醫(yī)療器械無(wú)菌檢查

1醫(yī)療器械-無(wú)菌檢查

江蘇省醫(yī)療器械檢驗(yàn)所

2主要內(nèi)容無(wú)菌定義及無(wú)菌檢查定義無(wú)菌檢驗(yàn)依據(jù)試驗(yàn)主要設(shè)備實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件及人員要求培養(yǎng)基種類及配制要求培養(yǎng)基適用性檢查試驗(yàn)菌種及菌液制備無(wú)菌檢查方法驗(yàn)證供試品無(wú)菌檢查及結(jié)果判斷

3

無(wú)菌定義:無(wú)活微生物的狀態(tài)。無(wú)菌檢查定義：無(wú)菌檢查法系用于檢查藥典要求無(wú)菌的藥品、原料、輔料及其他品種是否無(wú)菌的一種方法。若供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。（1）無(wú)菌定義4

（2）無(wú)菌檢驗(yàn)依據(jù)本規(guī)范選用于《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄XIH無(wú)菌檢查法。GB/T14233.2-2005《醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗(yàn)方法，第二部分：生物試驗(yàn)方法中規(guī)定的無(wú)菌試驗(yàn)方法。5（3）試驗(yàn)主要設(shè)備超凈工作臺(tái)細(xì)菌培養(yǎng)箱霉菌培養(yǎng)箱立式高壓蒸汽滅菌器臺(tái)式高壓蒸汽滅菌器顯微鏡生物安全柜電熱恒溫干燥箱集菌儀6

試驗(yàn)儀器（1）-超凈工作臺(tái)7

試驗(yàn)設(shè)備（2）--隔水式恒溫培養(yǎng)箱8

試驗(yàn)設(shè)備（3）----霉菌培養(yǎng)箱9試驗(yàn)設(shè)備（4）-立式高壓蒸汽滅菌器10試驗(yàn)設(shè)備（5）--臺(tái)式蒸汽滅菌器11試驗(yàn)設(shè)備備（6）--顯微鏡鏡12試驗(yàn)設(shè)備備（7）-生物安全全柜13試驗(yàn)設(shè)備備（8）Equinox全自動(dòng)無(wú)無(wú)菌檢驗(yàn)驗(yàn)系統(tǒng)14（4）實(shí)驗(yàn)環(huán)環(huán)境條件件要求：：無(wú)菌檢查查應(yīng)在環(huán)環(huán)境潔凈凈度10000級(jí)下的局局部潔凈凈度100級(jí)的單向向流空氣氣區(qū)域內(nèi)內(nèi)或隔離離系統(tǒng)中中進(jìn)行，，其全過(guò)過(guò)程必須須嚴(yán)格遵遵守?zé)o菌菌操作，，防止微微生物污污染。單單向流空空氣區(qū)、、工作臺(tái)臺(tái)面及環(huán)環(huán)境應(yīng)定定期按《醫(yī)藥工業(yè)業(yè)潔凈室室(區(qū))懸浮粒子子、浮游游菌和沉沉降菌的的測(cè)試方方法》的現(xiàn)行國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)進(jìn)行潔潔凈度驗(yàn)驗(yàn)證。隔隔離系統(tǒng)統(tǒng)按相關(guān)關(guān)的要求求進(jìn)行驗(yàn)驗(yàn)證，其其內(nèi)部環(huán)環(huán)境的潔潔凈度須須符合無(wú)無(wú)菌檢查查的要求求。15（4）實(shí)驗(yàn)人員員要求：：菌檢人員員必須具具備微生生物專業(yè)業(yè)知識(shí)，，并經(jīng)過(guò)無(wú)菌菌技術(shù)培培訓(xùn)。16（5）培養(yǎng)基基種類及要要求硫乙醇酸酸鹽流體體培養(yǎng)基基改良馬丁丁培養(yǎng)基基2012年12月1717（5）培養(yǎng)基基種類及要要求無(wú)菌檢查查：硫乙乙醇酸鹽鹽流體培培養(yǎng)基2012年12月1818（5）培養(yǎng)基基種類及要要求無(wú)菌檢查查：改改良馬丁丁培養(yǎng)基基：19（5）培養(yǎng)基基種類及要要求保存時(shí)間間：制備好的的培養(yǎng)基基應(yīng)保存存在：2℃～25℃、、避光非密閉容容器中：：一般在在三周內(nèi)內(nèi)使用密閉容器器中：一一般可在在一年內(nèi)內(nèi)使用20（5）培養(yǎng)基基種類及要要求一般采用用商品脫脫水培養(yǎng)養(yǎng)基，臨用時(shí)按按照使用用說(shuō)明書(shū)書(shū)進(jìn)行配配制，配配制時(shí)須須迅速，，以免吸吸潮影響響稱量的的準(zhǔn)確性性，同時(shí)時(shí)需注意意滅菌后后培養(yǎng)基基的pH值應(yīng)符合規(guī)規(guī)定，否否則必須須校正后后滅菌使使用。新鮮配制制的培養(yǎng)養(yǎng)基，應(yīng)應(yīng)符合《中國(guó)藥典典》規(guī)定的配配方，對(duì)對(duì)培養(yǎng)基基進(jìn)行挑挑選。21（5）培養(yǎng)基基種類及要要求硫乙醇酸酸鹽培養(yǎng)養(yǎng)基：屬于流體體培養(yǎng)基基，即在在液體培培養(yǎng)基中中加入0.05%～0.07%的瓊脂，增加了了培養(yǎng)基基的粘度度，降低低培養(yǎng)基基中的含含氧量，，使培養(yǎng)養(yǎng)基在一一段時(shí)間間內(nèi)保持持厭氧的的條件，，有利于于厭氧菌菌的生長(zhǎng)長(zhǎng)。硫乙乙醇酸鹽鹽培養(yǎng)基基分裝在在適宜的的容器中中，其粉粉紅色的的氧化層適合需氣氣菌的生生長(zhǎng)，在在供試品品接種前前，培養(yǎng)養(yǎng)基的氧氧化層的的顏色不不得超過(guò)過(guò)培養(yǎng)基基深度的的1／5，調(diào)PH值滅菌后后為7.1±±0.2，分裝，，滅菌。。硫乙醇酸酸鹽培養(yǎng)養(yǎng)管置：：30～35℃培養(yǎng)14天。22（5）培養(yǎng)基基種類及要要求改良馬丁丁培養(yǎng)基基：取培養(yǎng)基基成分混混合，微微溫溶解解，調(diào)節(jié)節(jié)PH值約為6.8，煮沸，，搖勻，，調(diào)PH值滅菌后后為6.4±±0.2，分裝，，滅菌。。改良馬丁丁培養(yǎng)基基：置23～28℃培養(yǎng)14天。23（5）培養(yǎng)基基種類及要要求培養(yǎng)基裝裝量：對(duì)于采用用直接接接種法檢檢查的液體樣品，培培養(yǎng)基的的裝量與與供試品品裝量相相關(guān)，應(yīng)應(yīng)根據(jù)供供試品接接種量確確定培養(yǎng)養(yǎng)基的裝裝量，使使供試品品接種體體積不大大于培養(yǎng)養(yǎng)基的10%。對(duì)于采用用直接接接種法檢檢查的固體樣品，培培養(yǎng)基的的裝量均均為100ml；一次性性醫(yī)用材材料及醫(yī)醫(yī)療器具具，若醫(yī)醫(yī)療器具具體積過(guò)過(guò)大，培培養(yǎng)基的的裝量可可2000ml以上，已已將其完完全浸沒(méi)沒(méi)為準(zhǔn)。。對(duì)于采用用薄膜過(guò)濾濾法檢查的樣樣品，封封閉式薄薄膜濾器器的培養(yǎng)養(yǎng)基裝量量為100ml。24（6）培養(yǎng)基適適用性檢檢查新購(gòu)的培培養(yǎng)基或或自配的的新鮮培培養(yǎng)基要要求：無(wú)菌性檢檢查：每批培養(yǎng)養(yǎng)基隨機(jī)機(jī)取不少少于5支（瓶）），培養(yǎng)養(yǎng)14天，應(yīng)無(wú)無(wú)菌生長(zhǎng)長(zhǎng)。靈敏度檢檢查：其質(zhì)量均均應(yīng)符合合靈敏度檢檢查要求求。用于培培養(yǎng)基靈靈敏度檢檢查的菌菌種如下下：菌種種的傳代代的次數(shù)數(shù)不得超超過(guò)5代（從菌種種保存中中心獲得得的冷凍凍干燥菌菌種為0代）。25（6）培養(yǎng)基適適用性檢檢查菌種：試試驗(yàn)用菌菌株及菌菌液制備備：金黃色葡葡萄球菌菌[CMCC(B)26003銅綠色假假單胞菌菌[CMCC(B)10104]大腸埃希希菌[CMCC(B)44102]枯草桿菌菌[CMCC(B)63501]生孢梭梭菌[CMCC(B)64941]白色念念珠菌菌[CMCC(F)98001]黑曲霉霉[CMCC(F)98003]菌種的的要求求：不得超超過(guò)5代。采采用適適宜的的方法法保存存；并并以保保證試試驗(yàn)菌菌株的的生物物學(xué)特特性。。26（6）培養(yǎng)基基適用用性檢檢查菌液制制備一般當(dāng)當(dāng)日使使用。。取金黃色葡萄萄球菌菌、銅綠假單胞胞菌、、枯草芽孢桿桿菌，，少許許接種種至營(yíng)營(yíng)養(yǎng)肉肉湯基基中，，生孢梭菌的的新鮮鮮培養(yǎng)養(yǎng)物少少許接接種至至硫乙乙醇酸酸鹽流流體培培養(yǎng)基基中，，30～35℃℃培養(yǎng)18～24h；白色念珠菌菌的新新鮮培培養(yǎng)物物接種種改良良馬丁丁培養(yǎng)養(yǎng)基中中，23～28℃℃培養(yǎng)24～48h，上述述培養(yǎng)養(yǎng)物用用0.9%無(wú)菌氯氯化鈉鈉溶液液制成成含菌菌量小小于100cfu/ml菌懸液液；黑曲霉菌菌斜面面的新新鮮培培養(yǎng)物物接種種至改改良馬馬丁瓊瓊脂斜斜面培培養(yǎng)基基上，，23～28℃℃培養(yǎng)5～7天，使使大量量的孢孢子成成熟。。加入入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山山梨酯酯80的0.9%無(wú)菌氯氯化鈉鈉溶液液，將將孢子子洗脫脫。然然后用用適宜宜的方方法吸吸出孢孢子懸懸液至至無(wú)菌菌試管管中，，用含含0.05%（ml/ml）聚山山梨酯酯80的0.9%無(wú)菌氯氯化鈉鈉溶液液制成成小于于100cfu/ml的孢子子懸液液。（（見(jiàn)表表）27（6）培養(yǎng)基基適用用性檢檢查《中國(guó)藥藥典》2010年無(wú)菌菌檢查查驗(yàn)證證試驗(yàn)驗(yàn)中使使用7株菌見(jiàn)見(jiàn)下表表菌種接種培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度℃培養(yǎng)時(shí)間金黃色葡萄球菌營(yíng)養(yǎng)肉湯或者普通斜面30～35

18～24h銅綠假單孢菌

枯草芽孢桿菌大腸埃希菌（無(wú)）生孢梭菌硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基白色念珠菌改良馬丁或者普通斜面23～28

24～48h黑曲霉改良馬丁斜面23～285～7d28（6）培養(yǎng)基基適用用性檢檢查培養(yǎng)基基接種種金黃色色葡萄萄球菌菌2支銅綠假假單胞胞菌2支硫乙醇醇酸鹽鹽流體體培養(yǎng)養(yǎng)基枯枯草草芽孢孢桿菌菌2支生孢梭梭菌2支9支培培養(yǎng)基基裝量量12ml，空白對(duì)對(duì)照1支。分別接接種小小于100cfu/ml金葡、、銅綠綠、枯枯草、、生孢孢各2管管，另1支不接接種做做空白白對(duì)照照，培養(yǎng)3天，逐逐日觀觀察結(jié)結(jié)果。。29（5）培養(yǎng)基基適用用性檢檢查培養(yǎng)基基接種種白色念念株菌菌2支改良馬馬丁培培養(yǎng)黑曲霉霉2支（5支培養(yǎng)養(yǎng)基裝裝量9ml，其中中1支做空空白對(duì)對(duì)照））分別接接種小小于100cfu/ml白色、、黑曲曲各兩兩支，另1支不接接種做做空白白對(duì)照照。培養(yǎng)5天，逐逐日觀觀察結(jié)結(jié)果。。30（6）培養(yǎng)基基適用用性檢檢查結(jié)果判判斷空白對(duì)對(duì)照管管應(yīng)無(wú)無(wú)菌生生長(zhǎng)，，若加加菌的的培養(yǎng)養(yǎng)管均均生長(zhǎng)長(zhǎng)良好好，判判該培培養(yǎng)基基的靈靈敏度度檢查查符合合規(guī)定定。31（7）試驗(yàn)驗(yàn)(驗(yàn)證)菌種及菌液液制備菌種：試驗(yàn)驗(yàn)用菌株及及菌液制備備：金黃色葡萄萄球菌[CMCC(B)26003大腸埃希菌菌[CMCC(B)44102]枯草桿菌[CMCC(B)63501]生孢梭菌[CMCC(B)64941]白色念珠菌菌[CMCC(F)98001]黑曲霉[CMCC(F)98003]32（6）試驗(yàn)菌種種及菌液制制備10倍梯度度稀釋選擇適宜的的3個(gè)稀釋釋級(jí)別要求＜100cfu/ml33（7）無(wú)菌檢查查方法驗(yàn)證證驗(yàn)證準(zhǔn)備條條件：稀釋液、沖沖洗液及其其制備方法法0.1％蛋白胨水水溶液pH7.0氯化鈉—蛋白胨緩沖沖液制備的菌液液，應(yīng)當(dāng)日日使用。34（7）無(wú)菌檢查查方法驗(yàn)證證目的:證明所采用用的方法適適合于該供供試品的無(wú)無(wú)菌檢查確認(rèn)供試品品在該實(shí)驗(yàn)驗(yàn)條件下無(wú)無(wú)抑菌活性性或其抑菌菌活性可以以忽略不計(jì)計(jì)。確保在實(shí)際際檢驗(yàn)條件件下，該供供試品的無(wú)無(wú)菌檢查法法的準(zhǔn)確性性、有效性性和重現(xiàn)性性。驗(yàn)證證時(shí)，按“供試品的無(wú)無(wú)菌檢查”的規(guī)定及下下列要求進(jìn)進(jìn)行操作。。對(duì)每一試試驗(yàn)菌應(yīng)逐逐一進(jìn)行驗(yàn)驗(yàn)證。35（7）無(wú)菌檢查查方法驗(yàn)證證菌種及菌液液制備：：除大腸埃希希菌（Escherichiacoli）[CMCC(B)44102〕外，金黃色色葡萄球菌菌、枯草芽孢桿桿菌、生孢梭菌、、白色念珠菌菌、黑曲霉霉同培養(yǎng)基基靈敏度檢檢查。大腸腸埃希菌的的菌液制備備同金黃色色葡萄球菌菌。方法驗(yàn)證試試驗(yàn)與靈敏敏度檢驗(yàn)所所有菌種區(qū)區(qū)別：大腸埃希菌菌代替銅綠假單胞胞菌。36（7）無(wú)菌檢查查方法驗(yàn)證證菌液制備：：金黃色葡萄萄球菌（大大腸埃希菌菌、枯草芽芽孢桿菌)接種營(yíng)養(yǎng)肉肉湯（或營(yíng)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培培養(yǎng)基）生孢梭菌接接種硫乙醇醇酸鹽流體體培養(yǎng)基30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)；白色念珠菌菌接種改良良馬丁培養(yǎng)養(yǎng)基（或改改良馬丁瓊瓊脂培養(yǎng)基基）23～28℃培養(yǎng)24～48小時(shí)上述培養(yǎng)物物用0.9％無(wú)菌氯化化鈉溶液制制成每1ml含菌數(shù)小于于l00cfu(菌落形成單單位)的菌懸液。。黑曲霉接種種改良馬丁丁瓊脂斜面面培養(yǎng)基上上，23～28℃培養(yǎng)5～7天，加入3～5ml0.9％無(wú)菌氯化化鈉溶液，，將孢子洗洗吸出孢孢子懸液(用管口帶有有薄的無(wú)菌菌棉花或紗紗布能過(guò)濾濾菌絲的無(wú)無(wú)菌毛細(xì)吸吸管)至無(wú)菌試管管內(nèi)用0.9％無(wú)菌氯化化鈉溶液制制成每lml含孢子數(shù)小小于l00cfu的孢子懸液液。37（7）無(wú)菌檢查查方法驗(yàn)證證薄膜過(guò)濾法法將規(guī)定量的的供試品按按薄膜過(guò)濾濾法過(guò)濾，，沖洗，在在最后一次次的沖洗液液中加入試試驗(yàn)菌（小小于100cfu），過(guò)濾。。取出濾膜膜接種至相相應(yīng)的培養(yǎng)養(yǎng)基中，或或?qū)⑴囵B(yǎng)基基加至濾筒筒內(nèi)。另取取一濾桶，，不過(guò)濾供供試品，其其它操作同同上，作為為對(duì)照.將含培養(yǎng)基基的容器按按規(guī)定溫度度培養(yǎng)3～5天。各試試驗(yàn)菌及相相應(yīng)的培養(yǎng)養(yǎng)基逐一進(jìn)進(jìn)行驗(yàn)證。。（如下圖示示）38（7）無(wú)菌檢查查方法驗(yàn)證證薄膜過(guò)濾法法規(guī)定量的供供試品過(guò)濾硫乙醇酸鹽鹽流體培養(yǎng)養(yǎng)基濾膜接種改良馬丁培養(yǎng)養(yǎng)基沖洗▲每種菌均作1管不含供試品品管作為對(duì)照照加入試驗(yàn)菌過(guò)濾39（7）無(wú)菌檢查方方法驗(yàn)證直接接種法取符合直接接接種法培養(yǎng)基基用量要求的的硫乙醇酸鹽鹽流體培養(yǎng)基基8管，分別接人人小于l00cfu的金黃色葡萄萄球菌、銅綠綠假單胞菌、、枯草芽孢桿桿菌、生孢梭梭菌各2管；取符合直直接接種法培培養(yǎng)基用量要要求的改良馬馬丁培養(yǎng)基4管，分別接入入小于l00cfu的白色念珠菌菌、黑曲霉各各2管。其中1管接人規(guī)定量量的供試品，，另1管作為對(duì)照，，按規(guī)定的溫溫度培養(yǎng)3～5天。（如下表表）40（7）無(wú)菌檢查方方法驗(yàn)證-直接接種法方法驗(yàn)證所用菌種（藥典2010版規(guī)定）金黃色葡萄球菌分別接種各菌種新鮮培養(yǎng)物至相應(yīng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，將培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成菌懸液，濃度小100cfu/mL硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基8支：分別接種小于100cfu的金葡、大腸、枯草、生孢各2支，其中1管接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另1管作為對(duì)照，培養(yǎng)3天。大腸埃希菌枯草芽孢桿菌生孢梭菌白色念珠菌改良馬丁培養(yǎng)基4支：分別接種小于100cfu的白念、黑曲霉各2支，其中1管接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另1管作為對(duì)照，培養(yǎng)5天。黑曲霉41（7）無(wú)菌檢查方方法驗(yàn)證結(jié)果判斷與對(duì)照管比較較，如含供試試品各容器中中的試驗(yàn)菌均均生長(zhǎng)良好，，則供試品的的該檢驗(yàn)量在在該檢驗(yàn)條件件下無(wú)抑菌作作用或其抑菌菌作用可以忽忽略不計(jì)，照照此檢查法和和檢驗(yàn)條件進(jìn)進(jìn)行供試品的的無(wú)菌檢查。。如含供試品品的任一容器器中微生物生生長(zhǎng)微弱、緩緩慢或不生長(zhǎng)長(zhǎng)，則供試品品的該檢驗(yàn)量量在該檢驗(yàn)條條件下有抑菌菌作用。可采采用：1)增加沖洗量，，或增加培養(yǎng)養(yǎng)基的用量；；2)使用中和劑或或滅活劑、更更換濾膜品種種等方法，消消除供試品的的抑菌作用，，并重新進(jìn)行行方法驗(yàn)證。。42（8）供試品無(wú)菌菌檢查在100級(jí)超凈臺(tái)內(nèi)，，應(yīng)在酒精燈燈火焰周?chē)?，以無(wú)菌操作作法將規(guī)定量量的供試品分分別接種至含含硫乙醇酸鹽鹽流體培養(yǎng)基基（不少于15ml/管）和改良馬馬丁培養(yǎng)基（（不少于10ml/管）的容器中中。注意事項(xiàng)：嚴(yán)格遵守?zé)o菌菌技術(shù)操作，，切勿人為造造成污染；試驗(yàn)器具溫度度不可過(guò)高以以免將可能存存在的菌燙死死。43（8）供試品無(wú)菌菌檢查供試品包裝須須完好無(wú)損，，尤其是只有有一層包裝的的樣品。供試品若有兩兩層（或兩層層以上）包裝裝的，進(jìn)入無(wú)無(wú)菌檢驗(yàn)室需需將外包裝在在傳遞窗（或或緩沖間）拆拆除后，傳入入實(shí)驗(yàn)室。開(kāi)啟潔凈區(qū)紫紫外燈和空氣氣過(guò)濾裝置并并其工作1小時(shí)以上。操作人員準(zhǔn)備備：帶口罩、、帽子、穿專專用無(wú)菌服、、鞋進(jìn)入無(wú)菌菌室。每次試驗(yàn)中所所用物品必須須計(jì)劃好，并并有備用44（8）供試品無(wú)菌菌檢查無(wú)菌檢查法包包括：薄膜過(guò)濾法和和直接接種法法。只要供試品性性狀允許，應(yīng)應(yīng)采用薄膜過(guò)過(guò)濾法。進(jìn)行行供試品無(wú)菌菌檢查時(shí)，所所采用的檢驗(yàn)驗(yàn)方法和檢驗(yàn)驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)驗(yàn)證的方法相相同。45（8）供試品無(wú)菌菌檢查細(xì)菌檢測(cè)管：：硫乙醇酸鹽流流體培養(yǎng)基+供試品真菌檢測(cè)管：：改良馬丁培養(yǎng)養(yǎng)基+供試品陽(yáng)性對(duì)照管：：對(duì)應(yīng)陽(yáng)性菌+對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基+供試品陰性對(duì)照管：：應(yīng)取相應(yīng)的溶溶劑和稀釋液液或沖洗液+培養(yǎng)基46（8）供試品無(wú)菌菌檢查檢驗(yàn)數(shù)量：是指一次試驗(yàn)驗(yàn)所用供試品品最小包裝容容器的數(shù)量。。一般情況下，，供試品無(wú)菌菌檢查若采用用薄膜過(guò)濾法，應(yīng)增加最小小檢驗(yàn)數(shù)量的的1/2作陽(yáng)性對(duì)照用用；若采用直直接接種法，，應(yīng)增加供試試品無(wú)菌檢查查時(shí)每個(gè)培養(yǎng)養(yǎng)基容器接種種的樣品量做做陽(yáng)性對(duì)照用用。47（8）供試品無(wú)菌菌檢查檢驗(yàn)量：是指一次試驗(yàn)驗(yàn)所用的供試試品總量（g或ml）。采用直接接種種法時(shí)：若每支（瓶））供試品的裝裝量按規(guī)定足足夠接種兩份份培養(yǎng)基，則則應(yīng)分別接種種硫乙醇酸鹽鹽流體培養(yǎng)基基和改良馬丁丁培養(yǎng)基。采用薄膜過(guò)濾濾法時(shí)：檢驗(yàn)量應(yīng)不少少于直接接種種法的供試品品總接種量，，只要供試品品特性允許，，應(yīng)將所有容容器內(nèi)的全部部?jī)?nèi)容物過(guò)濾濾。48（8）供試品無(wú)菌菌檢查直接接種法：：每個(gè)容器中培培養(yǎng)基的用量量應(yīng)符合接種種的供試品體體積不得大于于培養(yǎng)基體積積的10％，同時(shí)硫乙乙醇酸鹽流體體培養(yǎng)基每管管裝量不少于于15ml，改良馬丁培培養(yǎng)基每管裝裝量不少于10ml。培培養(yǎng)養(yǎng)基基的的用用量量和和高高度度同同方方法法驗(yàn)驗(yàn)證證試試驗(yàn)驗(yàn)；；每每種種培培養(yǎng)養(yǎng)基基接接種種的的管管數(shù)數(shù)同同供供試試品品的的檢檢驗(yàn)驗(yàn)數(shù)數(shù)量量。。4949（8）供供試試品品無(wú)無(wú)菌菌檢檢查查陰性性對(duì)對(duì)照照：：供試試品品無(wú)無(wú)菌菌檢檢查查時(shí)時(shí)，，應(yīng)應(yīng)取取相相應(yīng)應(yīng)溶溶劑劑和和稀稀釋釋液液同同法法操操作作，，作作為為陰陰性性對(duì)對(duì)照照。。陰陰性性對(duì)對(duì)照照不不得得有有菌菌生生長(zhǎng)長(zhǎng)。。陰性性對(duì)對(duì)照照：：目的的是是驗(yàn)驗(yàn)證證相相應(yīng)應(yīng)溶溶劑劑和和稀稀釋釋液液本本身身是是否否存存在在污污染染，，防防止止假假陽(yáng)陽(yáng)性性。。5050（8）供供試試品品無(wú)無(wú)菌菌檢檢查查陽(yáng)性性對(duì)對(duì)照照：應(yīng)根根據(jù)據(jù)供供試試品品特特性性選選擇擇陽(yáng)陽(yáng)性性對(duì)對(duì)照照菌菌；；無(wú)無(wú)抑抑菌菌作作用用供供試試品品以以金金黃黃色色葡葡萄萄球球菌菌為為陽(yáng)陽(yáng)性性對(duì)對(duì)照照菌菌。。陽(yáng)陽(yáng)性性對(duì)對(duì)照照試試驗(yàn)驗(yàn)的的菌菌液液制制備備同同方方法法驗(yàn)驗(yàn)證證試試驗(yàn)驗(yàn)，，加加菌菌量量小小于于100cfu/ml，供供試試品品用用量量同同供供試試品品無(wú)無(wú)菌菌檢檢查查每每份份接接種種量量相相同同。。陽(yáng)陽(yáng)性性對(duì)對(duì)照照管管培培養(yǎng)養(yǎng)48~72小時(shí)時(shí)應(yīng)應(yīng)生生長(zhǎng)長(zhǎng)良良好好。。陽(yáng)性性對(duì)對(duì)照照：：目的的是是驗(yàn)驗(yàn)證證試試驗(yàn)驗(yàn)結(jié)結(jié)果果可可靠靠性性，，防防止止假假陰陰性性。。5151（8）供供試試品品無(wú)無(wú)菌菌檢檢查查薄膜膜過(guò)過(guò)濾濾法法：：2010年版版《中國(guó)國(guó)藥藥典典》規(guī)定定:只要要供供試試品品性性狀狀允允許許，，應(yīng)應(yīng)采采用用薄薄膜膜過(guò)過(guò)濾濾法法。。供供試試品品無(wú)無(wú)菌菌檢檢查查所所采采用用的的檢檢查查方方法法和和檢檢驗(yàn)驗(yàn)條條件件應(yīng)應(yīng)與與驗(yàn)驗(yàn)證證的的方方法法相相同同。。在蠕蠕動(dòng)動(dòng)泵泵的的作作用用下下，，被被測(cè)測(cè)產(chǎn)產(chǎn)品品通通過(guò)過(guò)裝裝有有帶帶空空氣氣過(guò)過(guò)濾濾器器的的針針頭頭及及無(wú)無(wú)菌菌管管路路直直接接從從樣樣品品容容器器中中進(jìn)進(jìn)入入濾濾筒筒中中，，免免去去了了通通常常膜膜轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移移過(guò)過(guò)程程中中易易產(chǎn)產(chǎn)生生的的污污染染。。無(wú)菌菌檢檢查查法法中中薄薄膜膜過(guò)過(guò)濾濾法法所所用用的的濾濾膜膜孔孔徑徑應(yīng)應(yīng)不不大大于于0.45μm，直徑約約為50mm。5252（8）供試品品無(wú)菌檢檢查水溶液供供試品取規(guī)定量量的供試試液，直直接過(guò)濾濾，或混混合至適適量稀釋釋液的無(wú)無(wú)菌容器器內(nèi)，混混勻，立立即過(guò)濾濾。供試液經(jīng)經(jīng)薄膜過(guò)過(guò)濾后，，若需要要用沖洗洗液沖洗洗濾膜，，每張濾濾膜每次次沖洗量量為100ml，總沖洗洗量不得得超過(guò)1000mL，以免濾濾膜上微微生物受受損傷。。沖洗后分分別將100mL硫乙醇酸酸鹽流