二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析

關(guān)于二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析第一頁，共二十八頁，2022年，8月28日學習要求：1.掌握：二氫吡啶類藥物的基本結(jié)構(gòu)及主要理化性質(zhì)；結(jié)構(gòu)、性質(zhì)與分析方法間的關(guān)系；鈰量法的原理、方法及注意事項。2.熟悉：二氫吡啶類藥物的化學鑒別反應(yīng)及有關(guān)物質(zhì)檢查的方法；3.了解：二氫吡啶類藥物其他的鑒別試驗及含量測定方法、及體內(nèi)分析中樣品的處理方法。第二頁，共二十八頁，2022年，8月28日第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)二氫吡啶類藥物的基本骨架：第三頁，共二十八頁，2022年，8月28日硝苯地平（nifedipine)尼群地平（nitrendipine)尼莫地平（nimodipine)一、代表性藥物的結(jié)構(gòu)第四頁，共二十八頁，2022年，8月28日一、代表性藥物的結(jié)構(gòu)尼索地平（nisoldipine)非洛地平（Felodipine)拉西地平（Lacidipine)伊拉地平（Isradipine)第五頁，共二十八頁，2022年，8月28日3.二氫吡啶環(huán)氨基質(zhì)子解離性4.穩(wěn)定性遇光極不穩(wěn)定，易發(fā)生光化學反應(yīng)5.旋光性6.吸收光譜特性2.硝基的氧化性1.二氫吡啶環(huán)的還原性

氧化還原反應(yīng)鑒別或氧化還原滴定法含量測定二、主要理化性質(zhì)第六頁，共二十八頁，2022年，8月28日第九章

二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析6.吸收光譜特性本類藥物具有芳環(huán)，有明顯的紫外吸收特征和紅外特征。藥物溶劑濃度（μg/ml）λmax/λmin(nm)吸光度比值硝苯地平無水乙醇15237,320-335寬吸收尼群地平無水乙醇20236,353/303A353/A302=2.1-2.3尼莫地平乙醇10237尼索地平無水乙醇10237非洛地平乙醇20238,361第七頁，共二十八頁，2022年，8月28日第二節(jié)鑒別試驗一、化學鑒別法（一）與亞鐵鹽反應(yīng)二氫吡啶類藥物苯環(huán)上硝基具有氧化性，可將氫氧化亞鐵氧化為紅棕色氫氧化鐵沉淀。第八頁，共二十八頁，2022年，8月28日ChP2010尼莫地平的鑒別：

取本品約20mg，加乙醇2ml溶解后，加新制的5%硫酸亞鐵銨溶液2ml，1.5mol/L硫酸溶液1滴與0.5mol/L氫氧化鉀溶液1ml，強烈振搖，1分鐘內(nèi)沉淀由灰綠色變?yōu)榧t棕色。Fe(OH)2

Fe(OH)3(紅色沉淀）第九頁，共二十八頁，2022年，8月28日（二）與氫氧化鈉試液反應(yīng)ChP2010硝苯地平的鑒別：

取本品約25mg，加丙酮1ml溶解，加20%氫氧化鈉溶液3～5滴，振搖，溶液顯橙紅色。二氫吡啶類藥物與堿作用后，二氫吡啶環(huán)1,4-位氫可以發(fā)生解離，形成共軛環(huán)發(fā)生顏色變化，可以進行鑒別。第十頁，共二十八頁，2022年，8月28日（三）沉淀反應(yīng)ChP2010尼莫地平注射液的鑒別：

取本品適量（約相當于尼莫地平20mg），置分液漏斗中，加乙醚30ml振搖提取，靜置，分取乙醚層，置水浴上蒸干，放冷，殘渣加乙醇2ml，攪拌使溶解，移至試管中，加1%氯化汞溶液3ml，即發(fā)生白色沉淀。第十一頁，共二十八頁，2022年，8月28日（四）重氮化-偶合反應(yīng)BP2010硝苯地平的鑒別：

取本品25mg，加10ml鹽酸-水-乙醇混合溶液（1.5∶3.5∶5），溫熱，加入鋅粒0.5g，放置5分鐘，濾過，濾液加亞硝酸鈉溶液（10g/L）5ml，放置2分鐘，再加入氨基磺酸銨溶液（50g/L）2ml，搖勻，加入鹽酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml，即顯紅色（持續(xù)5分鐘以上）。第十二頁，共二十八頁，2022年，8月28日二、分光光度法（一）紫外分光光度法ChP2010尼群地平軟膠囊的鑒別：

避光操作。取本品的內(nèi)容物約1g，置100ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，取10ml，置100ml量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，在353nm與303nm的波長處分別測定吸光度，在353nm與303nm的吸光度比值應(yīng)為2.1～2.3。（二）紅外分光光度法第十三頁，共二十八頁，2022年，8月28日五、色譜法（一）高效液相色譜法ChP2010尼莫地平片的鑒別：

在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應(yīng)與對照品溶液主峰的保留時間一致。第十四頁，共二十八頁，2022年，8月28日（二）薄層色譜法BP2010硝苯地平的鑒別：

取本品加甲醇制成每1ml中約含1mg的溶液，作為供試品溶液；另取硝苯地平對照品適量，加甲醇制成每1ml約含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠F254薄層板上，以乙酸乙酯-環(huán)己烷（40∶60）為展開劑，展開，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視，供試品溶液所顯主斑點的位置和顏色應(yīng)與對照品溶液的主斑點一致。第十五頁，共二十八頁，2022年，8月28日第三節(jié)有關(guān)物質(zhì)的檢查二氫吡啶類藥物遇光極不穩(wěn)定，易發(fā)生光化學歧化作用，引入雜質(zhì)，因此各國藥典標準中均規(guī)定在避光條件下進行有關(guān)物質(zhì)檢查，大多采用HPLC法。第十六頁，共二十八頁，2022年，8月28日硝苯地平在光照和氧化劑存在條件下分別生成兩種降解氧化產(chǎn)物：雜質(zhì)I：2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯雜質(zhì)II：2,6-二甲基-4-(2-亞硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯第十七頁，共二十八頁，2022年，8月28日

1.供試液Ⅰ和Ⅱ的制備2.有關(guān)雜質(zhì)對照品液Ⅰ和Ⅱ的制備3.色譜條件

填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠;

流動相：甲醇-水（3：2）；

檢測波長：235nm。結(jié)果：按外標法以峰面積計算，均不得超過0.1%，其他單個雜質(zhì)的峰面積不得大于對照品溶液中硝苯地平峰面積(0.2%)，雜質(zhì)總量不得過0.5%。第十八頁，共二十八頁，2022年，8月28日第四節(jié)含量測定一、鈰量法硝苯地平與硫酸鈰反應(yīng)的摩爾比為1∶2。鄰二氮菲-Fe(II)指示劑

終點時（鄰二氮菲-Fe(II)指示劑）:微過量的Ce4+將指示劑中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙紅色配合物離子呈無色，以指示終點的到達。原理第十九頁，共二十八頁，2022年，8月28日第九章

二氫吡啶類鈣通道阻滯藥物的分析ChP2010硝苯地平的含量測定：

取本品約0.4g，精密稱定，加無水乙醇50ml，微熱使溶解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸8.5ml，加水至100ml）50ml、鄰二氮菲指示液3滴，立即用硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點時，在水浴中加熱至50℃左右，繼續(xù)緩緩滴定至橙紅色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）相當于17.32mg的C17H18N2O6。含量計算公式：第二十頁，共二十八頁，2022年，8月28日優(yōu)點：①以Ce(SO4)2標準溶液穩(wěn)定，長時間放置、曝光、加熱不會引起濃度的變化。②Ce4+還原為Ce3+是單電子轉(zhuǎn)移，不是生成中間價態(tài)，反應(yīng)簡單，副反應(yīng)少。③大部分有機物不與Ce(SO4)2作用，不干擾測定。④特別適用于糖漿劑以及片劑等制劑藥物的測定。終點指示：①Ce4+為黃色，Ce3+為無色，Ce4+可自身作為指示劑，但不夠靈敏。②常用鄰二氮菲作為指示劑，即稍過量的Ce4+將指示液中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙紅色配合物離子呈無色，以指示終點的到達。如：尼莫地平，尼群地平，非洛地平，硝苯地平采用該法定量。（ChP2010）第二十一頁，共二十八頁，2022年，8月28日二、紫外-可見分光光度法ChP2010尼群地平軟膠囊的含量測定三、高效液相色譜法ChP2010尼莫地平分散片的含量測定第二十二頁，共二十八頁，2022年，8月28日設(shè)計一種容量分析方法測定其含量（名稱、原理、溶劑、滴定劑、指示劑、取樣量及操作）第二十三頁，共二十八頁，2022年，8月28日第五節(jié)體內(nèi)二氫吡啶類藥物的分析氨氯地平分子結(jié)構(gòu)中含有一個手性碳原子，故具有一對光學異構(gòu)體R-(+)-氨氯地平與S-(-)-氨氯地平，僅S-(-)-氨氯地平具有血管擴張作用，其中左旋氨氯地平藥效是消旋氨氯地平的2倍，因此需進行血漿中氨氯地平對映體的手性分離與立體選擇性藥動學研究。第二十四頁，共二十八頁，2022年，8月28日人血漿中氨氯地平對映體的固相萃取LC-MS/MS法測定：第二十五頁，共二十八頁，2022年，8月28日樣品處理：血漿樣品1.0ml，與1.0ml用流動相制備的內(nèi)標溶液(10ng/ml)混合后，取1.8ml上載至C18固相萃取柱(萃取柱預先用含2.5%氨的甲醇1.0ml洗滌2次，再用5mmol/L醋酸銨溶液1.0ml沖洗平衡)，分別用5mmol/L醋酸銨溶液1.0ml和水-甲醇(65:35)1.0ml洗滌，再用含2.5%氨的甲醇1.0ml洗脫，洗脫液在60℃下于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸發(fā)至干，殘渣物加250μl流動相溶解，吸取100μl注入液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)進行分析。第二十六頁，共二十八頁，2022年，8月28日色譜與質(zhì)譜條件色譜柱為Chiral-AGP柱(150mm×4.0mm，5μm)，流動相為10mmol/L醋酸銨緩沖液(pH4.5)-正丙醇(99:1)，流速0.9ml/min，柱溫30℃。APCI離子源，溫度350℃，輔助氣(N2)