10g/100g的試樣稱取2g~3g(精確至0.0001g)；灰分小于或等于10g/100g的試樣稱取3g~10g(精確至0.0001g，對于灰分含量更低的樣品可適當(dāng)增加稱樣量)。操作方法24總灰分制備：按GB/T8306的規(guī)定。測定方法：用約25mL熱蒸餾水分次將總灰分從坩堝中洗入100mL燒杯中，蓋上表面皿，用小火加熱至微沸,防止溶液濺出。趁熱用無灰濾紙過濾，并用熱蒸餾水分次洗滌杯中殘渣，直至濾液和洗滌體積約達(dá)150mL為止，將濾紙連同殘渣移入原坩堝內(nèi)，放在沸水浴鍋上小心地蒸去水分，然后將坩堝烘干并移入高溫爐內(nèi)，以550℃±25℃灼燒至無炭粒(一般需1h)。待爐溫降至200℃時，放入干燥器內(nèi)，冷卻至室溫，稱重(準(zhǔn)確至0.0001g)。再放入高溫爐內(nèi)，以550℃±25℃灼燒30min，如前冷卻并稱重。如此重復(fù)操作，直至連續(xù)兩次稱重之差不超過0.5mg為止，記下最低質(zhì)量?？偦曳种苽洌喊碐B/T8306的規(guī)定。25結(jié)果計算計算方法：以試樣質(zhì)量計水不溶性灰分的含量X1=（m1-m2）/（m3-m2）×100式中：X1——水不溶性灰分的含量，單位為克每百克(g/100g)；m1——坩堝和水不溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；m2——坩堝的質(zhì)量，單位為克(g)；m3——坩堝和試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；100———單位換算系數(shù)。結(jié)果計算26水溶性灰分的含量,按式(6)計算:X2=（m4-m5）/m0×100式中：X2—水溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g/100g)；m0—試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；m4—總灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；m5———水不溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；水溶性灰分的含量,按式(6)計算:27以干物質(zhì)計水不溶性灰分的含量：X1=（m1-m2）/[(m3-m2)×ω]×100式中：X1——水不溶性灰分的含量，單位為克每百克(g/100g)；m1——坩堝和水不溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；m2——坩堝的質(zhì)量，單位為克(g)；m3——坩堝和試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；ω——試樣干物質(zhì)含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，%；100——單位換算系數(shù)。以干物質(zhì)計28水溶性灰分的含量：X2=（m4-m5）/（m0×ω）×100式中：X2—水溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g/100g)；m0—試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；m4—總灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；m5—水不溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；ω——試樣干物質(zhì)含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，%；100—單位換算系數(shù)。試樣中灰分含量≥10g/100g時，保留三位有效數(shù)字；試樣中灰分含量<10g/100g時，保留兩位有效數(shù)字。精密度（重復(fù)性）：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5%。水溶性灰分的含量：29五、酸不溶性灰分檢驗酸不溶性灰分：在規(guī)定條件下，總灰分經(jīng)鹽酸處理后的殘留部分。檢驗方法依據(jù)：GB5009.4-2016《食品國家安全標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測定》（替代原GB/T8307-2013茶水溶性灰分和水不溶性灰分測定、GB/T8308-2013茶酸不溶性灰分測定）。測定原理：用鹽酸溶液處理總灰分，過濾、灼燒、稱量殘留物。五、酸不溶性灰分檢驗30儀器及用具高溫爐：最高溫度≥950℃。分析天平：感量分別為0.1mg、1mg、0.1g。石英坩堝或瓷坩堝。干燥器(內(nèi)有干燥劑)。無灰濾紙。漏斗。表面皿：直徑6cm。燒杯(高型)：容量100mL。恒溫水浴鍋：控溫精度±2℃。儀器及用具31操作方法坩堝處理：見前稱樣：見前總灰分處理：見前操作方法32測定方法用25mL10%鹽酸溶液將總灰分分次洗入100mL燒杯中，蓋上表面皿，在沸水浴上小心加熱，至溶液由渾濁變?yōu)橥该鲿r，繼續(xù)加熱5min，趁熱用無灰濾紙過濾，用沸蒸餾水少量反復(fù)洗滌燒杯和濾紙上的殘留物，直至中性(約150mL)。將濾紙連同殘渣移入原坩堝內(nèi)，在沸水浴上小心蒸去水分，移入高溫爐內(nèi)，以550℃±25℃灼燒至無炭粒(一般需1h)。待爐溫降至200℃時，取出坩堝，放入干燥器內(nèi)，冷卻至室溫，稱重(準(zhǔn)確至0.0001g)。再放入高溫爐內(nèi)，以550℃±25℃灼燒30min，如前冷卻并稱重。如此重復(fù)操作，直至連續(xù)兩次稱重之差不超過0.5mg為止，記下最低質(zhì)量。測定方法33結(jié)果計算以試樣質(zhì)量計：酸不溶性灰分的含量：X1=（m1-m2）/（m3-m2）×100式中：X1—酸不溶性灰分的含量,單位為克每百克(g/100g)；m1—坩堝和酸不溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；m2—坩堝的質(zhì)量，單位為克(g)；m3—坩堝和試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；100—單位換算系數(shù)。結(jié)果計算34以干物質(zhì)計：酸不溶性灰分的含量：X1=（m1-m2）/[(m3-m2)×ω]×100式中：X1——酸不溶性灰分的含量，單位為克每百克(g/100g)；m1——坩堝和酸不溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；m2——坩堝的質(zhì)量，單位為克(g)；m3——坩堝和試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；ω——試樣干物質(zhì)含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，%；100——單位換算系數(shù)。試樣中灰分含量≥10g/100g時，保留三位有效數(shù)字；試樣中灰分含量<10g/100g時，保留兩位有效數(shù)字。精密度（重復(fù)性）：在重復(fù)性條件下同一樣品獲得的測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5%。以干物質(zhì)計：酸不溶性灰分的含量：35六、水溶性灰分堿度檢驗水溶性灰分堿度：中和水溶性灰分浸出液所需要酸的量，或相當(dāng)于該酸量的堿量。檢驗方法依據(jù)：GB/T8309-2013《茶水溶性灰分堿度測定》。測定原理：用甲基橙作指示劑，以鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定來自水溶性灰分的溶液。六、水溶性灰分堿度檢驗36儀器及用具滴定管：容量50mL。三角燒瓶：250ml。試劑和溶液鹽酸：0.1mol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液，按GB/T601配置與標(biāo)定。甲基橙指示劑：甲基橙0.5g，用熱蒸餾水溶解后稀釋至1L。儀器及用具37操作方法取樣：按GB/T8302的規(guī)定。試樣制備：按GB/T8303的規(guī)定。水溶性灰分溶液的制備：按GB5009.4的規(guī)定。測定：將水溶性灰分溶液冷卻后，加甲基橙指示劑2滴，用0.1mol/L鹽酸溶液滴定。使用兩次測定水溶性灰分和水不溶性灰分的濾液，平行測定兩次。操作方法38結(jié)果計算計算方法：堿度的表示，即中和100g干態(tài)磨碎樣品所需的一定濃度鹽酸的物質(zhì)的量，或換算為相當(dāng)于干態(tài)磨碎樣品中所含氫氧化鉀的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。堿度用100g干態(tài)磨碎樣品所需鹽酸物質(zhì)的量（mol/100g）表示式中：V——滴定時消耗0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，單位為毫升（mL）；m0——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；w——試樣干物質(zhì)含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），%。注：如果使用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度未精確到所要求的濃度，則計算時用校正系數(shù)（滴定濃度/0.1）。

結(jié)果計算39堿度用氫氧化鉀的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示水溶性灰分堿度=56V/(10*1000*m0*w)*100%式中：V、m0、w——與上相同；56——氫氧化鉀的摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾（g/mol）。如果符合重復(fù)性的要求，則取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果（保留小數(shù)點后1位）。重復(fù)性：在重復(fù)條件下同一樣品獲得的兩次測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。堿度用氫氧化鉀的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示40七、粗纖維檢驗粗纖維：植物細(xì)胞壁的主要組成成分，包括纖維素、半纖維素、木質(zhì)素及角質(zhì)等成分。檢驗方法依據(jù)：GB/T8310-2013《茶粗纖維測定》。測定原理：用一定濃度的酸、堿消化處理試樣，殘留物再經(jīng)灰化、稱量。由灰化時的質(zhì)量損失計算粗纖維含量。七、粗纖維檢驗41儀器及用具：分析天平：感量0.001g。尼龍布：孔徑50μm（相當(dāng)于300目）。玻璃質(zhì)砂芯坩堝：微孔平均直徑80μm~160μm，體積30mL。高溫電爐：525℃±25℃。電熱鼓風(fēng)干燥箱：溫控120℃±2℃。干燥器：內(nèi)盛有效干燥劑。儀器及用具：42試劑和溶液除非另有說明，所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。1.25%硫酸溶液：吸取6.9mL濃硫酸（密度為1.84g/mL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.3%），緩緩加入少量水中，冷卻后，定容至1L，搖勻。1.25%氫氧化鈉溶液。1%鹽酸溶液體積分?jǐn)?shù)：取10mL濃鹽酸（密度1.18g/mL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)37.5%），加水定容至1L。搖勻。乙醇（95%）。丙酮試劑和溶液43操作方法：取樣：按GB/T8302的規(guī)定。試樣制備：按GB/T8303的規(guī)定。操作方法：44測定：酸消化：稱取試樣約2.5g（準(zhǔn)確至0.001g）于400mL于燒杯中，加入約100℃的1.25%硫酸溶液200mL，放在電爐上加熱（在1min內(nèi)煮沸）。準(zhǔn)確微沸30min，并隨時補加熱水，以保持原溶液的體積。移去熱源，將酸消化液倒入內(nèi)鋪50μm尼龍布的布氏漏斗中，緩緩抽氣減壓過濾，并用每次50mL沸蒸餾水洗滌殘渣，直至中性，10min內(nèi)完成。測定：45堿消化：用約100℃的1.25%氫氧化鈉200mL，將將尼龍布上的殘渣全部洗入原燒杯中，放在電爐上加熱（在1min內(nèi)煮沸）。準(zhǔn)確微沸30min，并隨時補加熱水，以保持原溶液的體積。將堿消化液連同殘渣倒入連接抽濾瓶的玻質(zhì)砂芯坩堝中，緩緩抽氣減壓過濾，用50mL左右沸蒸餾水洗滌殘渣，再用1%鹽酸洗滌一次，然后用沸蒸餾水洗滌數(shù)次，直至中性，最后用乙醇洗滌二次，丙酮洗滌三次并抽濾至干，除去溶劑。堿消化：用約100℃的1.25%氫氧化鈉200mL，將將尼龍46干燥：將上述坩堝及殘留物移入干燥箱中，120℃烘4h，放在干燥器中冷卻，稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。灰化：將已稱量的坩堝，置于高溫爐中，525℃±25℃灰化2h，待爐溫降至300℃左右時，取出坩堝，于干燥器中冷卻，稱量準(zhǔn)確至0.001g）。干燥：將上述坩堝及殘留物移入干燥箱中，120℃烘4h，放在干47結(jié)果計算計算方法：茶葉中粗纖維含量以干態(tài)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示：式中：m0——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；m1——灰化前坩堝及殘留物的質(zhì)量，單位為克（g）；m2——灰化后坩堝、灰分的質(zhì)量，單位為克（g）；w——試樣干物質(zhì)含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），%。如果符合重復(fù)性的要求，取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果（保留小數(shù)點后2位）。重復(fù)性：在重復(fù)條件下同一樣品獲得的兩次測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5%。結(jié)果計算48八、咖啡堿檢驗咖啡堿：一種黃嘌呤生物堿化合物，是一種中樞神經(jīng)興奮劑，能夠暫時的驅(qū)走睡意并恢復(fù)精力。檢驗方法依據(jù)：GB/T8312-2013《茶咖啡堿測定》。測定原理：高效液相色譜法：茶葉中咖啡堿經(jīng)沸水和氧化鎂混合提取后，經(jīng)高效液相色譜儀、C18分離柱、紫外檢測器檢測，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。紫外分光光度法：茶葉中的咖啡堿易溶于水，除去干擾物質(zhì)后，用特定波長測定其含量。八、咖啡堿檢驗49高效液相色譜法儀器及用具高效液相色譜儀：具有紫外檢測器。分析柱：C18（ODS柱—反相色譜柱）。分析天平：感量0.0001g。高效液相色譜法50試劑和溶液除非另有說明，所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。氧化鎂：重質(zhì)，分析純。甲醇：色譜純。高效液相色譜流動相：取600mL甲醇倒入1400mL蒸餾水，混勻，過0.45μm膜?？Х葔A標(biāo)準(zhǔn)液：稱取125mg咖啡堿（純度不低于99%）加乙醇:水（1:4）溶解，定容至250mL，搖勻，標(biāo)準(zhǔn)儲備液1mL中相當(dāng)于含0.5mg咖啡堿。吸取1.0mL、2.0mL、5.0、10.0mL上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液，分別加水定容至50mL作為系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，每1mL該系列標(biāo)準(zhǔn)工作液中，分別相當(dāng)于含10μg、20μg、50μg、100μg咖啡堿。試劑和溶液51操作方法取樣：按GB/T8302的規(guī)定。試樣制備：按GB/T8303的規(guī)定。測定：試液準(zhǔn)備：稱取1.0g（準(zhǔn)確至0.001g）磨碎試樣或0.5g固態(tài)速溶茶（準(zhǔn)確至0.001g），置于500mL燒瓶中，加4.5g氧化鎂及300mL沸水，于沸水浴中加熱，浸提20min（每隔5min搖動一次），浸提完畢后立即趁熱減壓過濾，濾液移入500mL容量瓶中，冷卻后，用水定容至刻度，混勻。取一部分試液，通過0.45μm濾膜過濾，待測。操作方法52色譜條件：檢測波長紫外檢測器，波長280nm；流動相；流速：0.5mL/min~1.5mL/min;柱溫：40℃；進樣量：10μL~μL。測定：準(zhǔn)確吸取制備液10μL~20μL，注入高效液相色譜儀，并用咖啡堿系列標(biāo)準(zhǔn)工作液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行色譜測定。色譜條件：53結(jié)果計算計算方法：比較試樣和標(biāo)準(zhǔn)樣的峰面積進行定量，茶葉中咖啡堿含量以干態(tài)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示：式中：C1——根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算得出的測定液中咖啡堿濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V1——樣品總體積，單位為毫升（mL）；m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；w——試樣干物質(zhì)含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），%如果符合重復(fù)性的要求，取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果，結(jié)果保留小數(shù)點后1位。重復(fù)性：在重復(fù)條件下同一樣品獲得的測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。結(jié)果計算54紫外分光光度法儀器和用具紫外分光光度儀分析天平：感量0.001g。試劑和溶液除非另有說明，所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。堿式乙酸鉛溶液：稱取50g堿式乙酸鉛，加水100mL，靜置過夜，傾出上清液過濾。0.01mol/L鹽酸溶液：取0.9mL濃鹽酸，用水稀釋至1L，搖勻。4.5mol/L硫酸溶液：取250mL濃鹽酸，用水稀釋至1L，搖勻?？Х葔A標(biāo)準(zhǔn)液：稱取100mg咖啡堿（純度不低于99%）溶于100mL水中，作為母液。準(zhǔn)確吸取5mL，加水至100mL作為工作液（1mL含咖啡堿0.05mg）。紫外分光光度法55操作方法試液準(zhǔn)備：稱取3g（準(zhǔn)確至0.001g）磨碎試樣于500mL錐形瓶中，加沸蒸餾水450mL，立即移入沸水浴中，浸提45min（每隔10min搖動一次），浸提完畢后立即趁熱減壓過濾，殘渣用少量熱蒸餾水洗滌2~3次。將濾液轉(zhuǎn)入500mL容量瓶中，冷卻后用水定容至刻度，搖勻。操作方法56測定：用移液管準(zhǔn)確吸取10mL試液至100mL容量瓶中，加入4mL0.01mol/L鹽酸和1mL堿式乙酸鉛溶液，用水定容至刻度，混勻，靜置澄清過濾。準(zhǔn)確吸取濾液25mL，注入50mL容量瓶中加入0.1mL4.5mol/L硫酸溶液，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置澄清過濾。用10min石英比色杯，在波長274nm處以試劑空白溶液作參比，測定吸光度（A）。測定：用移液管準(zhǔn)確吸取10mL試液至100mL容量瓶中，加入57咖啡堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：分別吸取0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL咖啡堿工作液于一組25mL容量瓶中，各加入1.0mL鹽酸，用水稀釋至刻度，混勻，用10min石英比色杯，在波長274nm處，以試劑空白溶液作參比，測定吸光度（A）。將測得的吸光度與對應(yīng)的咖啡堿濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?？Х葔A標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：分別吸取0.0mL、1.0mL、2.058結(jié)果計算計算方法：茶葉中咖啡堿含量以干態(tài)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示式中：C2——根據(jù)試樣測得的吸光度（A），從咖啡堿標(biāo)準(zhǔn)曲線上查的的咖啡堿相應(yīng)含量，單位為毫克每毫升（mg/mL）；V2——試液總量，單位為毫升（mL）；m——試樣用量，單位為克（g）；w——試樣干物質(zhì)含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），%。如果符合重復(fù)性的要求，取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果，結(jié)果保留小數(shù)點后1位。重復(fù)性：在重復(fù)條件下同一樣品獲得的測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。結(jié)果計算59九、茶多酚和兒茶素類檢驗茶多酚：茶葉中多酚類物質(zhì)的總稱，包括黃烷醇類、花色苷類、黃酮類、黃酮醇類和酚酸類等。主要為黃烷醇（兒茶素）類，兒茶素占60~80%。研究表明，茶多酚等活性物質(zhì)具解毒和抗輻射作用，能有效地阻止放射性物質(zhì)侵入骨髓，并可使鍶90和鈷60迅速排出體外，被健康及醫(yī)學(xué)界譽為“輻射克星”。兒茶素：又稱兒茶精，茶單寧。為黃烷醇的衍生物，分子式C15H14O6。兒茶素最初由兒茶中提取出。為無色結(jié)晶形固體；能溶于水；其水溶液受熱或在無機酸存在下，容易聚合成無定形鞣質(zhì)。和咖啡因同屬茶葉中的兩大重要機能性成分，但是又以兒茶素為茶湯中最主要的成分。兒茶素可以通過血液循環(huán)進入全身，加強新陳代謝，增強脂肪的氧化和能量消耗從而達(dá)到抑制肥胖的作用，尤其是對內(nèi)臟脂肪的抑制作用，能達(dá)到理想的減肥效果。九、茶多酚和兒茶素類檢驗60檢驗方法依據(jù)：GB/T8313-2008《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》。測定原理茶多酚：茶葉磨碎樣中的茶多酚用70%的甲醇在70℃水浴上提取，福林酚試劑氧化茶多酚中-OH基團并顯藍(lán)色，最大吸收波長λ為765nm，用沒食子酸做校正標(biāo)準(zhǔn)定量茶多酚。兒茶素類：茶葉磨碎樣中的兒茶素用70%的甲醇在70℃水浴上提取，兒茶素類的測定用C18柱、檢測波長278nm、梯度洗脫、HPLC分析，用兒茶素類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)外標(biāo)法直接定量，也可用兒茶素類與咖啡堿的相對校正因子RRFStd（ISO國際環(huán)試結(jié)果）來定量。檢驗方法依據(jù)：GB/T8313-2008《茶葉中茶多酚和兒61茶葉中兒茶素類的檢測——HPLC法儀器及用具分析天平：感量0.0001g。水?。?0℃±1℃。離心機：轉(zhuǎn)速3500r/min?；靹蚱?。高效液相色譜儀（HPLC）：包含梯度洗脫及檢測器（檢測波長278nm）。數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。液相色譜柱：C18（粒徑5μm，250mm*4.6mm）。茶葉中兒茶素類的檢測——HPLC法62試劑所用水均為重蒸餾水，除特殊規(guī)定外，所用試劑為分析純。乙腈：色譜純。甲醇。乙酸。甲醇水溶液（體積比）：7+3.乙二胺四乙酸（EDTA）溶液：10mg/mL（現(xiàn)配）?？箟难崛芤海?0mg/mL（現(xiàn)配）。試劑63穩(wěn)定溶液：分別將25mLEDTA溶液、25mL抗壞血酸溶液、50mL乙腈加入500mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。液相色譜流動相：流動相A：分別將90mL乙腈、20mL乙酸、2mLEDTA加入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。溶液需過0.45μm膜。流動相B：分別將800mL乙腈、20mL乙酸、2mLEDTA加入1000mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。溶液需過0.45μm膜。穩(wěn)定溶液：分別將25mLEDTA溶液、25mL抗壞血酸溶液、64標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：咖啡堿儲備溶液：2.00mg/mL。沒食子酸（GA）儲備溶液：0.100mg/mL。兒茶素類儲備溶液：+C1.00mg/mL，+EC1.00mg/mL，+EGC2.00mg/mL，+EGCG2.00mg/mL，+ECG2.00mg/mL。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用穩(wěn)定溶液配制。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度：沒食子酸5μg/mL~25μg/mL、咖啡堿50μg/mL~150μg/mL、+C50μg/mL~150μg/mL、+EC50μg/mL~150μg/mL、+EGC100μg/mL~300μg/mL、+EGCG100μg/mL~400μg/mL、+ECG50μg/mL~200μg/mL。標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：65操作方法取樣：按GB/T8302的規(guī)定。試樣制備：按GB/T8303的規(guī)定。測定：干物質(zhì)含量測定：按GB/T8303的規(guī)定。操作方法66供試液的制備：

母液：稱取0.2g（精確到0.0001g）均勻磨碎的試樣于10mL離心管中，加入在70℃中預(yù)熱過的70%甲醇溶液5mL，用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈鶆驖櫇?，立即移?0℃水浴中，浸提10min（隔5min攪拌一次），浸提后冷卻至室溫，轉(zhuǎn)入離心機在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心10min，將上清液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶。殘渣再用5mL的70%甲醇溶液提取一次，重復(fù)以上操作。合并提取液定容至10mL，搖勻，過0.45μm膜，待用（該提取液在4℃下可至多保存24h）。測試液：用移液管移取母液2mL至10mL容量瓶中，用穩(wěn)定溶液定容至刻度，搖勻，過0.45μm膜，待測。供試液的制備：67色譜條件流動相流速：1mL/min。柱溫：35℃。紫外檢測器：波長278nm。梯度條件：100%A相保持10min15min內(nèi)由100%A相→68%A相、32%B相68%A相、32%B相保持10min

100%A相色譜條件68測定待流速和柱溫穩(wěn)定后，進行空白運行。準(zhǔn)確吸取10μL混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液注射入HPLC。在相同的色譜條件下注射10μL測試液。測試液以峰面積定量。測定待流速和柱溫穩(wěn)定后，進行空白運行。準(zhǔn)確吸取10μL混合標(biāo)69結(jié)果計算計算方法：以兒茶素類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定量：

式中：A—所測樣品中被測成分的峰面積；fStd—所測成分的校正因子（濃度/峰面積，濃度單位μg/mL）；V—樣品提取液的體積。單位為毫升（mL）；d—稀釋因子（通常為2mL稀釋成10mL，則其稀釋因子為5）；m1—樣品稱取量，單位為克（g）；m—樣品的干物質(zhì)含量，%。結(jié)果計算70計算方法：以咖啡堿標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定量式中：RRfStd—所測成分相對與咖啡堿的校正因子；SCaf—咖啡堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率（峰面積/濃度，濃度單位μg/mL）。兒茶素類相對咖啡堿的校正因子表名稱GA+EGC+C+EC+EGCG+ECGRRfStd0.8411.243.583.671.721.42計算方法：以咖啡堿標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定量名稱GA+EGC+C+EC+E71兒茶素類總量計算公式重復(fù)性：同一樣品兒茶素類總量的兩次測定值相對誤差應(yīng)≤10%，若測定值的相對誤差在此范圍，取兩次測得值的算術(shù)平均值為結(jié)果，保留小數(shù)點后2位。兒茶素類總量計算公式72茶葉中茶多酚的檢測儀器及用具分析天平：感量0.001g。水?。?0℃±1℃。離心機：轉(zhuǎn)速3500r/min。分光光度計。茶葉中茶多酚的檢測73試劑所用水均為重蒸餾水，除特殊規(guī)定外，所用試劑為分析純。乙腈：色譜純。甲醇。碳酸鈉。甲醇水溶液（體積比）：7+3。福林酚試劑。10%福林酚試劑（現(xiàn)配）：將20mL福林酚試劑轉(zhuǎn)移到200mL容量瓶中，用水定容并搖勻。試劑747.5%碳酸鈉（質(zhì)量濃度）：稱取37.50g±0.01g碳酸鈉，加適量水溶解，轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻（室溫下可保持1個月）。沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1000μg/mL）：稱取0.110g±0.001g沒食子酸，于100mL容量瓶中溶解并定容至刻度，搖勻（現(xiàn)配）。沒食子酸工作液：用移液管分別移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于100mL容量瓶中，分別用水定容至刻度，搖勻，濃度分別為10、20、30、40、50μg/mL。7.5%碳酸鈉（質(zhì)量濃度）：稱取37.50g±0.01g碳酸75操作方法供試液的制備母液：同兒茶素類測定母液制備。測試液：移去母液1.0mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，待測。操作方法76測定用移液管分別移取沒食子酸工作液、水（做空白對照用）及測試液各1.0mL于刻度試管內(nèi)，在每個試管內(nèi)分別加入5.0mL的福林酚試劑，搖勻。反應(yīng)3min~8min內(nèi)，加入4.0mL7.5%碳酸鈉溶液，加水定容至刻度，搖勻。室溫下放置60min，用10mm比色皿、在765nm波長下用分光光度計測定吸光度（A）。根據(jù)沒食子酸工作液的吸光度（A）與各工作溶液的沒食子酸濃度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定77結(jié)果計算計算方法：比較試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作液的吸光度式中：A—樣品測試液吸光度；V—樣品提取液體積，10mL；d—稀釋因子（通常為1mL稀釋成100mL，則其稀釋因子為100）；SLOPEStd—沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率；m—樣品干物質(zhì)含量，%m1—樣品質(zhì)量，單位為克（g）。結(jié)果計算78重復(fù)性：同一樣品的兩次測定值，每100g試樣不得超過0.5g，若測定值相對誤差在此范圍，則取兩次測定值的算術(shù)平均值為結(jié)果，保留小數(shù)點后1位。注意事項：樣品吸光度應(yīng)在沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的校準(zhǔn)范圍內(nèi)，若樣品吸光度高于50μg/mL濃度的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的吸光度，則應(yīng)重新配置高濃度沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)工作液進行校準(zhǔn)。重復(fù)性：同一樣品的兩次測定值，每100g試樣不得超過0.5g79十、游離氨基酸總量檢驗游離氨基酸：茶葉水浸出物中呈游離狀態(tài)存在的具有α-氨基的有機酸。檢驗方法依據(jù)：GB/T8314-2013《茶游離氨基酸總量的測定》。測定原理：α-氨基酸在pH8.0的條件下與茚三酮共熱，形成紫色絡(luò)合物，用分光光度法在特定的波長下測定其含量。儀器及用具分析天平：感量0.001g。分光光度計。比色管：具塞，25mL。十、游離氨基酸總量檢驗80試劑和溶液除非另有說明，所用試劑均為分析純，水為蒸餾水。pH8.0磷酸鹽緩沖液：1/15mol/L磷酸二氫鈉：稱取23.9g十二水磷酸氫二鈉，加水溶解后轉(zhuǎn)入1L容量瓶中，定容至刻度，搖勻。1/15mol/L磷酸二氫鉀：稱取經(jīng)110℃烘干2h的磷酸氫二鉀9.08g，加水溶解后轉(zhuǎn)入1L容量瓶中，定容至刻度，搖勻。取1/15mol/L得磷酸二氫鈉溶液95mL和1/15mol/L磷酸二氫鉀5mL，混勻，該混合液的pH為8.02%茚三酮溶液：稱取水合茚三酮（純度不低于99%）2g，加50mL水和80mg氯化亞錫攪拌均勻。分次加少量水溶解，放在暗處，靜置一晝夜，過濾后加水定容至100mL。試劑和溶液81茶氨酸或谷氨酸系列標(biāo)準(zhǔn)工作液10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取250mg茶氨酸或谷氨酸（純度不低于99%）溶于適量水中，轉(zhuǎn)移定容至25mL，搖勻。該標(biāo)準(zhǔn)工作儲備液1mL含有10mg的茶氨酸或谷氨酸。移取0.0mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液，分別加水定容至50mL，搖勻。該系列標(biāo)準(zhǔn)工作液1mL分別含有0mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg茶氨酸或谷氨酸。茶氨酸或谷氨酸系列標(biāo)準(zhǔn)工作液82操作方法取樣：按GB/T8302的規(guī)定。試樣制備：按GB/T8303的規(guī)定。測定試液制備：按GB/T8312中4.4.1的規(guī)定。測定：準(zhǔn)確吸取試液1mL，注入25mL比色管中，加0.5mLpH8.0磷酸鹽緩沖液和0.5mL2%茚三酮溶液，在沸水浴中加熱15min。待冷卻后加水定容至25mL。放置10min后，用5mm比色杯，在570nm處，以試劑空白溶液作參比，測定吸光度（A）。操作方法83氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：分別吸取1mL茶氨酸或谷氨酸系列標(biāo)準(zhǔn)工作液于一組25mL比色管中，各加pH8.0磷酸鹽緩沖液0.5mL和2%茚三酮溶液0.5mL，在沸水浴中加熱15min。待冷卻后加水定容至25mL，按上面方法測定吸光度（A）。將測得的吸光度與對應(yīng)的茶氨酸或谷氨酸濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。氨基酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：分別吸取1mL茶氨酸或谷氨酸系列標(biāo)準(zhǔn)工84結(jié)果計算計算方法：茶葉中游離氨基酸含量以干態(tài)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示：式中：C—根據(jù)測定的吸光度從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的茶氨酸或谷氨酸的毫克數(shù)，單位為毫克（mg）；V1—試液總量，單位為毫升（mL）；V2—測定用試液量，單位為毫升（mL）；m—試樣用量，單位為克（g）;w—試樣干物質(zhì)含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)0，%。結(jié)果計算85如果符合重復(fù)性，取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果，保留小數(shù)點后1位。重復(fù)性：在重復(fù)條件下同一樣品獲得的測定結(jié)果的絕對誤差值不得超過算術(shù)平均值的10%。如果符合重復(fù)性，取兩次測定的算術(shù)平均值作86十一、茶黃素檢驗茶黃素：紅茶中溶于乙酸乙酯呈橙黃色的物質(zhì)，由多酚類及其衍生物氧化縮合而來，紅茶中茶黃素類的含量一般為0．3%～1．5%，對紅茶的色香味及品質(zhì)起著決定性的作用。由于茶黃素具有多種與人體健康有關(guān)的潛在功能，如抗氧化、防治心血管疾病、降血脂、抗癌防癌等，因而受到國內(nèi)外的廣泛關(guān)注，成為茶葉品質(zhì)化學(xué)與功能成分的研究熱點。檢驗方法依據(jù)：GB/T30483-2013《茶葉中茶黃素的測定高效液相色譜法》十一、茶黃素檢驗87測定原理：茶葉磨碎試樣中的茶黃素（兒茶素）用70%的甲醇在70℃水浴上提取，速溶茶用熱的10%乙腈溶解。茶黃素（兒茶素）的測定用C18柱、檢測波長278nm、梯度洗脫、HPLC分析，用茶黃素（兒茶素）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)外標(biāo)法直接定量。儀器與設(shè)備分析天平：感量0.0001g。水浴。離心機：轉(zhuǎn)速3500r/min?；靹蚱?。高效液相色譜儀（HPLC）：包含梯度洗脫及紫外檢測器（檢測波長278nm）。液相色譜柱：C18（粒徑5μm，250mm*4.6mm）。測定原理：茶葉磨碎試樣中的茶黃素（兒茶素）用70%的甲醇在788試劑除非另有說明，所用試劑均為分析純，水為蒸餾水，。乙腈：色譜純。甲醇。冰乙酸。70%甲醇水溶液（體積分?jǐn)?shù)。10mg/mLEDTA-2Na溶液：（現(xiàn)配）。10mg/mL抗壞血酸溶液：現(xiàn)配。試劑89穩(wěn)定溶液：分別將25mLEDTA-2Na溶液、25mL抗壞血酸溶液、50mL乙腈加入500mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。液相色譜流動相：流動相A：分別將90mL乙腈、20mL冰乙酸、2mLEDTA-2Na加入1L容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。溶液需過0.45μm膜。流動相B：分別將800mL乙腈、20mL冰乙酸、2mLEDTA-2Na加入1L容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。溶液需過0.45μm膜。穩(wěn)定溶液：分別將25mLEDTA-2Na溶液、25mL抗壞血90標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：咖啡堿儲備溶液：2.00mg/mL。沒食子酸（GA）儲備溶液：0.100mg/mL。兒茶素類儲備溶液：+C1.00mg/mL，+EC1.00mg/mL，+EGC2.00mg/mL，+EGCG2.00mg/mL，+ECG2.00mg/mL。茶黃素儲備溶液：TF2.00mg/mL、TF-3-G2.00mg/mL、TF-3′-G2.00mg/mL、TFDG2.00mg/mL。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：用穩(wěn)定溶液配制。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度：沒食子酸5~25μg/mL、咖啡堿50~150μg/mL、+C50~150μg/mL、+EC50~150μg/mL、+EGC100~300μg/mL、+EGCG100~400μg/mL、+ECG50~200μg/mL、TF100~300μg/mL、TF-3-G100~300μg/mL、TF-3′-G100~300μg/mL、TFDG100~300μg/mL。標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液：91操作方法取樣：按GB/T8302的規(guī)定。試樣制備：按GB/T8303的規(guī)定。測定步驟干物質(zhì)含量測定：按GB/T8303的規(guī)定。操作方法92供試液的制備：

茶葉：稱取0.2g（精確至0.0001g）均勻磨碎的試樣于10mL玻璃離心管中，加入在70℃中預(yù)熱過的70%甲醇溶液5mL，用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈鶆驖櫇?，立即移?0℃水浴中，浸提浸提10min（隔5min攪拌一次），浸提后冷卻至室溫，轉(zhuǎn)入離心機在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心10min，將上清液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶。殘渣再用5mL的70%甲醇溶液提取一次，重復(fù)以上操作。合并提取液定容至10mL，搖勻（該提取液在4℃下可至多保存24h）。用移液管移取上述提取液2mL至10mL容量瓶中，用穩(wěn)定溶液定容至刻度，搖勻，過0.45μm膜，待測。供試液的制備：93速溶茶：稱取0.5g（精確到0.0001g）均勻地速溶茶于50mL容量瓶中，加入不高于60℃的水溶解，加5mL乙腈并用水定容至刻度，搖勻。用移液管移取上述提取液2mL至10mL容量瓶中，用穩(wěn)定溶液定容至刻度，搖勻，過0.45μm膜，待測。速溶茶：稱取0.5g（精確到0.0094色譜條件流動相流速：1mL/min。柱溫：35℃。紫外檢測器：波長278nm。梯度條件：100%A相保持10min15min內(nèi)由100%A相→68%A相、32%B相68%A相、32%B相保持10min

100%A相色譜條件95測定待流速和柱溫穩(wěn)定后，進行空白運行。準(zhǔn)確吸取10μL混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液注射入HPLC。在相同的色譜條件下注射10μL測試液。測試液以峰面積定量。測定待流速和柱溫穩(wěn)定后，進行空白運行。準(zhǔn)確吸取10μL混合標(biāo)96結(jié)果計算計算方法：茶葉中茶黃素（兒茶素、咖啡堿、沒食子酸）含量以干態(tài)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示：

式中：A—所測樣品中被測成分的峰面積；fStd—所測成分的校正因子（濃度/峰面積，濃度單位μg/mL）；V—樣品提取液的體積。單位為毫升（mL）；d—稀釋因子（通常為2mL稀釋成10mL，則其稀釋因子為5）；m—樣品稱取量，單位為克（g）；w—樣品的干物質(zhì)含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），%。結(jié)果計算97茶黃素（兒茶素類）總量計算公式茶黃素總量計算兒茶素總量計算

如果符合重復(fù)性，取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果，保留小數(shù)點后2位。重復(fù)性：在重復(fù)條件下同一樣品獲得的茶黃素總量（兒茶素總量、咖啡堿含量、沒食子酸含量）測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。茶黃素（兒茶素類）總量計算公式98附錄：兒茶素、茶黃素、咖啡堿和沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)樣品液相色譜圖附錄：兒茶素、茶黃素、咖啡堿和沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)樣品液相色譜圖99十二、其他特定成分檢驗（略，參見p201、203、204）茶紅素紅碎茶滋味綠茶滋味十二、其他特定成分檢驗（略，參見p201、203、204）100作業(yè)1.什么是出廠檢驗、型式檢驗？有什么要求？2.國標(biāo)法水分檢驗有幾種方法？哪種為仲裁法？3.茶葉灰分檢驗的主要是注意事項有哪些？4.水浸出物檢驗的原理是什么？5.茶多酚有哪些成分？國標(biāo)法測定原理是什么？6.茶黃素和茶紅素測定的原理是什么？7.茶滋味化學(xué)檢驗的方法設(shè)計依據(jù)是什么？8.熟悉各類檢驗的方法過程。作業(yè)101演講完畢，謝謝觀看！演講完畢，謝謝觀看！102第四章茶產(chǎn)品特定成分檢驗茶葉特定成分概述茶產(chǎn)品特定成分檢驗第四章茶產(chǎn)品特定成分檢驗茶葉特定成分概述103教學(xué)目的和要求了解茶產(chǎn)品特定成分檢驗的含義、作用理解茶產(chǎn)品特定成分檢驗的一般內(nèi)容、原理掌握茶產(chǎn)品特定成分檢驗的依據(jù)方法教學(xué)目的和要求104第一節(jié)茶產(chǎn)品特定成分概述茶作為一種特殊的食品，廣受消費者的歡迎。茶葉已經(jīng)成為世界性飲品，目前全世界有30多億人飲茶。茶葉的品飲是人們工作、生活的重要組成部分。茶葉的質(zhì)量安全直接或間接與人們的生活質(zhì)量密切相關(guān)。消費者從單純追求茶葉產(chǎn)品的品味、營養(yǎng)發(fā)展到關(guān)注食品的質(zhì)量安全和對身體的調(diào)節(jié)功能，從解渴功能類食品發(fā)展到天然、營養(yǎng)、以及有益于健康的質(zhì)量安全型食品。第一節(jié)茶產(chǎn)品特定成分概述茶作為一種特殊的食品，廣受消費者105茶葉區(qū)別于其他食品的主要原因是其特有的化學(xué)成分。茶產(chǎn)品特定成分檢驗是對茶主要的化學(xué)成分進行的檢驗，主要有水分檢驗，灰分檢驗，水浸出物檢驗，茶多酚檢驗，咖啡堿檢驗，其他茶一般成分檢驗（茶紅素、茶黃素、粗纖維、茶滋味）等。茶葉區(qū)別于其他食品的主要原因是其特有的化學(xué)成分。106茶產(chǎn)品特定成分檢驗的意義和作用茶產(chǎn)品特定成分是其區(qū)別于其他食品的重要標(biāo)志，是衡量茶產(chǎn)品質(zhì)量的重要依據(jù)；提高茶產(chǎn)品質(zhì)量，可以推動生產(chǎn)的發(fā)展；茶產(chǎn)品質(zhì)量是進入市場的通行證；茶產(chǎn)品質(zhì)量是茶產(chǎn)業(yè)生存、發(fā)展的基礎(chǔ)；茶產(chǎn)品質(zhì)量是消費者生活健康的重要保障。茶產(chǎn)品特定成分檢驗的意義和作用107茶產(chǎn)品檢驗的類別出廠檢驗：每批產(chǎn)品均應(yīng)做出廠檢驗，經(jīng)檢驗合格簽發(fā)合格證后，方可出廠。檢驗項目一般為：感官品質(zhì)、碎茶和粉末、水分、總灰分、凈含量等；型式檢驗：產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的檢驗項目都進行檢驗。檢驗周期每年2次。有下列情況時，應(yīng)進行型式檢驗：如原料有較大改變，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量時；停產(chǎn)半年以上恢復(fù)生產(chǎn)時；國家法定質(zhì)量監(jiān)督機構(gòu)提出型式檢驗要求時。茶學(xué)研究檢驗茶產(chǎn)品檢驗的類別108第二節(jié)特定化學(xué)成分檢驗一、水分檢驗水分：在常壓條件下，試樣經(jīng)規(guī)定的溫度加熱至恒重時的質(zhì)量損失。檢驗方法依據(jù)：水分測定方法較多，檢驗時依據(jù)各類茶產(chǎn)品水分檢驗標(biāo)準(zhǔn)，在此以GB/T8304-2013《茶水分測定》為例。測定原理：試樣于103℃±2℃的電熱恒溫干燥箱中加熱至恒重，稱重，并計算試樣損失的質(zhì)量即為水分。第二節(jié)特定化學(xué)成分檢驗一、水分檢驗109儀器及用具樣品容器:清潔、干燥、避光、密閉的玻璃或不與樣品發(fā)生反應(yīng)的的材料制成；大小以能裝滿磨碎樣為宜鋁質(zhì)或玻璃質(zhì)烘皿：具蓋，內(nèi)徑75mm~80mm電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱：溫控103℃±2℃干燥器：內(nèi)盛有效干燥劑分析天平：感量0.001g儀器及用具110操作方法取樣：按GB/T8302的規(guī)定取樣。試樣制備：按GB/T8303的規(guī)定制備樣茶。烘皿的準(zhǔn)備：將潔凈的烘皿連同蓋置于103℃±2℃的干燥箱內(nèi)（皿蓋打開斜至皿邊），加熱1h，加蓋取出，于干燥器內(nèi)冷卻至室溫。稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。操作方法111測定仲裁法（103℃±2℃恒重法）：稱取5g（準(zhǔn)確至0.001g）試樣于已知質(zhì)量的烘皿中，置于103℃±2℃干燥箱內(nèi)（皿蓋打開斜至皿邊）。加熱4h，加蓋取出，于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱量。再置于干燥箱內(nèi)加熱1h，加蓋取出，于干燥器內(nèi)冷卻，稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。重復(fù)加熱1h的操作，直至連續(xù)兩次稱量差不超過0.005g，即為恒重，以最小稱量為準(zhǔn)?？焖俜ǎ?20℃烘干法）：稱取5g（準(zhǔn)確至0.001g）試樣于已知質(zhì)量的烘皿中，置于120干燥箱內(nèi)（皿蓋打開斜至皿邊）。以2min內(nèi)回升到120℃時計算，加熱1h，加蓋取出，于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。測定112結(jié)果計算：茶葉水分含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示如果符合重復(fù)性要求，取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果（保留小數(shù)點后1位）。重復(fù)性：在重復(fù)條件下同一樣品獲得的測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5%。注：用第二法測定茶葉水分，重復(fù)性達(dá)不到要求時，按第一法規(guī)定進行測定。結(jié)果計算：茶葉水分含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示113二、水浸出物檢驗水浸出物：在規(guī)定條件下，用沸水浸出茶葉中的水可溶性物質(zhì)。檢驗方法依據(jù)：GB/T8305-2013《茶水浸出物測定》測定原理：用沸水回流提取茶葉中的水可溶性物質(zhì)，再經(jīng)過濾、沖洗、干燥、稱量浸提后的茶渣，計算水浸出物含量。二、水浸出物檢驗114儀器及用具電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱：溫控120℃±2℃沸水浴布氏漏斗連同減壓抽濾裝置鋁質(zhì)或玻璃質(zhì)烘皿：具蓋，內(nèi)徑75mm~80mm干燥器：內(nèi)盛有效干燥劑分析天平：感量0.001g錐形瓶：500mL磨碎機：由不吸收水分的材料制成；死角盡可能小，易于清掃；內(nèi)裝孔徑為3mm的篩子。儀器及用具115操作方法取樣：按GB/T8302的規(guī)定取樣。試樣制備：先用磨碎機將少量試樣磨碎，棄去，在磨碎其余部分。烘皿準(zhǔn)備：將潔凈的烘皿連同15cm定性快速濾紙置于120℃±2℃的恒溫干燥箱內(nèi)，皿蓋打開斜至皿邊，烘干1h，加蓋取出，在干燥器內(nèi)冷卻至室溫。稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。操作方法116測定步驟：稱取2g（準(zhǔn)確至0.001g）磨碎試樣于500mL錐形瓶中，加沸蒸餾水300mL，立即移入沸水浴中浸提45min（每隔10min搖動一次）。浸提完畢后立即趁熱減壓過濾（用處理過的濾紙）。用約150mL沸蒸餾水洗滌茶渣數(shù)次，將茶渣連同已知質(zhì)量的濾紙移入烘皿內(nèi)，然后移入120℃±2℃的恒溫干燥箱內(nèi)，皿蓋打開斜至皿邊，烘干1h，加蓋取出，冷卻1h后再烘1h，立即移入干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。測定步驟：稱取2g（準(zhǔn)確至0.001g）磨碎試樣于500m117結(jié)果計算計算方法：茶葉中水浸出物含量以干態(tài)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示：

如果符合重復(fù)性要求，取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果，結(jié)果保留小數(shù)點后1位。重復(fù)性：在重復(fù)條件下同一樣品獲得的測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的2%。結(jié)果計算118三、總灰分檢驗總灰分：在規(guī)定條件下，茶葉經(jīng)525℃±25℃灼燒灰化后所得的殘渣。檢驗方法依據(jù)：GB/T8306-2013《茶總灰分測定》測定原理：試樣經(jīng)525℃±25℃加熱灼燒，分解有機物至恒重。三、總灰分檢驗119儀器及用具坩堝：鉑金、瓷質(zhì)或者其他不會被測定條件影響的材質(zhì)。高型、容量30mL。電熱板。高溫電爐：能溫控525℃±25℃。干燥器：內(nèi)盛有效干燥劑。坩堝鉗。分析天平：感量0.001g。儀器及用具120操作方法取樣：按GB/T8302的規(guī)定。試樣制備：按GB/T8303的規(guī)定。坩堝的準(zhǔn)備：將潔凈的坩堝置于525℃±25℃高溫電爐內(nèi)，灼燒1h，待爐溫降至300℃左右時取出坩堝，于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱量（準(zhǔn)確至0.001g）。操作方法121測定方法：稱取混勻的磨碎試樣2g（準(zhǔn)確至0.001g）于坩堝內(nèi)，在電熱板上徐徐加熱，使試樣充分炭化至無煙，將坩堝移入525℃±25℃高溫電爐內(nèi)，灼燒至無炭粒（不少于2h），待爐溫降至300℃左右時，取出坩堝，置于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱量。再移入高溫電爐內(nèi)以525℃±25℃溫度灼燒1h，取出，冷卻，稱量。再移入高溫電爐內(nèi)，灼燒30min，取出，冷卻，稱量。重復(fù)此操作，直至連續(xù)兩次稱量差不超過0.001g為止。以最小稱量為準(zhǔn)。其他：必要時，可保留總會分供水溶性灰分和水不溶性灰分的測定。測定方法：稱取混勻的磨碎試樣2g（準(zhǔn)確至0.001g）于坩122結(jié)果計算計算方法：茶葉總灰分含量以干態(tài)質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示：如果重復(fù)性符合要求，取兩次測定的算術(shù)平均值作為結(jié)果（保留小數(shù)點后1位）。重復(fù)性：在重復(fù)條件下同一樣品獲得的測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5%。結(jié)果計算123四、水溶性灰分和水不溶性灰分檢驗水溶性灰分：在規(guī)定條件下，總灰分中溶于水的部分。水不溶性灰分：在規(guī)定條件下，總灰分中不溶于水的部分。檢驗方法依據(jù)：GB5009.4-2016《食品國家安全標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測定》（替代原GB/T8307-2013茶水溶性灰分和水不溶性灰分測定、GB/T8308-2013茶酸不溶性灰分測定）。測定原理：用熱水提取總灰分，經(jīng)無灰濾紙過濾、灼燒、稱量殘留物，測得水不溶性灰分，由總灰分和水不溶性灰分的質(zhì)量之差計算水溶性灰分。四、水溶性灰分和水不溶性灰分檢驗124儀器及用具高溫爐：最高溫度≥950℃。分析天平：感量分別為0.1mg、1mg、0.1g。石英坩堝或瓷坩堝。干燥器(內(nèi)有干燥劑)。無灰濾紙。漏斗。表面皿：直徑6cm。燒杯(高型)：容量100mL。恒溫水浴鍋：控溫精度±2℃。儀器及用具125操作方法坩堝預(yù)處理：取大小適宜的石英坩堝或瓷坩堝置高溫爐中，在550℃±25℃下灼燒30min，冷卻至200℃左右，取出，放入干燥器中冷卻30min，準(zhǔn)確稱量。重復(fù)灼燒至前后兩次稱量相差不超過0.5mg為恒重。稱樣：灰分大于或等于10g/100g的試樣稱取2g~3g(精確至0.0001g)；灰分小于或等于10g/100g的試樣稱取3g~10g(精確至0.0001g，對于灰分含量更低的樣品可適當(dāng)增加稱樣量)。操作方法126總灰分制備：按GB/T8306的規(guī)定。測定方法：用約25mL熱蒸餾水分次將總灰分從坩堝中洗入100mL燒杯中，蓋上表面皿，用小火加熱至微沸,防止溶液濺出。趁熱用無灰濾紙過濾，并用熱蒸餾水分次洗滌杯中殘渣，直至濾液和洗滌體積約達(dá)150mL為止，將濾紙連同殘渣移入原坩堝內(nèi)，放在沸水浴鍋上小心地蒸去水分，然后將坩堝烘干并移入高溫爐內(nèi)，以550℃±25℃灼燒至無炭粒(一般需1h)。待爐溫降至200℃時，放入干燥器內(nèi)，冷卻至室溫，稱重(準(zhǔn)確至0.0001g)。再放入高溫爐內(nèi)，以550℃±25℃灼燒30min，如前冷卻并稱重。如此重復(fù)操作，直至連續(xù)兩次稱重之差不超過0.5mg為止，記下最低質(zhì)量?？偦曳种苽洌喊碐B/T8306的規(guī)定。127結(jié)果計算計算方法：以試樣質(zhì)量計水不溶性灰分的含量X1=（m1-m2）/（m3-m2）×100式中：X1——水不溶性灰分的含量，單位為克每百克(g/100g)；m1——坩堝和水不溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；m2——坩堝的質(zhì)量，單位為克(g)；m3——坩堝和試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；100———單位換算系數(shù)。結(jié)果計算128水溶性灰分的含量,按式(6)計算:X2=（m4-m5）/m0×100式中：X2—水溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g/100g)；m0—試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；m4—總灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；m5———水不溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；水溶性灰分的含量,按式(6)計算:129以干物質(zhì)計水不溶性灰分的含量：X1=（m1-m2）/[(m3-m2)×ω]×100式中：X1——水不溶性灰分的含量，單位為克每百克(g/100g)；m1——坩堝和水不溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；m2——坩堝的質(zhì)量，單位為克(g)；m3——坩堝和試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；ω——試樣干物質(zhì)含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，%；100——單位換算系數(shù)。以干物質(zhì)計130水溶性灰分的含量：X2=（m4-m5）/（m0×ω）×100式中：X2—水溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g/100g)；m0—試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；m4—總灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；m5—水不溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；ω——試樣干物質(zhì)含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，%；100—單位換算系數(shù)。試樣中灰分含量≥10g/100g時，保留三位有效數(shù)字；試樣中灰分含量<10g/100g時，保留兩位有效數(shù)字。精密度（重復(fù)性）：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5%。水溶性灰分的含量：131五、酸不溶性灰分檢驗酸不溶性灰分：在規(guī)定條件下，總灰分經(jīng)鹽酸處理后的殘留部分。檢驗方法依據(jù)：GB5009.4-2016《食品國家安全標(biāo)準(zhǔn)食品中灰分的測定》（替代原GB/T8307-2013茶水溶性灰分和水不溶性灰分測定、GB/T8308-2013茶酸不溶性灰分測定）。測定原理：用鹽酸溶液處理總灰分，過濾、灼燒、稱量殘留物。五、酸不溶性灰分檢驗132儀器及用具高溫爐：最高溫度≥950℃。分析天平：感量分別為0.1mg、1mg、0.1g。石英坩堝或瓷坩堝。干燥器(內(nèi)有干燥劑)。無灰濾紙。漏斗。表面皿：直徑6cm。燒杯(高型)：容量100mL。恒溫水浴鍋：控溫精度±2℃。儀器及用具133操作方法坩堝處理：見前稱樣：見前總灰分處理：見前操作方法134測定方法用25mL10%鹽酸溶液將總灰分分次洗入100mL燒杯中，蓋上表面皿，在沸水浴上小心加熱，至溶液由渾濁變?yōu)橥该鲿r，繼續(xù)加熱5min，趁熱用無灰濾紙過濾，用沸蒸餾水少量反復(fù)洗滌燒杯和濾紙上的殘留物，直至中性(約150mL)。將濾紙連同殘渣移入原坩堝內(nèi)，在沸水浴上小心蒸去水分，移入高溫爐內(nèi)，以550℃±25℃灼燒至無炭粒(一般需1h)。待爐溫降至200℃時，取出坩堝，放入干燥器內(nèi)，冷卻至室溫，稱重(準(zhǔn)確至0.0001g)。再放入高溫爐內(nèi)，以550℃±25℃灼燒30min，如前冷卻并稱重。如此重復(fù)操作，直至連續(xù)兩次稱重之差不超過0.5mg為止，記下最低質(zhì)量。測定方法135結(jié)果計算以試樣質(zhì)量計：酸不溶性灰分的含量：X1=（m1-m2）/（m3-m2）×100式中：X1—酸不溶性灰分的含量,單位為克每百克(g/100g)；m1—坩堝和酸不溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；m2—坩堝的質(zhì)量，單位為克(g)；m3—坩堝和試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；100—單位換算系數(shù)。結(jié)果計算136以干物質(zhì)計：酸不溶性灰分的含量：X1=（m1-m2）/[(m3-m2)×ω]×100式中：X1——酸不溶性灰分的含量，單位為克每百克(g/100g)；m1——坩堝和酸不溶性灰分的質(zhì)量，單位為克(g)；m2——坩堝的質(zhì)量，單位為克(g)；m3——坩堝和試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；ω——試樣干物質(zhì)含量(質(zhì)量分?jǐn)?shù))，%；100——單位換算系數(shù)。試樣中灰分含量≥10g/100g時，保留三位有效數(shù)字；試樣中灰分含量<10g/100g時，保留兩位有效數(shù)字。精密度（重復(fù)性）：在重復(fù)性條件下同一樣品獲得的測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的5%。以干物質(zhì)計：酸不溶性灰分的含量：137六、水溶性灰分堿度檢驗水溶性灰分堿度：中和水溶性灰分浸出液所需要酸的量，或相當(dāng)于該酸量的堿量。檢驗方法依據(jù)：GB/T8309-2013《茶水溶性灰分堿度測定》。測定原理：用甲基橙作指示劑，以鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定來自水溶性灰分的溶液。六、水溶性灰分堿度檢驗138儀器及用具滴定管：容量50mL。三角燒瓶：250ml。試劑和溶液鹽酸：0.1mol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液，按GB/T601配置與標(biāo)定。甲基橙指示劑：甲基橙0.5g，用熱蒸餾水溶解后稀釋至1L。儀器及用具139操作方法取樣：按GB/T8302的規(guī)定。試樣制備：按GB/T8303的規(guī)定。水溶性灰分溶液的制備：按GB5009.4的規(guī)定。測定：將水溶性灰分溶液冷卻后，加甲基橙指示劑2滴，用0.1mol/L鹽酸溶液滴定。使用兩次測定水溶性灰分和水不溶性灰分的濾液，平行測定兩次。操作方法140結(jié)果計算計算方法：堿度的表示，即中和100g干態(tài)磨碎樣品所需的一定濃度鹽酸的物質(zhì)的量，或換算為相當(dāng)于干態(tài)磨碎樣品中所含氫氧化鉀的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。堿度用100g干態(tài)磨碎樣品所需鹽酸物質(zhì)的量（mol/100g）表示式中：V——滴定時消耗0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，單位為毫升（mL）；m0——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；w——試樣干物質(zhì)含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），%。注：如果使用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度未精確到所要求的濃度，則計算時用校正系數(shù)（滴定濃度/0.1）。

結(jié)果計算141堿度用氫氧化鉀的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）表示水溶性灰分堿度=56V/(10*1000*m0*w)*100%式中：V、m0、w——與上相同；56——氫氧化鉀的摩爾質(zhì)量，單位為克每摩爾（g/mol）。如果符合重復(fù)性的要求，則取兩次測定的算術(shù)平均