分子生物學(xué)總復(fù)習(xí)題答案

名詞解釋基因：能夠表達(dá)和產(chǎn)生蛋白質(zhì)和RNA的DNA序列，是決定遺傳性狀的功能單位。基因組：細(xì)胞或生物體的一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和。端粒：以線性染色體形式存在的真核基因組DNA末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)叫端粒。該結(jié)構(gòu)是一段DNA序列和蛋白質(zhì)形成的一種復(fù)合體，僅在真核細(xì)胞染色體末端存在。操縱子：是指數(shù)個(gè)功能上相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一起，構(gòu)成信息區(qū)，連同其上游的調(diào)控區(qū)（包括啟動(dòng)子和操縱基因）以及下游的轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)所構(gòu)成的基因表達(dá)單位，所轉(zhuǎn)錄的RNA為多順反子。順式作用元件：是指那些與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)、能夠被基因調(diào)控蛋白特異性識(shí)別和結(jié)合的特異DNA序列。包括啟動(dòng)子、上游啟動(dòng)子元件、增強(qiáng)子、加尾信號(hào)和一些反應(yīng)元件等。反式作用因子：是指真核細(xì)胞內(nèi)含有的大量可以通過直接或間接結(jié)合順式作用元件而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄活性的蛋白質(zhì)因子。啟動(dòng)子：是RNA聚合酶特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列。增強(qiáng)子：位于真核基因中遠(yuǎn)離轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)，能明顯增強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄效率的特殊DNA序列。它可位于被增強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄基因的上游或下游，也可相距靶基因較遠(yuǎn)?；虮磉_(dá)：是指生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列過程，合成特定的蛋白質(zhì)，進(jìn)而發(fā)揮其特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的全過程。信息分子：調(diào)節(jié)細(xì)胞生命活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)。其中由細(xì)胞分泌的調(diào)節(jié)靶細(xì)胞生命活動(dòng)的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞間信息分子；而在細(xì)胞內(nèi)傳遞信息調(diào)控信號(hào)的化學(xué)物質(zhì)稱為細(xì)胞內(nèi)信息分子。10受體：是存在于靶細(xì)胞膜上或細(xì)胞內(nèi)能特異識(shí)別生物活性分子并與之結(jié)合，進(jìn)而發(fā)生生物學(xué)效應(yīng)的的特殊蛋白質(zhì)。11分子克?。涸隗w外對(duì)DNA分子按照即定目的和方案進(jìn)行人工重組，將重組分子導(dǎo)入合適宿主，使其在宿主中擴(kuò)增和繁殖，以獲得該DNA分子的大量拷貝。12蛋白激酶：是指能夠?qū)⒘姿峒瘓F(tuán)從磷酸供體分子轉(zhuǎn)移到底物蛋白的氨基酸受體上的一大類酶。13蛋白磷酸酶：是具有催化已經(jīng)磷酸化的蛋白質(zhì)分子發(fā)生去磷酸化反應(yīng)的一類酶分子，與蛋白激酶相對(duì)應(yīng)存在，共同構(gòu)成了磷酸化和去磷酸化這一重要的蛋白質(zhì)活性的開關(guān)系統(tǒng)。14基因工程：有目的的通過分子克隆技術(shù)，人為的操作改造基因，改變生物遺傳性狀的系列過程。15載體：能在連接酶的作用下和外源DNA片段連接并運(yùn)送DNA分子進(jìn)入受體細(xì)胞的DNA分子。16轉(zhuǎn)化：指質(zhì)粒DNA或以它為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細(xì)菌的過程。17感染：以噬菌體、粘性質(zhì)粒和真核細(xì)胞病毒為載體的重組DNA分子，在體外經(jīng)過包裝成具有感染能力的病毒或噬菌體顆粒，才能感染適當(dāng)?shù)募?xì)胞，并在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增。18轉(zhuǎn)導(dǎo)：指以噬菌體為載體，在細(xì)菌之間轉(zhuǎn)移DNA的過程，有時(shí)也指在真核細(xì)胞之間通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)移和獲得細(xì)胞DNA的過程。19轉(zhuǎn)染：指病毒或以它為載體構(gòu)建的重組子導(dǎo)入真核細(xì)胞的過程。20DNA變性：在物理或化學(xué)因素的作用下，導(dǎo)致兩條DNA鏈之間的氫鍵斷裂，而核酸分子中的所有共價(jià)鍵則不受影響。21DNA復(fù)性：當(dāng)促使變性的因素解除后，兩條DNA鏈又可以通過堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合形成DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)。22退火：指將溫度降至引物的TM值左右或以下，引物與DNA摸板互補(bǔ)區(qū)域結(jié)合形成雜交鏈。23筑巢PCR：先用一對(duì)外側(cè)引物擴(kuò)增含目的基因的大片段，再用內(nèi)側(cè)引物以大片段為摸板擴(kuò)增獲取目的基因?？梢蕴岣逷CR的效率和特異性。24原位PCR：以組織固定處理細(xì)胞內(nèi)的DNA或RNA作為靶序列，進(jìn)行PCR反應(yīng)的過程。25定量PCR：基因表達(dá)涉及的轉(zhuǎn)錄水平的研究常需要對(duì)mRNA進(jìn)行定量測(cè)定，對(duì)此采用的PCR技術(shù)就叫定量PCR。26基因打靶：是指通過DNA定點(diǎn)同源重組，改變基因組中的某一特定基因，從而在生物活體內(nèi)研究此基因的功能。27DNA芯片：DNA芯片技術(shù)是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接將大量的DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標(biāo)記的樣品雜交，通過對(duì)雜交信號(hào)的檢測(cè)分析，即可獲得樣品的遺傳信息。由于常用計(jì)算機(jī)硅芯片作為固相支持物，所以稱為DNA芯片。28錯(cuò)義突變：DNA分子中堿基對(duì)的取代，使得mRNA的某一密碼子發(fā)生變化，由它所編碼的氨基酸就變成另一種的氨基酸，使得多肽鏈中的氨基酸順序也相應(yīng)的發(fā)生改變的突變。29無義突變：由于堿基對(duì)的取代，使原來可以翻譯某種氨基酸的密碼子變成了終止密碼子的突變。30同義突變：堿基對(duì)的取代并不都是引起錯(cuò)義突變和翻譯終止，有時(shí)雖然有堿基被取代，但在蛋白質(zhì)水平上沒有引起變化，氨基酸沒有被取代，這是因?yàn)橥蛔兒蟮拿艽a子和原來的密碼子代表同一個(gè)氨基酸的突變。31移碼突變：在編碼序列中，單個(gè)堿基、數(shù)個(gè)堿基的缺失或插入以及片段的缺失或插入等均可以使突變位點(diǎn)之后的三聯(lián)體密碼閱讀框發(fā)生改變，不能編碼原來的蛋白質(zhì)的突變。32癌基因：是細(xì)胞內(nèi)控制細(xì)胞生長的基因，具有潛在的誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的特性。當(dāng)癌基因結(jié)構(gòu)或表達(dá)發(fā)生異常時(shí)，其產(chǎn)物可使細(xì)胞無限制增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。包括病毒癌基因和細(xì)胞癌基因。33細(xì)胞癌基因：存在于正常的細(xì)胞基因組中，與病毒癌基因有同源序列，具有促進(jìn)正常細(xì)胞生長、增殖、分化和發(fā)育等生理功能。在正常細(xì)胞內(nèi)未激活的細(xì)胞癌基因叫原癌基因，當(dāng)其受到某些條件激活時(shí)，結(jié)構(gòu)和表達(dá)發(fā)生異常，能使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。34病毒癌基因：存在于病毒（大多是逆轉(zhuǎn)錄病毒）基因組中能使靶細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的基因。它不編碼病毒結(jié)構(gòu)成分，對(duì)病毒無復(fù)制作用，但是當(dāng)受到外界的條件激活時(shí)可產(chǎn)生誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生的作用。35基因診斷：以DNA或RNA為診斷材料，通過檢查基因的存在、結(jié)構(gòu)缺陷或表達(dá)異常，對(duì)人體的狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過程。36RFLP：即限制性片段長度多態(tài)性，個(gè)體之間DNA的核苷酸序列存在差異，稱為DNA多態(tài)性。若因此而改變了限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)則可導(dǎo)致相應(yīng)的限制性片段的長度和數(shù)量發(fā)生變化，稱為RFLP。37基因治療：一般是指將限定的遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)入患者特定的靶細(xì)胞，以最終達(dá)到預(yù)防或改變特殊疾病狀態(tài)為目的治療方法。38反義RNA：堿基序列正好與有意義的mRNA互補(bǔ)的RNA稱為反義RNA?？梢宰鳛橐环N調(diào)控特定基因表達(dá)的手段。39核酶：是一種可以催化RNA切割和RNA剪接反應(yīng)的由RNA組成的酶，可以作為基因表達(dá)和病毒復(fù)制的抑制劑。40三鏈DNA：當(dāng)某一DNA或RNA寡核苷酸與DNA高嘌呤區(qū)可結(jié)合形成三鏈，能特異地結(jié)合在DNA的大溝中，并與富含嘌呤鏈上的堿基形成氫鍵。41SSCP：單鏈構(gòu)象多態(tài)性檢測(cè)是一種基于DNA構(gòu)象差別來檢測(cè)點(diǎn)突變的方法。相同長度的單鏈DNA，如果堿基序列不同，形成的構(gòu)象就不同，這樣就形成了單鏈構(gòu)象多態(tài)性。42管家基因：在生物體生命的全過程都是必須的，且在一個(gè)生物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)的基因。43細(xì)胞全能性：指同一種生物的所有細(xì)胞都含有相同的DNA，即基因的數(shù)目和種類是一樣的，但在不同階段，同一個(gè)體的不同組織和器官中基因表達(dá)的種類和數(shù)目是不同的。44SD序列：轉(zhuǎn)錄出的mRNA要進(jìn)入核糖體上進(jìn)行翻譯，需要一段富含嘌呤的核苷酸序列與大腸桿菌16SrRNA3，末端富含嘧啶的序列互補(bǔ)，是核糖體的識(shí)別位點(diǎn)。45反義核酸技術(shù)：是通過合成一種短鏈且與DNA或RNA互補(bǔ)的，以DNA或RNA為目標(biāo)抑制翻譯的反義分子，干擾目的基因的轉(zhuǎn)錄、剪接、轉(zhuǎn)運(yùn)、翻譯等過程的技術(shù)。46核酸探針：探針是指能與某種大分子發(fā)生特異性相互作用，并在相互作用之后可以檢測(cè)出來的生物大分子。核酸探針是指能識(shí)別特異堿基順序的帶有標(biāo)記的一段DNA或RNA分子。47周期蛋白：是一類呈細(xì)胞周期特異性或時(shí)相性表達(dá)、累積與分解的蛋白質(zhì)，它與周期素依賴性激酶共同影響細(xì)胞周期的運(yùn)行。48CAP：是大腸桿菌分解代謝物基因活化蛋白，這種蛋白可將葡萄糖饑餓信號(hào)傳遞個(gè)許多操縱子，使細(xì)菌在缺乏葡萄糖時(shí)可以利用其他碳源。問答題（一）、病毒、原核、真核基因組的特點(diǎn)？答：1、病毒基因組的特點(diǎn)：種類單一；②單倍體基因組：每個(gè)基因組在病毒中只出現(xiàn)一次；③形式多樣；④大小不一；⑤基因重疊；⑥動(dòng)物/細(xì)菌病毒與真核/原核基因相似：內(nèi)含子；⑦具有不規(guī)則的結(jié)構(gòu)基因；⑧基因編碼區(qū)無間隔：通過宿主及病毒本身酶切；⑨無帽狀結(jié)構(gòu)；⑩結(jié)構(gòu)基因沒有翻譯起始序列。2、原核基因組的特點(diǎn)：①為一條環(huán)狀雙鏈DNA；②只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；③具有操縱子結(jié)構(gòu)；④絕大部分為單拷貝；⑤可表達(dá)基因約50%，大于真核生物小于病毒；⑥基因一般是連續(xù)的，無內(nèi)含子；⑦重復(fù)序列很少。3、真核基因組的特點(diǎn)：①真核生物基因組遠(yuǎn)大于原核生物基因組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)龐大，具有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；②基因組DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成染色體，儲(chǔ)存于細(xì)胞核內(nèi)；③真核基因?yàn)閱雾樂醋?，而?xì)菌和病毒的結(jié)構(gòu)基因多為多順反子；④基因組中非編碼區(qū)多于編碼區(qū)；⑤真核基因多為不連續(xù)的斷裂基因，由外顯子和內(nèi)含子鑲嵌而成；⑥存在大量的重復(fù)序列；⑦功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族；⑧存在可移動(dòng)的遺傳因素；⑨體細(xì)胞為雙倍體，而精子和卵子為單倍體。（二）、乳糖操縱子的作用機(jī)制？答：1、乳糖操縱子的組成：大腸桿菌乳糖操縱子含Z、Y、A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列O，一個(gè)啟動(dòng)子P和一個(gè)調(diào)節(jié)基因I。2、阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)：沒有乳糖存在時(shí)，I基因編碼的阻遏蛋白結(jié)合于操縱序列O處，乳糖操縱子處于阻遏狀態(tài)，不能合成分解乳糖的三種酶；有乳糖存在時(shí)，乳糖作為誘導(dǎo)物誘導(dǎo)阻遏蛋白變構(gòu)，不能結(jié)合于操縱序列，乳糖操縱子被誘導(dǎo)開放合成分解乳糖的三種酶。所以，乳糖操縱子的這種調(diào)控機(jī)制為可誘導(dǎo)的負(fù)調(diào)控。3、CAP的正性調(diào)節(jié)：在啟動(dòng)子上游有CAP結(jié)合位點(diǎn)，當(dāng)大腸桿菌從以葡萄糖為碳源的環(huán)境轉(zhuǎn)變?yōu)橐匀樘菫樘荚吹沫h(huán)境時(shí)，cAMP濃度升高，與CAP結(jié)合，使CAP發(fā)生變構(gòu)，CAP結(jié)合于乳糖操縱子啟動(dòng)序列附近的CAP結(jié)合位點(diǎn)，激活RNA聚合酶活性，促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合于操縱子后促進(jìn)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄，對(duì)乳糖操縱子實(shí)行正調(diào)控，加速合成分解乳糖的三種酶。4、協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)：乳糖操縱子中的I基因編碼的阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控與CAP的正調(diào)控兩種機(jī)制，互相協(xié)調(diào)、互相制約。（三）、真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制？答：真核生物在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控主要是通過反式作用因子、順式作用元件和RNA聚合酶的相互作用來完成的，主要是反式作用因子結(jié)合順式作用元件后影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過程。轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成：真核生物RNA聚合酶識(shí)別的是由通用轉(zhuǎn)錄因子與DNA形成的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物，只有當(dāng)一個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到DNA上，形成有功能的啟動(dòng)子，才能被RNA聚合酶所識(shí)別并結(jié)合。轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成過程為：TFⅡD結(jié)合TATA盒；RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合TFⅡD-DNA復(fù)合物形成一個(gè)閉合的復(fù)合物；其他轉(zhuǎn)錄因子與RNA聚合酶結(jié)合形成一個(gè)開放復(fù)合物。在這個(gè)過程中，反式作用因子的作用是：促進(jìn)或抑制TFⅡD與TATA盒結(jié)合；促進(jìn)或抑制RNA聚合酶與TFⅡD-DNA復(fù)合物的結(jié)合；促進(jìn)或抑制轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成。反式作用因子：一般具有三個(gè)功能域（DNA識(shí)別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域和結(jié)合其他蛋白結(jié)合域）；能識(shí)別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)中的順式作用元件；對(duì)基因的表達(dá)有正性或負(fù)性調(diào)控作用。轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控：⑴反式作用因子的活性調(diào)節(jié)：①表達(dá)式調(diào)節(jié)——反式作用因子合成出來就具有活性；②共價(jià)修飾——磷酸化和去磷酸化，糖基化；③配體結(jié)合——許多激素受體是反式作用因子；④蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用——蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)復(fù)合物的解離與形成。⑵反式作用因子與順式作用元件的結(jié)合：反式作用因子被激活后，即可識(shí)別并結(jié)合上游啟動(dòng)子元件和增強(qiáng)子中的保守性序列，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄起調(diào)節(jié)作用。⑶反式作用因子的作用方式——成環(huán)、扭曲、滑動(dòng)、Oozing。⑷反式作用因子的組合式調(diào)控作用：每一種反式作用因子結(jié)合順式作用元件后雖然可以發(fā)揮促進(jìn)或抑制作用，但反式作用因子對(duì)基因調(diào)控不是由單一因子完成的而是幾種因子組合發(fā)揮特定的作用。（四）、真核生物轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控機(jī)制？答：（1）、5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化的調(diào)控意義：5，端加帽和3，端多聚腺苷酸化是保持mRNA穩(wěn)定的一個(gè)重要因素，它至少保證mRNA在轉(zhuǎn)錄過程中不被降解。（2）、mRNA選擇性剪接對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的作用（3）、mRNA運(yùn)輸?shù)目刂疲ㄎ澹⑹荏w的特點(diǎn)？答：1、高度專一性；2、高度親和性；3、可逆性；4、可飽和性；5、特定的作用模式（六）、表皮生長因子介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑？答：表皮生長因子受體是一個(gè)典型的蛋白酪氨酸激酶受體，這個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的主要步驟是：受體二聚化的形成及其磷酸化：表皮生長因子與受體的結(jié)合使受體發(fā)生二聚化，從而改變受體構(gòu)象，使蛋白酪氨酸激酶活性增強(qiáng)，受體自身的幾個(gè)蛋白酪氨酸殘基在激酶的作用下發(fā)生磷酸化。募集接頭蛋白Grb2：表皮生長因子受體自身被磷酸化后，不僅其激酶活性增強(qiáng)，而且其構(gòu)象發(fā)生變化，從而適合與含SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白分子相結(jié)合。Grb2是作為接頭蛋白結(jié)合到受體上。調(diào)控分子SOS的活化：SOS含有可與SH3結(jié)構(gòu)域相結(jié)合的富含脯氨酸基序，當(dāng)Grb2結(jié)合到磷酸化的表皮生長因子受體后，它的兩個(gè)SH3結(jié)構(gòu)域即可結(jié)合SOS，使之活化。低分子量G蛋白R(shí)as的活化：SOS可促進(jìn)Ras釋放GDP，結(jié)合GTP的反應(yīng)，使Ras激活?；罨腞as作用其下游分子Raf，使之活化。Raf是MAPK級(jí)聯(lián)反應(yīng)的第一個(gè)分子，由此啟動(dòng)了MAPK的三級(jí)激活過程。MAPK的級(jí)聯(lián)激活：Raf是一種MAPKKK，它作用于MEK，使之磷酸化而激活，活化的MEK在作用于MAPK家族的ERK1，使之磷酸化激活由此完成了三級(jí)激活。轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化及轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用：活化的ERK可以轉(zhuǎn)至細(xì)胞核內(nèi)，使某些轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子發(fā)生磷酸化，從而影響基因的轉(zhuǎn)錄。（七）、cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑？答：1、組成：胞外信息分子（主要是胰高血糖素、腎上腺素和促腎上腺皮質(zhì)激素），受體，G蛋白，AC，cAMP,PKA。2、途徑：信號(hào)分子與受體結(jié)合，引起受體構(gòu)象變化受體活化G蛋白活化后的G蛋白激活腺苷酸環(huán)化酶（AC）AC催化ATP生成cAMPcAMP活化PKA，PKA使目標(biāo)蛋白磷酸化，調(diào)節(jié)代謝酶的活性或調(diào)節(jié)基因的表達(dá)（八）、IP3-Ca2+信號(hào)途徑：信號(hào)分子與受體結(jié)合，引起受體構(gòu)象變化受體活化G蛋白活化后的G蛋白激活PLCPLC水解PIP2生成IP3和DGIP3使鈣通道打開，細(xì)胞內(nèi)Ca2+升高Ca2+與CaM結(jié)合，激活Ca2+-CaM依賴的蛋白激酶Ca2+-CaM依賴的蛋白激酶使目標(biāo)蛋白磷酸化。（九）、分子克隆中常用的工具酶及良好載體的條件？答：（1）、常用的工具酶限制性核酸內(nèi)切酶：是細(xì)菌產(chǎn)生的一類能識(shí)別和切割雙鏈DNA分子內(nèi)特定的堿基順序的核酸水解酶。DNA連接酶：將兩段DNA分子拼接起來的酶。DNA聚合酶：催化單核苷酸鏈延伸。逆轉(zhuǎn)錄酶：依賴于RNA的DNA聚合酶，這是一種有效的轉(zhuǎn)錄RNA成為DNA的酶，產(chǎn)物DNA又稱互補(bǔ)DNA。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶：將脫氧核糖核酸加到DNA的3末端。堿性磷酸酶：催化去除DNA、RNA等的5磷酸基團(tuán)。依賴DNA的RNA聚合酶：識(shí)別特異性啟動(dòng)子，RNA轉(zhuǎn)錄。（2）、良好載體的條件1、必須有自身的復(fù)制子；2、載體分子上必須有限制性核酸內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)，即多克隆位點(diǎn)，以供外源DNA插入；3、載體應(yīng)具有可供選擇的遺傳標(biāo)志，以區(qū)別陽性重組子和陰性重組子；4、載體分子必須有足夠的容量；5、可通過特定的方法導(dǎo)入細(xì)胞；6、對(duì)于表達(dá)載體還應(yīng)具備與宿主細(xì)胞相適應(yīng)的啟動(dòng)子、前導(dǎo)順序、增強(qiáng)子、加尾信號(hào)等DNA調(diào)控元件。（十）、藍(lán)-白篩選的原理？答：某些質(zhì)粒帶有大腸桿菌的半乳糖苷酶基因片段，在半乳糖苷酶基因的基因區(qū)外又另外引入了一段含多種單一限制酶位點(diǎn)的DNA序列。這些位點(diǎn)上如果沒有克隆外源性DNA片段，在質(zhì)粒被導(dǎo)入lac-的大腸桿菌后，質(zhì)粒攜帶的半乳糖苷酶基因?qū)⒄１磉_(dá)，與大腸桿菌的半乳糖苷酶基因互補(bǔ)，產(chǎn)生有活性的半乳糖苷酶，加入人工底物X-gal和誘導(dǎo)劑IPTG后，出現(xiàn)藍(lán)色的菌落。如果在多克隆位點(diǎn)上插入外源DNA片段，將使lacZ基因滅活，不能生成半乳糖苷酶，結(jié)果菌落出現(xiàn)白色。由于這種顏色標(biāo)志，重組克隆和非重組克隆的區(qū)分一目了然。（十一）SANGER雙脫氧鏈終止法的原理？答：DNA鏈中核苷酸以3’,5’-磷酸二酯鍵連接，合成DNA所用的底物是2’-脫氧核苷三磷酸。2’,3’ddNTP與普通dNTP不同，它們?cè)诿撗鹾颂堑?’位置缺少一個(gè)羥基。在DNA聚合酶作用下通過三磷酸基團(tuán)摻入到延伸的DNA鏈中，但由于沒有3’羥基，不能同后續(xù)的dNTP形成磷酸二酯鍵，因此，正在延伸的DNA鏈不能繼續(xù)延伸。在DNA合成反應(yīng)混合物的4種普通dNTP中加入少量的一種ddNTP，鏈延伸將與偶然發(fā)生但卻十分特異的鏈終止競爭，產(chǎn)物是一系列的核苷酸鏈，其長度取決于引物末端到出現(xiàn)過早鏈終止位置間的距離。在4組獨(dú)立酶反應(yīng)中分別采用4種不同的ddNTP，結(jié)果將產(chǎn)生4組寡核苷酸，它們將分別終止于模板鏈的A、C、G或T位置。（十二）、核酸分子雜交的原理？答：具有互補(bǔ)序列的兩條單鏈核酸分子在一定的條件下（適宜的溫度及離子強(qiáng)度等）堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合，重新形成雙鏈；在這一過程中，核酸分子經(jīng)歷了變性和復(fù)性的變化，以及在復(fù)性過程中個(gè)分子間鍵的形成和斷裂。雜交的雙方是待測(cè)核酸和已知序列。（十三）、影響雜交的因素？答：1、核酸分子的濃度和長度：核酸濃度越大，復(fù)性速度越快。探針長度應(yīng)控制在50-300個(gè)堿基對(duì)為好。2、溫度：溫度過高不利于復(fù)性，而溫度過低，少數(shù)堿基配對(duì)形成的局部雙鏈不易解離，適宜的溫度是較TM值低25度。3、離子強(qiáng)度：在低離子強(qiáng)度下，核酸雜交非常緩慢，隨著離子強(qiáng)度的增加，雜交反應(yīng)率增加。高濃度的鹽使堿基錯(cuò)配的雜交體更穩(wěn)定，所以進(jìn)行序列不完全同源的核酸分子雜交時(shí)必須維持雜交反應(yīng)液中的鹽濃度和洗膜液中的鹽濃度。4、雜交液中的甲酰胺：甲酰胺能降低核酸雜交的TM值。它有以下優(yōu)點(diǎn)：在低溫下探針更穩(wěn)定；能更好地保留非共價(jià)結(jié)合的核酸。5、核酸分子的復(fù)雜性：是指存在于反應(yīng)體系中的不同順序的總長度。兩個(gè)不同基因組DNA變性后的相對(duì)雜交速率取決于樣品濃度絕對(duì)一致時(shí)的相對(duì)復(fù)雜性（即DNA中的堿基數(shù)）。6、非特異性雜交反應(yīng)：在雜交前應(yīng)對(duì)非特異性雜交反應(yīng)位點(diǎn)進(jìn)行封閉，以減少其對(duì)探針的非特異性吸附作用。（十四）、探針的種類和優(yōu)缺點(diǎn)？答：1、cDNA探針：通過逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA后，將其克隆于適當(dāng)?shù)目寺≥d體，通過擴(kuò)增重組質(zhì)粒而使cDNA得到大量的擴(kuò)增。提取質(zhì)粒后分離純化作為探針使用。它是目前應(yīng)用最為廣泛的一種探針。2、基因組探針：從基因組文庫里篩選得到一個(gè)特定的基因或基因片段的克隆后，大量擴(kuò)增、純化，切取插入片段，分離純化為探針。3、寡核苷酸探針：根據(jù)已知的核酸順序，采用DNA合成儀合成一定長度的寡核苷酸片段作為探針。4、RNA探針：采用基因克隆和體外轉(zhuǎn)錄的方法可以得到RNA或反義RNA作為探針。（十五）、探針的標(biāo)記法？答：1、缺口平移法：此法是利用適當(dāng)濃度的DNaseⅠ在DNA雙鏈上隨機(jī)切割單鏈，造成單鏈切口。切口處產(chǎn)生一個(gè)5末端和3末端，3末端就可以作為引物，在大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的催化下，以互補(bǔ)的DNA單鏈為摸板，依次將dNTP連接到切口的3末端的羥基上，合成新的DNA單鏈；同時(shí)DNA聚合酶Ⅰ的5→3的核酸外切酶活性在切口處將舊鏈從5末端逐步切除，新合成鏈不斷延伸，從而使原DNA分子上的部分核苷酸殘基被標(biāo)記的核苷酸所取代。2、隨機(jī)引物法：隨機(jī)引物是人工合成的長度為6個(gè)寡核苷酸殘基的寡聚核苷酸片段的混合物。對(duì)于任何一個(gè)用作探針的DNA片段，隨機(jī)引物混合物中都會(huì)有一些六核苷酸片段可以與之結(jié)合，起到DNA合成引物的作用。將這些引物與變性的DNA單鏈結(jié)合后，以4種dNTP（其中一種是標(biāo)記物標(biāo)記的dNTP）為底物，合成與探針DNA互補(bǔ)的切帶有標(biāo)記物的DNA探針。3、PCR標(biāo)記法：在PCR反應(yīng)底物中，將一種dNTP換成標(biāo)記物標(biāo)記的dNTP，這樣標(biāo)記的dNTP就在PCR反應(yīng)的同時(shí)摻入到新合成的DNA鏈上。4、末端標(biāo)記法：只是將DNA片段的一端進(jìn)行標(biāo)記。（十六）、PCR的基本原理？答：PCR是在試管中進(jìn)行的DNA復(fù)制反應(yīng)，基本原理是依據(jù)細(xì)胞內(nèi)DNA半保留復(fù)制的機(jī)理，以及體外DNA分子于不同溫度下雙鏈和單鏈可以互相轉(zhuǎn)變的性質(zhì)，人為地控制體外合成系統(tǒng)的溫度，以促使雙鏈DNA變成單鏈，單鏈DNA與人工合成的引物退火，然后耐熱DNA聚合酶以dNTP為原料使引物沿著單鏈模板延伸為雙鏈DNA。PCR全過程每一步的轉(zhuǎn)換是通過溫度的改變來控制的。需要重復(fù)進(jìn)行DNA模板解鏈、引物與模板DNA結(jié)合、DNA聚合酶催化新生DNA的合成，即高溫變性、低溫退火、中溫延伸３個(gè)步驟構(gòu)成PCR反應(yīng)的一個(gè)循環(huán)，此循環(huán)的反復(fù)進(jìn)行，就可使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。DNA模板變性：模板雙鏈DNA?單鏈DNA，94℃。退火：引物＋單鏈DNA?雜交鏈，引物的Tm值。引物的延伸：溫度至70℃左右，TaqDNA聚合酶以４種dNTP為原料，以目的DNA為模板，催化以引物３’末端為起點(diǎn)的5’→3’DNA鏈延伸反應(yīng)，形成新生DNA鏈。新合成的引物延伸鏈經(jīng)過變性后又可作為下一輪循環(huán)反應(yīng)的模板PCR，就是如此反復(fù)循環(huán)，使目的DNA得到高效快速擴(kuò)增。（十七）、PCR引物設(shè)計(jì)的基本要求？答：1、引物長度一般為15～30個(gè)核苷酸。過短影響PCR的特異性，過長會(huì)提高相應(yīng)退火溫度，使延伸溫度超過TaqDNA聚合酶最適溫度74℃,影響產(chǎn)物的生成。2、引物的堿基盡可能隨機(jī)，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶堿基堆積現(xiàn)象。3’端不應(yīng)有連續(xù)3個(gè)G和C。否則會(huì)使引物和模板錯(cuò)誤配對(duì)。G+C含量一般占45％-55％。3’端和5’端引物具有相似的Tm值,Tm值計(jì)算公式：Tm＝4(G+C)+2(A+T)3、引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列以避免折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。引物的連續(xù)互補(bǔ)序列，一般不超過3bp。4、兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其應(yīng)避免3’端的互補(bǔ)重疊。5、引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不超過70％，引物3’末端連續(xù)8個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。6、引物3’端堿基是引發(fā)延伸的起點(diǎn)，因此一定要與模板DNA配對(duì)。引物3’端最佳堿基選擇是G和C，形成的堿基配對(duì)比較穩(wěn)定。7、引物與模板結(jié)合時(shí)，引物的5’端最多可以游離十幾個(gè)堿基而不影響PCR反應(yīng)的進(jìn)行。8、引物的5’端可以修飾，如附加限制酶位點(diǎn)，引入突變位點(diǎn)，用生物素、熒光物質(zhì)、地高辛標(biāo)記，加入其它短序列包括起始密碼子、終止密碼子等。（十八）、PCR的反應(yīng)條件？答：1、PCR反應(yīng)的緩沖液：Tris-HCl緩沖液KCl促進(jìn)引物的退火，濃度太高時(shí)會(huì)抑制TaqDNA聚合酶活性。加入BSA或明膠有利于保護(hù)TaqDNA聚合酶活性。必要時(shí)加入適量二甲基亞砜(DMSO)或甲酰胺利于破壞模板二級(jí)結(jié)構(gòu)，提高PCR反應(yīng)特異性。2、鎂離子濃度一般用量1.5-2.0mmol/L，TaqDNA聚合酶活性需要Mg2+。Mg2+濃度過低，會(huì)顯著降低酶活性。Mg2+濃度過高又使酶催化非特異性擴(kuò)增增強(qiáng)。Mg2+濃度還會(huì)影響引物的退火、模板與PCR產(chǎn)物的解鏈溫度，從而影響擴(kuò)增片段的產(chǎn)率。3、底物濃度工作濃度20-200umol/L，dNTPs濃度過高可加快反應(yīng)速度，也增加堿基的錯(cuò)配率和實(shí)驗(yàn)成本。降低濃度會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)速度下降，可提高反應(yīng)的特異性。在PCR反應(yīng)中，4種dNTP必須以等摩爾濃度配制，以減少PCR反應(yīng)的錯(cuò)配誤差并提高使用效率。4、TaqDNA聚合酶75-80℃時(shí)具有最高的聚合酶活性，150個(gè)核苷酸/秒；具有良好的熱穩(wěn)定性，95℃仍有活性，應(yīng)用濃度一般為1-2.5u/100ul反應(yīng)體積。5、引物0.1-0.5umol/L。引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配或非特異性擴(kuò)增、生成引物二聚體，使目的DNA片段產(chǎn)率下降。退火溫度與引物Tm值有關(guān)，引物Tm值在55-80℃范圍較為理想。6、反應(yīng)溫度和循環(huán)次數(shù)（十九）、影響大腸桿菌系統(tǒng)外源基因表達(dá)的因素？答：1、啟動(dòng)子的強(qiáng)弱；2、基因的劑量；3、影響RNA轉(zhuǎn)錄和翻譯效率的因素：SD序列、mRNA；4、外源基因密碼子的選擇；5、表達(dá)產(chǎn)物的大??；6、表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性。（二十）、大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)外源基因必須具備的條件？答：1、要求外源基因的編碼區(qū)不能含有內(nèi)含子；2、表達(dá)的外源片段要位于大腸桿菌啟動(dòng)子的下游，并形成正確的閱讀框架；3、轉(zhuǎn)錄出的mRNA必須有與大腸桿菌16SrRNA3，末端相匹配的SD序列，才能被有效的翻譯成蛋白質(zhì)。4、蛋白產(chǎn)物必須穩(wěn)定，不易被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶快速降解，且對(duì)宿主無害。（二十一）、真核細(xì)胞表達(dá)外源基因的條件？答：1、首先必須具備哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)的功能元件。要求哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體帶有能在真核細(xì)胞中表達(dá)外源基因的真核轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件；2、注意選擇轉(zhuǎn)染的受體細(xì)胞，不同類型的細(xì)胞具有不同的特性；3、注意選擇適當(dāng)?shù)倪x擇標(biāo)記。（二十二）、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的概念、原理及應(yīng)用？答：1、概念：是指用人工方法將外源基因?qū)牖蛘系交蚪M內(nèi)，并能穩(wěn)定傳代的一類動(dòng)物。它的特點(diǎn)是“分子及細(xì)胞水平操作，組織及動(dòng)物整體水平表達(dá)”。2、基本原理：將目的基因或基因組片段用顯微注射等方法注入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞中，使目的基因整合到基因組中，然后將此受精卵或著床前的胚胎細(xì)胞再植入受體動(dòng)物的輸卵管或子宮中，使其發(fā)育成攜帶有外源基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，人們可以通過分析轉(zhuǎn)基因和動(dòng)物表型的關(guān)系，揭示外源基因的功能；也可以通過轉(zhuǎn)入外源基因培育優(yōu)良的動(dòng)物品種。3、應(yīng)用：建立用于研究外源基因表達(dá)調(diào)控體系；建立醫(yī)學(xué)中常用的疾病模型；培育動(dòng)物新品種；藥理學(xué)和藥用蛋白的生產(chǎn)研究。（二十三）、基因敲除的基本程序？答：通過DNA同源重組，使得胚胎干細(xì)胞特定的內(nèi)源基因被破壞而造成功能喪失，然后通過胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)得到該基因喪失的小鼠模型的過程稱為基因敲除。打靶載體的構(gòu)建：同源序列要足夠長，要含有篩選用的標(biāo)志基因。胚胎干細(xì)胞的體外培養(yǎng)打靶載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞同源重組胚胎干細(xì)胞的篩選基因敲除胚胎干細(xì)胞注射入胚泡胚泡植入假孕小鼠的子宮中雜交育種獲得純合的基因敲除動(dòng)物（二十四）、DNA芯片的原理？答：DNA芯片技術(shù)就是一種大規(guī)模的集成的固相核酸分子雜交，以大量已知堿基序列的寡核苷酸片段為探針，檢測(cè)樣品中哪些核酸序列與其互補(bǔ)，然后通過定性定量分析得出待測(cè)樣品的基因序列及表達(dá)的信息。其方法包括芯片的制備、樣品的準(zhǔn)備、分子雜交和檢測(cè)分子。（二十五）、誘變劑的作用機(jī)制？答：1、堿基的類似物誘發(fā)突變2、改變DNA的化學(xué)結(jié)構(gòu)3、結(jié)合到DNA分子上誘發(fā)移碼突變4、紫外線及其他射線引起的DNA分子的變化（二十六）、突變類型及其遺傳效應(yīng)？答：1、突變類型：點(diǎn)突變：DNA大分子上一個(gè)堿基的變異。分為轉(zhuǎn)換和顛換。缺失：一個(gè)堿基或一段核苷酸鏈從DNA大分子上消失。插入：一個(gè)原來沒有的堿基或一段原來沒有的核苷酸鏈插入到DNA大分子中間。倒位：DNA鏈內(nèi)重組，使其中一段方向倒置。2、突變的遺傳效應(yīng)：①遺傳密碼的改變：錯(cuò)義突變、無義突變、同義突變、移碼突變對(duì)mRNA剪接的影響：一是使原來的剪接位點(diǎn)消失；二是產(chǎn)生新的剪接位點(diǎn)。蛋白質(zhì)肽鏈中的片段缺失：（二十七）、基因治療的策略？答：1、基因置換或稱基因矯正：特定的目的基因?qū)胩囟ǖ募?xì)胞，通過定位重組，讓導(dǎo)入的正?；蛑脫Q基因組內(nèi)原有的缺陷基因，不涉及基因組的任何改變。2、基因添加或稱基因增補(bǔ)：通過導(dǎo)入外源基因使靶細(xì)胞表達(dá)其本身不表達(dá)的基因。3、基因干預(yù)：采用特定的方式抑制某個(gè)基因的表達(dá)，或者通過破壞某個(gè)基因而使之不能表達(dá)，以達(dá)到治療疾病的目的。基因標(biāo)記：基因標(biāo)記實(shí)驗(yàn)是基因治療的前奏，并不在于直接治療疾病而是期望能夠提供有關(guān)正常細(xì)胞生物學(xué)和疾病病理方面的信息。（二十八）、基因診斷常用的生物學(xué)技術(shù)。（二十九）、簡述重組DNA技術(shù)的過程。蛋白質(zhì)的生物合成(一)名詞解釋1．翻譯2．密碼子3．密碼的簡并性4．同義密碼子5．變偶假說6．移碼突變7．同功受體8．多核糖體(二)問答題1．參與蛋白質(zhì)生物合成體系的組分有哪些?它們具有什么功能?2．遺傳密碼是如何破譯的?3．遺傳密碼有什么特點(diǎn)?4．簡述三種RNA在蛋白質(zhì)生物合成中的作用。5．簡述核糖體的活性中心的二位點(diǎn)模型及三位點(diǎn)模型的內(nèi)容。6．氨基酸在蛋白質(zhì)合成過程中是怎樣被活化的?7．簡述蛋白質(zhì)生物合成過程。8．蛋白質(zhì)合成中如何保證其翻譯的正確性?9．原核細(xì)胞和真核細(xì)胞在合成蛋白質(zhì)的起始過程有什么區(qū)別。10．蛋白質(zhì)合成后的加工修飾有哪些內(nèi)容?11．蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)是怎樣形成的?12．真核細(xì)胞與原核細(xì)胞核糖體組成有什么不同?如何證明核糖體是蛋白質(zhì)的合成場所?13.已知一種突變的噬菌體蛋白是由于單個(gè)核苷酸插入引起的移碼突變的，將正常的蛋白質(zhì)和突變體蛋白質(zhì)用胰蛋白酶消化后，進(jìn)行指紋圖分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有一個(gè)肽段的差異，測(cè)得其基酸順序如下：

正常肽段Met-Val-Cys-Val-Arg

突變體肽段Met-Ala-Met-Arg

（1）什么核苷酸插入到什么地方導(dǎo)致了氨基酸順序的改變？

（2）推導(dǎo)出編碼正常肽段和突變體肽段的核苷酸序列.

提示：有關(guān)氨基酸的簡并密碼分別為

Val:GUUGUCGUAGUGArg:CGUCGCCGACGAGAAGG

Cys:UGUUGCAla:GCUGCCGCACGC14.試列表比較核酸與蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。15.試比較原核生物與真核生物的翻譯。(三)填空題1．蛋白質(zhì)的生物合成是以___________為模板，以___________為原料直接供體，以_________為合成楊所。2．生物界共有______________個(gè)密碼子，其中___________個(gè)為氨基酸編碼，起始密碼子為_________；終止密碼子為_______、__________、____________。3．原核生物的起始tRNA以___________表示，真核生物的起始tRNA以___________表示，延伸中的甲硫氨酰tRNA以__________表示。4．植物細(xì)胞中蛋白質(zhì)生物合成可在__________、___________和___________三種細(xì)胞器內(nèi)進(jìn)行。5．延長因子T由Tu和Ts兩個(gè)亞基組成，Tu為對(duì)熱___________蛋白質(zhì)，Ts為對(duì)熱________蛋白質(zhì)。6．原核生物中的釋放因子有三種，其中RF-1識(shí)別終止密碼子_____________、____________；RF-2識(shí)別__________、____________；真核中的釋放因子只有___________一種。7．氨酰-tRNA合成酶對(duì)__________和相應(yīng)的________有高度的選擇性。8．原核細(xì)胞的起始氨基酸是_______，起始氨酰-tRNA是____________。9．原核細(xì)胞核糖體的___________亞基上的__________協(xié)助辨認(rèn)起始密碼子。l0．每形成一個(gè)肽鍵要消耗_____________個(gè)高能磷酸鍵，但在合成起始時(shí)還需多消耗___________個(gè)高能磷酸鍵。11．肽基轉(zhuǎn)移酶在蛋白質(zhì)生物合成中的作用是催化__________形成和_________的水解。12．肽鏈合成終止時(shí)，___________進(jìn)人“A”位，識(shí)別出_________，同時(shí)終止因子使________的催化作用轉(zhuǎn)變?yōu)開___________。13．原核生物的核糖體由____________小亞基和____________大亞基組成，真核生物核糖體由_________小亞基和_______________大亞基組成。14.蛋白質(zhì)中可進(jìn)行磷酸化修飾的氨基酸殘基主要為_____________、____________、___________。(四)選擇題1．蛋白質(zhì)生物合成的方向是()。①從C→N端②定點(diǎn)雙向進(jìn)行③從N端、C端同時(shí)進(jìn)行④從N→C端2．不能合成蛋白質(zhì)的細(xì)胞器是()。①線粒體②葉綠體③高爾基體④核糖體3．真核生物的延伸因子是()。①EF—Tu②EF一2③EF--G④EF一14．真核生物的釋放因子是()。①RF②RF一1③RF一2④RF一35．能與tRNA反密碼子中的I堿基配對(duì)的是()。①A、G②C、U③U④U、C、A6．蛋白質(zhì)合成所需能量來自()。①ATP②GTP③ATP、GTP④GTP7．tRNA的作用是()。①將一個(gè)氨基酸連接到另一個(gè)氨基酸上②把氨基酸帶到mRNA位置上③將mRNA接到核糖體上④增加氨基酸的有效濃度8．關(guān)于核糖體的移位，敘述正確的是()。①空載tRNA的脫落發(fā)生在“A”位上②核糖體沿mRNA的3’→5’方向相對(duì)移動(dòng)③核糖體沿mRNA的5’→3’方向相對(duì)移動(dòng)④核糖體在mRNA上一次移動(dòng)的距離相當(dāng)于二個(gè)核苷酸的長度9．在蛋白質(zhì)合成中，下列哪一步不需要消耗高能磷酸鍵()。①肽基轉(zhuǎn)移酶形成肽鍵②氨酰一tRNA與核糖體的“A，’位點(diǎn)結(jié)合③核糖體沿mRNA移動(dòng)④fMet—tRNAf與mRNA的起始密碼子結(jié)合以及與大、小亞基的結(jié)合10．在真核細(xì)胞中肽鏈合成的終止原因是()。①已達(dá)到mRNA分子的盡頭②具有特異的tRNA識(shí)別終止密碼子③終止密碼子本身具有酯酶作用，可水解肽酰與tRNA之是的酯鍵④終止密碼子被終止因子(RF)所識(shí)別11．蛋白質(zhì)生物合成中的終止密碼是()。①UAA②UAU③UAC④UAG⑤UGA12．根據(jù)擺動(dòng)假說，當(dāng)tRNA反密碼子第1位堿基是I時(shí)，能夠識(shí)別哪幾種密碼子()①A②C③G④T⑤U13．下列哪些因子是真核生物蛋白質(zhì)合成的起始因子()。①IF1②IF2③eIF2④eIF4⑤elF4A14．蛋白質(zhì)生物合成具有下列哪些特征()。①氨基酸必須活化②需要消耗能量③每延長一個(gè)氨基酸必須經(jīng)過進(jìn)位、轉(zhuǎn)肽、移位、稅落四個(gè)步驟④合成肽鏈由C端向N端不斷延長⑤新生肽鏈需加工才能成為活性蛋白質(zhì)15．下列哪些內(nèi)容屬于蛋白質(zhì)合成后的加工、修飾()。①切除內(nèi)含子，連接外顯子②切除信號(hào)肽③切除N-端Met④形成二硫鍵⑤氨的側(cè)鏈修飾16．蛋白質(zhì)生物合成過程中，下列哪些步驟需要消耗能量()。①氨基酸分子的活化②70S起始復(fù)合物的形成③氨酰tRNA進(jìn)入核糖體A位④肽鍵形成⑤核糖體移位17．原核生物的肽鏈延伸過程有下列哪些物質(zhì)參與()。①肽基轉(zhuǎn)移酶②鳥苷三磷酸③mRNA④甲酰甲硫氨酰-tRNA⑤EF-Tu、EF-Ts、EF-G18.Shine-Dalgarno順序(SD-順序)是指:()①在mRNA分子的起始碼上游8-13個(gè)核苷酸處的順序

②在DNA分子上轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)前8-13個(gè)核苷酸處的順序

③16srRNA3'端富含嘧啶的互補(bǔ)順序④啟動(dòng)基因的順序特征⑤以上都正確19.在研究蛋白合成中,可利用嘌呤霉素,這是因?yàn)樗?()①使大小亞基解聚②使肽鏈提前釋放③抑制氨基酰-tRNA合成酶活性④防止多核糖體形成⑤以上都正確20.氨基酸活化酶：()①活化氨基酸的氨基②利用GTP作為活化氨基酸的能量來源

③催化在tRNA的5’磷酸與相應(yīng)氨基酸間形成酯鍵

④每一種酶特異地作用于一種氨基酸及相應(yīng)的tRNA⑤以上都不正確(五)是非題1．DNA不僅決定遺傳性狀，而且還直接表現(xiàn)遺傳性狀。()2．密碼子在mRNA上的閱讀方向?yàn)?’→3’。()3．每—種氨基酸都有兩種以上密碼子。()4．一種tRNA只能識(shí)別一種密碼子。()5．線粒體和葉綠體的核糖體的亞基組成與原核生物類似。()6．大腸桿菌的核糖體的小亞基必須在大亞基存在時(shí)，才能與mRNA結(jié)合。()7．大腸桿菌的核糖體的大亞基必須在小亞存在時(shí)，才能與mRNA結(jié)合。()8．在大腸桿菌中，一種氨基酸只對(duì)應(yīng)于一種氨酰-tRNA合成酶。()9．氨基酸活化時(shí)，在氨酰-tRNA合成酶的催化下，由ATP供能，消耗—個(gè)高能磷酸鍵。()10．線粒體和葉綠體內(nèi)的蛋白質(zhì)生物合成起始與原核生物相同。()11．每種氨基酸只能有一種特定的tRNA與之對(duì)應(yīng)。()12．AUG既可作為fMet-tRNAf和Met-tRNAi的密碼子，又可作為肽鏈內(nèi)部Met的密碼子。()13．構(gòu)成密碼子和反密碼子的堿基都只是A、U、C、G。()14．核糖體大小亞基的結(jié)合和分離與Mg2+，的濃度有關(guān)。()15．核糖體的活性中心“A”位和“P”位都主要在大亞基上。()16.E.coli中，DnaA與復(fù)制起始區(qū)DNA結(jié)合，決定復(fù)制的起始。()二、參考答案(一)名詞解釋1．翻譯(translation)：以mRNA為模板，氨酰-tRNA為原料直接供體，在多種蛋白質(zhì)因子和酶的參與下，在核糖體上將mRNA分子上的核苷酸順序表達(dá)為有特定氨基酸順序的蛋白質(zhì)的過程。2．密碼子(codon)：mRNA中堿基順序與蛋白質(zhì)中氨基酸順序的對(duì)應(yīng)關(guān)系是通過密碼實(shí)現(xiàn)的，mRNA中每三個(gè)相鄰的堿基決定一個(gè)氨基酸，這三個(gè)相鄰的堿基稱為一個(gè)密碼子。3．密碼的簡并性(degeneracy)：—個(gè)氨基酸具有兩個(gè)以上密碼子的現(xiàn)象。4．同義密碼子(synonymcodon)：為同—種氨基酸編碼的各個(gè)密碼子，稱為同義密碼了。5．變偶假說(wobblehypothesis)：指反密碼子的前兩個(gè)堿基(3’-端)按照標(biāo)準(zhǔn)與密碼子的前兩個(gè)堿基(5’-端)配對(duì)，而反密碼子中的第三個(gè)堿墓則有某種程度的變動(dòng)，使其有可能與幾種不同的堿基配對(duì)。6．移碼突變(frame-shiftmutation)：在mRNA中，若插入或刪去一個(gè)核苷酸，就會(huì)使讀碼發(fā)錯(cuò)誤，稱為移碼，由于移碼而造成的突變、稱移碼突變。7，同功受體(isoacceptor)：轉(zhuǎn)運(yùn)同一種氨基酸的幾種tRNA稱為同功受體。8．反密碼子(anticodon)：指tRNA反密碼子環(huán)中的三個(gè)核苷酸的序列，在蛋白質(zhì)合成過程中通過堿基配對(duì)，識(shí)別并結(jié)合到mRNA的特殊密碼上。9．多核糖體(polysome)：mRNA同時(shí)與若干個(gè)核糖體結(jié)合形成的念珠狀結(jié)構(gòu)，稱為多核糖體。(二)問答題1．①mRNA：蛋白質(zhì)合成的模板；②tRNA：蛋白質(zhì)合成的氨基酸運(yùn)載工具；③核糖體：蛋白質(zhì)合成的場所；④輔助因子：(a)起始因子—--參與蛋白質(zhì)合成起始復(fù)合物形成；(b)延長因子—--肽鏈的延伸作用；(c)釋放因子一--終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來。2．提示：三個(gè)突破性工作(1)體外翻譯系統(tǒng)的建立；(2)核糖體結(jié)合技術(shù)；(3)核酸的人工合成。3．(1)密碼無標(biāo)點(diǎn)：從起始密碼始到終止密碼止，需連續(xù)閱讀，不可中斷。增加或刪除某個(gè)核苷酸會(huì)發(fā)生移碼突變。(2)密碼不重疊：組成一個(gè)密碼的三個(gè)核苷酸只代表一個(gè)氨基酸，只使用一次，不重疊使用。(3)密碼的簡并性：在密碼子表中，除Met、Trp各對(duì)應(yīng)一個(gè)密碼外，其余氨基酸均有兩個(gè)以上的密碼，對(duì)保持生物遺傳的穩(wěn)定性具有重要意義。(4)變偶假說：密碼的專一性主要由頭兩位堿基決定，第三位堿基重要性不大，因此在與反密碼子的相互作用中具有一定的靈活性。(5)通用性及例外：地球上的一切生物都使用同一套遺傳密碼，但近年來已發(fā)現(xiàn)某些個(gè)別例外現(xiàn)象，如某些哺乳動(dòng)物線粒體中的UGA不是終止密碼而是色氨酸密碼子。(6)起始密碼子AUG，同時(shí)也代表Met，終止密碼子UAA、UAG、UGA使用頻率不同。4．(1)mRNA：DNA的遺傳信息通過轉(zhuǎn)錄作用傳遞給mRNA，mRNA作為蛋白質(zhì)合成模板，傳遞遺傳信息，指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成。(2)tRNA：蛋白質(zhì)合成中氨基酸運(yùn)載工具，tRNA的反密碼子與mRNA上的密碼子相互作用，使分子中的遺傳信息轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)的氨基酸順序是遺傳信息的轉(zhuǎn)換器。(3)rRNA核糖體的組分，在形成核糖體的結(jié)構(gòu)和功能上起重要作用，它與核糖體中蛋白質(zhì)以及其它輔助因子一起提供了翻譯過程所需的全部酶活性。5．(1)二位點(diǎn)模型A位：氨酰-tRNA進(jìn)入并結(jié)合的部位；P位：起始氨酰-tRNA或正在延伸的肽基-tRNA結(jié)合部位，也是無載的tRNA從核糖體上離開的部位。(2)三位點(diǎn)模型大腸桿菌上的70S核糖體上除A位和P位外，還存在第三個(gè)結(jié)合tRNA的位點(diǎn)，稱為E位，它特異地結(jié)合無負(fù)載的tRNA及無負(fù)載的tRNA最后從核糖體上離開的位點(diǎn)。6．催化氨基酸活化的酶稱氨酰-tRNA合成酶，形成氨酰-tRNA，反應(yīng)分兩步進(jìn)行：(1)活化需Mg2+和Mn2+，由ATP供能，由合成酶催化，生成氨基酸-AMP-酶復(fù)合物。，(2)轉(zhuǎn)移在合成酶催化下將氨基酸從氨基酸—AMP—酶復(fù)合物上轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的tRNA上，形成氨酰-tRNA。7．蛋白質(zhì)合成可分四個(gè)步驟，以大腸桿菌為例：(1)氨基酸的活化：游離的氨基酸必須經(jīng)過活化以獲得能量才能參與蛋白質(zhì)合成，由氨酰-tRNA合成酶催化，消耗1分子ATP，形成氨酰-tRNA。(2)肽鏈合成的起始：由起始因子參與，mRNA與30S小亞基、50S大亞基及起始甲酰甲硫氨酰-tRNA(fMet-tRNAt)形成70S起始復(fù)合物，整個(gè)過程需GTP水解提供能量。(3)肽鏈的延長：起始復(fù)合物形成后肽鏈即開始延長。首先氨酰-tRNA結(jié)合到核糖體的A位，然后，由肽酰轉(zhuǎn)移酶催化與P位的起始氨基酸或肽酰基形成肽鍵，tRNAf或空載tRNA仍留在P位．最后核糖體沿mRNA5’→3’方向移動(dòng)一個(gè)密碼子距離，A位上的延長一個(gè)氨基酸單位的肽酰-tRNA轉(zhuǎn)移到P位，全部過程需延伸因子EF-Tu、EF-Ts，能量由GTP提供。(4)肽鏈合成終止，當(dāng)核糖體移至終止密碼UAA、UAG或UGA時(shí)，終止因子RF-1、RF-2識(shí)別終止密碼，并使肽酰轉(zhuǎn)移酶活性轉(zhuǎn)為水解作用，將P位肽酰-tRNA水解，釋放肽鏈，合成終止。8．提示：(1)氨基酸與tRNA的專一結(jié)合，保證了tRNA攜帶正確的氨基酸；(2)攜帶氨基酸的tRNA對(duì)mRNA的識(shí)別，mRNA上的密碼子與tRNA上的反密碼子的相互識(shí)別，保證了遺傳信息準(zhǔn)確無誤地轉(zhuǎn)譯；(3)起始因子及延長因子的作用，起始因子保證了只有起始氨酰-tRNA能進(jìn)入核糖體P位與起始密碼子結(jié)合，延伸因子的高度專一性，保證了起始tRNA攜帶的fMet不進(jìn)入肽鏈內(nèi)部；(4)核糖體三位點(diǎn)模型的E位與A位的相互影響，可以防止不正確的氨酰-tRNA進(jìn)入A位，從而提高翻譯的正確性；(5)校正作用：氨酰-tRNA合成酶和tRNA的校正作用；對(duì)占據(jù)核糖體A位的氨酰-tRNA的校對(duì)；變異校對(duì)即基因內(nèi)校對(duì)與基因間校對(duì)等多種校正作用可以保證翻譯的正確。9．(1)起始因子不同：原核為IF-1，IF-2，IF-2，真核起始因子達(dá)十幾種。(2)起始氨酰-tRNA不同：原核為fMet-tRNAf，真核Met-tRNAi(3)核糖體不同：原核為70S核粒體，可分為30S和50S兩種亞基，真核為80S核糖體，分40S和60S兩種亞基10．提示：(1)水解修飾；(2)肽鍵中氨基酸殘基側(cè)鏈的修飾；(3)二硫鍵的形成；(4)輔基的連接及亞基的聚合。11．提示：蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)是由氨基酸的順序決定的，不同的蛋白質(zhì)有不同的氨基酸順序，各自按一定的方式折疊而成該蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)。折疊是在自然條件下自發(fā)進(jìn)行的，在生理?xiàng)l件下，它是熱力學(xué)上最穩(wěn)定的形式，同時(shí)離不開環(huán)境因素對(duì)它的影響。對(duì)于具有四級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，其亞基可以由一個(gè)基因編碼的相同肽鏈組成，也可以由不同肽鏈組成，不同肽鏈可以通過一條肽鏈加工剪切形成，或由幾個(gè)不同單順反子mRNA翻譯，或由多順反子mRNA翻譯合成。12．原核細(xì)胞：70S核糖體由30S和50S兩個(gè)亞基組成；真核細(xì)胞：80S核糖體由40S和60S兩個(gè)亞基組成。利用放射性同位素標(biāo)記法，通過核糖體的分離證明之。13.提示：(1)在正常肽段的第一個(gè)Val的密碼GUA的G后插入了一個(gè)C；(2)正常肽段的核苷酸序列為：AUGGUAUGCGU…CG…；突變體肽段的核苷酸序列為：AUGGCUAUGCGU。14.核酸與蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)比較表如下：核酸（Nucleicacids）蛋白質(zhì)（Proteins）DNARNA一級(jí)結(jié)構(gòu)Primarystructure核苷酸序列AGTTCT或AGUUCU的排列順序3，，5，-磷酸二酯鍵氨基酸排列順序肽鍵二級(jí)結(jié)構(gòu)Secondarystructure雙螺旋主要是氫鍵，堿基堆積力配對(duì)（莖-環(huán)結(jié)構(gòu)）（同左）有規(guī)則重復(fù)的構(gòu)象（α-helix，β－sheet，β-turn）氫鍵三級(jí)結(jié)構(gòu)Tertiarystructure超螺旋RNA空間構(gòu)象一條肽鏈的空間構(gòu)象范德華力氫鍵疏水作用鹽橋二硫鍵等四級(jí)結(jié)構(gòu)Quaternarystructure多條肽鏈（或不同蛋白）15.原核生物與真核生物的翻譯比較如下：僅述真核生物的，原核生物與此相反。（1）.起始Met不需甲酰化；（2）.無SD序列，但需要一個(gè)掃描過程；（3）.tRNA先于mRNA與核糖體小亞基結(jié)合；（4）.起始因子比較多；（5）.只一個(gè)終止釋放因子。(三)填空題1．mRNA氨酰-tRNA核糖體2．6461UAAUAGUGA3．tRNAftRNAitRNAm4．核糖體線粒體葉綠體5．不穩(wěn)定穩(wěn)定6．UAAUAGUAAUGARF7．氨基酸t(yī)RNA8．甲酰甲硫氨酸甲酰甲硫氨酰-tRNA9．小16SrRNA10．4111．肽鍵肽酰-tRNA12．終止因子終止密碼子肽基轉(zhuǎn)移酶水解作用13．30S50S40S60S14.SerThrTyr(四)選擇題1．④2．③3．④4．①5．④6．③7．②8．③9．①10．④11．①④⑤12．①②⑤13．③④⑤14．①②③⑤15．②③④⑤16．①②③⑤17．①②③⑤18.①19.②20.④(五)是非題1．×2．√3．×4．×5．√6．×7．√8．√9．×10．√11．×12．√13．×14．√15．×16.√核酸的生物合成一、試題題目(一)名詞解釋1．中心法則2．半保留復(fù)制3．DNA聚合酶4．解旋酶5．拓?fù)洚悩?gòu)酶6．單鏈DNA結(jié)合蛋白7．DNA連接酶8．引物酶及引物體9．復(fù)制叉10．復(fù)制眼、θ結(jié)構(gòu)11.前導(dǎo)鏈12．岡崎片段、后隨鏈13．半不連續(xù)復(fù)制14．逆轉(zhuǎn)錄15．逆轉(zhuǎn)錄酶16．突變17，點(diǎn)突變18．結(jié)構(gòu)畸變19．誘變劑20．修復(fù)21．光裂合酶修復(fù)22．切除修復(fù)23．重組修復(fù)24．誘導(dǎo)修復(fù)和應(yīng)急反應(yīng)25．DNA重組26．基因工程27．轉(zhuǎn)錄28．模板鏈(反意義鏈)29．非模板鏈(編碼鏈)30．不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄31．啟動(dòng)子32．轉(zhuǎn)錄單位33．內(nèi)含子34．外顯子35．轉(zhuǎn)錄后加工36．核內(nèi)不均一RNA37．RNA復(fù)制(二)問答題1．試述Meselson和Stahl關(guān)于DNA半保留復(fù)制的證明實(shí)驗(yàn)。2．描述大腸桿菌DNA聚合酶I在DNA生物合成過程中的作用。3．試述DNA復(fù)制過程，總結(jié)DNA復(fù)制的基本規(guī)律。4．什么是逆轉(zhuǎn)錄?病毒中的單鏈RNA如何利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成雙鏈DNA，并整合到寄主細(xì)胞的基因組中?5．DNA的損傷原因是什么?6．簡述基因工程的基本操作步驟及其應(yīng)用意義。7．試比較轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的區(qū)別。8.試列表比較常染色質(zhì)DNA與端粒DNA的復(fù)制。9.將大腸桿菌從37度轉(zhuǎn)移到42度時(shí)，其基因表達(dá)如何變化？10.簡述原核生物轉(zhuǎn)錄作用的過程。11.試比較真核生物與原核生物mRNA轉(zhuǎn)錄的主要區(qū)別。(三)填空題1．Meselson-Stahl的DNA半保留復(fù)制證實(shí)試驗(yàn)中，區(qū)別不同DNA用_______方法。分離不同DNA用_______方法，測(cè)定DNA含量用_______方法，2．DNA聚合酶I(E．coli)的生物功能有_______、_______和_______作用。用蛋白水解酶作用DNA聚合酶I，可將其分為大、小兩個(gè)片段，其中_______片段叫Klenow片段，具有_______和_______作用，另外一個(gè)片段具有_______活性。3．在E．coli中，使DNA鏈延長的主要聚合酶是_______，它由_______亞基組成。DNA聚合酶Ⅱ主要負(fù)責(zé)DNA的_______作用。4．真核生物DNA聚合酶有_______，_______，_______，_______。其中在DNA復(fù)制中起主要作用的是_______和_______。5．解旋酶的作用是_______，反應(yīng)需要—提供能量，結(jié)合在后隨鏈模板上的解旋酶，移動(dòng)方向_______，結(jié)合在前導(dǎo)鏈的rep蛋白，移動(dòng)方向_______。6．在DNA復(fù)制過程中，改變DNA螺旋程度的酶叫_______。7．SSB的中文名稱_______，功能特點(diǎn)是_______。8．DNA連接酶只能催化_______鏈DNA中的缺口形成3’,5’-磷酸二酯鍵，不能催化兩條鏈間形成3’,5’-磷酸二酯鍵，真核生物DNA連接酶以_______作為能源，大腸桿菌則以作為能源，DNA連接酶在DNA______、________、_______中起作用。9．DNA生物合成的起始，需要一段_______為引物，引物由_______酶催化完成，該酶需與—些特殊_______結(jié)合形成_______復(fù)合物才有活性。10．DNA生物合成的方向是_______，岡奇片段合成方向是_______。11．由逆轉(zhuǎn)錄酶所催化的核酸合成是以_______為模板，以_______為底物，產(chǎn)物是_______。12．DNA突變主要分為_______和_______兩大類。13．誘變劑大致分為_______、_______、_______三種類型。14．RNA生物合成中，RNA聚合酶的活性需要_______模板，原料是_______、_______、_______、_______。15．大腸桿菌RNA聚合酶為多亞基酶，亞基組成_______，稱為_______酶，其中_______亞基組成稱為核心酶，功能_______；σ亞基的功能_______。16．用于RNA生物合成的DNA模板鏈稱為_______或_______。17．RNA聚合酶沿DNA模板_______方向移動(dòng)，RNA合成方向_______。18．真核生物RNA聚合酶共三種_______、_______、_______，它們分別催化_______、_______和_______的生物合成。19．某DNA雙螺旋中，單鏈5’…ATCGCTCGA…3’為有意義鏈，若轉(zhuǎn)錄mRNA，其中堿其排列順序?yàn)?’…_______…3’。20；能形成DNA--RNA雜交分子的生物合成過程有_______、_______。形成的分子基礎(chǔ)是_______。21．DNA復(fù)制中，_______鏈的合成是_______的，合成的方向和復(fù)制叉移動(dòng)方向相同；_______鏈的合成是_______的，合成的方向與復(fù)制叉方向相反。22．一條單鏈DNA(+)的堿基組成A2l％、G29％，復(fù)制后，RNA聚合酶催化轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物的堿基組成是_______。23．RNA聚合酶中能識(shí)別DNA模板上特定起始信號(hào)序列的亞基是_______，該序列部位稱_______。24．在細(xì)菌細(xì)胞中，獨(dú)立于染色體之外的遺傳因子叫_______。它是一種_______狀雙鏈DNA，在基因工程中，它做為_______。25．hnRNA加工過程中，在mRNA上出現(xiàn)并代表蛋白質(zhì)的DNA序列叫_______。不在mR—NA上出現(xiàn)，不代表蛋白質(zhì)的DNA序列叫_______。(四)選擇題1．DNA以半保留方式復(fù)制，如果一個(gè)具有放射性標(biāo)記的雙鏈DNA分子，在無放射性標(biāo)記的環(huán)境中經(jīng)過兩輪復(fù)制。其產(chǎn)物分子的放射性情況如何()。①其中一半沒有放射性②都有放射性③半數(shù)分子的兩條鏈都有放射性④都不含放射性2．關(guān)于DNA指導(dǎo)下的RNA合成的下列論述除了哪一項(xiàng)都是正確的()。①只有存在DNA時(shí)，RNA聚合酶才能催化磷酸二酯鍵的形成。②在合成過程中，RNA聚合酶需要一個(gè)引物。③RNA鏈的延長方向是5’→3’。④在多數(shù)情況下，只有一條DNA鏈作為模板。3．下列關(guān)于DNA和RNA聚合酶的論述哪一種是正確的():①RNA聚合酶用核苷二磷酸而不是核苷三磷酸來合成多核苷酸鏈②RNA聚合酶需要引物，并在生長的多核苷酸鏈的5’端加上核苷酸③DNA聚合酶能在核苷酸鏈的兩端加上核苷酸④所有RNA和DNA聚合酶只能在生長的多核苷酸鏈的3’端加上核苷酸。4．修補(bǔ)胸腺嘧啶有數(shù)種方法，其中之一是用DNA連接酶、DNA聚合酶等催化進(jìn)行，試問這些酶按下列哪種順序發(fā)揮作用()：①DNA連接酶→DNA聚合酶→核酸內(nèi)切酶②DNA聚合酶→核酸內(nèi)切酶→DNA連接酶③核酸內(nèi)切酶→DNA聚合酶→DNA連接酶④核酸內(nèi)切酶→DNA連接酶→DNA聚合酶5．DNA聚合酶在分類時(shí)屬于六大酶類中的哪一種()。①合成酶類②轉(zhuǎn)移酶類③裂解酶類④氧化還原酶類6．催化真核生物mRNA生物合成的RNA聚合酶Ⅱ?qū)Ζ?-鵝膏蕈堿()。不敏感②敏感③高度敏感④低度敏感7．DNA復(fù)制中RNA引物的主要作用是()。①引導(dǎo)合成岡奇片段②作為合成岡奇片段的模板③為DNA合成原料dNTP提供附著點(diǎn)④激活DNA聚合酶8．下列關(guān)于單鏈結(jié)合蛋白的描述哪個(gè)是錯(cuò)誤的()。①與單鏈DNA結(jié)合防止堿基重新配對(duì)②保護(hù)復(fù)制中單鏈DNA不被核酸酶降解③與單鏈DNA結(jié)合，降低雙鏈DNATm值④以上都不對(duì)9．紫外線對(duì)DNA的損傷主要是()。①引起堿基置換②形成嘧啶二聚體③導(dǎo)致堿基缺失④發(fā)生堿基插入l0．有關(guān)轉(zhuǎn)錄的錯(cuò)誤描述是()。①只有在DNA存在時(shí)，RNA聚合酶方可催化RNA②需要NTP做原料③RNA鏈的延伸方向是3’→5’④RNA的堿基需要與DNA互補(bǔ)11．關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄作用的錯(cuò)誤敘述是()。①以RNA為模板合成DNA②需要一個(gè)具有3’-OH末端的引物③以5’→3’方向合成，也能3’→5’方向合成④以dNTP為底物12．體內(nèi)參與甲基化反應(yīng)的直接甲基供體是()。①M(fèi)et②S—腺苷甲硫氨酸③甲酰甲硫氨酸④Met-tRNA13．關(guān)于大腸桿菌DNA聚合酶I的下列論述哪些是正確的()。①它是一個(gè)金屬酶②它能從3’-OH端逐步水解單股DNA鏈③它在雙螺旋區(qū)有5’→3’核酸酶活性④它需要DNA模板上的游離5’-OH；14．試將下列DNA復(fù)制的有關(guān)步驟按正確的順序排列()。①DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶合成RNA引物②解旋蛋白打開DNA雙鏈③DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶合成的DNA互補(bǔ)鏈④DNA連接酶連接DNA片段⑤核酸內(nèi)切酶切除RNA引物15．下列關(guān)于核不均一RNA(hnRNA)的論述哪些是正確的()。①它們的壽命比大多數(shù)細(xì)胞液的RNA為短②在3’端有一個(gè)多聚腺苷酸(polyA)長尾，是由DNA編碼的③它們存在于細(xì)胞核的核仁外周部分④鏈內(nèi)核苷酸不發(fā)生甲基化反應(yīng)⑤有大約四分之三成份將被切除棹，以形成mRNA16．DNA復(fù)制的精確性遠(yuǎn)高于RNA的合成，這是因?yàn)?)。①新合成的DNA鏈與模板鏈形成了雙螺旋結(jié)構(gòu)，而RNA鏈不能②DNA聚合酶有3'→5'外切酶活力，而RNA聚合酶無相應(yīng)活力③脫氧核苷酸之間的氫鍵配對(duì)精確性高于脫氧核苷酸與核苷酸之間的配對(duì)④DNA聚合酶有5’→3’外切酶活力，RNA聚合酶無此活性17．有關(guān)逆轉(zhuǎn)錄酶的論述哪些是正確的()。①具有依賴于RNA的DNA聚合酶活性②具有依賴于DNA的DNA聚合酶活性③不具備5’→3’或3’→5’核酸外切酶活性④催化合成反應(yīng)時(shí)，需要模板及3’-OH引物18．下列哪幾種突變最可能是致命的()。①腺嘌呤取代胞嘧啶②胞嘧啶取代尿嘧啶③缺失三個(gè)核苷酸④插入二個(gè)核苷酸19．Crick于1958年提出的中心法則包括()。①DNA復(fù)制②RNA復(fù)制③轉(zhuǎn)錄④逆轉(zhuǎn)錄⑤翻譯20．DNA生物合成中需要以下哪些酶參與()。①引物酶②解旋酶③解鏈酶④DNA連接酶⑤DNA聚合酶21．RNA聚合酶的核心酶由以下哪些亞基組成()。①α②σ③β④β’⑤δ22．RNA生物合成的終止需要以下哪些成分()。①終止子②ρ因子③δ因子④dnaβ蛋白⑤α亞基23．RNA與DNA生物合成相同的是()。①需RNA引物②以3’→5’方向DNA為模板③兩條模板鏈同時(shí)合成④新鏈生成方向5’→3’⑤形成3’,5’-磷酸二酯鍵24．DNA的切除修復(fù)需要以下哪幾種酶參與()①光裂合酶②核酸內(nèi)切酶③DNA聚合酶I④DNA連接酶⑤RNA聚合酶25．目的基因的制備方法有()①DNA復(fù)制②RNA轉(zhuǎn)錄③mRNA逆轉(zhuǎn)錄④化學(xué)合成法⑤限制性內(nèi)切酶切取26．真核細(xì)胞mRNA的加工修飾包括以下內(nèi)容()。①切除內(nèi)含子，連接外顯子②5’端接上“帽子”③3’端接上CCA④3’端添加多聚(A)尾⑤堿基甲基化27.指導(dǎo)合成蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因大多數(shù)是()①單考貝順序

②中度重復(fù)順序

③高度重復(fù)順序

④回文順序⑤以上都正確28.下面哪些因素可防止DNA上的一個(gè)點(diǎn)突變表現(xiàn)在蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)?()①DNA的修復(fù)作用

②密碼的簡并性

③校正tRNA的作用④核糖體對(duì)mRNA的校正

⑤以上都正確29.紫外線照射對(duì)DNA分子的損傷主要是()①堿基替換②磷酸酯鍵斷裂③堿基丟失

④形成共價(jià)連接的嘧啶二聚體⑤堿基插入30.能編碼多肽鏈的最小DNA單位是()①順反子②操縱子③啟動(dòng)子④復(fù)制子⑤轉(zhuǎn)錄子(五)是非題1．大腸桿菌DNA生物合成中，DNA聚合酶I主要起聚合作用。()2．原核生物DNA的合成是單點(diǎn)起始，真核生物為多點(diǎn)起始。()3．DNA生物合成不需要核糖核苷酸。()4．以一條親代DNA(3’→5’)為模板時(shí)，子代鏈合成方向5’→3’，以另一條親代DNA鏈5’→3’)為模板時(shí)，子代鏈合成方向3’→5’。()5．在DNA生物合成中，半保留復(fù)制與半不連續(xù)復(fù)制指相同概念。()6．在DNA合成終止階段由DNA聚合酶Ⅱ切除引物。()7．目前發(fā)現(xiàn)的逆轉(zhuǎn)錄酶大部分來自于病毒粒子。()8．依賴DNA的RNA聚合酶由緊密結(jié)合的α2ββ’σ亞基組成，其中σ因子具有識(shí)別起始部位和催化RNA合成的功能。()9．RNA的生物合成不需要引物。()10．大腸桿菌的mRNA在翻譯蛋白質(zhì)之前不需要加工。()11．DNA聚合酶I切除引物RNA屬3’→5’外切酶作用，切除錯(cuò)配的核苷酸屬5’→3’外切酶作用。()12．岡崎片段的合成需要RNA引物。()13．轉(zhuǎn)錄時(shí)，RNA聚合酶的核心酶沿模板DNA向其5’端移動(dòng)。()14．RNA不能做為遺傳物質(zhì)。()15．以單鏈DNA為遺傳載體的病毒，DNA合成時(shí)一般要經(jīng)過雙鏈的中間階段。()16．亞硝酸做為一種有效誘變劑，是因?yàn)樗苯幼饔糜贒NA，使堿基中的氨基氧化生成羰(酮)基，造成堿基配對(duì)錯(cuò)誤。()17．大腸桿菌DNA聚合酶Ⅲ只起聚合作用，不能校對(duì)錯(cuò)配堿基。()18．RNA也能以自身為模板合成一條互補(bǔ)的RNA鏈。()19．真核生物的各種RNA都必須經(jīng)過剪切、修飾才能成熟。()20.真核基因外顯子是指保留在成熟RNA中的相對(duì)應(yīng)的序列，不管它是否被翻譯。()二、參考答案(一)名詞解釋1．中心法則(centraldogma)：生物體遺傳信息流動(dòng)途徑。最初由Crick(1958)提出，經(jīng)后人的不斷補(bǔ)充和修改，現(xiàn)包括反轉(zhuǎn)錄和RNA復(fù)制等內(nèi)容。2．半保留復(fù)制(簡稱復(fù)制)（semiconservativereplication)：親代雙鏈DNA以每條鏈為模板，按堿基配對(duì)原則各合成一條互補(bǔ)鏈，這樣一條親代DNA雙螺旋，形成兩條完全相同的子代DNA螺旋，子代DNA分子中都有一條合成的“新”鏈和一條來自親代的舊鏈，稱為半保留復(fù)制。3．DNA聚合酶(DNApolymerase)：指以脫氧核苷三磷酸為底物，按5’→3’方向合成DNA的一類酶，反應(yīng)條件：4種脫氧核苷三磷酸、Mg+、模板、引物。DNA聚合酶是多功能酶，除具有聚合作用外，還具有其它功能，不同DNA聚合酶所具有的功能不同。4．解旋酶(helicase)：是一類通過水解ATP提供能量，使DNA雙螺旋兩條鏈分開的酶，每解開一對(duì)堿基，水解2分子ATP。5．拓?fù)洚悩?gòu)酶(topoisomerase)：是一類引起DNA拓?fù)洚悩?gòu)反應(yīng)的酶，分為兩類：類型I的酶能使DNA的一條鏈發(fā)生斷裂和再連接，反應(yīng)無需供給能量，類型Ⅱ的酶能使DNA的兩條鏈同時(shí)發(fā)生斷裂和再連接，當(dāng)它引入超螺旋時(shí)，需要由ATP供給能量。6．單鏈DNA結(jié)合蛋白(single-strandbindingprotein,SSB)：是一類特異性和單鏈區(qū)DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)。它的功能在于穩(wěn)定DNA解開的單鏈，阻止復(fù)性和保護(hù)單鏈部分不被核酸酶降解。7．DNA連接酶(DNAligase)：是專門催化雙鏈DNA中缺口共價(jià)連接的酶，不能催化兩條游離的單鏈DNA鏈間形成磷酸二酯鍵。反應(yīng)需要能量。8．引物酶及引發(fā)體(primase＆primosome)：以DNA為模板，以核糖核苷酸為底物，在DNA合成中，催化形成RNA引物的酶稱為引物酶及引物體。大腸桿菌的引物酶單獨(dú)沒有活性，只有與其它蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，形成一個(gè)復(fù)合體，即引發(fā)體才有生物活性。9．復(fù)制叉(replicationfork)：復(fù)制中的DNA分子，末復(fù)制的部分是親代雙螺旋，而復(fù)制好的部分是分開的，由兩個(gè)子代雙螺旋組成，復(fù)制正在進(jìn)行的部分呈丫狀叫做復(fù)制叉。10．復(fù)制眼θ