色譜分析 平面色譜法課件

平面色譜法《色譜分析法》系列課件第五章平面色譜法第一節(jié)概述1938年俄國(guó)人首先實(shí)現(xiàn)了在氧化鋁薄層上分離一種天然藥物。1965年德國(guó)化學(xué)家出版了“薄層色譜法”一書(shū)，推動(dòng)了這一技術(shù)的發(fā)展。因TLC法設(shè)備簡(jiǎn)單，分析速度快，分離效率高，結(jié)果直觀(guān)，很快被用作定性和半定量的方法。70年代中后期發(fā)展了高效薄層色譜。80年代以后發(fā)展了薄層色譜光密度掃描儀，和各步操作的儀器化，并實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)化。Thin-layerchromatographyofstandardPLsamplesFig.1Description:Thethermo-stabilityofphospholipidsandlysophospholipidswasdeterminedbyonedimensionalthin-layerchromatography(TLC).Achloroform-methanol-28%aqueousammoniasolventsystem(65:35:8,v/v)providedclearseparationofmajorphospholipids(PL)andtheirlysoforms.The5%(w/v)dodecamolybdophosphoricacidsolutioninethanolwasusedassprayreagent.ThethermostabilityofphospholipidswasevaluatedbycomparethespotsdensityandareaofPLsampleswithvaryingheattreatment.Rapiddeterminationofthermo-stabilityofphospholipidsbyTLC二、平面色譜法的基本流程確定樣品的預(yù)處理方法選擇吸附劑和展開(kāi)劑制備層析用薄板點(diǎn)樣層析分離顯色定性或定量分析分析結(jié)果，給出結(jié)論三、平面色譜法參數(shù)（一）定性參數(shù)1.比移值Rf(retardationfactor;Rf)溶質(zhì)移動(dòng)的距離與流動(dòng)相移動(dòng)距離之比

Rf范圍：

0<Rf<1Rf=0.2~0.8（常用）

Rf=0.3~0.5（最佳）Lds1ds2圖18－12.相對(duì)比移值Ris

討論參考物與被測(cè)組分在完全相同條件下展開(kāi)可以消除系統(tǒng)誤差，大大提高重現(xiàn)性和可靠性；參考物可以是后加入純物質(zhì)，也可是樣品中已知組分相對(duì)比移值Ris與組分、參考物性質(zhì)及色譜條件有關(guān)，范圍可以大于或小于1（三）容量因子k’與比移值Rf的關(guān)系容量因子：k’=ts/tmts

、tm分別為組分在固定相和展開(kāi)劑中的保留時(shí)間保留值的定義：2.分離數(shù)(separationnumber;SN)定義：相鄰斑點(diǎn)分離度為1.177時(shí)，在Rf=0(原點(diǎn))到Rf=1(溶劑前沿)之間能容納的色譜斑點(diǎn)數(shù)。

W(1/2)0,W(1/2)1為實(shí)驗(yàn)測(cè)得的某組分色譜峰的半峰寬對(duì)ds作圖外推至在原點(diǎn)處和溶劑前沿處的半峰寬。

一般薄層板的分離數(shù)為7~10，高效薄層板可達(dá)10~20。SN是衡量分離容量的重要參數(shù)。概述1．TLC定義：將固定相均勻涂布在表面光滑的平板上，形成薄層而進(jìn)行色譜分離和分析的方法2．操作過(guò)程：鋪板→活化

→點(diǎn)樣

→

展開(kāi)

→定位(定性)/洗脫(定量)3．分離機(jī)制：吸附*、分配*、離子交換、空間排阻4．特點(diǎn)；分離能力強(qiáng)、靈敏度高、展開(kāi)時(shí)間較短、顯色方便。5．應(yīng)用：藥物雜質(zhì)檢查、純度測(cè)定、定性及定量等。一、主要類(lèi)型（一）吸附薄層色譜

固定相為吸附劑的薄層色譜。利用吸附劑對(duì)不同組分的吸附能力差異而實(shí)現(xiàn)分離.經(jīng)過(guò)吸附、解吸、再吸附、再解吸……最后混合物得到分離.K大，Rf值小，移動(dòng)慢；K小，Rf大，移動(dòng)快。（二）分配薄層色譜

固定相為液體，吸留在載體上的薄層色譜。利用被分離組分在固定相與流動(dòng)相中的分配系數(shù)不同而被分離。常用的是反相薄層色譜法，固定相是烷基化學(xué)鍵合相，展開(kāi)劑是水及與水相溶的有機(jī)溶劑。二、吸附劑與展開(kāi)劑(一）吸附劑1.硅膠：硅膠H------不含黏合劑硅膠G------含煅石膏（13-15%）硅膠F254---既含煅石膏，又含熒光指示劑2.氧化鋁：可分為中性（pH7.5)、堿性（pH9.0）和酸性（pH4.0）（二）展開(kāi)劑常用的有：

石油醚<環(huán)己烷<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烷<苯<甲苯<二氯甲烷<乙醚<氯仿<乙酸乙酯<正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<吡啶<酸<水吸附劑與展開(kāi)劑的選擇展開(kāi)劑的選擇：根據(jù)被測(cè)組分、吸附劑和展開(kāi)劑本身的極性吸附劑的選擇：根據(jù)被測(cè)物極性和吸附劑的吸附能力

被測(cè)物極性強(qiáng)——弱極性吸附劑

被測(cè)物極性弱——強(qiáng)極性吸附劑圖18－3連續(xù)展開(kāi)：層析缸，預(yù)飽和，防止邊緣效應(yīng)浸入展開(kāi)劑深度0.51.0cm，展開(kāi)至整板3/4距離,標(biāo)記。1,2樣品3標(biāo)準(zhǔn)品前沿原點(diǎn)

???1.5-2.0cm2.0cm123展開(kāi)方式展開(kāi)方式二維展開(kāi)——在兩個(gè)垂直的方向上進(jìn)行展開(kāi)。將樣品點(diǎn)在薄層板的一個(gè)角上，展開(kāi)適當(dāng)距離后，揮干溶劑，再將薄層板以與原展開(kāi)方向成90

的方向進(jìn)行展開(kāi)。原點(diǎn)12定量分析1.目視比較半定量2.測(cè)量斑點(diǎn)面積3.洗脫法4.薄層掃描法五、高效薄層色譜法高效薄層色譜法（highperformancethinlayerchromatography；HPTLC)所用的吸附劑顆粒很?。?μm或10μm），用噴霧法制成高效薄層板。常用的有硅膠、氧化鋁、纖維素和化學(xué)鍵合相預(yù)制薄層板。第四節(jié)紙色譜法以紙做載體的色譜法，分離原理屬于液-液分配色譜法，操作與薄層法類(lèi)似。選紙→點(diǎn)樣

→

展開(kāi)

→顯色(定性)/洗脫(定量)固定相：紙纖維吸附的水流動(dòng)相：與水不互溶的有機(jī)溶劑（水飽和正丁醇）分離機(jī)制：同液-液分配色譜定性參數(shù)：討論：Rf與組分性質(zhì)、流動(dòng)相及溶解度有關(guān)極性組分→易保留，Rf小（流動(dòng)相極性↑，Rf↑）非極性組分→易流出，Rf大（流動(dòng)相極性↑，Rf↓）本章小結(jié)掌握:平面色譜法的基本分離原理及相關(guān)參數(shù)的計(jì)算（比移值、相對(duì)比移值，分離度）；薄層色譜法的特點(diǎn)；吸附薄層色譜中吸附劑和展開(kāi)劑的選擇原則。熟悉:薄層色譜法的主要操作步驟。了解:薄層掃描法的應(yīng)用及技術(shù)；紙色譜法的分離原理及實(shí)驗(yàn)條件。參考書(shū)及文獻(xiàn)1.《分析化學(xué)》（第四版）下冊(cè)，孫毓慶主編，人民衛(wèi)生出版社2．周同惠等．紙色譜和薄層色譜。分析化學(xué)叢書(shū)．第三卷．第五冊(cè)．北京：科學(xué)出版社，1989．3．林珍安等譯．高效薄層色譜．上海：上?？萍汲霭嫔纾?984．4.孫毓慶主編．薄層掃描法及其在藥物分析中的應(yīng)用．北京，人民衛(wèi)生出版社，1990．5.FriedBandShermaJ．Thin-layerChromatography．NewYork：MarcelDekkerlnc，1982．6.GrinbergN．ModernThin-layerChromatography．NewYork：MarcelDekkerlnc，1990。7.ShermaJandFriedB．HandbookofThin-LayerChromatography.NewYork：MarcelDekkerlnc，1991.（二）相平衡參數(shù)相平衡參數(shù)：分配系數(shù)K和容量因子k前面推導(dǎo)出R’表示單位時(shí)間內(nèi)一個(gè)分子在流動(dòng)相中出現(xiàn)的幾率，也可以表示組分分子在平面上移動(dòng)的速度.Rf＝L/L0=ut/u0t，定時(shí)展開(kāi)時(shí)R’＝Rf討論

⑴

Rf與K有關(guān)，即