基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件

基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法江西省臨床檢驗(yàn)中心基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理1應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)測(cè)定臨床標(biāo)本中的病原體核酸成分,是一種高度敏感,且最為直接的檢測(cè)手段。由于臨床標(biāo)本中含有蛋白質(zhì)、脂類等物質(zhì),可干擾PCR反應(yīng),故在做PCR反應(yīng)前必須進(jìn)行核酸提取應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技2經(jīng)典的核酸提取方法通常是加去污劑(SDs等)裂解細(xì)胞,經(jīng)蛋白酶處理、有機(jī)溶劑提取及乙醇沉淀等步驟經(jīng)典的核酸提取方法通常是加去3由于樣本的處理及保存對(duì)DNA和RNA(尤其是RNA)的影響較大,因此在核酸測(cè)定時(shí)標(biāo)本的處理及適當(dāng)保存對(duì)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確有效非常重要。由于樣本的處理及保存對(duì)DNA4臨床常見(jiàn)的標(biāo)本有血清(漿)全血、分泌物、棉拭子、膿液體液、新鮮組織、石蠟切片等,這些臨床標(biāo)本的處理和保存方法各有不同。臨床常見(jiàn)的標(biāo)本有血清(漿)5臨床標(biāo)本的處理臨床標(biāo)本的處理6血清(漿)標(biāo)本些病原體,如乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、人類免疫缺陷病毒(HIV)等的PCR檢測(cè)常采用血清或血漿標(biāo)本血清(漿)標(biāo)本7HBV:標(biāo)本通常由醫(yī)護(hù)人員采集應(yīng)注意避免溶血,如為血漿標(biāo)本注意抗凝劑的選擇,一般用EDTA-Na2或枸櫞酸納,不可使用肝素。標(biāo)本為全血時(shí),及時(shí)分離出血漿,提取病毒DNA進(jìn)行HBV:標(biāo)本通常由醫(yī)護(hù)人員采集8HCV:檢測(cè)RNA病毒。由于RNA極易降解,標(biāo)本的制備和保存方式往往可以影響測(cè)定結(jié)果。若用血漿標(biāo)本,應(yīng)使用EDTA抗凝。嚴(yán)棼使用肝素,因其對(duì)PCR擴(kuò)增有抑制作用且無(wú)法在核酸提取過(guò)程中去除?？鼓?小時(shí)內(nèi)分離血漿。如用血清杉本,則應(yīng)盡快(2小時(shí)內(nèi))分離血清進(jìn)行檢測(cè),或-200C保存。HCV:檢測(cè)RNA病毒。由于RNA極9全血標(biāo)本通常用來(lái)提取外周血單個(gè)核細(xì)胞核酸:如基因組DNA、線粒體DNA、總RNA等抗凝劑:一般使用EDTA-Na2、枸櫞酸納,不使用肝素。全血標(biāo)本10基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件11基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件12基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件13基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件14基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件15基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件16基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件17基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件18基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件19基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件20基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件21基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件22基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件23基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件24基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件25基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件26基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件27基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件28基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件29基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件30基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件31基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件32基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件33基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件34基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件35基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件36基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件37基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件38基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件39基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件40基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件41基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件42基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件43基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件44基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件45基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件46基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件47基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件48基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件49基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件50基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件51基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件52基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件53基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件54基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件55基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件56基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件57基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件58基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件59基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件60基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法江西省臨床檢驗(yàn)中心基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理61應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)測(cè)定臨床標(biāo)本中的病原體核酸成分,是一種高度敏感,且最為直接的檢測(cè)手段。由于臨床標(biāo)本中含有蛋白質(zhì)、脂類等物質(zhì),可干擾PCR反應(yīng),故在做PCR反應(yīng)前必須進(jìn)行核酸提取應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技62經(jīng)典的核酸提取方法通常是加去污劑(SDs等)裂解細(xì)胞,經(jīng)蛋白酶處理、有機(jī)溶劑提取及乙醇沉淀等步驟經(jīng)典的核酸提取方法通常是加去63由于樣本的處理及保存對(duì)DNA和RNA(尤其是RNA)的影響較大,因此在核酸測(cè)定時(shí)標(biāo)本的處理及適當(dāng)保存對(duì)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確有效非常重要。由于樣本的處理及保存對(duì)DNA64臨床常見(jiàn)的標(biāo)本有血清(漿)全血、分泌物、棉拭子、膿液體液、新鮮組織、石蠟切片等,這些臨床標(biāo)本的處理和保存方法各有不同。臨床常見(jiàn)的標(biāo)本有血清(漿)65臨床標(biāo)本的處理臨床標(biāo)本的處理66血清(漿)標(biāo)本些病原體,如乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、人類免疫缺陷病毒(HIV)等的PCR檢測(cè)常采用血清或血漿標(biāo)本血清(漿)標(biāo)本67HBV:標(biāo)本通常由醫(yī)護(hù)人員采集應(yīng)注意避免溶血,如為血漿標(biāo)本注意抗凝劑的選擇,一般用EDTA-Na2或枸櫞酸納,不可使用肝素。標(biāo)本為全血時(shí),及時(shí)分離出血漿,提取病毒DNA進(jìn)行HBV:標(biāo)本通常由醫(yī)護(hù)人員采集68HCV:檢測(cè)RNA病毒。由于RNA極易降解,標(biāo)本的制備和保存方式往往可以影響測(cè)定結(jié)果。若用血漿標(biāo)本,應(yīng)使用EDTA抗凝。嚴(yán)棼使用肝素,因其對(duì)PCR擴(kuò)增有抑制作用且無(wú)法在核酸提取過(guò)程中去除。抗凝后6小時(shí)內(nèi)分離血漿。如用血清杉本,則應(yīng)盡快(2小時(shí)內(nèi))分離血清進(jìn)行檢測(cè),或-200C保存。HCV:檢測(cè)RNA病毒。由于RNA極69全血標(biāo)本通常用來(lái)提取外周血單個(gè)核細(xì)胞核酸:如基因組DNA、線粒體DNA、總RNA等抗凝劑:一般使用EDTA-Na2、枸櫞酸納,不使用肝素。全血標(biāo)本70基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件71基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件72基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件73基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件74基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件75基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件76基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件77基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件78基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件79基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件80基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件81基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件82基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件83基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件84基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件85基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件86基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件87基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件88基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件89基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件90基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件91基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件92基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件93基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件94基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件95基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件96基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件97基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件98基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件99基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件100基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件101基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件102基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件103基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件104基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件105基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件106基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件107基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件108基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件109基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件110基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件111基因擴(kuò)增檢驗(yàn)標(biāo)本的處理保存及核酸提取方法課件112