定量分析方法與驗(yàn)證

第四章藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證節(jié)定量分析樣品的前處理方法第二節(jié)定量分析方法特點(diǎn)（自學(xué)）第三節(jié)藥品分析方法的驗(yàn)證第四節(jié)生物樣品分析方法的基本要求定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁(yè)!節(jié)定量分析樣品的前處理方法一、含鹵素有機(jī)藥物的分析一、概述含鹵素有機(jī)藥物系指藥物分子結(jié)構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪鏈相連者，而不包括某些有機(jī)藥物的鹵酸鹽或氫鹵酸鹽。結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：C—X（一）含鹵素有機(jī)藥物定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁(yè)!鹵素與脂肪鏈的C原子相連者，鹵素與C原子結(jié)合不牢固，可直接測(cè)定或水解后測(cè)定。氮芥氟烷1鹵素與脂肪鏈碳原子相連定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁(yè)!碘苯酯I諾氟沙星定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁(yè)!（二）含金屬的有機(jī)藥物含金屬有機(jī)藥物2.有機(jī)金屬藥物:

金屬原子直接和碳原子以共價(jià)鍵相連，結(jié)合牢固，溶液中一般不能解離成離子狀態(tài)，需經(jīng)有機(jī)破壞后分析。

金屬原子不直接和碳原子相連，以金屬的有機(jī)酸及酚的鹽或配位化合物的形式存在.如酒石酸銻鉀、富馬酸亞鐵、葡萄糖酸銻鈉等。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁(yè)!二不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法直接測(cè)定法經(jīng)還原分解后測(cè)定法經(jīng)水解后測(cè)定法定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁(yè)!(二)經(jīng)水解后測(cè)定法1、堿水解后測(cè)定法

適于鹵素和碳原子結(jié)合不牢固的含鹵素有機(jī)藥物回流回流Volhard法定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁(yè)!方法指示劑滴定液被滴定物終點(diǎn)變化莫爾法K2Cr2O7AgNO3鹵化物磚紅色原理佛爾哈德法硫酸鐵銨NH4SCN(KSCN)Ag+紅色法揚(yáng)氏法吸附指示劑AgNO3鹵化物指示劑變色定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁(yè)!(三)經(jīng)還原分解后測(cè)定法適用于碘原子與苯環(huán)直接相連的含鹵素有機(jī)藥物。NaOHZn+3Na2ZnO2+3H2O+3NaI+2CH3COONaNaI的測(cè)定CHPUSP（KIO3滴定法）AgNO3滴定冰HAC,曙紅鈉指示劑（Fajans法）泛影酸定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁(yè)!原理將含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子中有機(jī)結(jié)構(gòu)被“消化”成CO2和H2O，有機(jī)結(jié)合的氮轉(zhuǎn)化為無機(jī)氮，與過量的硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸銨，經(jīng)堿化后釋放出氨氣，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。常量法——含氮量25～30mg半微量法——含氮量

1.0～2.0mg凱氏定氮法定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁(yè)!1.高溫?zé)胱品ㄓ糜诤u素、含磷藥物和藥物中砷鹽的檢查。常加入無水碳酸鈉、硝酸鎂、氫氧化鈣、氧化鋅等輔助灰化。(二)干法破壞定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁(yè)!適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分析(3)特點(diǎn)：本法特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速、破壞完全，尤其適用于微量樣品的分析(2)適用范圍：定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁(yè)!固體樣品：無灰濾紙液體樣品：紙袋軟膏類樣品：蠟油紙中包裹后再用無灰濾紙包裹(5)操作方法①樣品的準(zhǔn)備取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁(yè)!②燃燒前燃燒瓶的準(zhǔn)備用洗液洗凈后，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定加入吸收液，小心急速地通入氧氣1min，立即用表面皿覆蓋瓶口。③樣品的燃燒

點(diǎn)燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，俟燃燒完畢（應(yīng)無黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，同法另做空白試驗(yàn)。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁(yè)!例碘苯酯的含量測(cè)定ChP置換碘量法2碘苯酯[O]I2NaIO+NaI1/3NaIO3+2/3NaI5/3NaI自身氧化還原溴醋酸5/3NaIO32NaIO32HIO3+10KI+12H+6I2+…6I2+12Na2S2O312NaI+6Na2S4O6Br2（過量)+HCOOHHBr（過量）+CO2↑

NaOH定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁(yè)!驗(yàn)證內(nèi)容準(zhǔn)確度精密度專屬性檢測(cè)限定量限線性與范圍耐用性定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁(yè)!

制劑可采用空白輔料中加入原料藥對(duì)照品法。還應(yīng)作單獨(dú)輔料的空白測(cè)定。加樣回收試驗(yàn)（中藥）已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁(yè)!（二）精密度(Precision)

定義：系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之接近的程度。常用標(biāo)準(zhǔn)差（SD）或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁(yè)!同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度?？疾祀S機(jī)變動(dòng)因素的影響。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。2.中間精密度定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁(yè)!

指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力。是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)相互干擾程度的度量。（三）專屬性（specificity）定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁(yè)!（四）檢測(cè)限(limitofdetection，LOD)1、定義：系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。無需定量測(cè)定。常用%、ppm、ppb表示。它既反映方法與儀器的靈敏度和噪音的大小，也表明樣品經(jīng)處理后空白(本底)值的高低。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁(yè)!（五）定量限

(limitofquantitation，LOQ)1、定義：指在具有一定準(zhǔn)確度和精密度的前提下，樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低濃度或量。常用%、ppm、ppb表示雜質(zhì)和降解產(chǎn)物定量測(cè)定時(shí)需確定定量限。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁(yè)!（六）線性與范圍

(linearityandrange)1、定義：線性：在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。線性范圍：指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間?？捎胢g／L~mg／L、μg／ml~ug／ml等表示。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁(yè)!（七）耐用性(robustness)定義：指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。變動(dòng)因素：溶液穩(wěn)定性、不同的測(cè)試耗用時(shí)間、不同的分析溫度、不同的測(cè)定日期、流動(dòng)相的組成和pH，商品柱的品牌，柱溫等。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁(yè)!各種含量測(cè)定方法對(duì)效能指標(biāo)的要求

1.容量分析法：用原料藥精制品(含量>99.5％)或?qū)φ掌房疾旆椒ǖ木芏?，RSD≤0.2％；回收率一般在99.7～100.3％之間。

2.UV法：用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測(cè)定，其RSD一般不大于1％。制劑的測(cè)定，回收率一般應(yīng)在98％～102％之間。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁(yè)!思考題1、在原料藥的分析方法驗(yàn)證中，是否所有指標(biāo)均需進(jìn)行驗(yàn)證？2、怎樣設(shè)計(jì)回收率試驗(yàn)？定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁(yè)!（二）體內(nèi)藥物分析的意義

通過體內(nèi)藥物分析結(jié)果可求得藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)，可了解藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄情況。因此，體內(nèi)藥物分析為藥物研究、制劑質(zhì)量管理、臨床用藥等提供了數(shù)據(jù)和信息。另外，在用藥過量、誤服或服毒等中毒事件中，為解毒急救或判斷案情，也需要進(jìn)行體內(nèi)藥物分析；還有對(duì)一些興奮劑、致幻劑、鎮(zhèn)靜劑等藥物濫用現(xiàn)象也需要進(jìn)行體內(nèi)藥物進(jìn)行檢測(cè)。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁(yè)!二常用樣品的種類、采集和貯存（一）樣品及采集1、血樣：

血漿(plasma)：全血加肝素、枸櫞酸鹽、草酸鹽等抗凝劑后經(jīng)離心分取，量約為全血的一半。血清(serum)：血液室溫放置后，自然凝固析出的清液。全血采?。阂话闶庆o脈取血、針刺手指、耳垂取血?jiǎng)游飳?shí)驗(yàn)可直接從動(dòng)脈或心臟采取定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁(yè)!2、唾液：

優(yōu)點(diǎn)：樣品易得，取樣無痛苦，尤易為兒童接收。缺點(diǎn)：藥物濃度變化大采?。菏?5分鐘，收集自然流出或經(jīng)舌在口內(nèi)攪動(dòng)流出的唾液。也可采取物理、化學(xué)方法刺激使唾液流出。

定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁(yè)!（二）樣品貯存取樣后最好立即進(jìn)行分析，不能立即分析的，則短期內(nèi)冷藏(4℃)，長(zhǎng)期冰凍(-20℃)。全血未經(jīng)分離，不宜直接冷凍保持。尿液是很好的細(xì)菌生長(zhǎng)液，若需收集24小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間的樣品或不能立即測(cè)定的，應(yīng)置冰箱冷藏或加防腐劑（1%甲苯、過飽和氯仿）保存。

定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁(yè)!（三）生物樣品前處理方法分離、純化與濃集化學(xué)衍生化去除蛋白質(zhì)綴合物的水解有機(jī)破壞定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁(yè)!2、綴合物的水解尿液中藥物多數(shù)呈綴合物狀態(tài)。（1）酸水解：適量鹽酸（2）酶水解：常用葡糖酸苷酶或硫酸酯酶或兩者混合。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁(yè)!目的：從大量共存物中分離出所需要的微量組分方法：（1）液-液萃?。↙LE）：多數(shù)藥物是親脂性的，可用有機(jī)溶劑萃取出來，而大多數(shù)內(nèi)源性雜質(zhì)是強(qiáng)極性的，不被萃取出。4、分離、純化與濃集定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁(yè)!

（2）液-固萃?。↙SE）：將生物樣品溶液通過填有適宜擔(dān)體的小柱，使藥物保留在擔(dān)體上，洗去雜質(zhì)后，用適當(dāng)?shù)娜軇┫疵撓聛頊y(cè)定；或雜質(zhì)保留在擔(dān)體上，先把藥物洗脫下來測(cè)定。擔(dān)體親水性：硅藻土疏水性：活性炭、聚苯乙烯或C18化學(xué)鍵合硅膠常用微型柱：BoundElut、Sep-pak定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第34頁(yè)!（3）被測(cè)組分的濃集濃集方法：1、末次提取時(shí)，加入溶劑盡可能少2、揮去溶劑：（1）通入氣流（氮?dú)猓┐蹈桑?）減壓法：適于易隨氣流揮發(fā)或遇熱不穩(wěn)定藥物定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第35頁(yè)!GC中化學(xué)衍生化：RCOOH、ROH、RSH、RNH2CH3I、CH3N2等RCOOCH3、ROCH3、RSCH3、RNHCH3例：烷基化極性降低，揮發(fā)性增加烷基化（碘庚烷、疊氮甲烷）?；ㄒ宜狒⒈狒┕柰榛ㄈ谆裙柰門MCS等）。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第36頁(yè)!四、定量分析方法的驗(yàn)證(一)特異性

所測(cè)的物質(zhì)是原型藥物或特定的活性代謝物，內(nèi)源性物質(zhì)和相應(yīng)的其他代謝物及其他藥物不影響樣品的測(cè)定?？瞻籽獫{空白血漿＋標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)受試血漿定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第37頁(yè)!(三)精密度與準(zhǔn)確度(四)定量下限(五)穩(wěn)定性(六)提取回收率(七)質(zhì)控樣品(八)質(zhì)量控制(九)測(cè)定結(jié)果定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第38頁(yè)!碘番酸泛影酸

鹵素與芳環(huán)相連的藥物，鹵素與碳原子結(jié)合牢固，不能直接進(jìn)行測(cè)定，需經(jīng)處理后才能測(cè)定。2鹵素與芳環(huán)碳原子相連定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第39頁(yè)!磺溴酞鈉定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第40頁(yè)!富馬酸亞鐵硫柳汞卡巴胂定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第41頁(yè)!(一)直接測(cè)定法Fe2++Ce4+Fe3++Ce3+如：葡萄糖酸銻鈉的含量測(cè)定碘量法Sb5+I-Sb3++I2Na2S2O3滴定適用于金屬原子不直接與碳原子相連的或C—M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物。（包括配位滴定、氧化還原滴定）如：富馬酸亞鐵的含量測(cè)定ChP(2005)鈰量法鄰二氮菲做指示劑，微過量的硫酸鈰將紅色亞鐵配合物氧化成淺藍(lán)色高價(jià)鐵。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第42頁(yè)!銀量法根據(jù)終點(diǎn)指示方法可分為：1莫爾法（Mohr法，鉻酸鉀指示劑法）2佛爾哈德法（Volhard法，硫酸鐵銨指示劑法）3法揚(yáng)氏法（Fajans法，吸附指示劑法）定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第43頁(yè)!例：十一烯酸鋅的測(cè)定2、酸水解后測(cè)定法十一烯酸鋅稀鹽酸十一烯酸氧化鋅EDTA-Na滴定定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第44頁(yè)!三經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法(一)濕法破壞主要適用于含氮有機(jī)藥物、生物制品分析中N、P等測(cè)定的前處理H2SO4-HNO3H2SO4-HClO4H2SO4-K2SO4HNO3-KMnO4分解劑/消化劑輔助分解劑——?jiǎng)P氏定氮法測(cè)定含有氨基和酰胺結(jié)構(gòu)的藥物結(jié)構(gòu)定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第45頁(yè)!凱氏燒瓶K2SO4(提高消解溫度)CuSO4(加快消解速度)硫酸堿液硼酸(吸收液)甲基紅-溴甲酚綠指示劑硫酸滴定空白校正定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第46頁(yè)!氧瓶燃燒法：將有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的待測(cè)物質(zhì)吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐校缓蟾鶕?jù)待測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定。2氧瓶燃燒后測(cè)定法（Oxygenflaskbustionmethod）(1)原理定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第47頁(yè)!(4)裝置燃燒瓶：為500、1000或2000ml無色、磨口、厚壁、硬質(zhì)玻璃錐型瓶瓶塞：空心，底部熔封鉑絲一根鉑絲：下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第48頁(yè)!定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第49頁(yè)!(6)吸收液作用：將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價(jià)態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y(cè)定的價(jià)態(tài)。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第50頁(yè)!第三節(jié)藥品分析方法的驗(yàn)證

目的：證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求，方法驗(yàn)證過程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品標(biāo)準(zhǔn)起草和修訂說明中。用途：1、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。2、藥物合成方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第51頁(yè)!一、準(zhǔn)確度(Accuracy)1、定義：

指測(cè)得結(jié)果與真實(shí)值接近的程度。通常采用回收率試驗(yàn)來表示。2、方法：回收試驗(yàn)法（原料藥）：空白+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M

定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第52頁(yè)!UV、HPLC回收率要求在98～102%范圍容量分析法回收率要求在99.7～100.3%范圍中藥分析回收率一般要求在95～105%范圍內(nèi)，有些方法操作步驟繁多時(shí)，可要求在90～110%范圍內(nèi)。RSD一般在3%以內(nèi)。數(shù)據(jù)要求規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第53頁(yè)!在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度。在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品，各測(cè)三次。或把被測(cè)物濃度當(dāng)作100%，至少測(cè)6次計(jì)算RSD進(jìn)行評(píng)價(jià)。1.重復(fù)性定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第54頁(yè)!不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。3.重現(xiàn)性定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第55頁(yè)!氧氟沙星乳膏的含量測(cè)定圖譜乳膏基質(zhì)樣品定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第56頁(yè)!2、方法：信噪比法（儀器分析方法）：HPLC、GC：用已知濃度樣品與空白試驗(yàn)對(duì)照，記錄測(cè)得的被測(cè)藥物信號(hào)強(qiáng)度S與噪音(或背景信號(hào))強(qiáng)度N，以能達(dá)到S／N＝2或S／N＝3時(shí)的樣品最低藥濃為L(zhǎng)OD；UV或熒光分析：多次空白試驗(yàn)，求得其背景響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)差，將三倍空白標(biāo)準(zhǔn)差(即3δ空或3S空)作為檢測(cè)限的估計(jì)目視法（非儀器分析方法）：通過已知濃度的樣品，目視確定能被可靠地檢測(cè)出的最低量作為檢測(cè)限。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第57頁(yè)!定量限與檢測(cè)限的差別：定量限要定量測(cè)定某一藥物在樣品介質(zhì)中的最低濃度，且定量限規(guī)定的最低濃度應(yīng)該符合一定的精密度和準(zhǔn)確度的要求。2、方法：非儀器分析方法：與檢測(cè)限的確定方法相同；儀器分析方法：S/N=10時(shí)相應(yīng)的濃度，作為定量限的估計(jì)值。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第58頁(yè)!2、方法：

線性與范圍的確定可用作圖法(響應(yīng)值Y／濃度X)或計(jì)算回歸方程(Y＝a+bX)來研究建立。采用相關(guān)系數(shù)(r)表示標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性度。對(duì)照品的LOQ必須包括在線性范圍。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第59頁(yè)!①②③①已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度②如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充③視具體情況予以驗(yàn)證準(zhǔn)確度精密度重復(fù)性中間精密度專屬性檢測(cè)限定量限線性/范圍耐用性鑒別＋＋雜質(zhì)定量＋－＋＋＋－＋＋＋雜質(zhì)限度＋＋含量測(cè)定＋＋＋＋＋－－＋＋溶出量測(cè)定＋＋＋＋＋－－＋＋檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第60頁(yè)!

線性：吸收度A一般在0.3～0.7，濃度點(diǎn)n≥5。用濃度c對(duì)A作線性回歸處理，得一直線方程，r應(yīng)大于0.9999(n＝5)，方程的截距應(yīng)近于零。3.HPLC法：要求RSD<2％，回收率98％～102％之間。線性范圍：濃度點(diǎn)n應(yīng)為5～7，回歸處理濃度c～峰高H或峰面積A或被測(cè)物與內(nèi)標(biāo)的響應(yīng)值之比進(jìn)行回歸，建立方程，r應(yīng)大于0.999，截距應(yīng)趨于零。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第61頁(yè)!體內(nèi)藥物分析：是一門研究進(jìn)入人或動(dòng)物體內(nèi)，存在于生物樣品（如體液、組織、器官和排泄物等）中的藥物及其代謝物和內(nèi)源性物質(zhì)的質(zhì)與量變化規(guī)律的分析方法學(xué)。一概述(一)體內(nèi)藥物分析的概念第四節(jié)生物樣品分析方法的基本要求定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第62頁(yè)!（三）體內(nèi)藥物分析的特點(diǎn)1．干擾物質(zhì)多：生物樣品中含有大量的內(nèi)源性物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂肪等，以及代謝物、結(jié)合物等，樣品一般均需經(jīng)過分離、凈化后才能進(jìn)行分析。2．樣品量少、不能重復(fù)取樣：生物樣品多數(shù)在特定條件下采集，無法再次取樣，且樣品量少。3．被測(cè)成分濃度低：對(duì)分析方法的靈敏度及專屬性要求較高。在測(cè)定前需濃縮、富集以適應(yīng)分析方法要求。4．藥物濃度監(jiān)測(cè)和藥物濫用：要求分析方法簡(jiǎn)便、快速定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第63頁(yè)!定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第64頁(yè)!3、尿液：

尿樣測(cè)定主要用于藥物劑量回收研究、藥物腎清除率和生物利用度等研究，以及測(cè)定代謝物類型等。

優(yōu)點(diǎn)：采取簡(jiǎn)便，取樣量大，受試者無痛苦。缺點(diǎn)：藥物濃度變化也大，需采集一定時(shí)間內(nèi)的尿樣。采?。簞?dòng)物應(yīng)在代謝籠中進(jìn)行，通過籠下漏斗接收。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第65頁(yè)!三生物樣品的前處理（一）藥物在體內(nèi)的存在形式游離型：原形藥物或代謝物綴合物：藥物或其代謝物與葡萄糖醛酸等結(jié)合結(jié)合物：藥物與蛋白質(zhì)結(jié)合（二）樣品前處理的目的1、提高測(cè)定方法靈敏度、準(zhǔn)確度和專屬性2、保護(hù)測(cè)定儀器不受生物樣品中類脂和蛋白質(zhì)等的污染。定量分析方法與驗(yàn)證共74頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第66頁(yè)!1、去除蛋白質(zhì)加入與水混融的有機(jī)溶劑(乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃)加入中性鹽(飽和硫酸銨、硫酸鈉、枸櫞酸鹽)加入強(qiáng)酸(三氯醋酸、高氯酸、偏磷酸)加入金屬沉淀劑(CuSO4-N