NAD 激酶（NADK）活性檢測試劑盒說明書-微量法UPLC-MS-4353

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁NAD激酶（NADK）活性檢測試劑盒說明書注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。貨號：UPLC-MS-4353規(guī)格：100T/48S

微量法產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體60mL×1瓶4℃保存試劑一液體5mL×1瓶4℃保存試劑二液體10mL×1瓶4℃保存試劑三粉劑×1瓶-20℃保存試劑四粉劑×1支-20℃保存試劑五粉劑×1瓶-20℃保存試劑六粉劑×1瓶-20℃保存試劑七粉劑×1瓶4℃保存試劑八液體14μL×1瓶4℃保存試劑九液體20mL×1瓶4℃保存試劑十液體40mL×1瓶（自備）標準品粉劑×1支4℃保存溶液的配制：1、試劑三：用時加入3mL雙蒸水，充分溶解，可分裝保存，-20℃保存兩周，禁止反復凍融；臨用前取出一支稀釋100倍使用。21mL雙蒸水，充分溶解，4℃保存；32mL雙蒸水，充分溶解，4℃保存；42mL雙蒸水，充分溶解，4℃保存；5、試劑七：用時加入2mL雙蒸水，充分溶解，4℃避光保存；6EP0.986mL蒸餾水充分溶解，可分裝后-20℃反復凍融；7、試劑十：自備95%乙醇；81.9mL2μmol/mLNADP10020nmol/mLNADP標準溶液備用。產(chǎn)品說明：NADK（EC3）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)唯一能夠催NAD+NADP+NAD(H)ATP或無機多聚磷酸[poly(P)]作為磷?；w進行磷酸化反NADP(H)。因此，NADNADP(H)NAD(H)NADP(H)的平衡上具有重要作用。NADKNAD+6-PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（570nmK活性的大小。注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：臺式離心機、可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/水乙醇、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）1、細菌、細胞或組織樣本的制備：5001mL破碎細菌或細胞（20%3s10s30次；8000g4℃10min，取上清，置冰上待測。0.1g1mL提取液進行冰浴勻漿；8000g4℃10min2、血清（漿）樣本：直接檢測。二、測定步驟1、可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至570nm，95%乙醇調(diào)零。2、標準品的配制：按下表混合試劑三和標準品配制標準品標準品（μL）試劑三（μL）標準管濃度（nmol/mL）050054521040415356203082525103020123515143、操作表：（在EP管中操作）試劑名稱(μL)測定管對照管標準管空白管樣本1010--標準品--10-蒸餾水10試劑一14242424試劑三10試劑四6666充分混勻，37℃（哺乳動物）25℃（其它物種）15min2min（散失10000rpm5min20μL1.5mLEP管中，繼續(xù)加入下列試劑。試劑二50505050試劑五15151515試劑六15151515試劑七15151515試劑八7777室溫避光靜置20min。試劑九100100100100混勻靜置5min，15000g，常溫離心10min。去上清，留沉淀。試劑十20020020020096570nmA空白，計算ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標準=A標準-A空白。三、NADK活性計算1、標準曲線的繪制：NADPx軸，ΔAyy=kx+bΔA測定帶入公式x（nmolmL。2、NADK活力的計算：按樣本蛋白濃度計算：mg1nmolNADPNADK（U/mgprot）=x×V樣本÷（Cpr×V樣本）÷T=0.067×x÷Cpr按樣本質(zhì)量計算：g1nmolNADPNADK（U/g質(zhì)量）=x×V樣本÷（W×V樣本÷V提取）÷T=0.067×x÷W按細菌或細胞數(shù)量計算：11nmolNADPNADK（U/104cell）=x×V樣本÷（500×V樣本÷V提?。耇=x×1.33×10-4按血清（漿）體積計算：mL血清（漿）1nmolNADPNADK（U/mL）=x÷T=0.067×xV樣本：加入樣本體積，0.01mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V提取：加入的提取液體積，1mL；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬；T：