基因分析課件

基因分析技術(shù)原理及其應(yīng)用生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室DNAmRNAProtein基因分析分析對(duì)象分析內(nèi)容大小/數(shù)量位置相互作用目的常用技術(shù)的原理依靠的儀器設(shè)備大致的操作過(guò)程技術(shù)的應(yīng)用范圍(一)瓊脂糖凝膠電泳(agarosegelelectrophoresis)原理:帶電粒子在電場(chǎng)中的泳動(dòng)應(yīng)用:分離0.2-50kb的DNA片段加樣電泳結(jié)果脈沖場(chǎng)凝膠電泳（三）DNA測(cè)序(DNASequencing)原理:雙脫氧終止法應(yīng)用:分析DNA序列、SNP（四）DNA/RNA定量分析(DNA/RNAquantificationbyspectrophotometry)原理:在260nm處有吸收峰應(yīng)用：[dsDNA]=50x(OD260-OD310)xdilutionfactorSpectrophotometer（五）SouthernBlot原理:標(biāo)記物標(biāo)記探針,雜交反應(yīng)應(yīng)用:目的DNA在基因組中的存在有關(guān)RNA的分析技術(shù)（七）RT-PCR原理：PCR反應(yīng)應(yīng)用:克隆，RNA定量（八）實(shí)時(shí)定量RT-PCR(RealTimePCR)

原理：熒光標(biāo)記分子、PCR反應(yīng)應(yīng)用：RNA定量（九）NorthernBlot原理：核酸雜交應(yīng)用:檢測(cè)或定量分析特異RNA的表達(dá)及大?。ㄊ〥NAChip/microarray原理：核酸雜交應(yīng)用：分析基因表達(dá)差異、數(shù)量芯片制備（十一）原位雜交/整體原位雜交（insituhybridization/

wholemountinsituhybridization）原理：核酸雜交應(yīng)用：原位細(xì)胞mRNA表達(dá)的檢測(cè)（十二）RNase保護(hù)分析（RNaseprotectionassay,RPA）原理：核酸雜交應(yīng)用：分析轉(zhuǎn)錄本含量/剪切情況，位點(diǎn)有關(guān)Protein的分析技術(shù)（十三）蛋白質(zhì)濃度測(cè)定:BCA原理：BCA與Cu+結(jié)合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物,562nm處吸收應(yīng)用：蛋白濃度測(cè)定（十四）氨基酸序列分析(proteinsequencing)原理：Edman降解法+HPLC應(yīng)用：氨基酸序列分析（十五）聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)原理：分子量大小不同，用電泳法分離蛋白質(zhì)應(yīng)用:純度分析、分子量測(cè)定、濃度測(cè)定、免疫印跡第一步、免疫沉淀蛋白的鑒定蛋白染色結(jié)果（十六）雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳（Two-dimensionalpolyacrylamidegelelectrophoresis,2D）原理：等電聚焦+SDS應(yīng)用：分離鑒定蛋白，篩選表達(dá)差異蛋白雙向電泳裝置（十七）酶聯(lián)免疫吸附分析(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)原理：抗原-抗體反應(yīng)應(yīng)用：檢測(cè)目標(biāo)抗原/抗體（十八）免疫沉淀法（immunoprecipitation）原理：抗原-抗體反應(yīng)應(yīng)用：鑒定特異蛋白質(zhì)免疫共沉淀法(co-immunoprecipitation)原理：抗原-抗體反應(yīng)應(yīng)用：鑒定蛋白質(zhì)相互作用染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（chromatinimmunoprecipitation，ChIP）

原理：抗原-抗體反應(yīng)應(yīng)用：研究DNA-蛋白質(zhì)相互作用的理想方法（二十）western-blot原理：SDS+抗原-抗體結(jié)合應(yīng)用：鑒定特異蛋白質(zhì)（二十一）蛋白質(zhì)芯片(proteinchip)原理：蛋白質(zhì)分子間相互作用應(yīng)用：檢測(cè)蛋白表達(dá)量、差異、相互作用（二十二）免疫組織化學(xué)技術(shù)（Immunohistochemistry）原理：抗原-抗體結(jié)合應(yīng)用：檢測(cè)目標(biāo)蛋白位置免疫組織化學(xué)染色（二十三）雙雜交系統(tǒng)（two-hybridsystem）原理：轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)特征應(yīng)用：篩選相互作用分子雙雜交結(jié)果（二十四）基因打靶技術(shù)（genetargeting）原理：同源重組應(yīng)用：基因功能研究（二十五）RNA干擾（RNAinterference,RNAi）原理：雙鏈RNA誘導(dǎo)同源mRNA降解過(guò)程

應(yīng)