液相色譜的新進展-超高效液相色譜課件

液相色譜新進展

－超高效液相色譜液相色譜新進展

Waters公司的UPLC:UltraPerformanceLiquidChromatography(超高效液相色譜）

Agilent公司的RRLC:RapidResolutionLiquidChromatography

（快速高分離度液相色譜）一、定義：用細粒徑填料（sub-2μm)、細內徑柱子獲得柱效高達(100,000-300,000/m)的液相色譜技術，簡稱超高效液相色譜Waters公司的UPLC:一、定義：用細粒徑填料（sub為什么關注小顆粒色譜填料？根據VanDeemter方程H=A+B/v+Cv顆粒度越小，HETP越低，柱效越高，分離度越好對于小顆粒，通過高流速獲得高分離速度對于小顆粒，提高流速時HETP不會提高－提高分離速度二、基本原理為什么關注小顆粒色譜填料？根據VanDeemter方程H=節(jié)約時間節(jié)約溶劑超高靈敏度超高分離度缺點：高壓力AgilentRRLC約450barWatersUPLC約700bar優(yōu)點：三、優(yōu)缺點：節(jié)約時間優(yōu)點：三、優(yōu)缺點：西洋參成分的分離比對HPLCUPLC4.6×250mm，5μm2.1×50mm，1.7μm西洋參成分的分離比對HPLCUPLC4.6×250mm，5μ1、提高分離速度小顆粒填料的速度優(yōu)勢分離度RS∝L/dp，即保持L/dp，同比縮短柱長,以提高分離速度提高流速－小顆粒填料的保持柱效，不降低分離度提高速度的輔助手段溫度1、提高分離速度小顆粒填料的速度優(yōu)勢不同色譜柱和溫度的分離速度比對不同色譜柱和溫度的分離速度比對2、提高分離度和靈敏度提高L/dp

（dp變?。岣咧В岣叻蛛x度對于4.6×150mm，5μm色譜柱，L/dp

＝30對于4.6×150mm，1.8μm色譜柱，L/dp

＝83.3

-改善分離度，保持分離速度對于4.6×100mm，1.8μm色譜柱，L/dp

＝55.6

-改善分離度，提高速度2、提高分離度和靈敏度提高L/dp（dp變?。岣叻蛛x度：顆粒對藥物雜質分離的影響分離度：顆粒對藥物雜質分離的影響改善分離度和靈敏度改善分離度和靈敏度四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）1、分離目標化合物：根據中國藥典（2005年版）確定分離人參皂苷Rg1、Re與Rb1，結構如下：四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀2、藥典色譜條件樣品：西洋參提取液儀器：Agilent1100高效液相色譜系統(tǒng)流動相：以乙腈為流動相A，以0.1％磷酸為流動相B，按下表進行梯度洗脫四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）色譜柱：ZORBAXSBC184.6×150mm，5μm柱溫：40oC流速：1.0mL/min檢測波長：203nm進樣量：5μL2、藥典色譜條件四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agil四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）HPLC色譜柱規(guī)格:4.6x150mm，5μm,(L/dp=30)。根據L/dp值初步確定RRLC色譜柱規(guī)格：4.6x50mm，1.8μm，(L/dp≈28）故可以獲得相近的分離效率，但分離速度大大提高，并且可以改善靈敏度。3、色譜柱的選擇：四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）4、方法轉換的初步參數確定在MethodTranslator相應欄目中輸入原始HPLC條件，包括HPLC色譜柱規(guī)格、進樣量、流速、梯度表等參數，并選擇RRLC色譜柱的規(guī)格，即可獲得根據洗脫柱體積相同原則折算而得的RRLC分離的初步參數。四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀五、方法優(yōu)化：由于人參皂苷Rg1、Re未達到基線分離，可通過溫度進一步優(yōu)化分離四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）五、方法優(yōu)化：四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agile應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）6、RRLC色譜條件確定：RRLC色譜條件：Agilent1200高分離度快速液相色譜(RRLC)，色譜柱：ZORBAXSBC184.6x50mm,1.8um流動相：A:0.1%H3PO4，B:乙腈，梯度分離柱溫：25oC流速：2mL/min檢測波長：203nm進樣量：5μL應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）6四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）7、西洋參分析：HPLC與RRLC分離色譜圖比較四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀在RRLC系統(tǒng)上可以實現HPLC分離,此外還可以大幅度縮短分析時間，降低溶劑消耗，大大提高工作效率。與HPLC相比，在保持相同進樣量的前提下，使用小顆粒填料的RRLC可以顯著改善分離靈敏度。溫度對RRLC分離影響較大，可通過調節(jié)溫度改善分離度，或加快分離速度，節(jié)約時間四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）8、結論在RRLC系統(tǒng)上可以實現HPLC分離,此外還可以大幅度縮短分五、展望及結語填料粒徑進一步減小增大柱效，進一步提高靈敏度和通量。提高溫度（流動相的粘度和溫度成正比，適當的提高溫度可進一步降低壓力，同時溫度升高有利于傳質、加快吸附脫附平衡均可以帶來柱效的進一步提高。但要注意安全性。）總之，隨著商品儀器的應用及逐漸推廣，超高效液相色譜將成為復雜樣品分析的一個強有力的工具。五、展望及結語填料粒徑進一步減小增大柱效，進一步提高靈敏度和謝謝!Thankyouforyourattention謝謝!Thankyouforyourattentio液相色譜新進展

－超高效液相色譜液相色譜新進展

Waters公司的UPLC:UltraPerformanceLiquidChromatography(超高效液相色譜）

Agilent公司的RRLC:RapidResolutionLiquidChromatography

（快速高分離度液相色譜）一、定義：用細粒徑填料（sub-2μm)、細內徑柱子獲得柱效高達(100,000-300,000/m)的液相色譜技術，簡稱超高效液相色譜Waters公司的UPLC:一、定義：用細粒徑填料（sub為什么關注小顆粒色譜填料？根據VanDeemter方程H=A+B/v+Cv顆粒度越小，HETP越低，柱效越高，分離度越好對于小顆粒，通過高流速獲得高分離速度對于小顆粒，提高流速時HETP不會提高－提高分離速度二、基本原理為什么關注小顆粒色譜填料？根據VanDeemter方程H=節(jié)約時間節(jié)約溶劑超高靈敏度超高分離度缺點：高壓力AgilentRRLC約450barWatersUPLC約700bar優(yōu)點：三、優(yōu)缺點：節(jié)約時間優(yōu)點：三、優(yōu)缺點：西洋參成分的分離比對HPLCUPLC4.6×250mm，5μm2.1×50mm，1.7μm西洋參成分的分離比對HPLCUPLC4.6×250mm，5μ1、提高分離速度小顆粒填料的速度優(yōu)勢分離度RS∝L/dp，即保持L/dp，同比縮短柱長,以提高分離速度提高流速－小顆粒填料的保持柱效，不降低分離度提高速度的輔助手段溫度1、提高分離速度小顆粒填料的速度優(yōu)勢不同色譜柱和溫度的分離速度比對不同色譜柱和溫度的分離速度比對2、提高分離度和靈敏度提高L/dp

（dp變?。岣咧В岣叻蛛x度對于4.6×150mm，5μm色譜柱，L/dp

＝30對于4.6×150mm，1.8μm色譜柱，L/dp

＝83.3

-改善分離度，保持分離速度對于4.6×100mm，1.8μm色譜柱，L/dp

＝55.6

-改善分離度，提高速度2、提高分離度和靈敏度提高L/dp（dp變?。岣叻蛛x度：顆粒對藥物雜質分離的影響分離度：顆粒對藥物雜質分離的影響改善分離度和靈敏度改善分離度和靈敏度四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）1、分離目標化合物：根據中國藥典（2005年版）確定分離人參皂苷Rg1、Re與Rb1，結構如下：四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀2、藥典色譜條件樣品：西洋參提取液儀器：Agilent1100高效液相色譜系統(tǒng)流動相：以乙腈為流動相A，以0.1％磷酸為流動相B，按下表進行梯度洗脫四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）色譜柱：ZORBAXSBC184.6×150mm，5μm柱溫：40oC流速：1.0mL/min檢測波長：203nm進樣量：5μL2、藥典色譜條件四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agil四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）HPLC色譜柱規(guī)格:4.6x150mm，5μm,(L/dp=30)。根據L/dp值初步確定RRLC色譜柱規(guī)格：4.6x50mm，1.8μm，(L/dp≈28）故可以獲得相近的分離效率，但分離速度大大提高，并且可以改善靈敏度。3、色譜柱的選擇：四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）4、方法轉換的初步參數確定在MethodTranslator相應欄目中輸入原始HPLC條件，包括HPLC色譜柱規(guī)格、進樣量、流速、梯度表等參數，并選擇RRLC色譜柱的規(guī)格，即可獲得根據洗脫柱體積相同原則折算而得的RRLC分離的初步參數。四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀五、方法優(yōu)化：由于人參皂苷Rg1、Re未達到基線分離，可通過溫度進一步優(yōu)化分離四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）五、方法優(yōu)化：四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agile應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）6、RRLC色譜條件確定：RRLC色譜條件：Agilent1200高分離度快速液相色譜(RRLC)，色譜柱：ZORBAXSBC184.6x50mm,1.8um流動相：A:0.1%H3PO4，B:乙腈，梯度分離柱溫：25oC流速：2mL/min檢測波長：203nm進樣量：5μL應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）6四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）7、西洋參分析：HPLC與RRLC分離色譜圖比較四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀在RRLC系統(tǒng)上可以實現HPLC分離,此外還可以大幅度縮短分析時間，降低溶劑消耗，大大提高工作效率。與HPLC相比，在保持相同進樣量的前提下，使用小顆粒填料的RRLC可以顯著改善分離靈敏度。溫度對RRLC分離影響較大，可通過調節(jié)溫度改善分離度，或加快分離速度，節(jié)約時間四、應用實例：西洋參的液相色譜分析(Agilent液相色譜儀）8、結論在