DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除

片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除肖懷東FieldApplicationSpecialistTel:8008208982;4008208982E-mail:CNAPMsupport@lifetech.DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁(yè)!概要提供線索的軟件界面實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)DNA提取重要性常見問題DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁(yè)!提供線索的軟件頁(yè)面DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁(yè)!信息(Info)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁(yè)!電泳參數(shù)(EPT)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁(yè)!SizeMatchEditorDNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁(yè)!雜峰出現(xiàn)的可能原因污染的原因電泳系統(tǒng)污染樣品污染PCR反應(yīng)的原因DNA用量DNA質(zhì)量操作不精確軟件設(shè)置的原因閾值設(shè)置過低試劑的原因試劑、緩沖液、膠保存不當(dāng)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁(yè)!甲酰胺推薦使用Hi-DiFormamide，避免電進(jìn)樣時(shí)的離子競(jìng)爭(zhēng)甲酰胺容易氧化，小管分裝，-

20C保存DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁(yè)!POP膠出現(xiàn)尿素結(jié)晶可以不作處理直接使用，不影響數(shù)據(jù)質(zhì)量。建議的方法：讓瓶子在室溫下升溫，逐漸溶解。切勿讓溫度達(dá)到或超過50C，這會(huì)導(dǎo)致POP膠的變質(zhì)。盡量減少膠處于室溫的時(shí)間。DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁(yè)!DNA提取重要性DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁(yè)!安全；快速；經(jīng)濟(jì)；易于操作；避免交叉污染；可靠和可重復(fù)；適用于不同的樣本載體；得到高質(zhì)量、高純度DNA；可自動(dòng)化操作。DNA提取技術(shù)應(yīng)該滿足下列要求DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁(yè)!DNA提取過程中常見問題1——

抑制物過多DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁(yè)!DNA提取過程中常見問題2——交叉污染DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁(yè)!常見問題DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁(yè)!2熒光污染DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁(yè)!4模板過量(Overamplification)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁(yè)!6拔起峰(PullUp)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁(yè)!8弱擴(kuò)增(Weakamplification)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁(yè)!10出峰延遲DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁(yè)!11微突變(Microvariation)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁(yè)!13OL太多DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁(yè)!應(yīng)用MiniFiler試劑盒優(yōu)勢(shì)：擴(kuò)增片段小，可顯著提高困難模板的分析成功率。DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁(yè)!樣品圖譜(SamplesPlot)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁(yè)!AnalysisStartPoint

-pastprimerpeak-before75peakAnalysisStopPoint

Anywhereafter450peak**原始數(shù)據(jù)（RawData）DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁(yè)!分子量?jī)?nèi)標(biāo)（SizingQuality）DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁(yè)!實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁(yè)!雜峰出現(xiàn)的可能原因及解決方案污染的原因電泳系統(tǒng)污染：更換污染的水、緩沖液、試劑……樣品污染：避免交叉污染，勤更換用具……

PCR反應(yīng)的原因DNA用量：避免加入過多DNA模板操作不精DNA質(zhì)量：使用高純度DNA，OD260/OD280>1.6操作部正確：對(duì)懷疑結(jié)果進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)軟件設(shè)置的原因

-閾值設(shè)置過低：建議設(shè)置為平均峰高的10%試劑的原因試劑、緩沖液、膠保存不當(dāng)：按推薦的方法保存試劑DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁(yè)!BufferBuffer：新鮮配制，不要使用過期的buffer。(3500為預(yù)裝好的）DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁(yè)!注意保養(yǎng)毛細(xì)管。不能讓毛細(xì)管的兩端長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中。干燥使毛細(xì)管內(nèi)的膠凝固，膠凝固導(dǎo)致毛細(xì)管報(bào)廢，無(wú)法逆轉(zhuǎn)。不走電泳的時(shí)候，注意儀器上的緩沖液不要干涸；取下來(lái)的時(shí)候，毛細(xì)管兩端浸在水或者緩沖液里。注意樣品純度。DNA越純，毛細(xì)管壽命越長(zhǎng)。蛋白質(zhì)等成分長(zhǎng)期進(jìn)入毛細(xì)管，會(huì)滯留在管內(nèi)阻塞管腔，減少毛細(xì)管壽命。毛細(xì)管DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁(yè)!DNA純度對(duì)最終結(jié)果的質(zhì)量有重要影響；在給定樣品時(shí)，良好的提取方案可以最大量地得到高質(zhì)量DNA；不同的樣本類型會(huì)影響到DNA提取方案的選擇；所有應(yīng)用于法庭DNA科學(xué)的提取方案在使用前都應(yīng)得到充分的優(yōu)化和認(rèn)證。DNA提取在法醫(yī)DNA工作中的重要性DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁(yè)!Chelex貯存液的pH值Chelex貯存液的理想pH是10-11如果pH<9PCR結(jié)果很差

PCR產(chǎn)率很低建議：現(xiàn)配現(xiàn)用、少量配制，迅速用完DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁(yè)!無(wú)法得到完整的STR分型；可能產(chǎn)生錯(cuò)的STR分型；降低毛細(xì)管的壽命；解決方案：選擇適合的DNA提取方法純化DNA使用IDPlus、MiniFiler試劑盒DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁(yè)!無(wú)法得到準(zhǔn)確的STR分型可能產(chǎn)生錯(cuò)的STR分型解決方案：經(jīng)常更換常用試劑如水、chelex、甲酰胺等；避免移液器、鑷子等污染；避免臺(tái)面污染；DNA單向流動(dòng)。DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁(yè)!1寬峰(BroadPeak)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁(yè)!3釘子峰(Spike)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁(yè)!5分裂峰(Splitpeaks)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁(yè)!7弱擴(kuò)增(Weakamplification)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁(yè)!9無(wú)擴(kuò)增(Noamplification)DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁(yè)!DNA片段分析常見實(shí)驗(yàn)故障排除共42頁(yè)，