藥品研發(fā)中藥品含量測定方法設(shè)計中的幾個問題

4/4藥品研發(fā)中藥品含量測定方法設(shè)計中的幾個問題藥品的含量或效價是評定藥品的主要指標(biāo)之一，設(shè)計其測定方法時，應(yīng)根據(jù)藥品特性、劑型、處方、鑒別試驗和純度檢查綜合考慮，當(dāng)鑒別試驗和純度檢查保證了專屬性和純度的情況下，含量測定方法的選擇要著眼于準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性和可重復(fù)性。◆原料藥：對于組份單一的原料藥，首選精密度高，操作簡便、快速的容量法測定含量，可根據(jù)藥物分子中所具有的官能團及其化學(xué)性質(zhì)，選用不同的容量分析方法，但應(yīng)符合如下條件：（1）反應(yīng)須按一個方向完全進行；（2）反應(yīng)要迅速，必要時可通過加熱或加入催化劑等方法提高反應(yīng)速度；（3）共存物不得干擾主要反應(yīng)，或能用適當(dāng)方法消除；（4）確定等當(dāng)點的方法要簡單、靈敏；（5）標(biāo)化滴定液所用基準(zhǔn)物質(zhì)易得，并符合純度高、組成恒定且與化學(xué)式符合、性質(zhì)穩(wěn)定（標(biāo)化時不發(fā)生副反應(yīng)）等要求。方法敘述中要強調(diào)：（1）供試品的取用量應(yīng)滿足滴定精度的要求（消耗滴定液約20ml）；（2）滴定終點的判斷要明確，如選用指示劑法，應(yīng)考慮其變色敏銳，提供滴定曲線，并用電位法校準(zhǔn)其終點顏色。（3）為排除因加入其它試劑或混入雜質(zhì)對測定結(jié)果的影響，或便于剩余滴定法的計算，可采用“將滴定的結(jié)果用空白試驗校正”的辦法；（4）最后要給出滴定度（采用四位有效數(shù)字）。容量法測定含量要注意參加反應(yīng)的應(yīng)是藥物分子活性部分，而不應(yīng)是次要的酸根或堿基部分。如鹽酸西替立嗪、鹽酸氨溴索，有研究者采用氫氧化鈉滴定液滴定法直接測定其含量，事實上這種方法測定的是其中鹽酸的含量，由于其成鹽工藝中的酸、堿配比不當(dāng)時，可嚴重影響成品酸堿度，故此法的測定結(jié)果并不能代表其活性成分有機堿的含量，這種方法不能準(zhǔn)確把握其有效成分含量。應(yīng)采用非水滴定法，以無水冰醋酸為溶劑屏蔽掉鹽酸的干擾，用高氯酸滴定其有機堿的含量。高氯酸非水滴定法因適應(yīng)性廣（適用于有機弱堿及其鹽類）、方法簡便和測定結(jié)果精密等優(yōu)點，在化學(xué)原料藥的含量測定中較為常用。如用容量法不適宜時，可考慮選用HPLC法，尤其在有關(guān)物質(zhì)干擾，或多組份物質(zhì)時，具有特殊優(yōu)勢。因儀器或操作間的偏差較大，一般不選用UV法，尤其不首選“吸收系數(shù)法”定量，不選用末端吸收峰作測定波長；須用UV法時，可采用不受儀器及其它變化影響的“對照品比較法”定量，測定溶液的吸收度宜在0.3～0.7間。元素測定法如定氮法，在其它方法均不適宜時可采用，但因不能反映化合物含量的變化情況，此法不可用于穩(wěn)定性考察中?！糁苿哼x用方法時應(yīng)考慮輔料等的干擾，首選方法一般為HPLC法，在有關(guān)物質(zhì)、輔料不干擾的情況下，也可選用UV法或原料藥項下的容量法，復(fù)方制劑首選HPLC法較為適宜。◆方法的驗證：訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的含量測定法不同于一般質(zhì)量考察的方法，須經(jīng)過嚴格的方法學(xué)驗證，不同原理的測定法具有不同的驗證內(nèi)容及要求：（1）容量分析法的驗證：①精密度：用原料藥精制品考察方法精密度，平行試驗5個樣本的RSD≤0.2%；②準(zhǔn)確度：以測定原料精制品（含量>99.5%）的回收率（測定值與理論值的比值）計算，應(yīng)在99.7%～100.3%之間（n＝5,RSD≤0.1%）；③滴定終點確定的依據(jù)：包括滴定曲線的繪制，如用指示劑法確定終點，應(yīng)用電位法校準(zhǔn)終點顏色，提供指示劑顏色與電位變化情況的對比結(jié)果；④耐用性：考察測定條件（供試液穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時間等）有微小變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應(yīng)在方法中注明。（2）HPLC法的驗證：①精密度：RSD≤2%（n＝5）；②準(zhǔn)確度：用于制劑時，要考察輔料的影響，將一定量藥物加到按處方比例配制的輔料中（為標(biāo)示量的80%～120%）制成高、中、低三個劑量，混合均勻后，每個劑量取三份樣品，按擬定方法測定回收率，應(yīng)在98%～102%之間（n＝9,RSD≤2%）。③線性范圍：用已知含量的精制品配制一系列濃度的溶液（n＝5～7），用濃度C對峰面積A或峰高h或被測物的響應(yīng)值之比進行回歸處理，線性方程的相關(guān)系數(shù)r≥0.999，截距應(yīng)趨于零，并提供線性關(guān)系圖；④專屬性：輔料、有關(guān)物質(zhì)或降解產(chǎn)物峰對主藥峰應(yīng)無干擾；⑤耐用性：考察測定條件（供試液穩(wěn)定性、流動相組成和pH值、不同品牌或批號的同類色譜柱、柱溫、流速、樣品提取次數(shù)、時間等）有微小變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應(yīng)在方法中注明；⑥靈敏度：作為常量分析法，此項可不作主要要求。（3）UV法的驗證：①精密度：RSD≤1%（n＝5）；②準(zhǔn)確度：方法同HPLC法，回收率應(yīng)在98%～102%之間（n＝9,RSD≤2%），同時要求輔料、有關(guān)物質(zhì)或降解產(chǎn)物在測定波長處無吸收。③線性范圍：用已知含量的精制品配制一系列濃度的溶液（n＝5～7，吸收度A在0.2～0.7間），用濃度C對峰面積A或峰高h或被測物的響應(yīng)值之比進行回歸處理，線性方程的相關(guān)系數(shù)r應(yīng)≥0.999，截距應(yīng)趨于零，并提供線性關(guān)系圖；④耐用性：考察測定