臨床免疫學(xué)和免疫檢驗主管-講義myxjy

第十四章免疫細(xì)胞的分離及其表面標(biāo)志檢測第三節(jié)其他的免疫細(xì)胞第一節(jié)免疫細(xì)胞的分一、外周血單個核細(xì)胞的分將2份6%聚蔗糖蒸餾水溶液與1份34%泛影葡胺生理鹽水溶液混合，其為1.077±0.002，可作為Ficoll二、淋巴細(xì)胞的分純淋巴細(xì)胞群是利用單核細(xì)胞在37℃和Ca2＋存在時，能主動黏附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花Percoll三、TB的分四、T細(xì)胞亞群的分五、分離細(xì)胞的保將分離的細(xì)胞用適量含10%～20%滅活小牛的Hanks、Tc-199、RPMI1640或其他培養(yǎng)液稀釋重懸。4℃保存。六、分離細(xì)胞的測這種不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不，但細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加，使通過細(xì)胞膜進入細(xì)胞內(nèi)，使死細(xì)胞呈藍(lán)色，通過細(xì)胞與活細(xì)胞的百分比可反映細(xì)胞七、不同細(xì)胞分離方法的綜合早期的免疫細(xì)胞分離技術(shù)主要是根據(jù)不同免疫細(xì)胞的物理屬性（如不同）和生物學(xué)屬性（如黏附力不同）進行分離，用目前的標(biāo)準(zhǔn)看，其分離的靈敏度或分辨率都不高。作為一種傳統(tǒng)的分離其分離效果已被認(rèn)可，如用單個核細(xì)胞進行的某些實驗，一般被認(rèn)為可以代表淋巴細(xì)胞，無特別需要一般并不采用分離純化淋巴細(xì)胞的替代技術(shù)。作為富集某一類細(xì)胞的，傳統(tǒng)的方法仍不失為簡便和行之有效的技PercollPercoll手續(xù)繁多，若無特殊需要很少采用。第二節(jié)淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分一、T細(xì)胞表面標(biāo)志及其亞CD3＋CD4＋CD8－T（Th）CD4＋CD25＋T（TrTreg）CD2表達(dá)于全部人TNK（SRBC）結(jié)合，又稱為綿羊紅細(xì)胞受CD3TTTCR-CD3CD4／CD8CD4CD8TT表達(dá)CD4的主要是輔助性T細(xì)胞，表達(dá)CD8的主要是細(xì)胞毒性T細(xì)胞。其他表面標(biāo)志：致有絲受體、TCD3＋CD4＋CD8－TT（Th1，Th2）。研究表明，Th1IL-2、IFN-γIL-5、IL-6IL-10（二）TTCD3＋CD4－CD8＋TTTTc1Tc2，Tc1Tc2二、B細(xì)胞表面標(biāo)膜免疫球蛋白（mIg）又稱為BCR，表達(dá)于所有成B細(xì)胞和大多數(shù)B細(xì)胞瘤的細(xì)胞表面，屬于免疫球蛋白超原型，是B細(xì)胞最具特性的表面標(biāo)志。BmIgmIgMmIgD。三、NK細(xì)胞表面標(biāo)CD16分子又稱為低親和性IgGFc受體，當(dāng)IgG類抗體與靶細(xì)胞表面相應(yīng)抗原表位特異性結(jié)合后，可通過其Fc段與NK細(xì)胞表面FcRⅢ結(jié)合，行使針對靶細(xì)胞的定向非特異性作用，也即NK細(xì)胞的抗體依賴第三節(jié)其他的免疫細(xì)MHC-Ⅱ類分子，并具有抗原提呈功能。所有表達(dá)一、單核-吞噬細(xì)CD14。二、樹突狀細(xì)根據(jù)刺激T細(xì)胞增殖能力的不同，它們被分為成熟和不成DCDCCD1a、CD11cCD83。第四節(jié)免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測及應(yīng)一、免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測（一）（二）霉親和素放大系統(tǒng)提高靈敏度該類方法可用普通顯微鏡觀察凡的細(xì)胞即為相應(yīng)CD抗原陽性的細(xì)胞，（三）D（直接法或與抗相應(yīng)D克隆抗體作用后，洗去游離的抗體，再加入熒光素標(biāo)記的抗小鼠IgG抗，經(jīng)溫育結(jié)合后洗去多余的標(biāo)記抗體（間接法），制片后用熒光顯微鏡觀察結(jié)果，計算陽性細(xì)胞占總計數(shù)細(xì)胞的百分率。（四）二、淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意T能方面發(fā)揮多種作用，故有必要對各類淋巴細(xì)胞（淋巴細(xì)胞亞群）識別進行計數(shù)。AIDSCD4／CD8升高常見于自身