細(xì)胞融合和單細(xì)胞克隆課件

2.2動物細(xì)胞工程選修3現(xiàn)代生物科技專題專題2細(xì)胞工程教學(xué)目標(biāo)重點難點問題探討教學(xué)過程知識結(jié)構(gòu)教學(xué)反饋課后習(xí)題教學(xué)參考2.2.2動物細(xì)胞融合與單克隆抗體教學(xué)目標(biāo)了解動物細(xì)胞融合的原理、過程和意義。理解單克隆抗體制備的過程和應(yīng)用重點難點1.教學(xué)重點：單克隆抗體的制備和應(yīng)用2.教學(xué)難點：單克隆抗體的制備過程如果將奶牛的細(xì)胞與植物細(xì)胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽就可以擠出牛奶嗎？動物細(xì)胞也能融合嗎？教學(xué)過程一.動物細(xì)胞融合1.動物融合的過程請同學(xué)們閱讀課本P52動物融合動物細(xì)胞融合過程示意圖不同DNA的兩個細(xì)胞

滅活的病毒有絲分裂兩個完整的雜交細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。7.你推測一下動物細(xì)胞融合有哪些方面的應(yīng)用嗎？思考題利用動物細(xì)胞融合技術(shù)誘導(dǎo)形成雜交瘤細(xì)胞8.在生產(chǎn)實際中雜交瘤細(xì)胞有怎樣的應(yīng)用？生產(chǎn)單克隆抗體6.你能歸納出什么叫做動物細(xì)胞融合嗎？2.動物細(xì)胞融合的概念動物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的過程，融合后形成的具有原來兩個或多個細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞稱為雜交細(xì)胞。提問？1.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）。2.一個Ｂ淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)能分泌多種抗體嗎？每一個Ｂ淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。3.一種抗原侵入機(jī)體之后，引起機(jī)體免疫反應(yīng)產(chǎn)生的抗體只有一種嗎？動物在免疫反應(yīng)過程中，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬種以上。4.簡述獲得抗體的傳統(tǒng)途徑？抗原動物體抗體抗原不純抗體不純二、單克隆抗體刺激漿細(xì)胞6.如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？

體外培養(yǎng)單個Ｂ淋巴細(xì)胞，提取分泌的抗體7.體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞能無限增殖嗎?怎樣解決這個問題？5.這種方法獲得的抗體有什么缺陷？產(chǎn)量低，純度低，特異性差1.設(shè)計方案：一個B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能夠無限增殖雜種細(xì)胞二、單克隆抗體2.制備過程：免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性專一抗體檢驗陽性注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)單克隆抗體克隆雜交細(xì)胞分開不同雜交細(xì)胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細(xì)胞

單克隆抗體制備過程示意圖多種雜交細(xì)胞單克隆抗體制備過程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”，靈敏度很高，在妊娠第8天就可以做出診斷，比原來的診斷方法提前了10天左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準(zhǔn)確率在90％以上。教學(xué)反饋1.動物細(xì)胞融合技術(shù)最重要的用途是（）A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞B2.單克隆抗體是由下列哪種細(xì)胞產(chǎn)生的 （）

A.B淋巴細(xì)胞B.T淋巴細(xì)胞C.骨髓瘤細(xì)胞D.雜交瘤細(xì)胞

D3.（多選）1975年米爾斯坦和柯勒成功地獲得了單克隆抗體。下列細(xì)胞中與單克隆抗體的制備有關(guān)的是 （）

A.效應(yīng)B細(xì)胞B．T淋巴細(xì)胞

C.骨髓瘤細(xì)胞D．雜交瘤細(xì)胞

ABCDB體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

4.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實驗方案制備單克隆抗體不能，沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細(xì)胞。(1).該實驗方案的目的是：________________(2).該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？(3).A是從小鼠的脾臟中取得__________該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______。(4).圖中B為________________過程，常用_________________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。(5).C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括________培養(yǎng)和__________培養(yǎng)兩個階段，其中_____代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。B淋巴細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活的病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無限增殖原代傳代503.“生物導(dǎo)彈”是指 （）A.單克隆抗體B.雜交瘤細(xì)胞C.產(chǎn)生特定抗體的B淋巴細(xì)胞D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物

D4.只能使動物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是 （）

A．PEGB．滅活的病毒C．電刺激D．離心A二.簡答題1.淋巴細(xì)胞是由動物體---------------------中的---------------------細(xì)胞分化發(fā)育而來的。2.雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是---------------------骨髓造血干主動運輸三.思考與探究1.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)有什么不同？2.制備單克隆抗體時，為什么要選用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？提示：植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動物細(xì)胞融合技術(shù)基本相同，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動物細(xì)胞融合是兩個體細(xì)胞直接融合。

提示：哺乳動物感染抗原后，其體內(nèi)會形成相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動物在免疫反應(yīng)的過程中，每一種B淋巴細(xì)胞能分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的B淋巴細(xì)胞大量增殖。B淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會兼有兩個親本細(xì)胞的特性──在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。

教學(xué)參考1.已成功的動物細(xì)胞融合實例還有哪些？生物種類細(xì)胞來源成功年代酵母菌—雞原生質(zhì)體—血紅細(xì)胞1975年人—胡蘿卜腹水癌細(xì)胞—原生質(zhì)體1976年人—小鼠纖維肉瘤細(xì)胞—畸胎瘤細(xì)胞1978年要知道更多的實例，需經(jīng)常查閱更多科研報道。3.如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用“有限稀釋法”來選擇。將雜