分光光度計使用原理及操作方法

1/1/3分光光度法原理：光是一種電磁波擁有必定的波長和頻次?？梢姽獾牟ㄩL范圍在 400-760nm，紫外光為200-400nm，紅外光為760-5000nm?？梢姽庖虿ㄩL不一樣體現(xiàn)不一樣顏色，這些波長在必定范圍內(nèi)體現(xiàn)不一樣顏色的光稱單色光。利用棱鏡可將白光分紅按波長次序擺列的各樣單色光，即紅、橙、黃、能量。物質(zhì)汲取由光源發(fā)出的某些波長的光可形成汲取光譜，因為物質(zhì)的分子構(gòu)造不一樣，對光的汲取能力不一樣，所以每種物質(zhì)都有特定的汲取光譜，并且在必定條件下其汲取程度與該物質(zhì)的濃度成正比，分光光度法就是利用物質(zhì)的這類汲取特點對不一樣物質(zhì)進行定性或定量剖析的方法。在比色剖析中，有色物質(zhì)溶液顏色的深度決定于入射光的強度、有色物質(zhì)溶液的濃度及液層的厚度。當一束單色光照耀溶液時，入射光強度愈強，溶液濃度愈大，液層厚度愈厚，溶液對光的汲取愈多，它們之間的關(guān)系，切合物質(zhì)對光汲取的定量定律，即朗伯比爾（朗伯比爾定律：物理意義：當一束平行單色光垂直經(jīng)過某一平均非散射的吸光物質(zhì)時與其吸光度A光物質(zhì)的濃度cb成正比。數(shù)學(xué)表達式：A=lg(1/T)=KbcA2/2/3T——透射比，是透射光強度比上入射光強度；K——為摩爾汲取系數(shù)，它與汲取物質(zhì)的性質(zhì)及入射光的波長 λ相關(guān)；C——吸光物質(zhì)的濃度；B使用方法：721可見分光光度計其波長范圍360～800nm，色散元件為三角棱形.檢查儀器各調(diào)理鈕的開端地點能否正確，接通電源開關(guān)，翻開樣品室暗箱0位”，預(yù)熱20min0電”位器調(diào)整電表為T=0％。蓋上樣品室蓋使光電管受光，推進試樣架拉手，使參比溶液池（溶液裝入4／5高度，置第一格）置于光路上，調(diào)理＝100％。

100％透射比調(diào)理器，使電表指針指 T重復(fù)進行翻開樣品室蓋，調(diào)0，蓋上樣品室蓋，調(diào)T為器穩(wěn)固。光度值。讀數(shù)后應(yīng)立刻翻開樣品室蓋。丈量完成，拿出比色皿，洗凈后倒置于濾紙上晾干。各旋鈕置于本來放大器各檔的敏捷度為：“樣

1”倍；“1020，敏捷度挨次增大。因為單色光波長不一時，光能量不一樣，需選不一樣的敏捷度檔。選擇原則是在能使參比溶液調(diào)到T＝1000和”“100。”注意事項：3/3/31、該儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時擱置在堅固安穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強。熱時節(jié)不可以用風(fēng)扇直接向儀器吹風(fēng)，防備燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)固。2、使用本儀器前，使用者應(yīng)當?shù)谝徽J識本儀器的構(gòu)造和工作原理，以及各個操控旋鈕之功能。在未按通電源以前，應(yīng)當對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應(yīng)堅固，通電也要優(yōu)秀，各個調(diào)理旋鈕的開端地點應(yīng)當正確，而后再按通電源開關(guān)。測定方法：選參比測定試樣溶液的吸光度，需先用參比溶液調(diào)理透光度為 100%（吸光度為0），以除去其余成分及吸光池和溶劑等對光的反射和汲取帶來的測定偏差。選方法：單組分和多組分（1）單組分是指樣品溶液中含有一種組分，或許是在混淆物溶液中待測汲取系數(shù)法等。校準曲線法（常用）：配制一系列不一樣含量的標準溶液，采用適合的參比，在同樣的條件下，測定系列標準溶液的吸光度，作A-c曲