齊魯醫(yī)學(xué)流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介

流式細(xì)胞儀（FlowCytometer)

基礎(chǔ)簡介中科院生物物理研究所中國科學(xué)院蛋白質(zhì)科學(xué)研究平臺2005年3月劉春春流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!主要內(nèi)容流式細(xì)胞儀概要流式細(xì)胞儀的工作原理流式細(xì)胞儀測量的對象流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!什么是流式細(xì)胞儀●流式細(xì)胞儀實物BDFACSVantageBD-Calibur流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!流式細(xì)胞儀基本結(jié)構(gòu)流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!對比

流式細(xì)胞儀是一種特殊的顯微鏡流式細(xì)胞儀顯微鏡

流動的細(xì)胞靜止的細(xì)胞樣本

數(shù)量大數(shù)量少

高速分選樣本難以再利用細(xì)胞群體特征量分布可以揭示細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)信息流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!功能特點

（1）多參數(shù)定量分析每一個細(xì)胞；

（2）細(xì)胞分選；

高純度：99%以上；可分析小于1/10000比例的稀有細(xì)胞群；單細(xì)胞克隆等。

（3）高通量（分析分選）．

分析150，000個/秒分選100，000個/秒

流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!流式細(xì)胞儀工作原理流體動力學(xué)聚焦流動室激光聚焦液流與光源流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!二色鏡

123帶通濾波片光電倍增管激光束細(xì)胞收集透鏡前向散射光側(cè)向散射光，熒光光信號分離，導(dǎo)向，各探測通道PMT接收并轉(zhuǎn)化為電信號。光信號收集流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!流式細(xì)胞儀產(chǎn)生的信號非熒光信號顆粒度細(xì)胞大小流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!熒光信號熒光染料被激發(fā)而發(fā)射的光信號。

定量染色

熒光信號大小

被標(biāo)記組分含量的定量多熒光標(biāo)記胞內(nèi)多種組分，實現(xiàn)多參數(shù)測量流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!CD45FITC(log)R1=單核細(xì)胞(CD14+ve)R2=淋巴細(xì)胞(CD45>單核細(xì)胞)R3=中性粒細(xì)胞(CD45<單核細(xì)胞)CD14PE(log)前向散射光(linear)側(cè)向散射光(linear)PE＋FITC熒光標(biāo)記檢測外周血裂解后細(xì)胞群流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!流式細(xì)胞儀的測量對象大小

懸浮在溶液中的相互離散顆粒。

大小范圍：0.2uM-300uM。對象類型

細(xì)胞類型：

（1）

高等真核細(xì)胞；

（2）酵母；（3）細(xì)菌；

（4）多細(xì)胞的聚集體，如胰島等。

非生命顆粒：細(xì)胞核、染色體、和其它細(xì)胞器以及乳化微球等。流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!功能屬性：酶活性細(xì)胞凋亡細(xì)胞壞死細(xì)胞活性氫硫基凝血素結(jié)合位點藥物動力學(xué)……..經(jīng)驗之談：凡細(xì)胞內(nèi)能進行熒光標(biāo)記的成分或者某種變化，都可用流式細(xì)胞儀進行檢測。流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!Hoechst33258（AT）ChromomycinA3（GC）白血病患者2456X89-127recip9-221314151617Y1820192221Ph1/3染色體組型測定13流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!●FCM的定義

流式細(xì)胞儀是指，使細(xì)胞（或其他粒子）以單個方式依次高速通過激發(fā)光束，采集細(xì)胞被光照時產(chǎn)生的各種信號，對信號進行處理，并對各參數(shù)進行關(guān)聯(lián)分析的一種儀器。流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!流式細(xì)胞儀蛋白膠

多參數(shù)單參數(shù)

量化的分布平均值

容易檢測各個參數(shù)間的相關(guān)性不容易流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!應(yīng)用領(lǐng)域

疾病診斷生物學(xué)基礎(chǔ)研究環(huán)境監(jiān)測海洋微生物研究農(nóng)業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用等等70年代美國為攻克癌癥而建造。廠商：Becton-DicksonCoulter-BeckmanDOCytomation已成為一個幾十億美金的產(chǎn)業(yè)流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!探測光路聚焦流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!數(shù)據(jù)處理FSCSSCFL1FL2FL3對數(shù)

線性線性

線性

對數(shù)脈沖處理，模數(shù)轉(zhuǎn)換光信號電信號記錄數(shù)據(jù)，顯示結(jié)果（面積，峰高，寬度）流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!散射光信號區(qū)分裂解后的外周血細(xì)胞群流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!PI＋Annexin－V細(xì)胞凋亡檢測DNA含量-PIAnnexin-V流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!細(xì)胞分選流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!流式細(xì)胞儀能夠檢測的細(xì)胞屬性和組分舉例

1）不需染色：

大小，胞漿顆粒度，細(xì)胞自發(fā)熒光，色素，細(xì)胞精確計數(shù)。

2）需染色或標(biāo)記：

細(xì)胞組分：細(xì)胞膜：流動性，通透性，膜電位

細(xì)胞內(nèi)離子：H+（可檢測PH值），Na+，K+，Ca2+（結(jié)合的和自由的）。核酸：DNA含量，DNA成分，DNA合成，RNA，染色質(zhì)結(jié)構(gòu)等

總蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)分子間相互作用抗原

細(xì)胞骨架成分

受體流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!G1SphaseG2MG1121DNA含量

DNA含量細(xì)胞周期時相G0/1G2/MS細(xì)胞數(shù)細(xì)胞周期分析流式細(xì)胞儀(Flow-Cytometer)基礎(chǔ)簡介共25頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!