t-fixation-補體結(jié)合(共14張PPT)

Chapter20

LaboratoryDiagnosisandprevention、treatment病毒感染的診斷和防治1第1頁，共14頁。Section1Diagnosis

Ⅰ、collectionofsample標(biāo)本的采集Blood,Urine,Stool,nasalswab鼻拭,throatswab咽拭,saliva唾液,sputum,rectalswab直腸拭,vesiclefluid囊泡液,

tissuebiopsy活組織檢查,cerebrospinalfluid,etal.Asepsis無菌操作含雜菌的應(yīng)加入高濃度抗生素2第2頁，共14頁。Ⅱ、Cultureandidentify

病毒的培養(yǎng)與鑒定（一）※病毒的培養(yǎng)Culture：用活細胞動物（Animals）接種雞胚（Embryonatedeggs）接種組織細胞培養(yǎng)（tissuecellculture）

Primarycultures原代細胞

Diploidcellcultures傳代細胞

Continuouscultures二倍體細胞3第3頁，共14頁。常用的細胞培養(yǎng)4第4頁，共14頁。（二）病毒的鑒定identify1、細胞形態(tài)學(xué)改變：microscopyCytopathiceffect（CPE）致細胞病變效應(yīng)

5第5頁，共14頁。InclusionBodies：狂犬病毒包涵體（Negribody）6第6頁，共14頁。巨細胞病毒包涵體7第7頁，共14頁。PCR(Polymerasechainreaction)（一）※病毒的培養(yǎng)Culture：用活細胞Enzymeactivities(reversetranscriptase逆轉(zhuǎn)錄酶)Hemagglutinationandhemadsorption血細胞吸附Antigendetection(ELISA,Westernblot)雞胚（Embryonatedeggs）接種Directdetection:Cytopathiceffect（CPE）致細胞病變效應(yīng)5、Detectionofviralproteins

(antigensandenzymes)Neutralization中和試驗ImmuneElectronmicroscopy免疫電鏡技術(shù):

Humanrotavirus;HAV;病毒感染單層細胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱蝕斑，蝕斑是由一個感染性病毒體復(fù)制形成的，稱蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位PFU來表示。Proteinpatterns(electrophoresis電泳)2、病毒數(shù)量和感染性測定（1）、空斑形成單位（plaqueformingunits）病毒感染雞胚、動物或細胞后，引起50%發(fā)生死亡或病變的最小量。

病毒感染單層細胞后，產(chǎn)生的局限性病灶，稱蝕斑，蝕斑是由一個感染性病毒體復(fù)制形成的，稱蝕斑形成單位，病毒懸液中的感染性病毒量以每毫升的蝕斑形成單位PFU來表示。（2）、LD50或TCID50

(50%致死量或50%組織細胞感染量）8第8頁，共14頁。TCID50

(50%Tissuecellinfectivedose)TCID50isdefinedasthatdilution稀釋ofviruswhichwillcauseCPEin50%ofagivenbatch批ofcellculture3、電子顯微鏡檢查ElectronmicroscopyDirectdetection:Humanrotavirus輪狀病毒;HAV;HBV;

Smallpoxvirus天花病毒;Herpesvirus.ImmuneElectronmicroscopy免疫電鏡技術(shù):

Humanrotavirus;HAV;9第9頁，共14頁。4、serologydiagnosis血清學(xué)診斷Complementfixation補體結(jié)合試驗Hemagglutinationinhibition血凝與血凝抑制試驗Neutralization中和試驗Immunofluorescence(directorindirect)

免疫熒光試驗Latexagglutination乳膠凝集試驗ELISA10第10頁，共14頁。5、Detectionofviralproteins

(antigensandenzymes)Antigendetection(ELISA,Westernblot)Hemagglutinationandhemadsorption血細胞吸附Enzymeactivities(reversetranscriptase逆轉(zhuǎn)錄酶)Proteinpatterns(electrophoresis電泳)11第11頁，共14頁。6、DetectionofviralgeneticmaterialPCR(Polymerasechainreaction)RT-PCR(Reversetranscriptasepolymerasechainreaction)Southern（DNA),Northern(RNA),anddotblotsDNAgenomehybridizationinsitu(cytochemistry)ElectrophoreticmobilitiesofRNAforsegmentedRNAviruses(Electrophoresis)Restrictionendonucleasecleavagepatterns12第12頁，共14頁。Proteinpatterns(electrophoresis電泳)雞胚（Embryonatedeggs）接種1、細胞形態(tài)學(xué)改變：microscopyNeutralization中和試驗Humanrotavirus輪狀病毒;HAV;HBV;

Smallpoxvirus天花病毒;Herpesvirus.ImmuneElectronmicroscopy免疫電鏡技術(shù):

Humanrotavirus;HAV;Antigendetection(ELISA,Westernblot)TCID50isdefinedasthatdilution稀釋ofviruswhichwillcauseCPEin50%ofagivenbatch批ofcellcultureGeneengineeredvaccine基因工程疫苗Hemagglutinationandhemadsorption血細胞吸附Enzymeactivities(reversetranscriptase逆轉(zhuǎn)錄酶)組織細胞培養(yǎng)（tissuecellculture）（一）※病毒的培養(yǎng)Culture：用活細胞Directdetection:（一）※病毒的培養(yǎng)Culture：用活細胞Section2

preventionandtreatment

病毒感染的防治（一）Activeimmunization主動免疫Attenuatedlivevaccine減毒活疫苗Inactivatedvaccine滅活疫苗Subunitvaccine亞單位疫苗Geneengineered