DB43-T 1967-2020浮萍實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)技術(shù)操作規(guī)程

ICS65.020CCSB16

DB43湖 南 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB43/T1967—2020浮萍實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)技術(shù)操作規(guī)程GuidelineforLaboratoryCultureTechnologyofLemna202020201229發(fā)布2021-03-29實(shí)施湖南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布目 次前言Ⅲ112規(guī)范性引用文件13············13.1············13.2無性繁殖體13.3無性繁殖群13.41414.114.214.3pH2526儀器設(shè)備與器具26.1培養(yǎng)設(shè)備26.2培養(yǎng)器具26.3其它設(shè)備和工具2727.1···············27.2培養(yǎng)與擴(kuò)繁27.3···············27.4注意事項(xiàng)3A（）Steinberg4前 言本文件按照GB/T1.1—2020給出的規(guī)則起草。本文件某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本文件由湖南省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：湖南省植物保護(hù)研究所,長沙艾格里生物科技有限公司。本文件主要起草人：劉勇、陳昂、張德詠、張戰(zhàn)泓、蔣桂芳、羅杰、羅香文、熊浩、陳武瑛。浮萍實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)殖技術(shù)操作規(guī)程本文件規(guī)定了湖南省小浮萍、紫背浮萍等浮萍的室內(nèi)培養(yǎng)環(huán)境條件。本文件適用于湖南省浮萍實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的管理。（3.1生物量Biomass3.1生物量Biomass3.2無性繁殖體Clone指通過無性繁殖產(chǎn)生的生物體或細(xì)胞。來自同一個(gè)無性繁殖體的個(gè)體有遺傳同一性。3.3無性繁殖群Colony指相互連著的母體和后代葉片（通常2～4片）的集合體。有時(shí)也指整個(gè)植株。3.4葉片F(xiàn)rond指浮萍植株的單個(gè)“葉狀結(jié)構(gòu)”。它是最小的單位，即個(gè)體，有繁殖能力。4環(huán)境條件光照30～50cm6500～10000Lux/16/8。水溫（24±溫情況下會(huì)形成冬芽。4.3pHpH6～9pHpHStinbrgHl和NaHp。浮萍應(yīng)培養(yǎng)于溫度和光照可控的設(shè)備或區(qū)域中，如：恒溫箱、人工氣候箱、恒溫室、高壓滅菌鍋、光源、冰箱等?？梢杂枚喾N容器，如：三角瓶、表面皿、組織培養(yǎng)瓶等。超凈工作臺(tái)、照度計(jì)、溫濕度計(jì)、網(wǎng)、篩、接種環(huán)、叉子、薄刀片等。滅菌a）取樣：選取一簇單克隆浮萍，將其分成若干個(gè)個(gè)體；b）去根：用滅菌后的刀片去除所有浮萍個(gè)體的根；c）漂洗：在無菌水中劇烈的搖動(dòng)，沖洗浮萍植株；d）表面滅菌：0.5％的次氯酸鈉溶液中浸泡1mine）漂洗：無菌水或無菌培養(yǎng)液沖洗2～3次；f）接種：在超凈工作臺(tái)中轉(zhuǎn)接到無菌培養(yǎng)液中，確保轉(zhuǎn)接的浮萍個(gè)體葉狀體底部的囊為綠色。7～10a）12140min；b）150mL3cm；c）轉(zhuǎn)接：挑選生長狀況良好的浮萍植株，用接種環(huán)轉(zhuǎn)接入倒有新鮮培養(yǎng)基的容器里；d）密封：蓋上容器蓋子，并用parafilm封口膜密封；e）標(biāo)記：標(biāo)記浮萍的名稱品系和世代，記錄初始葉片數(shù)和時(shí)間。保種1～24a）用滲透劑和冷凍保護(hù)劑（如蔗糖和甘油）去除自由水；b）植株保存于凍存管中，-80℃冷凍保存；c）浸入-196℃液氮中。復(fù)蘇：低溫保藏的浮萍可在45℃水浴中迅速解凍，接種至新鮮培養(yǎng)基即可復(fù)蘇。pH6～9附錄A（資料性）改進(jìn)的Steinberg培養(yǎng)基的配方表A.1改進(jìn)的Steinberg培養(yǎng)基的配方物質(zhì)濃度（mg/L）KNO3350CaN3)242O295KH2PO490K2HPO412.6MgO47HO100H3